Name: daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth
Uploaded: 2019-04-23T13:00:00
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우리가이 연구 개발에 대 한 박사 폴라 다 실베이라, 박사 Cecília Atem Gonçalves 드 Araújo 코스타, 숀 M. Maule, 쉐 인 M. Maule, 박사 Malvin N. Janal와 박사 Iriana Zanin 감사합니다. 우리는 또한이 연구에서 분석 하는 스트레인을 기부에 대 한 박사 알렉산더 D. 존슨 (UCSF)를 인정 합니다.

1입니다. 배양 기의 준비
<ol><li>Sabouraud 포도 당 한 천 (SDA)를 준비 합니다. SDA 페니 (50 mg/L) 1000 ml 증류수의 보충의 65 g을 일시 중단 합니다. 매체를 완전히 분해를 끓인 다. 30 분 쿨 45-50 ° c에 대 한 15 PSI (121 ° C)에 압력가 마로 소독 하 여 소독 잘 혼합 하 고 멸 균 페 트리 접시에 SDA의 20 mL를 붓고 (크기: 100 m m x 15 m m).</li>
	<li>준비 효 모 질소 기본 (YNB) 매체 100 mM 포도 당 6.7 g YNB 및 초순 물 1000 mL에 ?...

<ol>
	<li>Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).</li><li>Harriott, M. M., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+and+Staphylococcus+aureus+form+polymicrobial+biofilms:+effects+on+antimicrobial+resistance.">Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).</li><li>Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+antifungal+resistance.">Overcoming antifungal resistance.</a> Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).</li><li>Finkel, J. S., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+Candida+albicans+biofilm+development.">Genetic control of Candida albicans biofilm development.</a> Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).</li><li>Zarnowski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+entries+in+a+fungal+biofilm+matrix+encyclopedia.">Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia.</a> MBio. 5, e013333 (2014).</li><li>Mitchell, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Community+participation+in+biofilm+matrix+assembly+and+function.">Community participation in biofilm matrix assembly and function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).</li><li>Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+super+glue:+the+biofilm+matrix+and+its+composition,+assembly,+and+functions.">Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions.</a> PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).</li><li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+light+rescues+mice+from+potentially+fatal+Pseudomonas+aeruginosa+burn+infection:+efficacy,+safety,+and+mechanism+of+action.">Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).</li><li>de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+twice-daily+blue+light+treatment+on+matrix-rich+biofilm+development.">Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development.</a> PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).</li><li>Fontana, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+effect+of+photodynamic+therapy+in+dental+plaque-derived+biofilms.">The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms.</a> Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).</li><li>Donlan, R. M., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+survival+mechanisms+of+clinically+relevant+microorganisms.">Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).</li><li>Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+genes+TEC1+and+EFG1+in+Candida+albicans+influences+extracellular+matrix+composition+and+biofilm+morphology.">Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology.</a> Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).</li><li>Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culturing+and+screening+of+Candida+albicans+biofilms.">In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms.</a> Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).</li><li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection.">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li><li>Kuchar&#237;kov&#225;, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujd&#225;kov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+comparison+of+Candida+albicans+and+Candida+glabrata+biofilms+under+different+conditions+and+their+susceptibility+to+caspofungin+and+anidulafungin.">Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin.</a> Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).</li><li>Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+media+profoundly+affect+Candida+albicans+and+Candida+tropicalis+growth,+adhesion+and+biofilm+development.">Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development.</a> Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).</li><li>Kadosh, D., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+the+Candida+albicans+filamentous+growth+program+by+relief+of+transcriptional+repression:+a+genome-wide+analysis.">Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis.</a> Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).</li><li>Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+on+Streptococcus+mutans+using+curcumin+and+toluidine+blue+activated+by+a+novel+LED+device.">Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device.</a> Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).</li></ol>

C. albicans biofilm의 성공적인 경작을 위해 가장 중요 한 단계는: 1) 사전 inoculum YNB 중 포도 당 100 mM;와 보완 inoculum을 할 2)를 접착 단계에 대 일 분을 기다려야 하 고 신중 하 게 씻어 두 번 0.89% 우물 NaCl 준수 비 세포;를 제거 하 그리고 3) RPMI 매체 RPMI 균 성장 자극 것 이후 biofilm 형성을 시작 하는 준수 셀에 추가 하려면. Aneuploidies C. albicans를 경작 하는 경우 발생할 수 있습니다. 따라서, 7 ...

Candida albicans 의 발생률을 증가 하는 당뇨병, 면역 억제 치료 응용 프로그램, HIV 감염, 에이즈, 침략 적 임상 절차 및 과거 년에 있는 넓 스펙트럼 항생제 소비의 발생률이 증가 관련 질병1,2. C. albicans 감염 biofilm 개발 관련 일반적으로 그리고 임상 발현, 칸디 다 증, 또는 candidemia1,2등 조직 발현 등을 일으킬 수 있습니다. Biofilm 성장의 가장 주목할 만한 독성 요인 중 하나는 세포 외 다 당 류 매트릭스 설립 이다. Biofilm 형성 기존 항진균 약물, 환경 스트레스, 그리고 호스트 면역 메커니즘3에 저항을 증가 협력.
C. albicans 의 biofilm 성장을 planktonic 셀의 초기 부착 기판, 기판 표면, 및 hyphal 성장을 통해 효 모 세포의 전파에 의해 뒤에 시작 됩니다. Biofilm 성장의 마지막 단계 성숙 단계, 어떤 점에서 효 모와 같은 개발 억제, hyphal 개발 확장 되 고 세포 외 매트릭스 포함 biofilm4입니다. C. albicans exopolysaccharides (EPS) 행렬에서 mannan-글 루 칸 복잡 한5,6를 상호 작용 합니다. Exopolysaccharides의 상호 작용은 약7에 biofilms의 방어에 대 한 중요 합니다. 따라서, C. albicans 기질에서 EPS의 감소는 구강 칸디 다 증 제어를 위한 새로운 antibiofilm 프로토콜의 개발을 지원할 수 있습니다.
빛 조절 성장, 개발, 및 여러 생물8 의 행동 그리고 photodynamic 항균 화학요법 (협정)에 항균으로 적용 되었습니다. 협정에는 특정 파장의 빛을 흡수 photosensitizer9가시 광선 적용 됩니다. 그러나,는 photosensitizers 낮은 효능10를 일으키는 biofilm, 침투에 어려움이 있다. 완전히 침투 biofilms 치료제의 실패는 biofilms 때때로 전통적인 항균 치료3,5저항 하는 이유입니다. 동봉 된 미생물 세포를 비활성화 하려면 제 기질; 통해 침투 필요 그럼에도 불구 하 고, EPS는 biofilm에 운송의 그들의 수준을 자극 하거나11자체 매트릭스와 항균의 응답에 영향을 미치는 이러한 분자에 대 한 diffusional 장애물을 특징.
협정의 단점을 고려 하면 자체적으로 빛의 사용 가치 개선으로 나온다. 예비 데이터는 하루에 두 번 블루 빛으로 치료 크게 구 mutans biofilm에 EPS-불 용해성의 생산을 저해 밝혔다. EPS-불 용해성의 감소, 블루 빛 biofilm 성장을 저하. 그럼에도 불구 하 고, C. albicans biofilms에 붉은 빛을 사용 하 여 광선 요법의 결과 부족 한. 따라서,이 조사 목표는 붉은 빛을 사용 하 여 어떤 방식으로 광선 요법 성장과 C. albicans biofilm의 영향에 평가 했다. 매일 두 번 치료를 위해 우리는 우리 실험실의 이전 프로토콜9,12 , 생존 능력에 대 한 답변을 제공 하는 간단 하 고 재현성 biofilm 모델을 제공 적응 드라이 무게와 세포 외 다 당 류 빨간 불 치료. 후 금액 다른 치료법을 테스트 하기 위해 동일한 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1115px;" width="1115">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Clorhexidine 20%&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">C9394</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Dextrose (D-Glucose) Anhydroous</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">D16-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:372px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">DSP-MD.43</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LumaCare LC-122 A&#160;</td>
			<td style="width:372px;">LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">NaCl&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">S641-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Bioreagents&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BP 359-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol 5%</td>
			<td style="width:372px;">Milipore Sigma</td>
			<td style="width:123px;">843984</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino)</td>
			<td style="width:372px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">R7755</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol</td>
			<td style="width:372px;">Acumedia</td>
			<td style="width:123px;">7306A</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sulfuric acid&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">SA200-1</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast nitrogen base&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Difco</td>
			<td style="width:123px;">DF0392-15-9</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">M1254</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">&#160;24-well polystyrene plate&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">353935</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth

여기, 선물이 Candida albicans biofilm의 성장에 일당 빨간 불 치료의 결과 평가 하는 프로토콜. C. albicans SN425의 planktonic 성장, 증가 하는 inoculums 효 모 질소 기지 미디어에 성장 했다. Biofilm 형성에 대 한 아미노산의 높은 농도가지고 RPMI 1640 미디어 biofilm 성장 수 있도록 적용 되었다. 48 h의 Biofilms 비 코히어런트 빛 장치로 1 분 동안 하루에 두 번을 치료 했다 (붉은 빛, 파장 = 635 nm; 에너지 밀도 = 87.6 J·cm-2). 긍정적인 통제 (PC), 0.12% 액체 (CHX) 적용, 그리고 부정적인 제어 (NC), 0.89 %NaCl biofilms에 적용 했다. 콜로 니 형성 단위 (CFU), 건조 중량, 가용성과 불용 성 exopolysaccharides 치료 후 계량 했다. 간단히, 여기에 제시 된 프로토콜 간단 하 고 재현성 및 빨간 불 치료. 후 드라이 무게와 세포 외 다 당 류 금액, 생존 능력에 대 한 답변을 제공 합니다.

그림 2 1 분 빨간 불 로그10 CFU/mL는 NC에 비해 감소에 대 한 레드 빛 당 일당 치료 후 로그10 CFU/mL C. albicans 의 결과 표시 (p = 0.004). 그림 3 은 매일 처리 후 C. albicans biofilms의 바이오 매스 (mg)의 결과 제공합니다. 모든 처리 그룹은 NC에 비해 바이오 매스의 감소를 보였다 (p = 0.000) 붉은 빛 처리는 PC에서 ?...

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Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

규제 Candida albicans Biofilm 성장에 붉은 빛으로 매일 광선 요법

여기, 선물이 Candida albicans biofilm의 성장에 레드 빛 응용 프로그램의 결과 평가 하는 프로토콜. 635 nm의 파장 및 87.6 J·cm-2 의 에너지 밀도와 비 코히어런트 레드 라이트 장치 48 h에 대 한 칸디 다 albicans biofilms의 성장에 걸쳐 적용 되었다.

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

칸디다 면역 손상 호스트에 보급 된 곰팡이 감염의 가장 일반적인 원인입니다. 매트릭스 때문에 생물막에 완전히 침투하는 치료제의 실패는 생물막이 전통적인 치료법에 저항하는 이유 중 하나입니다. 우리의 프로토콜은 홍빛을 사용하여 광요법이 칸디다 알비칸스 생물막의 성장과 배열을 방해하는 방법을 평가합니다.이 연구에서 사용되는 균주는 세포 외 매트릭스를 특징으로하고 광 장치가 성공적으로 다른 판자 미생물 현탁액 및 생물막에 적용되었기 때문에 적용 된 방법은 잘 확립되어 있습니다. 이 장치의 가장 큰 장점은 치료 시간 단축으로 임상 응용 프로그램에 더 눈에 띄게됩니다. 칸디다 알비칸을 배양할 때 항체를 획득할 수 있다는 것을 유의하십시오.따라서, 7일 이상 된 식민지를 사용하지 말고, 섭씨 4도에서 플레이트를 시작하지 말고, 기존 플레이트로부터 세포를 다시 줄이지 않는 것이 중요하다. 마찬가지로, 긴장은 하룻밤 성장의 18 시간 전에 사용되어야한다. 분광계를 처음으로 사용하는 경우 먼저 단위 수로 콜로니 팜을 획득하여 광학 밀도 값과 상관관계를 맺는 것이 중요합니다.따라서, 실험은 밀리리터당 10~7개의 세포의 초기 세포 농도에서 중간 성장 단계를 사용하기 시작할 것이다. 이러한 세포 농도는 가장 의존적이고 안정적인 물질 생물막을 제공하는 것으로 나타났다. 시작하려면, 중단 65 SDA의 그램, 로람페니콜의 리터 당 50 밀리그램으로 보충, 에 1, 000 비커에 증류수의 밀리리터.비커를 히터에 놓고 중간을 완전히 녹입니다. 그런 다음 미디어를 유리 병으로 옮기습니다. 캡을 병에 놓지만 병을 배출할 수 있도록 완전히 나사를 놓지 마십시오.병을 오토클레이브에 배치하여 15 PSI, 섭씨 121도에서 30분 동안 살균합니다. 약 섭씨 45도에 솔루션을 냉각합니다. 일회용 멸균 파이펫을 사용하여 잘 섞고 SDA의 파이펫 20 밀리리터를 멸균 페트리 플레이트에 넣습니다.YNB 배지를 준비하려면 100 밀리몰라 포도당으로 보충하여 6.7 그램의 YNB와 18 그램의 덱스트로스를 비커에 1, 000 밀리리터의 초순수 수를 섞습니다. 비커에 스티어 바를 놓고 비커를 저어 접시에 넣고 섞습니다. 0.22 마이크로미터 진공 필터 시스템을 통해 배지를 걸이하여 멸균합니다.10.4 그램의 RPMI-1640 및 34 그램의 MOPS를 1, 000 밀리리터에 초순수 수의 혼합하여 RPMI 매체를 준비하십시오. 교반기에서 열 없이 섞고 일반 수산화나트륨 1개를 추가하여 PH를 7으로 조정합니다. 0.22 마이크로미터 진공 필터 시스템을 사용하여 매체를 살균합니다.먼저, 미생물 칸디다 알비칸스 SN 425를 주변 온도에서 해동한다. 클로람페니콜로 보충된 SDA가 함유된 이전에 준비된 페트리 요리에 대한 정지 문화의 10 마이크로리터. 페트리 요리를 섭씨 37도에서 48시간 동안 에어로비티로 배양합니다.사전 접종을 위해 살균 된 윤활유를 사용하여 페트리 접시에서 칸디다 알비칸 의 10 식민지를 선택하고 포도당으로 보충 된 YNB 배지의 10 밀리리터를 포함하는 원심 분리기 튜브에 넣습니다. 16시간 동안 37도에서 튜브를 에어로비로 배양합니다. 그런 다음, 희석을 위해 1-10 비율로 포도당으로 보충된 신선한 YNB 배지에 이 스타터 문화를 추가하여 접종을 준비합니다.분광계를 사용하여 540 나노미터에서 초기 OD를 측정합니다. 8시간 동안 37도에서 접종을 에어로비컬하게 배양하고 최종 OD를 540 나노미터로 측정합니다. 초기 OD에서 최종 OD를 빼서 접종자의 OD가 중간 로그 성장 단계에 있는지 확인합니다.밀리리터당 7개의 세포당 10~7개의 세포로 접종을 얻으려면, 5, 500회 G.pour를 5, 500회 G.pour를 저혈당 나트륨을 함유한 비커에 슈퍼나탄을 붓고 신선한 YNB를 추가하여 이전 부피의 절반에 접종을 농축한다. 24웰 폴리스티렌 플레이트의 각 웰에 접종한 밀리리터 1밀리리터를 넣습니다. 우물 바닥에 세포 접착을 허용하기 위해 90 분 동안 섭씨 37도에서 에어로브로 배양하십시오.양성 제어 생물막에 대해 0.12%의 클로르헨시딘1밀리리터로 1분간 생물막을 치료한다. 음의 대조를 위해, 멸균의 1 밀리리터, 0.89 %의 염화 나트륨으로 1 분 동안 생물막을 치료하십시오. 그 후, 우물을 각각 2회, 1분 씩 씻고, 1밀리리터의 멸균 염화나트륨을 1밀리리터로 씻어 비부착 세포를 제거한다.그런 다음 일관되지 않은 적색 광을 켜고 전원 계수를 사용하여 빛의 전력 밀도를 측정합니다. 평방 센티미터당 87.6 줄의 에너지 밀도 요구 사항에 따라 노출 시간을 결정합니다. 접시를 빨간 불빛 아래에 놓습니다.샘플의 온난화를 피하기 위해 광원과 바이오필름 사이의 거리를 5밀리리터로 유지합니다. 1 분 동안 노출 한 후, 각 우물에 멸균 RPMI 매체의 1 밀리리터를 추가하고 밤에 섭씨 37도에서 플레이트를 배양합니다. 아침에, RPMI 매체와 함께 6 시간 동안 동일한 세척, 가벼운 치료, 긍정적 이고 부정적인 제어 치료 및 인큐베이션을 반복합니다.다시, 두 번 생물 막을 세척, 적색빛에 노출, 긍정적 이고 부정적인 제어 치료를 수행. 우물에서 용액을 흡인하고 RPMI 매체를 추가합니다. 48시간의 생물막 개발을 달성할 때까지 인큐베이션, 세척, 가벼운 치료 및 양성 및 음수 제어 치료를 반복합니다.처리를 시작하려면, 매체를 버리고 멸균의 1 밀리리터, 0.89%의 염화나트륨을 우물에 추가하고 파이펫 팁을 사용하여 우물에서 생물막을 긁어버린다. 제거된 생물막을 멸균 튜브로 옮기. 멸균의 또 다른 1 밀리리터를 추가, 0.89%의 염화 나트륨을 우물에 넣습니다.다시 긁어 내고 2 밀리리터의 총 부피, 같은 튜브에 서스펜션을 추가합니다. 생체 필름 서스펜션을 1분 동안 활발하게 소용돌이시다. CFU 분석을 위해, 각 희석에 대해 0.89%의 염화나트륨 용액의 900 마이크로리터를 함유한 마이크로 원심분리기 튜브로 생물막 서스펜션에서 0.1 밀리리터의 알리쿼터를 전송한다.살막 용액을 10에서 음수 10에서 음4로 희석하여 식염수 용액으로 희석합니다. SDA 플레이트에 각 희석제 50 마이크로리터를 시드하고 48시간 동안 섭씨 37도에서 플레이트를 배양합니다. 식민지를 계산하고 수식을 적용합니다.건성 중량 분석을 위해, 첫째로 계량하고 마이크로 원심분리기 관을 레이블. 생물막 서스펜션의 0.1 밀리리터와 절대 에탄올 1 밀리리터를 튜브에 넣고 18시간 동안 음수 섭씨 20도에 보관하십시오. 그런 다음 원심 분리기가 10 분 동안 10, 000 배 G를 원심분리합니다.상체를 버리고 1 주일 동안 샘플을 건조기에 튜브를 놓습니다. 마이크로 원심분리기 튜브의 무게를 다시 계량하고, 바이오매스 중량을 얻기 위해 뺄셈을 한다. 본 실험에서, 칸디다 알비칸스 생물막에 1분 동안 적색광을 가진 다이엠 치료 후, CFU는 염화나트륨으로 처리된 음의 대조군과 비교하여 감소되었다.매일 치료 후 칸디다 알비칸스 생물막의 바이오매스의 결과, 홍등 처리 그룹은 염화물로 치료 양성 대조군에서 관찰된 바이오매스의 유사한 감소를 제시한 것을 보여준다. 두 그룹은 또한 서로 통계적 유사성을 보였다. 둘 다 바이오매스의 감소를 보였지만, 염화나트륨으로 처리된 부정적인 대조군과 비교하였다.칸디다 알비칸의 열등한 양은 수용성 및 불용성 EPS로 관찰되었으며, 음의 대조군과 비교하여 양수 대조군에서 관찰되었다. 통계적으로 유의하지는 않지만 적색광의 디엠 적용시 EPS 용해성 및 EPS 불용성의 양을 수치적으로 감소시켰습니다. 음성 조절 및 적색광 처리단은 통계적 유사성을 보였다.정확한 적용 기간을 결정하기 위해 치료를 시작하기 전에 전력 계수를 사용하여 빛의 전력 밀도를 측정합니다. 단계는 에너지 밀도가 항상 섭리계의 87.6 줄이 될 것이라는 것을 보장합니다. 이전에 인용된 수식을 사용합니다.측정은 5밀리미터의 플레이트 병에 빛에서 동일한 것을 사용하여 이루어집니다. 광선 요법과 항진균 제 사이의 연관성은 적색광으로 전처리가 약물 적용에 이어 생물막내로의 약물 침투를 향상시키는지 확인하기 위해 연구될 수 있습니다. 매일 두 번 의 치료를 위해 우리는 실험실의 프로토콜을 조정하여 적색 광 처리 후 생존가능성, 건조 중량 및 세포 외 다당류 금액에 대한 해답을 제공하는 쉽고 재현 가능한 생물막 모델을 제공했습니다.프로토콜은 일반적이며 약물, 기타 조명 또는 빛과 약물의 조합을 포함한 적색 광 이외에 다른 치료법을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다. 미생물로 작업하려면 안전 안경, 버튼 랩 코트 및 니트로 장갑과 같은 특수 장비가 필요합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

모니터링 형성과 Antifungal 자화율 테스트를위한 96 자 Microtiter 플레이트 기반 방법 캔디다 albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

연구

면역학 및 감염병학

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

미생물 커뮤니티를 공부<em&gt; 생체</em&gt; 사이에 호스트 매개 상호 작용의 모델<em&gt; 칸디다 알비 칸스</em&gt; 및<em&gt; 녹농균</em&gt; 항공에

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

라이트 사이드에와 서: Vivo에서 당뇨병 털 Murine 모델에 만성 상처에서 녹 농 균 Biofilm 감염의 모니터링

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

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Candida albicans 자동 미세 장치를 사용 하 여에서 Biofilm 형성의 시각화

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

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깊은 피부 주입으로는 모델 조직학 분석 Candida albicans 피부 감염의

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

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시투 혼성화에서 형광을 사용하여 뮤린 위장에서 칸디다 알비칸스의 시각화

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

칸디다 알비칸스 바이오필름 의 명확화 및 이미징

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

칸디다 알비칸스 위장관에서 최면 모포 발생을 연구하는 Ex vivo 분석

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

로즈 벵골 매개 광역학 치료 칸 디다 알비칸을 억제하기 위해

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

포유류 숙주에서 활성 감염 중 칸디다 알비칸스 돌연변이 균주에서 형태형성 표현형을 스크리닝하기 위한 생체 내 이미징 사용

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...