Name: study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por el Programa Nacional De Investigación y Desarrollo Clave (2016YFD0200900) de China, la Fundación Científica Natural Nacional de China (No 31772076 y No 31270728), China Postdoctoral Foundation (2018M630700) y Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Open Fund of Laboratorio Clave Estatal de Biología y Utilización de Plantas de Té (SKLTOF20180111).

1. Cultura callo del té
NOTA: Las hojas estériles se derivaron de líneas de plantlet cultivadas in vitro desarrolladas por primera vez en el grupo de investigación17. Todos los procedimientos hasta la sección 5 se llevaron a cabo en una campana de flujo laminar estéril, excepto por el tiempo de cultivo en una incubadora.
<ol><li>Ajustar el pH de los dos medios (Murashige y Skoog [MS] medio basal y medio líquido B5 de Gamborg) a 5.8 antes de autoclave (121 oC, 2...

<ol>
	<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+identification,+quantitation,+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh,+green,+and+white+teas+using+UPLC/DAD/MS.">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li><li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+green,+white,+black,+Oolong,+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content.">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li><li>Kopjar, M., Tadic&#180;, M., Piliz&#711;ota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green,+yellow+and+black+tea+leaves.">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li><li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li><li>Hou, R. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis.">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li><li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell.">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li><li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. 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Este artículo presenta el proceso detallado de establecer un modelo de metabolismo de pesticidas en el tejido vegetal del té, incluyendo la selección de explantas, la determinación de la viabilidad celular y el establecimiento de un cultivo de suspensión de células de té con alto nivel metabólico Actividad. Cualquier parte de un tejido vegetal podría utilizarse para iniciar el callo en un ambiente esterilizado25. Las hojas de té fueron elegidas para la iniciación del callo en este estud...

El té es una de las bebidas no alcohólicas más consumidas en el mundo1,2. El té se produce a partir de las hojas y cogollos de la perley perenne Camellia sinensis L.Las plantas de té se cultivan en vastas plantaciones y son susceptibles a numerosas plagas de insectos 3,4. Los insecticidas organofosforados y neonicotinoides se utilizan a menudo como insecticidas sistémicos5 para proteger las plantas de té de plagas como las moscas blancas, las tolvas de hojas y algunas especies de lepidópteros6,7. Después de la aplicación, estos insecticidas son absorbidos o translocados en la planta. Dentro de la planta, estos insecticidas sistémicos pueden transformarse a través de hidrólisis, oxidación o reacciones de reducción por enzimas vegetales. Estos productos de transformación pueden ser más polares y menos tóxicos que los compuestos principales. Sin embargo, para algunos organofosfatos, las bioactividades de algunos productos son más altas. Por ejemplo, el acefato se metaboliza en el metamidofos más tóxico8,9, y el dimetoato en el omethoato10,11. Por lo tanto, los estudios metabólicos de las plantas son importantes para determinar el destino de un pesticida dentro de una planta12.
Se ha demostrado que los cultivos de tejidos vegetales son una plataforma útil para investigar el metabolismo de los plaguicidas, con los metabolitos identificados similares a los que se encuentran en las plantas intactas13,14,15. El uso de cultivos tisulares, particularmente cultivos de suspensión celular, tiene varias ventajas. En primer lugar, los experimentos pueden llevarse a cabo sin microorganismos, evitando así la interferencia de la transformación o degradación de plaguicidas por microbios. En segundo lugar, el cultivo de tejidos proporciona materiales consistentes para su uso en cualquier momento. En tercer lugar, los metabolitos son más fáciles de extraer de cultivos de tejidos que de plantas intactas, y los cultivos de tejidos a menudo tienen menos compuestos intercaladores y menor complejidad de los compuestos. Por último, los cultivos de tejidos se pueden utilizar más fácilmente para comparar una serie de metabolismo de pesticidas en un solo experimento16.
En este estudio, se estableció con éxito una suspensión celular derivada de las hojas de la planta de té cultivada estérilmente. El cultivo de suspensión de células de té se utilizó entonces para comparar los comportamientos de disipación de seis insecticidas sistémicos.
Este protocolo detallado está destinado a proporcionar alguna orientación para que los investigadores puedan establecer una plataforma de cultivo de tejido vegetal útil para estudiar el destino metabólico de los xenobióticos en el té.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:674px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Acetamiprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">46717</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 135410-20-7</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Acetonitrile (CAN, 99.9%)</td>
			<td style="width:188px;">Tedia</td>
			<td style="width:175px;">AS1122-801</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 75-05-8</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Agar</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">A8190</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 9002-18-0</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Clothianidin (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">525</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 210880-92-5</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Dimethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">109217</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 60-51-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidacloprid (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">91029</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 138261-41-3</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Imidaclothiz (99.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Toronto Research Chemical</td>
			<td style="width:175px;">I275000</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 105843-36-5</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Kinetin (KT, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">K8010</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 525-79-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Omethoate (98.5%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">105491</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 1113-02-6</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">P8070</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 25249-54-1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:188px;">Sucrose</td>
			<td style="width:188px;">Tocris Bioscience</td>
			<td style="width:175px;">5511</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 57-50-1</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Thiamethoxam (99.8%)</td>
			<td style="width:188px;">Dr. Ehrenstorfer</td>
			<td style="width:175px;">20625</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 153719-23-4</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:188px;">Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Solarbio Science &#38; Technology</td>
			<td style="width:175px;">T8170</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 298-96-4</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:188px;">2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, &#62;98.0%)</td>
			<td style="width:188px;">Guangzhou Saiguo Biotech</td>
			<td style="width:175px;">D8100</td>
			<td style="width:123px;">CAS No: 94-75-7</td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:77px;width:188px;">chiral column</td>
			<td style="width:188px;">Agilent CYCLOSIL-B</td>
			<td>112-6632</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Gas chromatography (GC)</td>
			<td style="width:188px;">Shimadu</td>
			<td>2010-Plus</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Flame Photometric Detector (FPD)&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">High-performance liquid chromatography (HPLC)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1260</td>
			<td style="width:123px;">Paired with Ultraviolet detector (UV)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">HSS T3 C18 column</td>
			<td style="width:188px;">Waters</td>
			<td>186003539</td>
			<td style="width:123px;">Chromatography column (100 mm &#215; 2.1 mm &#215; 1.8 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr height="96">
			<td height="96" style="height:96px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Agilent</td>
			<td>1290-6545</td>
			<td style="width:123px;">Tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometer (QTOF)</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:188px;">Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)</td>
			<td style="width:188px;">Thermo Scientific</td>
			<td>Ultimate 3000-Q Exactive Focus</td>
			<td style="width:123px;">Connected to a Orbitrap mass spectrometer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study on the metabolism of six systemic insecticides in a newly established cell suspension culture derived from tea (camellia sinensis l.) leaves

Se desarrolló una plataforma para estudiar el metabolismo de insecticidas utilizando tejidos in vitro de la planta de té. Las hojas de las plantas de té estéril fueron inducidas a formar callos sueltos en murashige y Skoog (MS) medios basales con las hormonas vegetales 2,4-ácido diclorofenoxacetico (2,4-D, 1,0 mg L-1) y kinetina (KT, 0,1 mg L-1). Callus se formó después de 3 o 4 rondas de subcultura, cada una con una duración de 28 días. El callo suelto (alrededor de 3 g) se inoculó en medios líquidos B5 que contenían las mismas hormonas vegetales y se cultivaba en una incubadora de temblores (120 rpm) en la oscuridad a 25 oC. Después de 3 x 4 subcultivos, se estableció una suspensión celular derivada de la hoja de té en una relación subcultal que oscila entre 1:1 y 1:2 (líquido madre de suspensión: medio fresco). Usando esta plataforma, se añadieron seis insecticidas (5 g de ml-1 cada tiametoxam, imidacloprid, acetamiprid, imidaclothiz, dimetoato y omethoato) al cultivo de suspensión celular derivado de la hoja de té. El metabolismo de los insecticidas fue rastreado mediante cromatografía líquida y cromatografía de gases. Para validar la utilidad del cultivo de suspensión de células de té, los metabolitos de tiametoxano y dimetoato presentes en cultivos celulares tratados y plantas intactas se compararon utilizando espectrometría de masas. En los cultivos de células de té tratadas, se encontraron siete metabolitos de tiametoxano y dos metabolitos de dimetoato, mientras que en las plantas intactas tratadas, sólo se encontraron dos metabolitos de tiametoxam y uno de dimetoato. El uso de una suspensión celular simplificó el análisis metabólico en comparación con el uso de plantas de té intactas, especialmente para una matriz difícil como el té.

La inducción de callos a partir de hojas cosechadas a partir de árboles de té cultivados en el campo y de hojas extirpadas de plantas de té cultivadas in vitro en un ambiente estéril se comparó midiendo la contaminación, el pardeamiento y la inducción después de 28 días de cultivo en medios de aseo ( Figura 1A). El crecimiento del callo se registró en 20, 37, 62 y 90 días de cultivo (Figura1B). El callo derivado de la...

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Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Este trabajo presenta un protocolo para establecer un cultivo de suspensión celular derivado del té (Camellia sinensis L.) hojas que se pueden utilizar para estudiar el metabolismo de los compuestos externos que pueden ser tomados por toda la planta, como insecticidas.

Estudio sobre el metabolismo de seis insecticidas sistémicos en un cultivo de suspensión celular recién establecido derivado del té (Camellia Sinensis L.) Hojas

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

El té es una de las bebidas más populares en todo el mundo. Los pesticidas se utilizan a veces para proteger las plantas de té de las plagas. Algunos pesticidas sistémicos pueden ser hechos para esto por enzimas en el árbol del té.Y luego se integró a través de la oxidación, hidrólisis, o reacciones de reducción. Los cultivos de suspensión de células vegetales se pueden utilizar como un, fácilmente para estudiar el comportamiento del metabolismo vegetal de los pesticidas. Este método tiene varias ventajas.En primer lugar, puede funcionar en condiciones de microorganismos libres, evitando así la interferencia de la degradación de los plaguicidas causada por los microbios. En segundo lugar, puede proporcionar material constante para nosotros en cualquier momento. Por último, también se puede utilizar fácilmente para comparar teorías del comportamiento de pesticidas en un solo experimento.En este estudio, establecemos cultivos de suspensión de células de té a partir de colores variables de hojas de té. El estado óptimo de cultivos de las suspensiones celulares se utilizó entonces para comparar el comportamiento de disipación de seis pesticidas. Este experimento será llevado a cabo por Jiao Weiting y Ge Guoqin.Esta es nuestras plantas estériles de té que funciona como la fuente de explant. Corte a lo largo del ala media de una hoja estéril usando tijeras. Y luego, subdividir cada mitad en trozos pequeños de aproximadamente 0,3 veces 0,3 centímetros en un plato de Petri.Coloque los explantes estériles en un medio visual de la MS que contenga 2, 4-D y KT. Se pueden colocar seis explantas en un matraz de 300 mililitros. Cultivo de la hoja explanta a una temperatura constante de 25 grados Celsius en la oscuridad. Después de 28 días, seleccione la primera generación de callos inducidos y luego transfiera a matraz nuevo.Adquirir el callo suelto y variable después de tres a cuatro subculturas. Cortar los grandes, callos variables y sueltos del medio sólido en trozos pequeños utilizando una cuchilla quirúrgica estéril en condiciones estériles. Somos unos tres gramos de los pequeños pedazos de un callo.Coloque el callo en B5 que contiene 2, 4-D y el KT. Cultivo de la suspensión de células líquidas a una temperatura constante en la incubadora de agitación en la oscuridad. Después de siete a diez días de cultivo, retire el matraz de cultivo y déjelos reposar durante unos minutos. Tome el sobrenadante como sedimento aquí obligará el cultivo a un medio fresco.Retire los callos grandes precipitados. Obtenga el cultivo final de suspensión celular bien cuidado después de cuatro a tres ciclos de subcultura de 28 días cada uno. Mantenga una muestra de células vivas a cien grados centígrados durante diez minutos como célula de control antes de la tinción de viabilidad.Centrifugar todo el cultivo de suspensión celular durante ocho minutos a 6.000 G.Retire el sobrenadante antes de suspender las células en 5 mililitros de tampón PBS y agítelo durante un minuto a mano. Añadir 2,5 mililitros de la solución TTC y agitar a mano de nuevo. Incubar la mezcla durante una hora en una incubadora de pie a 13 grados centígrados.Añadir una alícuota de cuatrocientos microlitros a la vista para esterilizar la solución de cada neonicotinoides tiametoxam, acetimoprid, imidacloprid e imideproxasa. Todo a la primera fase orgánica. Dimetoato y omethoato en los cultivos de suspensión celular respectivamente.Muestras de cultivo de suspensiones celulares con insecticidas a temperatura constante y velocidad de incubadora temblorosa. Tome las muestras en días diferentes. Para probar la muestra que contiene un neonicotinoide, retire una alícuota de 1 mililitro del cultivo celular homogéneo.Colóquelo en un tubo centrífugo de plástico de 1,5 mililitros y centrifugarlo a 4.000 G durante dos minutos. Pasar el sobrenadante a través de una membrana de filtro de 0,22 micrómetros antes del análisis por HPLC-UV y UPLC QTOF. Para probar la muestra, continúe en la primera fase orgánica.Retire una alícuota de 500 microlitios del cultivo celular y colóquela en un tubo centrífugo de 35 mililitros o un tubo de centrífuga de plástico de 1,5 mililitros. Añadir 0,1 gramos de cloruro de sodio y cinco mililitros extraer disolvente en el tubo centrífugo de 35 mililitros de las 500 muestras de microlitro. Vórtice la mezcla durante un minuto.Y luego dejar que descansen durante 10 minutos. Tome 2,5 mililitros de sobrenadante en un tubo de vidrio de 10 mililitros y evapore a casi sequedad utilizando un evaporador de nitrógeno a 14 grados centígrados. Disolver el residuo con una acetona mililitro.Vórtice durante un minuto, pasarlo a través de una membrana de filtro de 0,22 micrómetros antes del análisis por GC-FPD. Ponga cinco plantas en macetas de plástico de cuatro litros durante quince días. Añadir cero microgramos por mililitro o 100 microgramos por mililitro de tiametoxam o dimetoaxe en macetas de plástico, respectivamente.Preparar la muestra de planta intacta de acuerdo con el método anterior, excepto para el pre-remojo y luego analizar por espectrometría de masas Orbitrap. Utilice un HPLCUV para detectar el contenido y los productos metabólicos del tiametoxam y el acetimoprid a longitudes de onda de 254 nanómetros, y de imidacloprid e imidaproxasa a 270 nanómetros. Detectar el contenido de dimetoato y omethoato por GC-FPD utilizando una columna tubular.Detectar los metabolitos de insecticidas en el cultivo celular utilizando el UPRC QTOF con una columna Carbono-18. Detectar los metabolitos de insecticidas en el extracto de la planta de ensayo utilizando espectrometría de masas UPLC Orbitrap. El callo de una planta estéril tiene menor contaminación marrón pero mayor inductividad que la del callo de las hojas de té recogidos.El callo derivado de hojas estériles siempre era de color amarillento brillante, mientras que el callo derivado de hojas recogidas era blanco con manchas marrones. Cuando la concentración de KT fue de 0,1 miligramos por litro, el callo era de color amarillento y de textura suelta. La tasa de crecimiento del callo fue la más alta, hasta 61.5%cuando la concentración de 2, 4-D fue de un miligramo por litro con la concentración de KT fue de 0,5 miligramos por litro.Los datos de crecimiento de callo fueron los mejores y la tasa de crecimiento del callo fue la más alta alcanzó 46.9%Por lo tanto, la mejor combinación de homent de la planta fue un miligramo por litro de 2, 4-D y 0,1 miligramos por litro de KT para el crecimiento del callo del té. El callo cubrió completamente las hojas por la cuarta subcultura, y cuando el ciclo de la subcultura era de 28 días. El callo había crecido vigorosamente con color amarillento y textura suelta y sin dorar.Después de comparar los datos brutos del callo y el color de la suspensión celular, el medio líquido B5 era más adecuado para el cultivo de suspensión celular. El valor OD del cultivo de suspensión celular se utilizó para representar la cantidad de crecimiento celular. Durante los 75 días de cultivo, la proporción de 15 gramos por mililitro tenía un valor de OD significativamente mayor que el de las otras dos proporciones.La viabilidad celular dentro del cultivo de suspensión de la célula de té se probó mediante tinción TTC. El compuesto TTC incoloro se puede convertir en formadin rojo por deshidrogenasa en las mitocondrias de las células vivas, pero el color no se puede cambiar en las células muertas. Y este es todo el proceso de establecer un cultivo de suspensión de células de té.Este es el primer estudio comparativo del metabolismo de diferentes pesticidas en el té utilizando una técnica de cultivo de suspensión celular. Se identificaron varios metabolitos de plaguicidas, y algunos de ellos fueron investigados en plantas de té mantenidas. Este nuevo método podría servir como modelo para estudios metabólicos de pesticidas en té u otras plantas.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

Un método para medir el metabolismo en muestras ordenadas subpoblaciones de Comunidades celulares complejas utilizando isótopos estables de Búsquedas

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

Investigación

Bioquímica

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Resuelta en el tiempo de ionización por electrospray de hidrógeno-deuterio Espectrometría de Masas de cambio para el estudio de la estructura proteica y Dinámica

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

Aislamiento de proteínas de filamento intermedio de múltiples tejidos de ratón para estudiar las modificaciones postraduccionales asociadas al envejecimiento

Intermediate filaments (IFs), together with actin filaments and microtubules, form the cytoskeleton &#8211; a critical structural element of every cell. ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Detección y visualización de los complejos de proteínas inducidos por daño de ADN en cultivos de células en suspensión usando el ensayo de ligación de proximidad

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Un método Simple para la detección química de alto rendimiento en Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Asignación de metabolismo: Supervisar la actividad de la deshidrogenasa del lactato directamente en el tejido

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Análisis colorimétrico de lactato intracelular en pequeña escala y del piruvato en el nematodo Caenorhabditis elegans

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Microgravimetry disipativo para estudiar la dinámica de unión de la fosfolípido vinculante proteínas anexina A2 a bicapas de lípidos respaldados por el sólido utilizando un resonador de cuarzo

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Cell Fractionation of U937 Cells in the Absence of High-speed Centrifugation

Fraccionamiento de la célula de las células U937 en ausencia de centrifugación de alta velocidad

In this protocol we detail a method to obtain subcellular fractions of U937 cells without the use of ultracentrifugation or indiscriminate detergents. ...