Name: daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth
Uploaded: 2019-04-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth at JoVE.com

ونشكر الدكتور بولا دا سيلفيرا، كوستا الدكتور سيسيليا اتيم غونسالفس دي أروجو، ماولي شون م.، ماولي م. شين، جانال مالفين أ. د. والدكتور إيريانا زانن لتطوير هذه الدراسة. ونعترف أيضا الدكتور ألكسندر دال جونسون (UCSF) للتبرع إلى الضغط التي تم تحليلها في هذه الدراسة.

1. إعداد وسائل الإعلام الثقافة
<ol><li>إعداد أجار سابورو سكر العنب (حزب العمل الديمقراطي). تعليق ز 65 من حزب العمل الديمقراطي وتستكمل مع الكلورامفينيكول (50 مغ/لتر) في 1,000 مل ماء المقطر. يغلي بحل الوسط تماما. تعقيم بالتعقيم في 15 PSI (121 درجة مئوية) عن 30 دقيقة كول إلى 45-50 درجة مئوية. تخلط جيدا وتصب 20 مل م...

<ol>
	<li>Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).</li><li>Harriott, M. M., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+and+Staphylococcus+aureus+form+polymicrobial+biofilms:+effects+on+antimicrobial+resistance.">Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).</li><li>Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+antifungal+resistance.">Overcoming antifungal resistance.</a> Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).</li><li>Finkel, J. S., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+Candida+albicans+biofilm+development.">Genetic control of Candida albicans biofilm development.</a> Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).</li><li>Zarnowski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+entries+in+a+fungal+biofilm+matrix+encyclopedia.">Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia.</a> MBio. 5, e013333 (2014).</li><li>Mitchell, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Community+participation+in+biofilm+matrix+assembly+and+function.">Community participation in biofilm matrix assembly and function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).</li><li>Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+super+glue:+the+biofilm+matrix+and+its+composition,+assembly,+and+functions.">Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions.</a> PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).</li><li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+light+rescues+mice+from+potentially+fatal+Pseudomonas+aeruginosa+burn+infection:+efficacy,+safety,+and+mechanism+of+action.">Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).</li><li>de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+twice-daily+blue+light+treatment+on+matrix-rich+biofilm+development.">Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development.</a> PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).</li><li>Fontana, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+effect+of+photodynamic+therapy+in+dental+plaque-derived+biofilms.">The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms.</a> Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).</li><li>Donlan, R. M., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+survival+mechanisms+of+clinically+relevant+microorganisms.">Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).</li><li>Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+genes+TEC1+and+EFG1+in+Candida+albicans+influences+extracellular+matrix+composition+and+biofilm+morphology.">Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology.</a> Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).</li><li>Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culturing+and+screening+of+Candida+albicans+biofilms.">In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms.</a> Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).</li><li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection.">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li><li>Kuchar&#237;kov&#225;, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujd&#225;kov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+comparison+of+Candida+albicans+and+Candida+glabrata+biofilms+under+different+conditions+and+their+susceptibility+to+caspofungin+and+anidulafungin.">Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin.</a> Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).</li><li>Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+media+profoundly+affect+Candida+albicans+and+Candida+tropicalis+growth,+adhesion+and+biofilm+development.">Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development.</a> Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).</li><li>Kadosh, D., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+the+Candida+albicans+filamentous+growth+program+by+relief+of+transcriptional+repression:+a+genome-wide+analysis.">Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis.</a> Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).</li><li>Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+on+Streptococcus+mutans+using+curcumin+and+toluidine+blue+activated+by+a+novel+LED+device.">Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device.</a> Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).</li></ol>

الخطوات الأكثر أهمية لاستزراع ناجحة من بيوفيلم المبيضة : 1) للقيام بالعدوى قبل والعدوى في المتوسط YNB تكملة مع الجلوكوز 100 مم؛ 2) الانتظار 90 دقيقة لمرحلة الالتصاق وتغسل بعناية مرتين الآبار بنسبة 0.89 في المائة كلوريد الصوديوم لإزالة الخلايا غير التقيد بها؛ و 3) لإضافة المتوسطة ربمي في الخل?...

زيادة حالات مرض السكري، تطبيقات المعالجة الكابتة للمناعة، والإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، ووباء الإيدز، الإجراءات السريرية الغازية واستهلاك المضادات الحيوية واسعة الطيف في السنوات الماضية زادت حالات المبيضات البيض المتصلة بالأمراض1،2. ترتبط عادة بالتنمية بيوفيلم التهابات المبيضة وقد يسبب المظاهر السريرية، مثل داء المبيضات أو المظاهر الجهازية، مثل المبيضات1،2. واحدة من أبرز عوامل الفوعة النمو بيوفيلم هو إنشاء مصفوفة السكاريد خارج الخلية. وتتعاون تشكيل بيوفيلم زيادة المقاومة للعقاقير المضادة للفطور الموجودة، والإجهاد البيئي، والمضيف الآليات المناعية3.
ويبدأ نمو بيوفيلم المبيضة الانضمام المبكر الخلايا العوالق إلى الركازة، متبوعاً بنشر خلايا الخميرة من خلال سطح الركازة، ونمو أصله. المرحلة الأخيرة من النمو بيوفيلم هو مرحلة النضوج، حيث يتم إعاقة التنمية مثل الخميرة ويوسع تنمية أصله، والمصفوفة خارج الخلية إحاطة بيوفيلم4. تتفاعل والانسيابيه المبيضة (EPS) في المصفوفة شكل معقد5،المنان glucan6. تفاعل والانسيابيه أمر بالغ الأهمية للدفاع عن الأغشية الحيوية مكافحة المخدرات7. ومن ثم، يمكن الحد EPS من المصفوفة خارج الخلية المبيضة دعم تطوير بروتوكولات أنتيبيوفيلم جديدة لمكافحة داء المبيضات الفموية.
ينظم الضوء النمو والتنمية، وسلوك العديد من الكائنات الحية8 وتم تطبيقه كمضادات الميكروبات في العلاج الكيميائي الميكروبات الضوئي (الميثاق). وينطبق ميثاق ضوء مرئي طول موجي محدد ومحسس ضيائي امتصاص ضوء9. ومع ذلك، قد الضيائية صعوبات في اختراق بيوفيلم، مما تسبب في انخفاض كفاءة10. فشل العوامل العلاجية في اختراق الأغشية الحيوية تماما سبب في أن الأغشية الحيوية أحياناً يقاوم العلاج بمضادات الميكروبات التقليدية3،5. لإلغاء تنشيط الخلايا الجرثومية المغلقة، يلزم مضادات الميكروبات تتخلل من خلال المصفوفة خارج الخلية؛ ومع ذلك، يميز EPS عقبة ديفوسيونال لمثل هذه الجزيئات بدفع مستوى النقل إلى بيوفيلم أو بالتأثير على استجابة مضادات الميكروبات مع المصفوفة نفسها11.
نظراً للعيوب للميثاق، يبرز استخدام الضوء بحد ذاته كحدوث تحسن قيمة. وكشفت البيانات الأولية أن العلاج بالضوء الأزرق مرتين في يوم إلى حد كبير يحول دون إنتاج EPS الذوبان في بيوفيلم mutans العقدية . بنقصان قدرة EPS-تستعصي على الحل، تناقص الضوء الأزرق بيوفيلم النمو. ومع ذلك، نتائج العلاج الضوئي باستخدام الضوء الأحمر في الأغشية الحيوية المبيضة شحيحة. ومن ثم، كان الهدف من هذا التحقيق لتقييم ما هي طريقة المعالجة الضوئية باستخدام الضوء الأحمر يؤثر على النمو وترتيب بيوفيلم المبيضة . للعلاج مرتين يوميا وعلينا تكييف لدينا مختبر السابقة البروتوكولات9،12 إلى تقديم نموذج بيوفيلم سهلة واستنساخه أن توفر إجابات فيما يتعلق بالجدوى، السكريات الوزن الجاف وخارج الخلية المبالغ بعد العلاج الضوء الأحمر. يمكن استخدام البروتوكول نفسه لاختبار العلاجات الأخرى.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1115px;" width="1115">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Clorhexidine 20%&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">C9394</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Dextrose (D-Glucose) Anhydroous</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">D16-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:372px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">DSP-MD.43</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LumaCare LC-122 A&#160;</td>
			<td style="width:372px;">LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">NaCl&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">S641-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Bioreagents&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BP 359-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol 5%</td>
			<td style="width:372px;">Milipore Sigma</td>
			<td style="width:123px;">843984</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino)</td>
			<td style="width:372px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">R7755</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol</td>
			<td style="width:372px;">Acumedia</td>
			<td style="width:123px;">7306A</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sulfuric acid&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">SA200-1</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast nitrogen base&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Difco</td>
			<td style="width:123px;">DF0392-15-9</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">M1254</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">&#160;24-well polystyrene plate&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">353935</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth

نقدم هنا، بروتوكولا لتقييم نتائج بدل الضوء الأحمر في العلاج على نمو بيوفيلم المبيضات البيض . لزيادة نمو العوالق SN425 المبيضة ، نما إينوكولومس في وسائل الإعلام "قاعدة النيتروجين الخميرة". لتكوين بيوفيلم، طبقت RPMI 1640 وسائل الإعلام، التي لها تركيزات عالية من الأحماض الأمينية، للمساعدة على نمو بيوفيلم. تعامل الأغشية الحيوية 48 ساعة مرتين في يوم لمدة 1 دقيقة مع جهاز خفيفة غير متماسك (الضوء الأحمر؛ والطول الموجي = 635 نانومتر؛ وكثافة الطاقة = 87.6 J·cm-2). كما تم تطبيق عنصر تحكم إيجابية (PC)، الكلورهيكسيدين 0.12 في المائة (التايوانية)، وكعنصر تحكم سلبية (كارولاينا الشمالية)، 0.89% كلوريد الصوديوم تم تطبيقه على الأغشية الحيوية. مستعمرة تشكيل وحدات (زيمبابوي), كانت كمياً والانسيابيه الوزن الجاف والقابلة للذوبان وغير قابلة للذوبان بعد العلاج. بإيجاز، البروتوكول المعروضة هنا بسيط واستنساخه ويقدم إجابات فيما يتعلق بالجدوى، مبالغ السكاريد الوزن الجاف وخارج الخلية بعد العلاج الضوء الأحمر.

الشكل 2 يعرض نتائج سجل10 مليلتر زيمبابوي من المبيضة بعد العلاج المصروف مع الضوء الأحمر للضوء الأحمر 1 كحد أدنى إلى حد كبير سجل10 زيمبابوي/مل مقارنة NC (p = 0.004). ويبين الشكل 3 النتائج من الكتلة الأحيائية (ملغ) للأغشية الحيوية ال...

Watch this Scientific Journal Video about Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth at JoVE.com

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

المعالجة الضوئية اليومية مع الضوء الأحمر لتنظيم "النمو بيوفيلم" المبيضات البيض

نقدم هنا، بروتوكولا لتقييم نتائج تطبيق الضوء الأحمر على نمو بيوفيلم المبيضات البيض . جهاز ضوء الأحمر غير متسقة مع الطول الموجي ل 635 نانومتر وكثافة الطاقة 87.6 J·cm-2 طبق في جميع أنحاء نمو المبيضات البيض الأغشية الحيوية ح 48.

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

المبيضات هو السبب الأكثر شيوعا للعدوى الفطرية نشر في المضيفين المناعة. فشل العوامل العلاجية لاختراق بيو فيلم تماما بسبب المصفوفة هو أحد الأسباب التي تجعل بيو فيلم مقاومة للعلاجات التقليدية. بروتوكولنا يقيم كيف العلاج بالضوء، وذلك باستخدام الضوء الأحمر، ويتداخل مع نمو وترتيب الأغشية الحيوية المبيضات ألبيكانس.الأساليب المطبقة راسخة ، لأن السلالة المستخدمة في هذه الدراسة كانت مصفوفة خارج الخلية تتميز والجهاز الخفيف تم تطبيقه بنجاح على غيرها من المعلقات الكائنات الحية الدقيقة planktonic والأغشية الحيوية. أكبر ميزة لهذا الجهاز هو الحد من وقت العلاج، مما يجعله أكثر وضوحا للتطبيقات السريرية. عندما زراعة المبيضات albicans تكون على علم بأن الأجسام المضادة يمكن الحصول عليها.لذلك ، من المهم عدم استخدام المستعمرات التي يزيد عمرها عن سبعة أيام ، وعدم بدء تشغيل اللوحات عند أربع درجات مئوية ، وعدم إعادة الخلايا المتتالية من اللوحات الموجودة. وبالمثل، ينبغي استخدام سلالة قبل 18 ساعة من النمو بين عشية وضحاها. عند استخدام مقياس الطيفي لأول مرة من المهم الحصول أولاً على مزرعة مستعمرة في عدد الوحدات ، للربط مع قيم الكثافة البصرية.لذلك، سوف تبدأ التجارب باستخدام منتصف مرحلة النمو في تركيز الخلايا الأولية من 10 إلى 7 خلايا لكل ملليلتر. وقد تبين أن تركيز الخلية هذا يوفر الأغشية الحيوية الأكثر اعتماداً واستقراراً. لتبدأ, تعليق 65 غراما من SDA, تستكمل مع 50 ملليغرام لكل لتر من الكلوراففينيكول, في 1,000 ملليلتر من الماء المقطر في منقار.وضع القارص على سخان ليغلي، من أجل حل المتوسطة تماما. ثم نقل وسائل الإعلام إلى زجاجة. وضع الغطاء على الزجاجة، ولكن لا المسمار عليه تماما لضمان زجاجة قادرة على تنفيس.ضع الزجاجة في الأوتوكلاف لتعقيم المحلل عند 15 PSI و 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. تبريد الحل إلى حوالي 45 درجة مئوية. استخدام ماصة يمكن التخلص منها، العقيمة، لخلط جيدا، والماصات 20 ملليلتر من SDA في لوحات بيتري العقيمة.لإعداد ينب المتوسطة، وتستكمل مع الجلوكوز 100 ملليمولار، مزيج 6.7 غرام من YNB و 18 غراما من دكستروز إلى 1،000 ملليلتر من الماء النقي جدا في كوب. ضعي بارًا مُحرّكًا في القارق وضعي القارب على لوحة حركية لخلطه. تصفية المتوسطة من خلال نظام تصفية فراغ 0.22 ميكرومتر لتعقيم.إعداد دورة في الدقيقة المتوسطة عن طريق خلط 10.4 غرام من RPMI-1640 و 34 غراما من MOPS، إلى 1،000 ملليلتر من المياه النقية جدا. مزيج في مُحرك بدون حرارة وضبط PH إلى سبعة بإضافة هيدروكسيد الصوديوم العادي واحد. تعقيم المتوسطة باستخدام نظام تصفية فراغ 0.22 ميكرومتر.أولا، إذابة الكائنات الحية الدقيقة المبيضات ألبيكانس SN 425 في درجة الحرارة المحيطة. بذور 10 microliters من ثقافة وقف على أطباق بيتري أعدت سابقا تحتوي على SDA، وتستكمل مع الكلورافينيكول. احتضان أطباق بيتري الهوائية في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.لpre-inoculum استخدام تزليق معقمة لاختيار 10 مستعمرات المبيضات ألبيكان من أطباق بيتري ووضعها في أنبوب الطرد المركزي التي تحتوي على 10 ملليلتر من المتوسط YNB، تستكمل مع الجلوكوز. احتضان أنبوب الهوائية في 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة. ثم، وإعداد inoculums عن طريق إضافة هذه الثقافة بداية في المتوسطة ينب الطازجة، وتستكمل مع الجلوكوز، في نسبة 1-10 لتخفيف.استخدم مقياس الطيف لقياس الأوزون الأولي عند 540 نانومتر. احتضان inoculums الهوائية في 37 درجة مئوية لمدة ثماني ساعات، وقياس OD النهائي في 540 نانومتر. طرح OD النهائي من OD الأولي للتحقق مما إذا كان OD من inoculums هي على مرحلة النمو منتصف السجل.للحصول على inoculum مع 10 إلى الخلايا السبع لكل ملليلتر، والطرد المركزي inoculum لمدة خمس دقائق في 5،500 مرة G.Pour الماحتوم في كوب يحتوي على هيبوكلوريت الصوديوم وإضافة ينب الطازجة لتركيز inoculum إلى نصف الحجم السابق. إضافة ملليلتر واحد من inoculum إلى كل بئر من 24 لوحة البوليسترين جيدا. احتضان الهوائية في 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة للسماح التصاق الخلية إلى أسفل الآبار.علاج الأغشية الحيوية لمدة دقيقة واحدة مع ملليلتر واحد من 0.12٪ الكلورهيكسيدين ل biofilms التحكم الإيجابي. للسيطرة السلبية، وعلاج الأغشية الحيوية لمدة دقيقة واحدة مع ملليلتر واحد من العقيمة، 0.89٪ كلوريد الصوديوم. في وقت لاحق، وغسل الآبار مرتين، دقيقة واحدة لكل منهما، مع ملليلتر واحد من كلوريد الصوديوم العقيم 0.89٪ لإزالة الخلايا غير المنضمة.ثم قم بتشغيل ضوء أحمر غير متماسك واستخدم عداد طاقة لقياس كثافة الطاقة للضوء. تحديد وقت التعرض على أساس متطلبات كثافة الطاقة من 87.6 جول لكل سنتيمتر مربع. ضع الصحن تحت الضوء الأحمر.الحفاظ على المسافة بين مصدر الضوء وbiofilm إلى خمسة ملليلتر لتجنب ارتفاع درجة حرارة العينة. بعد التعرض لمدة دقيقة واحدة، إضافة ملليلتر واحد من عقم RPMI المتوسطة لكل بئر، واحتضان لوحات في 37 درجة مئوية خلال الليل. في الصباح، كرر نفس الغسيل، والعلاج الخفيف، وعلاجات التحكم الإيجابية والسلبية، والحضانة لمدة ست ساعات مع متوسطة RPMI.مرة أخرى، وغسل الأغشية الحيوية مرتين، ويعرض لهم الضوء الأحمر، وتنفيذ علاجات التحكم الإيجابية والسلبية. استلهم الحل في الآبار وأضف متوسط RPMI. كرر الحضانة والغسيل والعلاج الخفيف وعلاجات التحكم الإيجابية والسلبية ، حتى تحقيق 48 ساعة من تطوير البيوفيلم.لبدء المعالجة، والتخلص من المتوسطة وإضافة ملليلتر واحد من العقيمة، 0.89٪ كلوريد الصوديوم إلى البئر، واستخدام تلميح ماصة لخدش بيو فيلم من البئر. نقل بيو فيلم إزالة إلى أنبوب معقمة. إضافة ملليلتر واحد آخر من العقيمة، 0.89٪ كلوريد الصوديوم إلى البئر.خدش مرة أخرى وإضافة تعليق إلى نفس الأنبوب، لحجم إجمالي 2 ملليلتر. دوامة بقوة تعليق بيو فيلم لمدة دقيقة واحدة. بالنسبة لتحليل CFU، نقل aliquot من 0.1 ملليلتر من تعليق الغشاء الحيوي إلى أنبوب جهاز طرد مركزي صغير يحتوي على 900 ميكرولترات من محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.89٪لكل تخفيف.تمييع محلول بيو فيلم من 10 إلى واحد سلبي، إلى 10 إلى الأربعة السلبية، في محلول ملحي. بذور 50 ميكرولترات من كل تخفيف للوحات SDA، واحتضان لوحات في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. عد المستعمرات وتطبيق الصيغة.لتحليل الوزن الجاف، الوزن أولاً وتسمية أنابيب أجهزة الطرد المركزي الصغيرة. إضافة 0.1 ملليلتر من تعليق بيو فيلم ومليلتر واحد من الإيثانول المطلق في الأنابيب، وتخزينها في درجة مئوية سلبية 20 لمدة 18 ساعة. ثم، الطرد المركزي 10، 000 مرات G لمدة 10 دقائق.تخلص من المنافق ووضع الأنابيب في مجفف لتجفيف العينات لمدة أسبوع واحد. وزن أنابيب أجهزة الطرد المركزي الصغيرة مرة أخرى، والقيام الطرح للحصول على وزن الكتلة الحيوية. في هذه التجربة، بعد العلاجات لكل يوم يومي مع الضوء الأحمر لمدة دقيقة واحدة إلى الأغشية الحيوية المبيضات ألبيكانس، تم تخفيض CFU، بالمقارنة مع السيطرة السلبية المعالجة مع كلوريد الصوديوم.نتائج الكتلة الحيوية من المبيضات البيكانز الأغشية الحيوية بعد العلاجات اليومية، وتظهر مجموعة معالجة الضوء الأحمر قدمت انخفاض مماثل من الكتلة الحيوية لتلك التي لوحظت في مجموعة التحكم الإيجابية، تعامل مع الكلورهيكسيدين. كما أظهرت المجموعتان تشابها إحصائيا مع بعضهما البعض. في حين أنها أظهرت كل من انخفاض الكتلة الحيوية، مقارنة مع التحكم السلبي تعامل مع كلوريد الصوديوم.ولوحظت كميات أدنى من المبيضات ألبيكانس قابل للذوبان وغير قابلة للذوبان EPS, في السيطرة الإيجابية, مقارنة مع السيطرة السلبية. على الرغم من أن لا ذات دلالة إحصائية، فإن كل تطبيق يومي للضوء الأحمر قلص عددياً كميات EPS القابلة للذوبان وEPS غير قابلة للذوبان. أظهرت السيطرة السلبية ومجموعة الضوء الأحمر المعالجة تشابهًا إحصائيًا.قياس كثافة الطاقة للضوء، باستخدام عداد الطاقة قبل بدء المعالجة لتحديد الفترات الدقيقة للتطبيق. وتؤكد الخطوات أن كثافة الطاقة ستكون دائما 87.6 جول لكل سنتيمتر مربع. استخدم الصيغة المذكورة سابقاً.يتم القياس باستخدام نفس من الضوء إلى زجاجة من لوحات، خمسة ملليمترات. ويمكن دراسة العلاقة بين العلاج بالضوء والأدوية المضادة للفطريات للتحقق مما إذا كان العلاج المسبق مع الضوء الأحمر ، يليه تطبيق الدواء ، يحسن من اختراق المخدرات في البيوفيلم. للعلاج مرتين يوميا قمنا بتكييف بروتوكولات مختبرنا، وتوفير نموذج بيو فيلم سهل، ويمكن استنساخه، الذي يقدم إجابات بشأن الجدوى، والوزن الجاف، وكميات السكريات خارج الخلايا بعد العلاج بالضوء الأحمر.البروتوكول هو عام ويمكن استخدامه لاختبار العلاجات الأخرى، بالإضافة إلى الضوء الأحمر، بما في ذلك الأدوية، وغيرها من الأضواء، أو مزيج من الضوء والأدوية. يتطلب العمل مع الكائنات الحية الدقيقة معدات خاصة، مثل نظارات السلامة، ومعطف مختبر الأزرار، وقفازات نيترو.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

96 ألف لوحة حسنا Microtiter القائم على أسلوب تشكيل لمراقبة واختبار قابلية مضاد المبيضات البيض الأغشية الحيوية

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

دراسة المجتمعات الميكروبية<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج من التفاعل بوساطة بين المضيف<em&gt; المبيضات البيض</em&gt; و<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في الخطوط الجوية

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

تأتي إلى "جانب الضوء": "في فيفو" الرصد الزائفة الزّنجاريّة بيوفيلم الالتهابات في "الجروح المزمنة" في "نموذج مورين أصلع السكري"

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

التصور "تشكيل بيوفيلم" في المبيضات البيض باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

العميق "الجلد حقن كنموذج" "عدوى الجلد" المبيضات البيض "التحليل النسيجي"

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

التصور من المبيضات الbicans في الجهاز الهضمي Murine باستخدام التهجين في الموقع الفلورسنت

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

توضيح والتصوير المبيضات ألبيكانس بيوفيم

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

مُسَاَنّة مُعَدِيّة سابقة لدراسة المبيضات المبيضات البَيكانسِيّة الواصلة Morphogenesi في الجهاز الهضمي

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

روز البنغال العلاج الضوئي الديناميكي بوساطة لمنع المبيضات البيضاء

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

استخدام التصوير في الجسم الحي للكشف عن الأنماط الظاهرية للتشكل في سلالات المبيضات البيض الطافرة أثناء العدوى النشطة في مضيف الثدييات

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...