Name: study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves at JoVE.com

이 작품은 중국의 국가 핵심 연구 및 개발 프로그램 (2016YFD0200900), 중국의 국가 자연 과학 재단 (No. 31772076 및 No. 31270728), 중국 박사 후 과학 재단 (2018M630700), 그리고 오픈 펀드의 지원을 받았습니다. 차 식물 생물학 및 활용의 국가 키 연구소 (SKLTOF20180111).

1. 차 캘러스 문화
참고: 멸균 잎은 연구그룹17에서처음 개발된 시험관내 재배 식물군 라인에서 유래되었다. 섹션 5까지의 모든 절차는 인큐베이터에서 배양 시간을 제외하고 멸균 층류 흐름 후드에서 수행되었다.
<ol><li>오토클레이브(121°C, 20분)에 앞서 두 배지(무라시게 및 스쿠그[MS] 기저 배지 및 감보그의 B5 액상 배지)의 pH를 5.8로 조정한다.</li>
	<li>가위?...

<ol>
	<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+identification,+quantitation,+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh,+green,+and+white+teas+using+UPLC/DAD/MS.">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li><li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+green,+white,+black,+Oolong,+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content.">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li><li>Kopjar, M., Tadic&#180;, M., Piliz&#711;ota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green,+yellow+and+black+tea+leaves.">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li><li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li><li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+the+Nonsystemic+Behavior+of+the+Pesticide+Ferbam+on+Tea+Leaves+by+Engineered+Gold+Nanoparticles.">Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles.</a> Environmental Science &amp; Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).</li><li>Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+of+C-14-Ethion+insecticide+in+the+presence+of+deltamethrin+and+dimilin+pesticides+in+cotton+seeds+and+oils,+removal+of+ethion+residues+in+oils,+and+bioavailability+of+its+bound+residues+to+experimental+animals.">Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).</li><li>Fang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+Dynamics+and+Dietary+Risk+Assessments+of+Two+Neonicotinoid+Insecticides+during+Lonicerajaponica+Planting,+Drying,+and+Tea+Brewing+Processes.">Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes.</a> Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).</li><li>Pan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissipation+pattern,+processing+factors,+and+safety+evaluation+for+dimethoate+and+its+metabolite+(omethoate)+in+tea+(Camellia+sinensis).">Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis).</a> PloS One. 10 (9), e0138309 (2015).</li><li>Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatal+intoxication+with+omethoate.">Fatal intoxication with omethoate.</a> International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).</li><li>Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residues+of+acephate+and+its+metabolite+methamidophos+in/on+mango+fruit+(Mangifera+indica+L.).">Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.).</a> Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).</li><li>Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradation+of+acephate+using+a+developed+bacterial+consortium+and+toxicological+analysis+using+earthworms+(Lumbricus+terrestris)+as+a+model+animal.">Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal.</a> International Biodeterioration &amp; Biodegradation. 69, 1-9 (2012).</li><li>Ford, K. A., Casida, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+metabolism+and+pharmacokinetics+of+seven+neonicotinoid+insecticides+in+spinach.">Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).</li><li>Frear, D. S., Swanson, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolism+of+cisanilide+(cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide)+by+Excised+Leaves+and+Cell+Suspension+Cultures+of+Carrot+and+Cotton.">Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).</li><li>Sandermann, H., Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+plant+cell+cultures+to+study+the+metabolism+of+environmental+chemicals.">Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).</li><li>Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+metabolite+profiling+of+the+insecticide+thiamethoxam+in+plant+and+cell+suspension+culture+of+tomato.">Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).</li><li>Lichtner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phloem+mobility+of+crop+protection+products.">Phloem mobility of crop protection products.</a> Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shoot+basal+ends+as+novel+explants+for+in+vitro+plantlet+regeneration+in+an+elite+clone+of+tea.">Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea.</a> Journal of Horticultural Science &amp; Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).</li><li>Meng, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake,+Translocation,+Metabolism,+and+Distribution+of+Glyphosate+in+Nontarget+Tea+Plant+(Camellia+sinensis+L).">Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L).</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).</li><li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+Extraction+Method+for+Determination+of+Neonicotinoid+Residues+in+Tea.">Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).</li><li>Karmakar, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence,+metabolism+and+safety+evaluation+of+thiamethoxam+in+tomato+crop.">Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop.</a> Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).</li><li>Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+Dimethoate+and+Metabolites+Following+Foliar+Application+to+Plants.">Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).</li><li>Lucier, G. W., Menzer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nature+of+oxidative+metabolites+of+dimethoate+formed+in+rats,+liver+microsomes,+and+bean+plants.">Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).</li><li>Yang, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties. , (2004).</li><li>Jiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+Metabolic+Behaviors+of+Six+Systemic+Insecticides+in+a+Newly+Established+Cell+Suspension+Culture+Derived+from+Tea+(L.)+Leaves.">Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).</li><li>Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation,+growth+and+cryopreservation+of+plant+cell+suspension+cultures.">Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures.</a> Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).</li><li>Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+plant+growth+regulators+on+cell+growth+and+ginsenoside+saponin+production+by+suspension+cultures+of+Panax+quinquefolium.">Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium.</a> Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).</li><li>Grover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+monoterpenoids+and+aroma+compounds+from+cell+suspension+cultures+of+Camellia+sinensis.">Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).</li><li>Lei, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis.">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li><li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell.">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li><li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenobiotic+Metabolism+in+Plants:+In+vitro+Tissue,+Organ,+and+Isolated+Cell+Techniques.">Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques.</a> ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).</li></ol>

이 기사는 이식물의 선택, 세포 생존력의 결정, 높은 대사를 가진 차 세포 현탁액 배양의 확립을 포함하여 차 식물 조직에 있는 농약 물질 대사의 모형을 설치하는 상세한 과정을 제시합니다 활동. 식물 조직의 모든 부분은 살균 된 환경에서 굳은 살을 시작하는 데 사용할 수있습니다 25. 차 잎은 이 연구에서 캘러스 개시를 위해 선택되었으며, 잎이 지하 부분보다 덜 오염되는 경?...

차는 세계에서 가장 널리 소비되는 무알코올 음료중 하나입니다 1,2. 차는 우디다년 동백꽃의 잎과 싹에서 생산되며 L. 차 식물은 광대한 농장에서 재배되며 수많은 곤충 해충3,4에취약하다. 유기인산및네오니코티노이드 살충제는 백색파리, 잎호퍼 및 일부 레피도프테란 종6,7과 같은 해충으로부터 차 식물을 보호하기 위해 전신 살충제5로 자주 사용된다. 적용 후, 이러한 살충제는 흡수되거나 식물로 전이됩니다. 식물 내에서, 이러한 전신 살충제는 식물 효소에 의해 가수 분해, 산화 또는 환원 반응을 통해 형질전환될 수 있다. 이러한 변형 제품은 모 화합물보다 더 극성 및 덜 독성이 있을 수 있습니다. 그러나 일부 유기 인산염의 경우 일부 제품의 생체 활동이 더 높습니다. 예를 들어, 아세트산은 보다 독성이 강한 메타미도포스8, 9, 및 이메토에이트 내로 대사되어10,11. 식물 대사 연구는 따라서 식물 내의 농약의 운명을 결정하는 데 중요하다12.
식물 조직 배양은 농약 대사를 조사하기 위한 유용한 플랫폼으로 입증되었으며, 확인된 대사산물은 그대로식물13,14,15에서발견되는 것과 유사하다. 조직 배양, 특히 세포 현탁액 배양의 사용은 몇 가지 장점을 갖는다. 첫째, 실험은 미생물이 없는 실험을 수행하여 미생물에 의한 농약 변형 또는 분해의 간섭을 피할 수 있습니다. 둘째, 조직 배양은 언제든지 사용하기 위한 일관된 물질을 제공한다. 셋째, 대사 산물은 손상되지 않은 식물보다 조직 배양에서 추출하기가 더 쉬울 수 있으며, 조직 배양은 종종 인터링 화합물이 적고 화합물의 복잡성이 낮습니다. 마지막으로, 조직 배양은 단일 실험16에서일련의 농약 대사를 비교하는데 보다 용이하게 사용될 수 있다.
본 연구에서는 멸균 재배 차 식물의 잎에서 파생 된 세포 현탁액이 성공적으로 확립되었습니다. 차 세포 현탁액 배양은 6개의 전신 살충제의 발산 거동을 비교하기 위해 사용되었다.
이 상세한 프로토콜은 연구원이 차에 있는 xenobiotics의 신진 대사 운명을 공부하기 위하여 유용한 식물 조직 문화 플랫폼을 설치할 수 있도록 몇몇 지도를 제공하기 위한 것입니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:674px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Acetamiprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">46717</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 135410-20-7</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Acetonitrile (CAN, 99.9%)</td>
			<td style="width:188px;">Tedia</td>
			<td style="width:175px;">AS1122-801</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 75-05-8</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Agar</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">A8190</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 9002-18-0</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Clothianidin (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">525</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 210880-92-5</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Dimethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">109217</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 60-51-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidacloprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">91029</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 138261-41-3</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidaclothiz (99.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Toronto Research Chemical</td>
			<td style="width:175px;">I275000</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 105843-36-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Kinetin (KT, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">K8010</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 525-79-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Omethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">105491</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 1113-02-6</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">P8070</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 25249-54-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Sucrose</td>
			<td style="width:188px;">Tocris Bioscience</td>
			<td style="width:175px;">5511</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 57-50-1</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Thiamethoxam (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">20625</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 153719-23-4</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">T8170</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 298-96-4</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:188px;">2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Guangzhou Saiguo Biotech</td>
			<td style="width:175px;">D8100</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 94-75-7</td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:77px;width:188px;">chiral column</td>
			<td style="width:188px;">Agilent CYCLOSIL-B</td>
			<td>112-6632</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Gas chromatography (GC)</td>
			<td style="width:188px;">Shimadu</td>
			<td>2010-Plus</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Flame Photometric Detector (FPD)&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">High-performance liquid chromatography (HPLC)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1260</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Ultraviolet detector (UV)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">HSS T3 C18 column</td>
			<td style="width:188px;">Waters</td>
			<td>186003539</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (100 mm &#215; 2.1 mm &#215; 1.8 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="96">
			<td height="96" style="height:96px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Agilent</td>
			<td>1290-6545</td>
			<td style="width:123px;">Tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometer (QTOF)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Thermo Scientific</td>
			<td>Ultimate 3000-Q Exactive Focus</td>
			<td style="width:123px;">Connected to a Orbitrap mass spectrometer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves

차 공장의 체외 조직을 사용하여 살충제 대사를 연구하기위한 플랫폼이 개발되었습니다. 멸균차 식물로부터의 잎은 식물 호르몬 2,4-디클로로페녹시아세트산(2,4-D, 1.0 mg L-1)과 키네틴(KT, 0.1mg L-1)을 가진 무라시게및 스쿠그(MS) 기저 매에 느슨한 굳은살을 형성하도록 유도하였다. 캘러스는 각각 28 일 동안 지속되는 3 또는 4 라운드의 후 형성되었습니다. 느슨한 캘러스(약 3 g)를 동일한 식물 호르몬을 함유하는 B5 액상 배지로 접종한 후 25±1°C에서 어둠 속에서 흔들리는 인큐베이터(120 rpm)에서 배양하였다. 3-4 서브컬쳐 후, 차잎에서 유래된 세포 현탁액을 1:1 및 1:2(현탁액 어머니 액체: 신선한 배지) 사이의 하위 배양 비율로 확립하였다. 이 플랫폼을 사용하여, 6개의 살충제(5 μg mL-1 각 티아메톡삼, 이미다클로프리드, 아세트타미프리드, 이미다클로시즈, 디메토에이트 및 오메토아테)를 차 잎 유래 세포 현탁액 배양에 첨가하였다. 살충제의 대사를 액체 크로마토그래피 및 가스 크로마토그래피를 사용하여 추적했습니다. 차 세포 현탁액 배양의 유용성을 검증하기 위해, 처리된 세포 배양 및 손상되지 않은 식물에 존재하는 티아메톡산 및 디메토이트의 대사산물을 질량분광법을 사용하여 비교하였다. 처리된 차 세포 배양에서, 티아메톡산의 7개의 대사산물 및 디메토아테의 2개의 대사산물이 발견되었으며, 처리된 그대로 식물에서는 티아메톡삼의 대사산물 2개와 디메토에이트 중 하나만 발견되었다. 세포 현탁액의 사용은 특히 차와 같은 어려운 매트릭스에 대해 그대로 차 식물의 사용에 비해 대사 분석을 단순화했다.

현장에서 자란 차 나무와 멸균 환경에서 시험관 내에서 자란 차 식물에서 절제된 잎에서 수확한 잎에서 칼의 유도는 MS 매체에 재배 한 후 오염, 브라우닝 및 유도를 측정하여 비교했습니다. 그림1A)를 참조하십시오. 캘러스 성장은 20, 37, 62 및 90일의 배양(도1B)에서기록되었다. 시험관내에서 자란 잎에서 유래한 캘러스는 재배 90?...

Watch this Scientific Journal Video about Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves at JoVE.com

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

이 연구는 살충제 와 같은 전체 식물에 의해 채택될 수 있는 외부 화합물의 대사를 연구하는데 사용될 수 있는 차(동백나무)에서 유래된 세포 현탁액 배양을 확립하기 위한 프로토콜을 제시한다.

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

차는 전 세계에서 가장 인기있는 음료 중 하나입니다. 살충제는 때때로 해충으로부터 차 식물을 보호하는 데 사용됩니다. 일부 전신 살충제는 티 트리의 효소에 의해 이것을 위해 만들 수 있습니다.그리고 산화, 가수 분해 또는 환원 반응을 통해 통합됩니다. 식물 세포 현탁액 배양은 농약의 식물 대사 행동을 쉽게 연구하기 위해, 쉽게 사용할 수 있습니다. 이 방법에는 몇 가지 장점이 있습니다.첫째, 무료 미생물의 조건에서 작동할 수 있으므로 미생물에 의한 농약 분해의 간섭을 피할 수 있다. 둘째, 언제든지 우리에게 일정한 재료를 제공 할 수 있습니다. 마지막으로, 그것은 또한 단일 실험에서 농약 행동의 이론을 비교 하기 위해 쉽게 사용할 수 있습니다.이 연구에서는 차 잎의 가변색으로부터 차 세포 현탁액 배양을 확립합니다. 세포 현탁액의 최적 배양 상태는 6 농약의 소멸 행동을 비교하기 위해 사용되었습니다. 이 실험은 자오 웨이팅과 게 구오친에 의해 수행됩니다.이것은 우리의 차 멸균 화분은 절제의 근원으로 작동 합니다. 가위를 사용하여 멸균 잎의 중간 날개를 따라 잘라. 그리고, 페트리 접시에 약 0.3 배 0.3 센티미터의 작은 조각으로 각 절반을 세분화.멸균 식소균을 2, 4-D 및 KT가 포함된 MS 시각적 매체에 놓습니다. 6개의 이출은 300 밀리리터 플라스크에 배치할 수 있습니다. 어둠 속에서 섭씨 25도의 일정한 온도에서 잎을 배양합니다. 28 일 후, 유도 된 callus의 첫 번째 세대를 선택한 다음 신선한 플라스크로 전송합니다.3~4개의 하위 문화권 후에 느슨하고 가변 콜러스를 획득합니다. 멸균 조건하에서 멸균 수술 블레이드를 사용하여 고체 매체에서 가변 및 느슨한 굳은 칼을 작은 조각으로 잘라냅니다. 우리는 캘러스의 작은 조각의 약 3 그램입니다.콜러스를 2, 4D, KT가 포함된 B5에 넣습니다. 어둠 속에서 흔들리는 인큐베이터에서 일정한 온도로 액체 세포 현탁액을 배양합니다. 7~10일 의 배양 후, 문화 플라스크를 제거하고 몇 분 동안 서 둡니다. 여기에 퇴적물으로 상체를 가지고 신선한 매체에 문화를 강제합니다.침전된 큰 굳은 굳을 제거합니다. 각각 28일의 4~3개의 서브배양 주기 후에 최종 잘 손질된 세포 현탁액 배양을 획득한다. 생존 력 염색 하기 전에 대조구로 10 분 동안 100 섭씨에서 살아있는 세포의 샘플을 유지 합니다.원심분리기 는 6, 000 G.에서 8분 동안 모든 세포 현탁액 배양을 제거하고 PBS 버퍼의 5 밀리리터로 세포를 일시 중단하고 손으로 1 분 동안 흔들어 전에 상신제들을 제거합니다. TTC 용액의 2.5 밀리리터를 추가하고 다시 손으로 흔들어 줍니다. 섭씨 13도에서 서있는 인큐베이터에서 1 시간 동안 혼합물을 배양하십시오.모든 네오니코티노이드 티아메톡삼, 아세티노프리드, 이미다클로프리드, 이미데프로제스의 스톡 솔루션을 살균하기 위해 400마이크로리터의 알리쿼터를 추가합니다. 모든 유기 첫 번째 단계. 디메토이트 및 세포 현탁액 배양으로 각각 omethoate.일정한 온도에서 살충제와 세포 현탁액의 배양 샘플, 그리고 인큐베이터 속도를 흔들어. 다른 날에 샘플을 가져 가라. 네오니코티노이드를 함유한 시료를 테스트하려면 동질세포 배양의 1 밀리리터 알리쿼트를 제거한다.1.5 밀리리터 플라스틱 원심분리기 튜브에 넣고 원심분리기는 4, 000 G에서 2분간 배치합니다. HPLC-UV 및 UPLC QTOF에 의해 분석하기 전에 0.22 마이크로미터 필터 멤브레인을 통해 상체를 전달합니다. 샘플을 테스트하려면 유기 첫 번째 단계에서 계속하십시오.세포 배양의 500 마이크로리터 알리쿼트를 제거하고 35 밀리리터 원심분리기 튜브 또는 1.5 밀리리터 플라스틱 원심분리기 튜브에 넣습니다. 염화 나트륨 0.1 그램과 5 밀리리터 추출물 용매를 500 마이크로리터 샘플의 35 밀리리터 원심분리기 튜브에 넣습니다. 1 분 동안 혼합물을 소용돌이.그리고 10 분 동안 휴식을 취할 수 있습니다. 2.5 밀리리터의 상체를 10 밀리리터 유리 튜브에 넣고 섭씨 14도에서 질소 증발기를 사용하여 거의 건조함으로 증발하십시오. 잔류물을 1밀리리터 아세톤으로 녹입니다.1 분 동안 소용돌이, GC-FPD에 의해 분석하기 전에 0.22 마이크로 미터 필터 멤브레인을 통과. 15 일 동안 4 리터 플라스틱 냄비에 5 개의 식물을 넣습니다. 밀리리터당 0 마이크로그램 또는 티아메톡삼밀리리터당 100마이크로그램을 플라스틱 냄비에 넣으세요.이전 방법에 따라 그대로 식물 샘플을 준비, 사전 침을 제외하고 다음 Orbitrap 질량 분광법에 의해 분석. HPLCUV를 사용하여 254 나노미터의 파장에서 티아메톡삼과 아세티모프리드의 함량 및 대사 산물을 감지하고, 270 나노미터의 이미다클로프리드와 이미데프로사제의 함량과 대사 산물을 검출한다. 관 열을 사용하여 GC-FPD에 의한 디메트호이트와 오메토이트 의 함량을 감지합니다.탄소-18 컬럼을 사용하여 UPRC QTOF를 사용하여 세포 배양에서 살충제의 대사산물을 검출한다. UPLC 궤도 랩 질량 분광법을 사용하여 시험 식물 추출물에서 살충제의 대사 산물을 감지합니다. 한 멸균 화분의 캘러스는 오염 브라우닝이 낮지만 고른 차 잎에서 callus의 유도성이 높습니다.멸균 잎에서 파생된 캘러스는 항상 밝은 황색이었고, 수확한 잎에서 추출한 캘러스는 갈색 반점이 있는 흰색이었습니다. KT 농도가 리터당 0.1밀리그램이되었을 때, 캘러스는 황색으로 변하고 질감이 느슨했습니다. 2, 4-D 농도가 리터당 1밀리그램이었을 때 콜러스의 성장률은 61.5%까지 가장 높았으며, KT의 농도는 리터당 0.5밀리그램이었다.캘러스의 성장 데이터가 최고였고 캘러스의 성장률이 46.9%에 가장 높았기 때문에 식물호먼트의 가장 좋은 조합은 KT의 리터당 2, 4D, 0.1밀리그램으로 차 캘러스 성장을 위한 것이었다. 캘러스는 네 번째 하위 문화권에 의해 잎을 완전히 덮었고, 하위 문화 주기가 28 일 이었을 때. 캘러스는 황색과 느슨한 질감과 갈색이 없는 힘차게 성장했습니다.칼러스의 총 데이터와 세포 현탁액의 색상을 비교한 후, B5 액체 배지는 세포 현탁액 배양에 더 적합하였다. 세포 현탁액 배양의 OD 값은 세포 성장의 양을 나타내는 데 사용되었다. 재배 75일 동안 40밀리리터당 15그램의 비율은 다른 두 비율보다 OD 값이 상당히 높았습니다.티 셀 서스펜션 배양 내의 세포 생존능력은 TTC 염색에 의해 시험되었다. 무색 TTC 화합물은 살아있는 세포의 미토콘드리아에서 탈수소 효소에 의해 붉은 포마딘으로 변환될 수 있지만 죽은 세포에서는 색을 변경할 수 없습니다. 그리고 이것은 차 세포 현탁액 배양을 확립하는 전체 과정입니다.이것은 세포 현탁액 배양 기술을 사용하여 차에 있는 다른 살충제의 물질 대사의 첫번째 비교 연구입니다. 몇몇 살충제 대사산물은 확인되었고, 그 중 일부는 보관된 차 식물에서 더 조사되었습니다. 이 새로운 방법은 차 또는 다른 식물에 농약 대사 연구의 모델로 봉사 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

안정 동위 원소 추적을 사용하여 복잡한 세포 공동체의 정렬 된 부분 집단에서 대사를 측정하는 방법

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

연구

생화학

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

시간 해결 전기 분무 이온화 수소 - 중수소 교환 질량 분석 단백질 구조와 역학 연구를위한

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

노화 관련 post-translational 수정을 공부하기 위해 여러 마우스 조직에서 중간 필라멘트 단백질의 분리

Intermediate filaments (IFs), together with actin filaments and microtubules, form the cytoskeleton &#8211; a critical structural element of every cell. ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Proximity Ligation Assay를 이용한 현탁 세포 배양에서의 DNA 손상 유발 단백질 복합체의 검출 및 가시화

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

꼬마 선 충 에서 높은 처리량 화학 심사 하는 간단한 방법

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

매핑 대사: 조직에서 직접 젖 산 효소 활동 모니터링

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

소규모 색도계 분석 실험의 세포내 젖이 나올와 꼬마 선 충 의 선 충 Pyruvate

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

인지질 단백질 Annexin a 2 석 영 공명 기를 사용 하 여 지원 되는 고체 지질 Bilayers에 바인딩의 바인딩 역학 공부 되는 낭비 적인 Microgravimetry

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Cell Fractionation of U937 Cells in the Absence of High-speed Centrifugation

고속 원심 분리의 부재에서 U937 세포의 세포 분별 법

In this protocol we detail a method to obtain subcellular fractions of U937 cells without the use of ultracentrifugation or indiscriminate detergents. ...