Name: a new best practice for validating tail vein injections in rat with near-infrared-labeled agents
Uploaded: 2019-04-19T14:30:00
Duration: 4 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents at JoVE.com

J.A.P. J.M.J. במשותף מתוכנן הגישה ניסיוני להערכת Nanoemulsions במודל חולדה כרונית פגיעה הכיווץ על ההשפעות על כאב נוירופתי. J.M.J. נוצר ועוצב הגישה משלוח סמים באופן כללי, ממוקדות מקרופאג עם nanoemulsions, הרכב nanoemulsion, ואת תהליכי ייצור. J.M.J. הפיק את nanoemulsion, אשר היה מפוברק עוד יותר על ידי שראשי תחת הדרכתו של J.M.J. היציבות nanoemulsion הוערכה על ידי טיפול J.M.J., א ו פ מ חיה, ניתוח, התנהגות, זריקות וריד הזנב, NIRF הדמיה בוצעו במשותף על ידי טרשת נפוצה, מופיעים תחת הדרכתו של J.A.P. כתב היד היה נכתב שהוכנו על ידי טרשת נפוצה ו בפרוטוקול נכתב על ידי A.M.S.
דימות אופטי ניר בוצעה על מערכת הדמיה חיה קטנה באוניברסיטת דוקיין (הנתמכים על ידי מענק של פיטסבורג רקמות זרע יוזמה הנדסה). J.M.J. מאשר תמיכה מן ההגנה פרס מספר FA8650-17-2-6836, נידה פרס מספר 1R21DA039621-01, NIBIB פרס מספר R21EB023104-02 פרס AFMSA מספר FA8650-17-2-6836. J.A.P., J.M.J להכיר תמיכה של פיטסבורג רקמות הנדסה יוזמה זרע המענק. J.A.P. ידוע גם בפרס Hunkele חששתי למחלות, ברנן, אמה וינטרס קרן, צ'ארלס הנרי ליץ II הקרן, ופרס חבר העמים אוניברסלי מחקר שיפור. J.A.P., J.M.J. להכיר תמיכה של פרווסט ההשבעה של אוניברסיטת דוקיין הבינתחומי למחקר קונסורציומים גרנט, אשר תומך האיחוד מחקר של כאב כרוני.

כל הפרוטוקולים בוצעו בהתאם להנחיות במדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה של מכוני הבריאות הלאומיים, טיפול בעלי חיים מוסדיים ושל שימוש הוועדה (IACUC) באוניברסיטת דוקיין.
1. הכנה והרדמה
הערה: טכניקות aseptic משמשים עבור מכלול של ההליך. רק חומרים חדשים סטרילי ומכשירים סטרילי בלוק הם כדי לשמש. ציוד מגן אישי (כפפות סטריליות, בונה לשיער, מסכה כירורגית, סקראבס) צריך להיות שחוקים כדי למנוע זיהום.
<ol><li>למבוגרים חולדות ספראג-Dawley זכר במשקל של 250-300 גר' שימשו פרוטוקול זה. להתאקלם חולדות תנאי החיים הרגיל, לשמור אותם על 12 שעות אור/12 h מחזור כהה, מספקים מזון ומים ad libitum. בית החיה מבחינה חברתית, תשאירו אותם על נייר תשתית וספק מיוחדת דיאט (ראה טבלה של חומרים) כדי להימנע autofluorescence במהלך דימות.</li>
	<li>עם השימוש של כרית החימום שמוקם כראוי, עזים ומתנגד החיה תחת איזופלוריין 5% הראשונית 20% חמצן, ואחריו רמת התחזוקה של לא פחות מ- 1.5% איזופלוריין ולא יותר מ 3%, אלא אם בעל החיים מתעורר או שומר על תחושה.</li>
	<li>לאשר הרדמה. ראויה באמצעות חוסר תגובה לעקוב צובט. נטר את זרימת הדם גם כן באמצעות סימנים חיוניים לכל אורך ההליך.</li>
</ol>2. הזרקה קדם תמונה Aquisition
<ol><li>תמונת החיה ב- imager פלורסצנטיות פרה ניר על-ידי הצבת החיה רוחבית לחשוף ההזרקה על הזנב לרוחב כדי לקבוע תוכנית בסיסית של קרינה פלואורסצנטית בזנב (איור 1C, E). ביצוע של ייבוא תמונות בו זמנית של שני אור לבן (תצוגת גוף), ליד ערוצי אינפרא-אדום באמצעות NIRF imager, התוכנה המשוייכת עם טבלאות בדיקת מידע מקושר (LUT).</li>
	<li>ביצוע הדמיה, להזיז את החיה לשולחן הדיונים כירורגי, ולמקם אותו תחת הרדמה על הזריקה וריד הזנב. הערה: נמשיך לעקוב סימני החיים של החיה ולבדוק ההרדמה המתאים דרך הזנב צביטה.</li>
</ol>3. הזנב הזרקה לווריד עם סוכן המכילות NIRF
<ol><li>
עם החיה במצב שכיבה, אוריינט הזנב עם הצד הגבי פונה כלפי מעלה. אני על הזנב להערכת במים חמים למשך תקופה מינימלית של 1 מינימלית אוריינט הזנב הווריד אז הצד הלטראלי (ימינה או שמאלה) הוא 30° (בכיוון השעון או נגד כיוון השעון) לחשוף את הווריד הזנב ימינה או שמאלה (איור 1ב')...
	<ol>
<li>ברגע וריד הזנב לרוחב אותרה (אשר מופיע בצבעים כהים על התארכות), לחטא את הזנב כולו עם רפידות אלכוהול, חוזר 2 x.</li>
		<li>במינון המתאים בהתבסס על תכנון המחקר, להתחיל זריקות באזור חוליות coccygeal דיסטלי של הזנב ונעה מקורב יותר אם מיקום המחט תקין נכשל.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנס מחט סטרילית 25 – 27 גר', מסגרת משופעת, לווריד הזנב לרוחב, עם הזנב בזווית של 180 מעלות, החדרת המחט במקביל הזנב והרימה אותה. להתבונן דם פלאשבק בטבעת של המחט כדי להבטיח השמה נכונה. אם אין פלאשבק לכאורה, לאט הניעו את מחט (מבלי להסיר אותו מהזנב) למצוא וריד ההכנסה. אם מניחים subcutaneously, פלאשבק דם לא תתרחש.</li>
	<li>הכנס את המזרק עם החומרים להזרקה לתוך החישוק של המחט. כאשר מושגת השמה נכונה, הנוזל להזרקה לא תישא התנגדות בעת ההזרקה. הזריקה יתקדמו וחלקה. ברגע מוזרק, הסר את המחט ואת המזרק, הפעילו לחץ עם גזה סטרילית לפחות 1 דקות להבטיח קרישת ולאחר לסמן את המקום של הזרקת עם עט על הזנב, הבטחת שהיא מוצגת בתמונה אור לבן. הערה: אין שטף דם או הנגע יהיו גלויים באתר של הזרקה.</li>
	<li>אם קצה המחט עובר במהלך ההוספה מזרק, הסר את המחט ונסה שוב ההליך כניסה המחט יותר מקורב על הווריד של חולשת הזנב. לא חוזר באותה המחט אם נקודת החזרה שונה הוא ניסה. הערה: לחלופין, ניתן לבצע ההזרקה עם צנתר הרביעי עם מחוון זרימת הדם (ראה טבלה של חומרים). יש את היתרון של אימות חזותי של הקטטר במהלך venipuncture. להוסיף את הקטטר, שיפוע צד, הזווית שתואר קודם לכן. התבונן בשורת הפלאשבק ב לכל אורכה של מחוון זרימת הדם כדי להבטיח השמה נכונה. לחץ קל גב ניתן למשוך דם במזרק כדי לאשר השמה נכונה בתוך הכלי לפני הזרקת. שוב, ללא התנגדות תורגש.</li>
</ol>4. ייבוא תמונות שלאחר הזרקה
<ol><li>ביצוע הערכת איכות בעקבות הזרקת וריד הזנב ב- imager פלורסצנטיות פרה ניר ב באופן התמונה שלפני הזריקה הבסיסית. להבטיח החיה. עדיין כראוי הוא מורדם – וככה הוא יהיה משך זמן הדמיה – לפני הצבתו של הצלם. הערה: מערכת הדמיה המכיל חיבורים הרדמה housingwith של המגירה ומסיכה עבור החיה אמור לשמש אם הם זמינים.</li>
	<li>אוריינט החיה על הצד הלטראלי לחשוף ההזרקה (לפי המסומן) על הזנב לרוחב. בדוק אם אות NIRF קיים רק באתר של הזרקה. הדבר מעיד על זריקת וריד הזנב מוצלחת (איור 1D). הערה: אם האות מפוזרת בכל רחבי הזנב כולו, הוא נחשב להיות תת עורית, ומכאן לא מוצלח (איור 1F). איור 2 מציג דוגמאות נוספות של זריקות שנכשלו.</li>
</ol>5. התמונה כמת
הערה: כימות התמונה יכולה להתבצע עם תוכנת הדמיה המלווה םלצה ניר, אם פונקציה זו זמינה. לחלופין, תוכנת ניתוח התמונה זמינים מסחרית אחרת עשוי להיות בשימוש24.
<ol><li>בתמונה שלאחר ההזרקה, צייר אזור-של-עניין מסביב לאזור של זריחה-הזרקת באתר2,6.</li>
	<li>למדוד את אזור ואת עוצמת קרינה פלואורסצנטית היחסי רשומה כמו אזור/בעוצמה. להשוות תמונות הזרקת מראש שלאחר הזרקת ו'בסיסית גם איכותית או quantitively באמצעות ניתוח סטטיסטי המתאים (תלוי על קבוצות לימוד ותנאי). הערה: החוקר יכול להחליט על סף להפלות טוב של זריקות רע או להקצות אחוז איכות הזריקה.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Janjic, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+NSAIDs+reduce+pain+via+macrophage+targeted+nanoemulsion+delivery+to+neuroinflammation+of+the+sciatic+nerve+in+rat.">Low-dose NSAIDs reduce pain via macrophage targeted nanoemulsion delivery to neuroinflammation of the sciatic nerve in rat.</a> Journal of Neuroimmunology. 318, 72-79 (2018).</li><li>Patel, S. K., Beaino, W., Anderson, C. J., Janjic, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theranostic+nanoemulsions+for+macrophage+COX-2+inhibition+in+a+murine+inflammation+model.">Theranostic nanoemulsions for macrophage COX-2 inhibition in a murine inflammation model.</a> Clinical Immunology. 160 (1), 59-70 (2015).</li><li>Patel, S. K., Janjic, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+targeted+theranostics+as+personalized+nanomedicine+strategies+for+inflammatory+diseases.">Macrophage targeted theranostics as personalized nanomedicine strategies for inflammatory diseases.</a> Theranostics. 5 (2), 150-172 (2015).</li><li>Patel, S. K., Zhang, Y., Pollock, J. A., Janjic, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclooxgenase-2+inhibiting+perfluoropoly+(ethylene+glycol)+ether+theranostic+nanoemulsions-in+vitro+study.">Cyclooxgenase-2 inhibiting perfluoropoly (ethylene glycol) ether theranostic nanoemulsions-in vitro study.</a> PLOS ONE. 8 (2), 55802 (2013).</li><li>Liu, L., Bagia, C., Janjic, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+First+Scale-Up+Production+of+Theranostic+Nanoemulsions.">The First Scale-Up Production of Theranostic Nanoemulsions.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 218-228 (2015).</li><li>Patel, S. K., Patrick, M. J., Pollock, J. A., Janjic, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+fluorescent+(near-infrared+and+visible)+triphasic+perfluorocarbon+nanoemuslions.">Two-color fluorescent (near-infrared and visible) triphasic perfluorocarbon nanoemuslions.</a> Journal of Biomedical Optics. 18 (10), 101312 (2013).</li><li>O'Hanlon, C. E., Amede, K. G., O'Hare, M. R., Janjic, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIR-labeled+perfluoropolyether+nanoemulsions+for+drug+delivery+and+imaging.">NIR-labeled perfluoropolyether nanoemulsions for drug delivery and imaging.</a> Journal of Fluorine Chemistry. 137, 27-33 (2012).</li><li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man.">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. , (1988).</li><li>Vasudeva, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+systems+biology+studies+implicate+IL-18+as+a+central+mediator+in+chronic+pain.">In vivo and systems biology studies implicate IL-18 as a central mediator in chronic pain.</a> Journal of Neuroimmunology. 283, 43-49 (2015).</li><li>Vasudeva, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuroinflammation+in+vivo+in+a+neuropathic+pain+rat+model+with+near-infrared+fluorescence+and+(1)(9)F+magnetic+resonance.">Imaging neuroinflammation in vivo in a neuropathic pain rat model with near-infrared fluorescence and (1)(9)F magnetic resonance.</a> PLOS ONE. 9 (2), 90589 (2014).</li><li>Cheng, Y., Liu, M., Hu, H., Liu, D., Zhou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+Optimization,+and+Characterization+of+PEGylated+Nanoemulsion+of+Prostaglandin+E1+for+Long+Circulation.">Development, Optimization, and Characterization of PEGylated Nanoemulsion of Prostaglandin E1 for Long Circulation.</a> AAPS PharmSciTech. 17 (2), 409-417 (2016).</li><li>Fofaria, N. M., Qhattal, H. S., Liu, X., Srivastava, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion+formulations+for+anti-cancer+agent+piplartine--Characterization,+toxicological,+pharmacokinetics+and+efficacy+studies.">Nanoemulsion formulations for anti-cancer agent piplartine--Characterization, toxicological, pharmacokinetics and efficacy studies.</a> International Journal of Pharmaceutics. 498 (1-2), 12-22 (2016).</li><li>Ganta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+Targeted+Theranostic+Nanoemulsion+for+Image-Guided+Ovarian+Cancer+Therapy.">EGFR Targeted Theranostic Nanoemulsion for Image-Guided Ovarian Cancer Therapy.</a> Pharmaceutical Research. 32 (8), 2753-2763 (2015).</li><li>Shah, L., Kulkarni, P., Ferris, C., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analgesic+efficacy+and+safety+of+DALDA+peptide+analog+delivery+to+the+brain+using+oil-in-water+nanoemulsion+formulation.">Analgesic efficacy and safety of DALDA peptide analog delivery to the brain using oil-in-water nanoemulsion formulation.</a> Pharmaceutical Research. 31 (10), 2724-2734 (2014).</li><li>Maruyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-level+expression+of+naked+DNA+delivered+to+rat+liver+via+tail+vein+injection.">High-level expression of naked DNA delivered to rat liver via tail vein injection.</a> Journal of Gene Medicine. , (2002).</li><li>Hibbitt, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+and+long-term+expression+of+a+135+kb+LDLR+genomic+DNA+locus+in+vivo+by+hydrodynamic+tail+vein+injection.">Delivery and long-term expression of a 135 kb LDLR genomic DNA locus in vivo by hydrodynamic tail vein injection.</a> Journal of Gene Medicine. , (2007).</li><li>Sebesty&#233;n, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+plasmid+delivery+by+hydrodynamic+tail+vein+injection.+I.+Hepatocyte+uptake+of+various+molecules.">Mechanism of plasmid delivery by hydrodynamic tail vein injection. I. Hepatocyte uptake of various molecules.</a> Journal of Gene Medicine. , (2006).</li><li>Budker, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+plasmid+delivery+by+hydrodynamic+tain+vein+injection.+II.+Morphological+studies.">Mechanism of plasmid delivery by hydrodynamic tain vein injection. II. Morphological studies.</a> Journal of Gene Medicine. , (2006).</li><li>Lecocq, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+by+mouse+liver+and+intracellular+fate+of+plasmid+DNA+after+a+rapid+tail+vein+injection+of+a+small+or+a+large+volume.">Uptake by mouse liver and intracellular fate of plasmid DNA after a rapid tail vein injection of a small or a large volume.</a> Journal of Gene Medicine. , (2003).</li><li>Park, S., Park, H. -. M., Sun, S. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-dose+Intravenous+Injection+Toxicity+of+Water-soluble+Danggui+Pharmacopuncture+(WDP)+in+Sprague-Dawley+Rats.">Single-dose Intravenous Injection Toxicity of Water-soluble Danggui Pharmacopuncture (WDP) in Sprague-Dawley Rats.</a> Journal of Pharmacopuncture. 21 (2), 104-111 (2018).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activatable+fluorescence+detection+of+epidermal+growth+factor+receptor+positive+mediastinal+lymph+nodes+in+murine+lung+cancer+model.">Activatable fluorescence detection of epidermal growth factor receptor positive mediastinal lymph nodes in murine lung cancer model.</a> PLOS ONE. 13 (6), 0198224 (2018).</li><li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+of+transplanted+human+umbilical+cord-derived+mesenchymal+stem+cells+labeled+with+fluorescent+probe+in+a+mouse+model+of+acute+lung+injury.">Tracking of transplanted human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells labeled with fluorescent probe in a mouse model of acute lung injury.</a> International Journal of Molecular Medicine. 41 (5), 2527-2534 (2018).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Janjic, J. M., Srinivas, M., Kadayakkara, D. K., Ahrens, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-delivering+nanoemulsions+for+dual+fluorine-19+MRI+and+fluorescence+detection.">Self-delivering nanoemulsions for dual fluorine-19 MRI and fluorescence detection.</a> Journal of the American Chemical Society. 130 (9), 2832-2841 (2008).</li><li>Chang, Y. -. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Automated+Mouse+Tail+Vascular+Access+System+by+Vision+and+Pressure+Feedback.">An Automated Mouse Tail Vascular Access System by Vision and Pressure Feedback.</a> IEEE/ASME Transactions on Mechatronics. 20 (4), 1616-1623 (2015).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theranostic+imaging+of+liver+cancer+using+targeted+optical/MRI+dual-modal+probes.">Theranostic imaging of liver cancer using targeted optical/MRI dual-modal probes.</a> Oncotarget. 8 (20), 32741-32751 (2017).</li><li>Tansi, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activatable+bispecific+liposomes+bearing+fibroblast+activation+protein+directed+single+chain+fragment/Trastuzumab+deliver+encapsulated+cargo+into+the+nuclei+of+tumor+cells+and+the+tumor+microenvironment+simultaneously.">Activatable bispecific liposomes bearing fibroblast activation protein directed single chain fragment/Trastuzumab deliver encapsulated cargo into the nuclei of tumor cells and the tumor microenvironment simultaneously.</a> Acta Biomaterialia. 54, 281-293 (2017).</li><li>Li, S., Johnson, J., Peck, A., Xie, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near+infrared+fluorescent+imaging+of+brain+tumor+with+IR780+dye+incorporated+phospholipid+nanoparticles.">Near infrared fluorescent imaging of brain tumor with IR780 dye incorporated phospholipid nanoparticles.</a> Journal of Translational Medicine. , (2017).</li><li>Gao, M., Yu, F., Lv, C., Choo, J., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+chemical+probes+for+accurate+tumor+diagnosis+and+targeting+therapy.">Fluorescent chemical probes for accurate tumor diagnosis and targeting therapy.</a> Chemical Society Reviews. , (2017).</li><li>Wang, R., Han, X., You, J., Yu, F., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ratiometric+Near-Infrared+Fluorescent+Probe+for+Synergistic+Detection+of+Monoamine+Oxidase+B+and+Its+Contribution+to+Oxidative+Stress+in+Cell+and+Mice+Aging+Models.">Ratiometric Near-Infrared Fluorescent Probe for Synergistic Detection of Monoamine Oxidase B and Its Contribution to Oxidative Stress in Cell and Mice Aging Models.</a> Analytical Chemistry. 90 (6), 4054-4061 (2018).</li><li>Han, X., Song, X., Yu, F., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ratiometric+Near-Infrared+Fluorescent+Probe+for+Quantification+and+Evaluation+of+Selenocysteine-Protective+Effects+in+Acute+Inflammation.">A Ratiometric Near-Infrared Fluorescent Probe for Quantification and Evaluation of Selenocysteine-Protective Effects in Acute Inflammation.</a> Advanced Functional Materials. 27 (28), 1700769 (2017).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

מעבדות מחקר כרוכות עלויות משמעותית כתוצאה misadministration הסוכנים הבדיקה. זריקות וריד הזנב הם טכניקה קשה לשלוט להשיג אחוזי הצלחה עקבית, עם מנוסים לבעיותיהם לעיתים קרובות גביית misadministration שגיאות. אין שום דרך אמינה כדי לאשר זריקה מוצלחת. פרוטוקול זה מציע פתרון לבעיה זו על ידי מתן חוקרים שיטה כמותיים כדי לאמת את ההצלחה של זריקת וריד הזנב מאתר. כאן,8,7,nanoemulsion NIRF-מתויג25 משלבת את הסוכן לפי בחירה (, במקרה זה, תרופה), היא תמונה באתר של הזרקת ב- imager חיית-קטן NIRF. יש גם האפשרות לפתח סוכן שאינה מבוססת על nanoemulsion ולהשתמש על אותו עיקרון של הדמיה NIRF על-ידי שילוב צבעים זמינים מסחרית אינפרא-אדום. בנוסף, סוכני דימות מוכן לשימוש עם מגוון רחב של יישומים, כגון גידול הדמיה, מטבולית הדמיה, תא סחר בבני אדם, אפופטוזיס הינם גם זמינים מסחרית. זריקה מתבצעת גם באמצעות מחט סטרילית או, לחילופין, של צנתר הרביעי; זה תלוי ההעדפה של החוקר. בנוסף, מרססים וריד הזנב אוטומטית26 השתמשו כדי לסייע בתהליך זה, תואמים מתודולוגיה זו. עם זאת, טכנולוגיה זו לא כבר הפך זמין מסחרית.
ישנם צעדים חשובים בבשיטת הזרקת וריד הזנב להבטיח שיעור גבוה יותר של המינהל סוכן הנכון. ראשית, צריך לנקות הזנב עם אתנול כדי להסיר את כל הלכלוך או פסולת, ומאפשר לחוקרים כדאי להמחיש את הווריד. להרחבת את הווריד מאת השוקע הזנב במים חמים הוא גם צעד חשוב מאוד בשיטה שלו, שכן היא מאפשרת פני שטח גדול יותר להזרקה. הזרקת בנקודה דיסטלי יותר על הווריד של הזנב מאפשרת שגיאה כלשהי, במקרה בו ניסיונות מרובים נדרשים. הזרקת שכדאי לנסות במיקום מקורב יותר בזנב וריד הזנב גודלת בגודל של ההיבט סימטרית של גוף החיה הוא התקרב. בנוסף, תקחי את הזנב contralateral יכול לשמש אם מיקום המחט נכשל באתרים יותר מ 3-5 על הווריד של חולשת הזנב.
ניהול מוצלח של סוכן מבחן התוצאה מעט אין אות NIRF בנקודת ההזרקה. אם אין התנגדות מורגשת במהלך כהונתו של הזריקה, יש מעט כדי לא זריחה בזנב ואז הזרקת ניתן להקליט מוצלח. אם התנגדות מורגשת במהלך ההזרקה, יש עקבות של NIRF אות לאורך כמה אורך הזנב, ואז הזרקת נרשם בתור לא מוצלח והוא צפוי חלקית תת עורית. קרינה פלואורסצנטית תמונות נלקחים מראש, שלאחר הזרקת, האיכות של הזריקה מוערך על ידי התבוננות איכותית או ניתוח באופן כמותי את האות פלורסצנטיות באתר של הזרקה. התוכנה מלווה םלצה ידי קרינה פלואורסצנטית ניר היא לעיתים קרובות המסוגלים לבצע ניתוח זה.
ניתן להתאים את השיטה במספר דרכים. . זה החלים על הזנב בהזרקה לווריד ב עכברים וחולדות. רוב קטן-חיה ניר זריחה imagers יהיה מסוגל אדיב מאתר מכרסמים. רמות של הרדמה צריכים להיות מותאמים בהתאם המשקל של החיה, לפי פרוטוקול IACUC של המעבדה למחקר. שינוי אפשרי נוסף הוא הכנת בדיקה שאינה מבוססת על nanoemulsion או על ידי שילוב של צבע אינפרא-אדום ניסח סוכן של החוקר או על ידי רכישת סוכן מוכן לשימוש הדמיה, המותאמים ביולוגית יישום ספציפי.
אם עכבר גדול יחסית, זה עלול להיות קשה למקם אותו בתוך םלצה חיית-קטן. לכן מומלץ כי תמונת בדיקה הוא נלקח עם החיה במגירה לפני הזרקת, מבט שדה לקביעה איפה הזנב הוא גלוי. זה עוזר לקלטת הזנב המגירה של הצלם, כדי להבטיח זאת לא זזה במהלך דימות.
שיטות אלטרנטיביות המבקשים להעריך את האיכות של וריד הזנב זריקות חיות קטנות מוגבלות להניצול של תיוג ריאגנטים זה לא לשבש הליכים ניסיוני בו-זמניות ודורשים המתת חסד של postinjection בעלי חיים 12,13. ריאגנטים מסוימים עשוי להשפיע תוצאות מחקר והערכה טיפולית של החיות מעורב, אז מומלץ טיפול בעיצוב ניסיוני.
שיטה זו, בעתיד, ניתן מעודן עם התקדמות טכנולוגיית הדמיה חיית-קטן, כמו גם שיפורים הגששים פלורסנט אינפרא-אדום. הגששים ביולוגי עם צבע אינפרא-אדום מואגד, המיועד למגוון רחב של יישומים שונים, ניתן בשלב ניהול הסוכן של עיצוב מחקר כדי לאמת את האיכות של זריקה, כפי שמתואר בספר זה שיטה2,3 ,27,28,29,30,31,32.

התוואי של הממשל של סוכנים חיות קטנות משמש כנקודה קריטית של ניסויים רבים. זה קובע איפה הסוכן כדי להיגאל, כתוצאה מכך, מה יקרה לאחר מכן הסוכן. למרות נתיבים אחרים יכול לשמש עבור סוכן הניהול1, תוואי משלוח תוך ורידי הוא נתיב מועדף עבור סוכן מסוים. הזרקת הרביעי מאפשר לסוכני להיות מוזרק ישירות למחזור הדם, תוך עקיפת רקמות הראשונה לעבור אפקטים והצורך שאינם שייכים absorption1 ממס. זה גם מאפשר מיקוד תאי הדם2,3 , מסירה ישירה לכל רקמות בתוך מערכת הדם. בחולדות, מספר ורידים יכול להיחשב, כולל את הוריד הצווארי, את saphenous את הווריד הזנב.
בשיטה זו, NIRF לצבוע המכיל בדיקה ביולוגית — במקרה זה,5,64,3,nanoemulsion (איור 1 א') — מוזרק לווריד הזנב לרוחב של חולדות. Nanoemulsion המכילים NIRF המסוים הזה שימש בעבר תמונה ולעקוב אחר neuroinflammation ויוו ו- ex-vivo7, 8 ב מודל החולדה9 של כאב נוירופתי2,3,4, 5,10,11. הדמיה מבוצע לפני ואחרי הזרקת עם imager פלורסצנטיות פרה ניר (ראה טבלה של חומרים). זה משמש כלי כדי לאמת את האיכות של המינהל הסוכן. הדמיה לפני משמש הזרקה של וריד הזנב כבסיס לקבלת תמונה בסיסית.
יותר ויותר במחקרים שנעשו בבעלי חיים, nanoemulsions מנוהל דרך הווריד מנוצל הגששים ביולוגי, מיקוד סוכנים12,13,14,15. זה אתגר מוכח לניהול סוכן דרך ה16,וריד הזנב17— להיות זה סם, וקטור ויראלי או בדיקה אחרת – על מנת להבטיח כל התוכן של הזריקה בהצלחה נכנסו למחזור הדם ולא הרקמות שמסביב17. לכן, שיטת להמחיש והערכת איכות זריקה מוצלחת היא מועילה.
בדרך כלל, מנורת החימום או מים חמים משמש כדי לחמם את הזנב, הגורמת התרחבות הוריד, המתיר שלה ויזואליזציה לפני הזרקת. בעוד זה מבטיח קל יותר כניסה לווריד, אין דרך כמותיים כדי להבחין אם המתחם נכנס למחזור הדם שלה כולו18,19,20,21. זה הופך להיות קשה יותר עדיין בזנים של בעלי חיים איפה הווריד ניגודים באופן עמום עם העור, כגון בעכברים שחורים. בדרך כלל, החוקר להעריך זריקה כושל על ידי התנסות ההתנגדות במהלך ההזרקה ו, במקרים מסוימים, להמחיש בליטה על הזנב, המציין של זליגת תת עורית של22,סוכן23.
במחקר זה, NIRF הדמיה של nanoemulsion מוזרק לתוך וריד הזנב לרוחב עכברים חיים מבוצעת על NIRF חיית-קטן מערכת הדמיה (ראה טבלה של חומרים). חולדות ניזונים מיוחד מטוהרים דיאטה (ראה טבלה של חומרים) כדי להפחית קרינה פלואורסצנטית בטן לא ספציפית. ייבוא תמונות בו זמנית של 800 nm זריחה ואור לבן נלכד באמצעות NIRF imager התוכנה המשוייכת. עוצמת קרינה פלואורסצנטית היחסי נמדד על הזנב-הברית הזרקת מראש, שלאחר הזרקת. עוצמת קרינה פלואורסצנטית עבור האזור עניין (ROI) באתר של הזרקת מוקלט, מחולק על ידי האזור של רועי. הערכות איכותי יכול להתבצע בו זריקות מקובלים. באופן אופציונלי, עוד ניתוח כמותי יכול להתבצע על ידי הגדרת סף לזריקות מקובל והקצאת רועי מדידות לקבוצות, באיזה שלב ניתן לחשב מובהקות סטטיסטית.
על ידי ניצול אסטרטגיה זו אימות בעקבות זריקות וריד הזנב, התקן של מחקר משפר עקב עקביות מוגברת של סוכן הניהול. שיטה זו של הערכת האיכות של הזרקת וריד הזנב ניתן אישית בקלות לסוכנים בזריקות שונות לכלול אינפרא אדום הגששים פלורסנט המסופקים באופן מסחרי על ידי מספר חברות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1033px;" width="1032">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">100% Oxygen air tank</td>
			<td style="width:175px;">AirGas Heathcare</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:435px;">For ventilation of animal.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Alcohol Pads</td>
			<td style="width:175px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">112-6131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Artificial Tears</td>
			<td style="width:175px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">100-2634</td>
			<td>This protects the rats eyes while it is anesthetized.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Beaker</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>This holds warm water to dilate the tail veins.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Distilled water</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Exhaust Fans</td>
			<td style="width:175px;">Hazard Technologies</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>For ventilation of lab, if it is not built in.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Face Mask</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Gas Chamber with tubing and face mask</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Gauze Pads</td>
			<td style="width:175px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">100-2634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Hair Bonnet</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Heating Lamp</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:175px;">Southmedic Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ND66794-013-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Padded Bench Cloth</td>
			<td style="width:175px;">Box Board Products Inc.</td>
			<td style="width:119px;">026755100I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pearl Small Animal Imager</td>
			<td>Li-COR Biosciences</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Pearl Trilogy Small Animal Imaging System</td>
			<td style="width:175px;">LI-COR Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Quote available via manufacturers web site. Other manufacturers such as Perkin Elmer (VisEn Medical FMT) offer preclinical NIR fluoresence imagers.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Scrubs, lab coat, shoe covers</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Sharps container</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">special diet</td>
			<td>Research Diets, Inc, New Brunswick, NJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Hilltop Animals, Springdale, PA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Sterile injection cap</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Sterile needle, 27G</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">SURFLO IV Catheter, 24G, yellow</td>
			<td style="width:175px;">TERUMO</td>
			<td style="width:119px;">SR+OX2419C1</td>
			<td>This is an alternative to using a sterile needle. It provides additional indication of correct venous insertion.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Surgical gloves</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:305px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:175px;">Multiple sources</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new best practice for validating tail vein injections in rat with near-infrared-labeled agents

עירוי לוריד (IV) של סוכנים לתוך וריד הזנב חולדות יכול להיות גם קשה וגם לא עקבי. אופטימיזציה של זריקות וריד הזנב הוא חלק מרכזי של הליכים ניסיוני רבים שבו ריאגנטים צריך להיות מוחדרים ישירות למחזור הדם. מבלי משים, ניתן ההזרקה תת עורית, ואולי לשנות את התוצאה מדעי. ניצול בדיקה ביולוגית המבוססת על nanoemulsion עם מואגד-סגול (NIRF) הפלורסנט, שיטה זו מציעה את היכולת של הדמיה הזנב מוצלחת וריד זריקה ויוו. עם השימוש imager NIRF, תמונות נלקחים לפני ואחרי ההזרקה של הסוכן. זריקה הרביעי מקובל אז איכותית או באופן כמותי נקבע בהתבסס על עוצמת האות NIRF באתר של הזרקה.

חולדות הוזרקו nanoemulsion NIRF המכילים המזרק הזנב לרוחב, מראש, שלאחר הזרקת התמונות צולמו עם הצלם קטן-חיה (טבלה של חומרים) כמפורט בפרוטוקול. תמונות שלאחר הזרקת איכותית שקובעת הזרקת איכות, ימוקם "בזריקה טובה" (n = 7), 'הזרקת רע' (n = 4) קבוצות. הערכה איכותי בוצע על ידי התבוננות עוצמת קרינה פלואורסצנטית שלאחר הזרקה לאזור. בזריקה אופטימלי, לא את האות NIRF לאתר של הזרקת. אין אות יראו אם הזריקה היא מוצלחת כי הסוכן נעקרו באופן מלא לזרם הדם. זריקה באיכות רע מציג סימן NIRF מפוזרת לאורכו של הזנב.
תמונות נותחו עם התוכנה הנלווית imager NIRF. אזורים-של-עניין נמשכו באתר של תמונות הזרקת מראש (איור 1C, E) וליד האזור של קרינה פלואורסצנטית בתמונות שלאחר ההזרקה (איור 1D, F). תמונות איפה פלורסצנטיות היה גלוי לכל אורך הזנב היו ייחשב והוציאו מניתוח (איור 2). מדידות של עוצמת קרינה פלואורסצנטית ושטח נרשמו. הערכים עבור אזור/זריחה בעוצמה חושבו, המותווה (איור 1G). הבדל משמעותי (אינטראקצית t-מבחן) על ידי קרינה פלואורסצנטית אינטנסיביות בין תמונות מראש, שלאחר הזרקת נצפתה בקבוצה 'הזרקת רע' (איור 1G) (p = 0.0024).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59295/59295fig1.jpg"> איור 1 : NIRF המבוסס על nanoemulsion והתמונות של וריד הזנב. (א) A מבוססי nanoemulsion ביולוגית החללית המכילים צבען NIRF היה מוזרק לתוך וריד הזנב (B) לרוחב ואת עם תמונה ב- imager NIRF. (C ו- D) קדם postinjection ותמונות של זריקה טובה. (E ו- F) קדם postinjection ותמונות של זריקה גרועה. החצים הלבנים להצביע על הנקודה של הזרקה. זה אפשרי להעריך איכותית ההצלחה של זריקה טובה לעומת זריקה רעה על-ידי הערכת מידת האות NIRF באתר של הזרקה. זריקות לא מקובל להציג פלורסצנטיות לכל אורך הזנב, הוצאו מן הניתוח (איור 2). (G) ניתן גם לנתח את התמונות כדי לחשוף את מדד כמותי של עוצמת קרינה פלואורסצנטית, עם ספי לאיכות הזריקה שהוקצה על-ידי החוקר. קווי השגיאה בגרף לשקף ב- SEM. עבור הקבוצה 'בזריקה טובה', n = 7. עבור הקבוצה 'הזרקת רע', n = 4. ישנו הבדל סטטיסטי בעוצמתם פלורסצנטיות בקבוצה 'הזרקת רע' בעת השוואת תמונות קדם ו- postinjection (אינטראקצית t-מבחן; p = 0.0024). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59295/59295fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59295/59295fig2.jpg"> איור 2 : דוגמאות של זריקות רע. (א) אות פלורסנט ראה בחלק של הזנב. (B) אות ניאון שנראה במלוא אורך הזנב. אותות פלואורסצנט (C) התפזרו בכבדות הזנב כולו ואזור סימטרית של גוף החיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59295/59295fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents at JoVE.com

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

כאן אנו מציגים שיטה לאימות זריקות וריד הזנב אצל חולדות על ידי ניצול אינפרא אדום קרינה פלואורסצנטית נתונים הדמיה של צבעי שולבו סוכנים או הגששים ביולוגי. הזנב הוא עם תמונה לפני אחרי הזריקה, לכמת את האות פלורסנט ואני נעשית הערכה של איכות הזרקה.

עבודה חדשה מומלצת עבור אימות זריקות וריד הזנב עכברוש עם סוכנים ליד אינפרא אדום-שכותרתו

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

שיטה זו של אימות והערכת דיוק ההזרקה מספקת שלב חשוב בבקרת איכות ושלב מכריע במחקרים בבעלי חיים להקלה על זריקות וריד זנב עקביות ובלתי ניתנות לשחזור. הערכת ההזרקה באמצעות הדמיה פלואורסצנטית מיד לאחר ביצועה מציעה את היתרון של קביעת אם הסוכן שלך נכנס למחזור הדם בכמות המיועדת שלו. הזרקת וריד הזנב היא מניפולציה מעשית כי היתרונות של הדגמה חזותית, כי ניתן משופרת על ידי התבוננות אישור של הסוכן מוזרק מאתר ההזרקה.הדגמת ההליך עם Muzamil סלים יהיה ברוק דיל, דוקטורנט מהמעבדה שלי. לפני הזרקת וריד הזנב, למקם חיה הרדמה באופן שוטף בתמונה פלואורסצנטיות כמעט אינפרא אדום עם אתר ההזרקה על הזנב חשוף להקים בסיס פלואורסצנטי. לאחר שהתמונה נרכשה, מעבירים את החיה לספסל הניתוחי בתצב הנוטה ומצמצמים את כלי הדם של הזנב על ידי טביעה במים חמים.לאחר דקה אחת בקירוב, כוון את הזנב כך שהצד הצדדי יהיה בתצוגה. וריד הזנב הצדי אמור להיראות כהה בצבעו. לחיטוי אורך הווריד עם רפידות אלכוהול.מקם את הזנב באופן צדדי והכנס צד שיפוע מחט 25 עד 27 מד למעלה ובמקביל לזנב הרים לתוך וריד הזנב הצדדי שנבחר החל באזור החוליות הדיסטליות של הזנב והזזת קרוב יותר אם מיקום מחט תקין נכשל לפי הצורך. בהכנסת מחט מוצלחת, פלאשבק דם צריך להיות שנצפה בשולי המחט. אם אין פלאשבק ברור, לאט להזיז את קצה המחט מבלי להסיר אותו מהזנב כדי למצוא החדרת ורידים.כאשר המחט הונחה כראוי, להכניס מזרק עם החומר להזרקה לתוך שפת המחט ולדכא את הבוכנה כדי לספק את התוכן לתוך וריד. לחלופין, ניתן להשתמש בקטטר עם מחוון זרימת דם. פלאשבק מהיר במקטע המחוון של הקטטר יצפה לאחר המיקום הנכון.לאחר מכן ניתן להשתמש בלחץ גב קל כדי למשוך דם לתוך המזרק כדי לאשר מיקום תקין בכלי לפני הזרקת. שוב, לא תורגש התנגדות. לאחר כל החומר נמסר, להסיר את המחט ולהחיל לחץ עם גזה סטרילית לפחות דקה אחת כדי להבטיח קרישה.סמן את אתר ההזרקה בעט כדי להבטיח שאתר ההזרקה יהיה גלוי בערוץ האור הלבן של התמונה הנרכשת. כדי להעריך את אות הפלואורסצנטיות שלאחר ההזרקה באתר ההזרקה, החזירו את החיה לשלב ההדמיה הכמעט אינפרא אדום וכווןו את החיה בצד הצדדי שלה כדי לחשוף את אתר ההזרקה בזנב הצדדי להדמיה כפי שהוכח. כדי לנתח את הפלואורסצנטיות של אתר ההזרקה הבסיסית ולאחר ההזרקה, ניתן לצייר אזורי עניין בתוכנת התמונה הכמעט אינפרא אדום על הזנב ליד אתר ההזרקה לפני וברחבי אזור הפלואורסצנטיות לאחר הזרקת וריד הזנב.זריקות בהצלחה נמסר ידגים כמעט באותה מידה רמות נמוכות של אות פלואורסצנטי לפני ואחרי הזריקה. תמונות שבהן הפלואורסצנטיות גלויה לאורך הזנב אינן מקובלות ויש להסירן מהניתוח. כל טכניקה מולקולרית התנהגותית, כירורגית או אקס ויוו יכולה להתבצע כרגיל לאחר הליך זה.טכניקה זו מספקת בקרת איכות עבור הזרקת וריד הזנב, חושף את האישור המהיר על ידי זרימת דם ורידית של הסוכן מוזרק כראוי, או אוסף באתר של הזרקה אם הווריד הוא החמיץ. הריג'נט המשמש בשיטה זו אינו מסוכן, עם זאת, יש לנקוט באמצעי הזהירות המתאימים אם הסוכן המבוסס על פלואורסצנטיות משולב בחומר מסוכן.

Research

JoVE Journal

Medicine

Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

הקרנה למכפילים מלנומה תוך שימוש במודל גידול כבני מקום דג זברה

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

Heterotopic עזר עכברוש כבד השתלה עם זרימה מוסדר פורטל וריד Arterialization בכישלון חריף כבדית

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

כלי דם בלון פגיעה וIntraluminal מנהל בעורקי תרדמת העכברוש

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

ביצוע subretinal זריקות במכרסמים כדי לספק תאי הרשתית פיגמנט האפיתל בהשעיה

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

חזר על איסוף דם של וריד הזנב של חולדות שאינם מרדימים עם מערכת איסוף דם ואקום

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Synergizing Antegrade Endoscopic with Bridging Vein Harvesting for Improvement of Great Saphenous Vein Graft Quality from the Lower Leg

סינגיזינג אנדוסקופי עם קציר וריד לשיפור איכות השתל וריד הגדול מהרגל התחתונה

Antegrade endoscopic harvesting of autografts for bypass grafting may be an optimal strategy addressing excellent graft quality and reduced post-operative ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

עכברוש עורק הראש מבוקר לחץ על פגיעה בבלון מגזרי עם יישום טיפולי Periadventitial

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

A Murine Tail Lymphedema Model

מודל לימפאדמה זנב מורין

Lymphedema is extremity swelling caused by lymphatic dysfunction. The affected limb enlarges because of accumulation of fluid, adipose, and fibrosis. ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

דגימת דם חוזרת מהווריד הסובקלבי של חולדה מודעת

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...