Name: study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dal National Key Research & Development Program (2016YFD0200900) della Cina, dalla National Natural Scientific Foundation of China (n. 31772076 e n. 31270728), dalla China Postdoctoral Science Foundation (2018M630700) e dall'Open Fund di Laboratorio chiave dello Stato di biologia e utilizzo delle piante di tè (SKLTOF20180111).

1. Cultura del callo del tè
NOTA: Le foglie sterili sono state derivate da linee di plantlet coltivate in vitro sviluppate per la prima volta nel gruppo di ricerca17. Tutte le procedure fino alla sezione 5 sono state eseguite in una cappa sterile di flusso laminare, ad eccezione del tempo di coltura in un'incubatrice.
<ol><li>Regolare il pH dei due supporti (Murashige e Skoog [MS] supporto basale e mezzo liquido B5 di Gamborg) a 5,8 prima dell'autoclaving (121 gradi ...

<ol>
	<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+identification,+quantitation,+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh,+green,+and+white+teas+using+UPLC/DAD/MS.">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li><li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+green,+white,+black,+Oolong,+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content.">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li><li>Kopjar, M., Tadic&#180;, M., Piliz&#711;ota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green,+yellow+and+black+tea+leaves.">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li><li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li><li>Hou, R. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis.">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li><li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell.">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li><li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenobiotic+Metabolism+in+Plants:+In+vitro+Tissue,+Organ,+and+Isolated+Cell+Techniques.">Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques.</a> ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).</li></ol>

Questo articolo presenta il processo dettagliato di definizione di un modello di metabolismo dei pesticidi nel tessuto vegetale del tè, compresa la selezione di espianti, la determinazione della vitalità cellulare e la creazione di una coltura di sospensione delle cellule del tè con alta attività. Qualsiasi parte di un tessuto vegetale potrebbe essere utilizzata per avviare callo in un ambiente sterilizzato25. Le foglie di tè sono state scelte per l'avvio del calloso in questo studio, non sol...

Il tè è una delle bevande analcoliche più consumate al mondo1,2. Il tè è prodotto dalle foglie e dalle gemme della perenne camellia sinensis L. Tea coltivate in vaste piantagioni e sono suscettibili a numerosi insetti parassiti3,4. Gli insetticidi organofosforici e neonicotinoidi sono spesso usati come insetticidi sistemici5 per proteggere le piante da tè da parassiti come mosche bianche, tramogge di foglie e alcune specie di lepidopteran6,7. Dopo l'applicazione, questi insetticidi vengono assorbiti o traslocati nella pianta. All'interno della pianta, questi insetticidi sistemici possono essere trasformati attraverso l'idrolisi, l'ossidazione o le reazioni di riduzione da parte degli enzimi vegetali. Questi prodotti di trasformazione possono essere più polari e meno tossici rispetto ai composti padre. Tuttavia, per alcuni organofosfati, le bioattività di alcuni prodotti sono più elevate. Ad esempio, l'accesata è metabolizzato nel methamidophos più tossico8,9e dimethoate in omethoate10,11. Gli studi metabolici delle piante sono quindi importanti per determinare il destino di un pesticida all'interno di una pianta12.
Le colture di tessuti vegetali si sono dimostrate una piattaforma utile per studiare il metabolismo dei pesticidi, con i metaboliti identificati simili a quelli trovati nelle piante intatte13,14,15. L'uso di colture tissutali, in particolare le colture di sospensioni cellulari, ha diversi vantaggi. In primo luogo, gli esperimenti possono essere effettuati senza microrganismi, evitando così l'interferenza della trasformazione o della degradazione dei pesticidi da parte dei microbi. In secondo luogo, la coltura dei tessuti fornisce materiali coerenti da utilizzare in qualsiasi momento. In terzo luogo, i metaboliti sono più facili da estrarre dalle colture di tessuti che dalle piante intatte, e le colture di tessuti hanno spesso meno composti interring e minore complessità dei composti. Infine, le colture tissutali possono essere utilizzate più facilmente per confrontare una serie di metabolismo dei pesticidi in un singolo esperimento16.
In questo studio, è stata stabilita con successo una sospensione cellulare derivata dalle foglie di piantagione di tè coltivata sterilmente. La coltura delle sospensioni delle celle di tè è stata poi utilizzata per confrontare i comportamenti di dissipazione di sei insetticidi sistemici.
Questo protocollo dettagliato ha lo scopo di fornire alcune indicazioni in modo che i ricercatori possano stabilire una piattaforma di coltura dei tessuti vegetali utile per studiare il destino metabolico degli xenobiotici nel tè.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:674px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Acetamiprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">46717</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 135410-20-7</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Acetonitrile (CAN, 99.9%)</td>
			<td style="width:188px;">Tedia</td>
			<td style="width:175px;">AS1122-801</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 75-05-8</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Agar</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">A8190</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 9002-18-0</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Clothianidin (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">525</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 210880-92-5</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Dimethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">109217</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 60-51-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidacloprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">91029</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 138261-41-3</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidaclothiz (99.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Toronto Research Chemical</td>
			<td style="width:175px;">I275000</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 105843-36-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Kinetin (KT, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">K8010</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 525-79-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Omethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">105491</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 1113-02-6</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">P8070</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 25249-54-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Sucrose</td>
			<td style="width:188px;">Tocris Bioscience</td>
			<td style="width:175px;">5511</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 57-50-1</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Thiamethoxam (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">20625</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 153719-23-4</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">T8170</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 298-96-4</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:188px;">2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Guangzhou Saiguo Biotech</td>
			<td style="width:175px;">D8100</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 94-75-7</td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:77px;width:188px;">chiral column</td>
			<td style="width:188px;">Agilent CYCLOSIL-B</td>
			<td>112-6632</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Gas chromatography (GC)</td>
			<td style="width:188px;">Shimadu</td>
			<td>2010-Plus</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Flame Photometric Detector (FPD)&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">High-performance liquid chromatography (HPLC)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1260</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Ultraviolet detector (UV)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">HSS T3 C18 column</td>
			<td style="width:188px;">Waters</td>
			<td>186003539</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (100 mm &#215; 2.1 mm &#215; 1.8 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="96">
			<td height="96" style="height:96px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Agilent</td>
			<td>1290-6545</td>
			<td style="width:123px;">Tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometer (QTOF)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Thermo Scientific</td>
			<td>Ultimate 3000-Q Exactive Focus</td>
			<td style="width:123px;">Connected to a Orbitrap mass spectrometer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves

È stata sviluppata una piattaforma per studiare il metabolismo degli insetticidi utilizzando tessuti in vitro della pianta del tè. Foglie da sterili piantagioni di tè sono stati indotti a formare callus sciolto su Murashige e Skoog (MS) mezzi basali con gli ormoni vegetali 2,4-dichlorophenoxyacetic acido (2,4-D, 1.0 mg L-1) e kinetina (KT, 0.1 mg L-1). Callus si formò dopo 3 o 4 giri di subcultura, ciascuno della durata di 28 giorni. Il callo sciolto (circa 3 g) è stato poi inoculato in supporti liquidi B5 contenenti gli stessi ormoni vegetali ed è stato coltivato in un'incubatrice agitazione (120 giri/) al buio a 25 gradi centigradi. Dopo 3/4 sottoculture, una sospensione cellulare derivata dalla foglia di tè è stata stabilita in un rapporto di sottocultura compreso tra 1:1 e 1:2 (liquido madre sospensione: mezzo fresco). Utilizzando questa piattaforma, sei insetticidi (5 g mL-1 ciascuno tiamethoxam, imidacloprid, acetamiprid, imidaclothiz, dimethoate e omethoate) sono stati aggiunti nella coltura delle sospensioni cellulari derivata dalla foglia di tè. Il metabolismo degli insetticidi è stato tracciato utilizzando la cromatografia liquida e la cromatografia a gas. Per convalidare l'utilità della coltura delle sospensioni delle cellule del tè, i metaboliti del tiamethoxan e del dimethoate presenti nelle colture cellulari trattate e nelle piante intatte sono stati confrontati utilizzando la spettrometria di massa. Nelle colture trattate di cellule del tè, sono stati trovati sette metaboliti di tiamethoxan e due metaboliti di dimethoate, mentre nelle piante trattate intatte, sono stati trovati solo due metaboliti del tiamethoxam e uno di dimethoate. L'uso di una sospensione cellulare ha semplificato l'analisi metabolica rispetto all'uso di piante da tè intatte, soprattutto per una matrice difficile come il tè.

L'induzione di callo dalle foglie raccolte da alberi da tè coltivati sul campo e da foglie eccitate da piantagioni di tè coltivate in vitro in un ambiente sterile è stata confrontata misurando contaminazione, doratura e induzione dopo 28 giorni di coltivazione su supporti MS ( figura 1A). La crescita del callo è stata registrata a 20, 37, 62 e 90 giorni di cultura (Figura 1B). Il callo derivato dalle foglie coltivate in vitro...

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Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Questo lavoro presenta un protocollo per stabilire una coltura di sospensione cellulare derivata dal tè ( Foglie diCamellia sinensis L.) che possono essere utilizzati per studiare il metabolismo di composti esterni che possono essere assorbiti da tutta la pianta, come gli insetticidi.

Studio sul metabolismo di sei insetticidi sistemici in una nuova coltura di sospensione cellulare derivata dal tè (Camellia Sinensis L.) plurale di "leaf"

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Il tè è una delle bevande più popolari in tutto il mondo. I pesticidi sono talvolta usati per proteggere le piante da tè dai parassiti. Alcuni pesticidi sistemici possono essere fatti per questo dagli enzimi nell'albero del tè.E poi integrato attraverso reazioni di ossidazione, idrolisi o riduzione. Le colture di sospensione delle cellule vegetali possono essere utilizzate come, facilmente per studiare il comportamento del metabolismo delle piante dei pesticidi. Questo metodo ha diversi vantaggi.In primo luogo, può essere utilizzato in condizioni di microrganismi liberi, evitando così l'interferenza della degradazione dei pesticidi causata dai microbi. In secondo luogo, può fornirci materiale costante in qualsiasi momento. Infine, può anche essere usato facilmente per confrontare le teorie del comportamento dei pesticidi in un singolo esperimento.In questo studio, stabiliamo colture di sospensione delle cellule del tè da colori variabili delle foglie di tè. Lo stato ottimale delle colture delle sospensioni cellulari è stato quindi utilizzato per confrontare il comportamento di dissipazione di sei pesticidi. Questo esperimento sarà condotto da Jiao Weiting e Ge Guoqin.Questa è la nostra plantlet sterile da tè che funziona come fonte di espianto. Tagliare lungo l'ala centrale di una foglia sterile usando le forbici. E poi, suddividere ogni metà in piccoli pezzi di circa 0,3 per 0,3 centimetri in una piastra di Petri.Posizionare gli espianto sterili su un supporto visivo MS contenente 2, 4D e KT. Sei espianto possono essere collocati in un pallone da 300 millilitri. Coltura la foglia espianta a una temperatura costante di 25 gradi Celsius al buio. Dopo 28 giorni, selezionare la prima generazione di callo indotto e quindi trasferirlo in pallone fresco.Acquisire il callus libero e variabile dopo tre o quattro sottoculture. Tagliare quelli grandi, calli variabili e sciolti dal mezzo solido in piccoli pezzi utilizzando una lama chirurgica sterile in condizioni sterili. Siamo circa tre grammi dei piccoli pezzi di un callo.Inserire il callo in B5 contenente 2, 4D e KT. Coltura della sospensione a celle liquide a temperatura costante nell'incubatrice di scuotimento al buio. Dopo sette o dieci giorni di coltura, rimuovere il pallone della coltura e lasciarli riposare per alcuni minuti. Prendi il supernatante poiché il sedimento qui costringerà la cultura a un mezzo fresco.Rimuovere i calli di grandi dimensioni precipitati. Ottenere l'ultima coltura di sospensione cellulare ben curata dopo quattro o tre cicli di sottocoltura di 28 giorni ciascuno. Mantenere un campione di cellule viventi a cento gradi Celsius per dieci minuti come cella di controllo prima della colorazione di vitalità.Centrifugare tutte le impostazioni di sospensione cellulare per otto minuti a 6.000 G.Rimuovere il supernatante prima di sospendere le cellule in 5 millilitri di tampone PBS e scuoterlo per un minuto a mano. Aggiungere 2,5 millilitri della soluzione TTC e agitare di nuovo a mano. Incubare la miscela per un'ora in un'incubatrice in piedi a 13 gradi Celsius.Aggiungere un'aliquota di quattrocento microlitri per sterilizzare la soluzione stock di tutti i neonicotinoidi Thiamethoxam, Acetimoprid, Imidacloprid e Imideproxase. Tutto alla prima fase organica. Dimetoato e ometoato rispettivamente nelle colture di sospensione cellulare.Campioni di coltura di sospensioni cellulari con insetticidi a temperatura costante e velocità dell'incubatrice tremante. Prelevare i campioni in giorni diversi. Per testare il campione contenente un neonicotinoide, rimuovere un'aliquota di 1 millilitro della coltura cellulare omogenea.Mettilo in un tubo di centrifuga di plastica da 1,5 millilitri e centrifugalo a 4.000 G per due minuti. Passare il supernatante attraverso una membrana filtrante da 0,22 micrometri prima dell'analisi da parte di HPLC-UV e UPLC QTOF. Per testare il campione, continuare nella prima fase organica.Rimuovere un'aliquota di 500 microlitri della coltura cellulare e posizionarsi in un tubo di centrifuga da 35 millilitri o in un tubo di centrifuga in plastica da 1,5 millilitri. Aggiungere 0,1 grammi di cloruro di sodio e cinque millilitri estrarre il solvente nel tubo di centrifuga da 35 millilitri dei campioni da 500 microlitri. Vortice la miscela per un minuto.E poi lasciare riposare per 10 minuti. Prendere 2,5 millilitri di supernatante in un tubo di vetro da 10 millilitri ed evaporare a quasi secchezza usando un evaporatore di azoto a 14 gradi Celsius. Sciogliere il residuo con un millilitro acetone.Vortice per un minuto, passalo attraverso una membrana filtrante di 0,22 micrometri prima dell'analisi da parte di GC-FPD. Metti cinque piante in vasi di plastica da quattro litri per quindici giorni. Aggiungere zero microgrammi per millilitro o 100 microgrammi per millilitro di Thiamethoxam o dimetoaxe in vasi di plastica, rispettivamente.Preparare il campione di pianta intatto secondo il metodo precedente, ad eccezione del pre-ammollo e quindi analizzare per spettrometria di massa Orbitrap. Utilizzare un HPLCUV per rilevare il contenuto e i prodotti metabolici del Thiamethoxam e dell'Acetimoprid a lunghezze d'onda di 254 nanometri, e di Imidacloprid e Imideproxase a 270 nanometri. Rilevare il contenuto di dimetoato e ometoato mediante GC-FPD utilizzando una colonna tubolare.Rilevare i metaboliti degli insetticidi nella coltura cellulare utilizzando l'UPRC QTOF con una colonna Carbon-18. Rilevare i metaboliti degli insetticidi nell'estratto vegetale di prova utilizzando la spettrometria di massa UPLC Orbitrap. Il callo di una plantlet sterile ha una minore doratura di contaminazione ma una maggiore induttività quella del callo dalle foglie di tè raccolte.Il callo derivato da foglie sterili era sempre giallastro brillante, mentre il callo derivato dalle foglie raccolte era bianco con macchie marroni. Quando la concentrazione di KT era di 0,1 milligrammi per litro, il callo era di colore giallastro e sciolto nella consistenza. Il tasso di crescita del callo era il più alto, fino al 61,5% quando la concentrazione di 2, 4-D era di un milligrammo per litro con la concentrazione di KT era di 0,5 milligrammi per litro.I dati di crescita del callo erano i migliori e il tasso di crescita del callo era il più alto raggiunto il 46,9%Pertanto, la migliore combinazione di homent vegetale era di un milligrammo per litro di 2, 4-D e 0,1 milligrammi per litro di KT per la crescita del tea callus. Il callo copriva completamente le foglie con la quarta sottocultura, e quando il ciclo di sottocultura era di 28 giorni. Il callo era cresciuto vigorosamente con colore giallastro e consistenza sciolta e senza doratura.Dopo aver confrontato i dati lordi del callo e il colore della sospensione cellulare, il mezzo liquido B5 era più adatto per la coltura di sospensioni cellulari. Il valore OD delle impostazioni cultura della sospensione cellulare è stato utilizzato per rappresentare la quantità di crescita cellulare. Durante i 75 giorni di coltivazione, il rapporto di 15 grammi per 40 millilitro aveva un valore di OD significativamente superiore a quello degli altri due rapporti.La vitalità cellulare all'interno della coltura delle sospensioni delle celle da tè è stata testata dalla colorazione TTC. Il composto TTC incolore può essere convertito in formadina rossa dai deidrogenasi nei mitocondri delle cellule viventi, ma il colore non può essere cambiato nelle cellule morte. E questo è l'intero processo di creazione di una coltura di sospensione delle cellule del tè.Questo è il primo studio comparativo del metabolismo di diversi pesticidi nel tè utilizzando una tecnica di coltura delle sospensioni cellulari. Sono stati identificati diversi metaboliti dei pesticidi e alcuni di essi sono stati ulteriormente studiati nelle piante da tè tenute. Questo nuovo metodo potrebbe servire come modello per gli studi metabolici sui pesticidi nel tè o in altre piante.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

Un metodo per misurare il metabolismo in Ordinati sottopopolazioni di cellule Comunità complessi utilizzando Stable Isotope Tracing

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

Ricerca

Biochimica

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Scambio risolta in tempo ionizzazione elettrospray idrogeno-deuterio Spettrometria di Massa per lo studio delle proteine ​​Struttura e dinamica

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

Isolamento di proteine ​​filamentose intermedie da tessuti multipli di topo per studiare modificazioni post-traduzionali associate all&#39;invecchiamento

Intermediate filaments (IFs), together with actin filaments and microtubules, form the cytoskeleton &#8211; a critical structural element of every cell. ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Rilevamento e visualizzazione di complessi proteici indotti da danni a DNA nelle cellule di cellule di sospensione utilizzando il test di legatura di prossimità

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Un metodo semplice per High Throughput Screening chimico in Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Metabolismo di mappatura: Monitoraggio dell'attività della deidrogenasi del lattato direttamente nel tessuto

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Su piccola scala saggi colorimetrici di intracellulare lattato e piruvato nel Nematode Caenorhabditis elegans

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Microgravimetry dissipativo per studiare la dinamica di associazione del fosfolipide proteina Annessina A2 a lipidici solido-supportato utilizzando un risonatore al quarzo

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Cell Fractionation of U937 Cells in the Absence of High-speed Centrifugation

Il frazionamento delle cellule delle cellule U937 in assenza di centrifugazione ad alta velocità

In this protocol we detail a method to obtain subcellular fractions of U937 cells without the use of ultracentrifugation or indiscriminate detergents. ...

Visualizing Surface T-Cell Receptor Dynamics Four-Dimensionally Using Lattice Light-Sheet Microscopy

Visualizzazione delle dinamiche del recettore a cellule T di superficie in modo quad-dimensionale utilizzando la microscopia A fogli di luce a reticolo