Name: study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves at JoVE.com

Diese Arbeit wurde unterstützt durch das National Key Research & Development Program (2016YFD0200900) of China, die National Natural Scientific Foundation of China (Nr. 31772076 und Nr. 31270728), Die China Postdoctoral Science Foundation (2018M630700) und der Open Fund of Of Of China (Nr. 31772076 und Nr. 31270728), die China Postdoctoral Science Foundation (2018M630700) und der Open Fund of Of Fund of China State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization (SKLTOF20180111).

1. Tee-Callus-Kultur
HINWEIS: Sterile Blätter wurden aus in vitro angebauten Plantletlinien gewonnen, die zuerst in der Forschungsgruppe17entwickelt wurden. Alle Eingriffe bis Abschnitt 5 wurden in einer sterilen laminaren Durchflusshaube durchgeführt, mit Ausnahme der Kulturzeit in einem Inkubator.
<ol><li>Stellen Sie den pH-Wert der beiden Medien (Murashige und Skoog [MS] Basalmedium und Gamborgs flüssiges Medium B5) vor dem Autoklavieren auf 5,8 ein (121 °C, 20...

<ol>
	<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+identification,+quantitation,+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh,+green,+and+white+teas+using+UPLC/DAD/MS.">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li><li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+green,+white,+black,+Oolong,+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content.">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li><li>Kopjar, M., Tadic&#180;, M., Piliz&#711;ota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green,+yellow+and+black+tea+leaves.">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li><li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li><li>Hou, R. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis.">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li><li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell.">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li><li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenobiotic+Metabolism+in+Plants:+In+vitro+Tissue,+Organ,+and+Isolated+Cell+Techniques.">Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques.</a> ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).</li></ol>

Dieser Artikel stellt den detaillierten Prozess der Etablierung eines Modells des Pestizidstoffwechsels in Teepflanzengewebe, einschließlich der Auswahl von Expflanzen, die Bestimmung der Zelllebensfähigkeit, und die Etablierung einer Teezellensuspensionskultur mit hoher metabolischer aktivität. Alle Teile eines Pflanzengewebes könnten verwendet werden, um Callus in einer sterilisierten Umgebung zu initiieren25. Teeblätter wurden in dieser Studie für die Callus-Initiation ausgewählt, nicht ...

Tee ist eines der am häufigsten konsumierten alkoholfreien Getränke der Welt1,2. Tee wird aus den Blättern und Knospen der holzigen mehrjährigen Camellia sinensis L. Teepflanzen werden in riesigen Plantagen angebaut und sind anfällig für zahlreiche Insektenschädlinge3,4. Organophosphor und neonicotinoide Insektizide werden oft als systemische Insektizide5 verwendet, um Teepflanzen vor Schädlingen wie Weißfliegen, Blatttrichtern und einigen lepidopteranartenArten zuschützen 6,7. Nach der Anwendung werden diese Insektizide absorbiert oder in die Pflanze übertragen. Innerhalb der Pflanze können diese systemischen Insektizide durch Hydrolyse, Oxidation oder Reduktionsreaktionen durch Pflanzenenzyme transformiert werden. Diese Transformationsprodukte können polarer und weniger toxisch sein als die Ausgangsverbindungen. Bei einigen Organophosphaten sind die Bioaktivitäten einiger Produkte jedoch höher. Zum Beispiel wird Acephat in die giftigeren Methamidophos8,9, und Dimethoat in Omethoat10,11metabolisiert. Pflanzenstoffwechselstudien sind daher wichtig, um das Schicksal eines Pestizids innerhalb einer Pflanze zu bestimmen12.
Pflanzengewebekulturen haben sich als nützliche Plattform für die Untersuchung des Pestizidstoffwechsels erwiesen, mit den identifizierten Metaboliten ähnlich denen in intakten Pflanzengefunden 13,14,15. Die Verwendung von Gewebekulturen, insbesondere Zellsuspensionskulturen, hat mehrere Vorteile. Erstens können Experimente frei von Mikroorganismen durchgeführt werden, wodurch die Interferenz der Pestizidumwandlung oder des Abbaus durch Mikroben vermieden wird. Zweitens bietet die Gewebekultur jederzeit konsistente Materialien für den Einsatz. Drittens sind die Metaboliten leichter aus Gewebekulturen zu extrahieren als aus intakten Pflanzen, und Gewebekulturen haben oft weniger zwischenende Verbindungen und eine geringere Komplexität von Verbindungen. Schließlich können Gewebekulturen leichter verwendet werden, um eine Reihe von Pestizidstoffwechsel in einem einzigen Experiment16zu vergleichen 16 .
In dieser Studie wurde eine Zellsuspension, die aus den Blättern steril angebauter Teepflanzelet gewonnen wurde, erfolgreich etabliert. Die Teezellensuspensionskultur wurde dann verwendet, um das Ableitungsverhalten von sechs systemischen Insektiziden zu vergleichen.
Dieses detaillierte Protokoll soll einige Anleitungen bieten, so dass Forscher eine Pflanzengewebekultur-Plattform einrichten können, die nützlich ist, um das metabolische Schicksal von Xenobiotika im Tee zu untersuchen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:674px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Acetamiprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">46717</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 135410-20-7</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Acetonitrile (CAN, 99.9%)</td>
			<td style="width:188px;">Tedia</td>
			<td style="width:175px;">AS1122-801</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 75-05-8</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Agar</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">A8190</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 9002-18-0</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Clothianidin (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">525</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 210880-92-5</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Dimethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">109217</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 60-51-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidacloprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">91029</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 138261-41-3</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidaclothiz (99.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Toronto Research Chemical</td>
			<td style="width:175px;">I275000</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 105843-36-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Kinetin (KT, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">K8010</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 525-79-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Omethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">105491</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 1113-02-6</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">P8070</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 25249-54-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Sucrose</td>
			<td style="width:188px;">Tocris Bioscience</td>
			<td style="width:175px;">5511</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 57-50-1</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Thiamethoxam (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">20625</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 153719-23-4</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">T8170</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 298-96-4</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:188px;">2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Guangzhou Saiguo Biotech</td>
			<td style="width:175px;">D8100</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 94-75-7</td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:77px;width:188px;">chiral column</td>
			<td style="width:188px;">Agilent CYCLOSIL-B</td>
			<td>112-6632</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Gas chromatography (GC)</td>
			<td style="width:188px;">Shimadu</td>
			<td>2010-Plus</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Flame Photometric Detector (FPD)&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">High-performance liquid chromatography (HPLC)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1260</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Ultraviolet detector (UV)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">HSS T3 C18 column</td>
			<td style="width:188px;">Waters</td>
			<td>186003539</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (100 mm &#215; 2.1 mm &#215; 1.8 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="96">
			<td height="96" style="height:96px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Agilent</td>
			<td>1290-6545</td>
			<td style="width:123px;">Tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometer (QTOF)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Thermo Scientific</td>
			<td>Ultimate 3000-Q Exactive Focus</td>
			<td style="width:123px;">Connected to a Orbitrap mass spectrometer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves

Es wurde eine Plattform zur Untersuchung des Insektizidstoffwechsels mit In-vitro-Geweben von Teepflanzen entwickelt. Blätter aus sterilen Teepflanzen wurden dazu induziert, lose Callus auf Murashige und Skoog (MS) Basalmedien mit den Pflanzenhormonen 2,4-Dichlorophenoxyessigsäure (2,4-D, 1,0 mg L-1) und Kinetin (KT, 0,1 mg L-1) zu bilden. Callus gebildet nach 3 oder 4 Runden Subkulierung, jede Dauer von 28 Tagen. Loser Callus (ca. 3 g) wurde dann in Flüssigmedien b5 geimpft, die die gleichen Pflanzenhormone enthielten, und in einem Schüttelinkubator (120 Umdrehungen pro Minute) im Dunkeln bei 25 °C bei 1 °C kultiviert. Nach 3-4 Subkulturen wurde eine aus DemTeeblatt gewonnene Zellsuspension in einem Subkulturverhältnis zwischen 1:1 und 1:2 (Suspensionsmutterflüssigkeit: frisches Medium) festgestellt. Auf dieser Plattform wurden sechs Insektizide (5 g ml-1 pro Thiamethoxam, Imidacloprid, Acetamiprid, Imidaclothiz, Dimethoat und Omethoat) in die von Teeblättern abgeleitete Zellsuspensionskultur aufgenommen. Der Stoffwechsel der Insektizide wurde mittels Flüssigchromatographie und Gaschromatographie verfolgt. Um die Nützlichkeit der Suspensionskultur der Teezellen zu validieren, wurden die Metaboliten von Thiamethoxan und Dimethoat in behandelten Zellkulturen und intakten Pflanzen mittels Massenspektrometrie verglichen. In behandelten Teezellkulturen wurden sieben Metaboliten von Thiamethoxan und zwei Metaboliten von Dimethoat gefunden, während in behandelten intakten Pflanzen nur zwei Metaboliten von Thiamethoxam und einer von Dimethoat gefunden wurden. Die Verwendung einer Zellsuspension vereinfachte die metabolische Analyse im Vergleich zur Verwendung intakter Teepflanzen, insbesondere für eine schwierige Matrix wie Tee.

Die Induktion von Callus aus Blättern, die von Feldteebäumen geerntet wurden, und von Blättern, die aus in vitro in einer sterilen Umgebung angebauten Teepflanzen entnommen wurden, wurde durch Messung von Kontamination, Bräunung und Induktion nach 28 Tagen Anbau auf MS-Medien verglichen ( Abbildung 1A). Das Calluswachstum wurde bei 20, 37, 62 und 90 Tagen Kultur registriert (Abbildung 1B). Der aus den in vitro gewachsenen Bl?...

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Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Diese Arbeit präsentiert ein Protokoll zur Etablierung einer Zellsuspensionskultur aus Tee (Camellia sinensis L.) Blätter, die verwendet werden können, um den Stoffwechsel von externen Verbindungen zu studieren, die von der ganzen Pflanze aufgenommen werden können, wie Insektizide.

Studie über den Stoffwechsel von sechs systemischen Insektiziden in einer neu etablierten Zellsuspensionskultur abgeleitet aus Tee (Camellia Sinensis L.) Blätter

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Tee ist eines der beliebtesten Getränke auf der ganzen Welt. Pestizide werden manchmal verwendet, um Teepflanzen vor Schädlingen zu schützen. Einige systemische Pestizide können dafür durch Enzyme in Teebaum gemacht werden.Und dann durch Oxidation, Hydrolyse oder Reduktionsreaktionen integriert. Pflanzenzellsuspensionskulturen können als eine verwendet werden, leicht, um das Pflanzenstoffwechselverhalten von Pestiziden zu untersuchen. Diese Methode hat mehrere Vorteile.Erstens kann es unter Bedingungen freier Mikroorganismen betrieben werden, wodurch eine Störung des Pestizidabbaus durch Mikroben vermieden wird. Zweitens kann es uns jederzeit konstantes Material liefern. Schließlich kann es auch leicht verwendet werden, um Theorien des Pestizidverhaltens in einem einzigen Experiment zu vergleichen.In dieser Studie stellen wir Teezellensuspensionskulturen aus variablen Farben von Teeblättern her. Der optimale Kulturstatus von Zellsuspensionen wurde dann verwendet, um das Ableitungsverhalten von sechs Pestiziden zu vergleichen. Dieses Experiment wird von Jiao Weiting und Ge Guoqin durchgeführt.Dies ist unsere Tee sterile Pflanzen, die als Quelle der Explantation funktioniert. Schneiden Sie entlang des mittleren Flügels eines sterilen Blattes mit einer Schere. Und dann unterteilen Sie jede Hälfte in kleine Stücke von etwa 0,3 mal 0,3 Zentimetern in einer Petrischale.Legen Sie die sterilen Explants auf ms visuelles Medium mit 2, 4-D und KT. Sechs Explanten können in einem 300-Milliliter-Kolben platziert werden. Kultur das Blatt explantiert bei einer konstanten Temperatur von 25 Grad Celsius im Dunkeln. Nach 28 Tagen wählen Sie die erste Generation des induzierten Callus und übertragen Sie dann auf frischen Kolben.Erwerben Sie den lockeren und variablen Callus nach drei bis vier Subkulturen. Schneiden Sie die großen, variablen und lockeren Callusen aus dem festen Medium in kleine Stücke mit einer sterilen chirurgischen Klinge unter sterilen Bedingungen. Wir sind etwa drei Gramm der kleinen Stücke eines Callus.Legen Sie den Callus in B5 mit 2, 4D und dem KT. Kultur die Flüssigzellsuspension bei konstanter Temperatur im Schüttelinkubator im Dunkeln. Nach sieben bis zehn Tagen Kultivierung, entfernen Sie den Kulturkolben und lassen Sie sie für ein paar Minuten stehen. Nehmen Sie den Überstand als Sediment hier wird die Kultur zu frischem Medium zwingen.Entfernen Sie die gefällten großen Calluses. Erhalten Sie die letzte gepflegte Zellsuspensionskultur nach vier bis drei Subkulturzyklen von jeweils 28 Tagen. Halten Sie eine Probe von lebenden Zellen bei hundert Grad Celsius für zehn Minuten als Kontrollzelle, bevor Sie die Lebensfähigkeit samtfärbung.Zentrifuge alle Zellsuspensionskultur für acht Minuten bei 6.000 G.Entfernen Sie den Überstand, bevor Sie die Zellen in 5 Milliliter PBS-Puffer aufhängen und schütteln Sie ihn für eine Minute von Hand. 2,5 Milliliter der TTC-Lösung hinzufügen und wieder von Hand schütteln. Inkubieren Sie die Mischung für eine Stunde in einem stehenden Inkubator bei 13 Grad Celsius.Fügen Sie ein Aliquot von vierhundert Mikroliter n-Sicht hinzu, um die Stammlösung aller Neonicotinoide Thiamethoxam, Acetimoprid, Imidacloprid und Imideproxase zu sterilisieren. Alles bis zur organischen ersten Phase. Dimethoat und Omethoat in die Zellsuspensionskulturen.Kulturproben von Zellsuspensionen mit Insektiziden bei konstanter Temperatur und Schütteln der Brutzeit. Nehmen Sie die Proben an verschiedenen Tagen. Um die Probe zu testen, die ein Neonicotinoid enthält, entfernen Sie einen 1 Milliliter Aliquot der homogenen Zellkultur.Legen Sie es in ein 1,5 Milliliter Kunststoffzentrifugenrohr, und zentrifugieren Sie es bei 4 000 G für zwei Minuten. Übergeben Sie den Überstand vor der Analyse durch HPLC-UV und UPLC QTOF durch eine 0,22 Mikrometer-Filtermembran. Um die Probe zu testen, fahren Sie in der organischen ersten Phase fort.Entfernen Sie einen 500 Mikroliter Aliquot der Zellkultur und legen Sie es in ein 35-Milliliter-Zentrifugenrohr oder ein 1,5-Milliliter-Kunststoffzentrifugenrohr. Fügen Sie 0,1 Gramm Natriumchlorid und fünf Milliliter Lösungsmittel in das 35 Milliliter Zentrifugenrohr der 500-Mikroliter-Proben. Wirbel die Mischung für eine Minute.Und dann lassen Sie sie für 10 Minuten ruhen. Nehmen Sie 2,5 Milliliter Überstand in ein 10 Milliliter Glasrohr und verdampfen Sie mit einem Stickstoffverdampfer bei 14 Grad Celsius bis zur Trockenheit. Lösen Sie den Rückstand mit einem Milliliter Aceton auf.Vortex für eine Minute, passieren Sie es durch eine 0,22 Mikrometer Filtermembran vor der Analyse durch GC-FPD. Legen Sie fünf Pflanzen in vier Liter Plastiktöpfe für fünfzehn Tage. Fügen Sie null Mikrogramm pro Milliliter bzw. 100 Mikrogramm pro Milliliter Thiamethoxam bzw. Dimethoaxe in Plastiktöpfe ein.Bereiten Sie die intakte Pflanzenprobe nach der vorherigen Methode vor, mit Ausnahme der Voreinweichung und anschließender Analyse durch Orbitrap-Massenspektrometrie. Verwenden Sie ein HPLCUV, um den Inhalt und die Stoffwechselprodukte von Thiamethoxam und Acetimoprid bei Wellenlängen von 254 Nanometern sowie von Imidacloprid und Imideproxase bei 270 Nanometern zu detektieren. Erkennen Sie den Inhalt von Dimethoat und Omethoat durch GC-FPD mithilfe einer röhrenförmigen Säule.Nachweis der Metaboliten von Insektiziden in der Zellkultur mit der UPRC QTOF mit einer Carbon-18-Säule. Detektieren Sie die Metaboliten von Insektiziden im Testpflanzenextrakt mit der UPLC Orbitrap Massenspektrometrie. Der Callus einer sterilen Pflanze hat eine geringere KontaminationBräunung, aber höhere Induktivität als die von Callus aus gepflückten Teeblättern.Der von sterilen Blättern abgeleitete Kalus war immer hellgelb, während der von gepflückten Blättern abgeleitete Callus weiß mit braunen Flecken war. Wenn die KT-Konzentration 0,1 Milligramm pro Liter betrug, war der Callus gelblich in der Farbe und locker in der Textur. Die Wachstumsrate des Callus war die höchste, bis zu 61,5%, wenn die Konzentration von 2, 4-D war ein Milligramm pro Liter mit der Konzentration von KT war 0,5 Milligramm pro Liter.Die Wachstumsdaten von callus war die beste und die Wachstumsrate von Callus war die höchste erreicht 46.9%Daher war die beste Kombination von Pflanze Homent war ein Milligramm pro Liter von 2, 4-D und 0,1 Milligramm pro Liter KT für den Tee Callus Wachstum. Der Kalus bedeckte die Blätter vollständig durch die vierte Subkultur, und wenn der Subkulturzyklus 28 Tage betrug. Der Callus war kräftig mit gelblicher Farbe und lockerer Textur und ohne Bräunung gewachsen.Nach dem Vergleich der Bruttodaten von Callus und der Farbe der Zellsuspension eignete sich das flüssige Medium B5 besser für die Zellsuspensionskultur. Der OD-Wert der Zellsuspensionskultur wurde verwendet, um die Menge des Zellwachstums darzustellen. Während der 75 Tage des Anbaus hatte das Verhältnis von 15 Gramm pro 40 Milliliter einen od-Wert, der deutlich höher war als der der beiden anderen Verhältnisse.Die Zelllebensfähigkeit innerhalb der Suspensionskultur der Teezellen wurde durch TTC-Färbung getestet. Die farblose TTC-Verbindung kann durch Dehydrogenase in Mitochondrien lebender Zellen in rotes Formadin umgewandelt werden, aber die Farbe kann in abgestorbenen Zellen nicht verändert werden. Und das ist der ganze Prozess der Etablierung einer Teezellensuspensionskultur.Dies ist die erste vergleichende Studie über den Stoffwechsel verschiedener Pestizide im Tee mit einer Zellsuspensionskulturtechnik. Mehrere Pestizidmetaboliten wurden identifiziert, und einige von ihnen wurden in gehaltenen Teepflanzen weiter untersucht. Diese neue Methode könnte als Modell für Pestizid-Stoffwechselstudien in Tee oder anderen Pflanzen dienen.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

Ein Verfahren zur Messung des Metabolismus in sortierter Subpopulationen von komplexen Zell Gemeinschaften Verwendung stabiler Isotopen-Tracing

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

Forschung

Biochemie

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Zeitaufgelöste Elektrospray-Ionisations Wasserstoff-Deuterium-Austausch-Massenspektrometrie zur Struktur Protein Studium und Dynamik

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

Isolierung von Zwischenfilamentproteinen aus mehreren Mausgeweben zur Untersuchung von altern-assoziierten posttranslationalen Modifikationen

Intermediate filaments (IFs), together with actin filaments and microtubules, form the cytoskeleton &#8211; a critical structural element of every cell. ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Nachweis und Visualisierung von DNA-schadeninduzierten Proteinkomplexen in Suspensionszellkulturen unter Verwendung des Proximity Ligation Assays

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Eine einfache Methode zur chemischen Hochdurchsatz-Screening in Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Mapping-Stoffwechsel: Laktat-Dehydrogenase Überwachungstätigkeit direkt im Gewebe

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Kleinräumige farbmetrischen Assays der intrazellulären Laktat und Pyruvat in den Fadenwurm Caenorhabditis elegans

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Dissipative Microgravimetry die Bindung Dynamik der Phospholipid-bindende Protein Annexin A2, solide unterstützt Lipid Bilayer mit einem Quarz-Resonator zu studieren

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Cell Fractionation of U937 Cells in the Absence of High-speed Centrifugation

Zelle Fraktionierung von U937 Zellen in der Abwesenheit von High-Speed-Zentrifugation

In this protocol we detail a method to obtain subcellular fractions of U937 cells without the use of ultracentrifugation or indiscriminate detergents. ...