Name: daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth
Uploaded: 2019-04-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth at JoVE.com

Мы благодарим д-р Паула да Силвейра, д-р Сесилия Атем Гонсалвес де Араужо Коста, Шон м. Maule, Мауле м. Шейн, д-р Мелвин N. Janal и доктор Ирина Занин для развития данного исследования. Мы также признаем д-р Александр D. Джонсон (UCSF) для пожертвования штамм, анализируются в настоящем исследовании.

1. Подготовка культуры средств массовой информации
<ol><li>Подготовка sabouraud декстроза агар (ПДД). Приостановите 65 g ПДД, дополнена Хлорамфеникол (50 мг/Л) в 1000 мл дистиллированной воды. Варить до растворения среды. Стерилизация автоклавированием при 15 PSI (121° C) для 30 минут остыть до 45-50 ° C. Хорош...

<ol>
	<li>Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).</li><li>Harriott, M. M., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+and+Staphylococcus+aureus+form+polymicrobial+biofilms:+effects+on+antimicrobial+resistance.">Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).</li><li>Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+antifungal+resistance.">Overcoming antifungal resistance.</a> Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).</li><li>Finkel, J. S., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+Candida+albicans+biofilm+development.">Genetic control of Candida albicans biofilm development.</a> Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).</li><li>Zarnowski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+entries+in+a+fungal+biofilm+matrix+encyclopedia.">Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia.</a> MBio. 5, e013333 (2014).</li><li>Mitchell, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Community+participation+in+biofilm+matrix+assembly+and+function.">Community participation in biofilm matrix assembly and function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).</li><li>Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+super+glue:+the+biofilm+matrix+and+its+composition,+assembly,+and+functions.">Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions.</a> PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).</li><li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+light+rescues+mice+from+potentially+fatal+Pseudomonas+aeruginosa+burn+infection:+efficacy,+safety,+and+mechanism+of+action.">Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).</li><li>de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+twice-daily+blue+light+treatment+on+matrix-rich+biofilm+development.">Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development.</a> PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).</li><li>Fontana, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+effect+of+photodynamic+therapy+in+dental+plaque-derived+biofilms.">The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms.</a> Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).</li><li>Donlan, R. M., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+survival+mechanisms+of+clinically+relevant+microorganisms.">Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).</li><li>Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+genes+TEC1+and+EFG1+in+Candida+albicans+influences+extracellular+matrix+composition+and+biofilm+morphology.">Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology.</a> Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).</li><li>Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culturing+and+screening+of+Candida+albicans+biofilms.">In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms.</a> Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).</li><li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection.">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li><li>Kuchar&#237;kov&#225;, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujd&#225;kov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+comparison+of+Candida+albicans+and+Candida+glabrata+biofilms+under+different+conditions+and+their+susceptibility+to+caspofungin+and+anidulafungin.">Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin.</a> Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).</li><li>Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+media+profoundly+affect+Candida+albicans+and+Candida+tropicalis+growth,+adhesion+and+biofilm+development.">Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development.</a> Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).</li><li>Kadosh, D., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+the+Candida+albicans+filamentous+growth+program+by+relief+of+transcriptional+repression:+a+genome-wide+analysis.">Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis.</a> Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).</li><li>Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+on+Streptococcus+mutans+using+curcumin+and+toluidine+blue+activated+by+a+novel+LED+device.">Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device.</a> Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).</li></ol>

Наиболее важные шаги для успешного культивирования C. albicans биопленки являются: 1) сделать предварительно посевным материалом и посевным материалом в среде YNB дополнена глюкозы 100 мм; 2) чтобы подождать 90 мин для этапа адгезии и тщательно мыть дважды скважин с 0,89% NaCl для удаления непри?...

Увеличение заболеваемости диабетом, иммуносупрессивной терапии приложений, ВИЧ-инфекции, эпидемия СПИДа, инвазивных клинических процедур и широкого спектра действия антибиотиков потребления в последние годы увеличилось число Candida albicans связанные с заболеваниями1,2. C. albicans инфекции обычно связаны с развитием биопленки и может вызвать клинических проявлений, таких как кандидоз, или системных проявлений, таких как кандидемия1,2. Одним из наиболее значимых факторов вирулентности биопленки роста является создание матрицы внеклеточный полисахарид. Биопленки сотрудничает увеличить сопротивление существующих противогрибковых препаратов, экологический стресс и принимающих иммунные механизмы3.
Биопленки рост C. albicans начинается с раннего приверженность планктонных клеток подложки, следуют размножения дрожжевых клеток через поверхность субстрата и гиф роста. Последний этап биопленки роста является фаза созревания, которой дрожжеподобные развития подавляется, гиф развитие расширяет и внеклеточного матрикса заключает биопленки4. C. albicans экзополисахаридов (EPS) в матрице взаимодействуют сформировать Маннан глюкан комплекс5,6. Взаимодействие между экзополисахаридов имеет решающее значение для обороны биоплёнки против наркотиков7. Следовательно уменьшение EPS от C. albicans внеклеточного матрикса могла бы поддержать разработку новых протоколов antibiofilm управление устный кандидоз.
Свет регулирует рост, развитие и поведение нескольких организмов8 и она применялась в качестве противомикробного средства в фотодинамической антимикробной химиотерапии (Пакт). Пакт применяется видимого света определенной длины волны и фотосенсибилизатора поглощая свет9. Однако фотосенсибилизаторов испытывают трудности в проникающего биопленки, вызывая ниже эффективность10. Терапевтических агентов неспособность полностью проникнуть биоплёнки причина что биоплёнки иногда противостоять традиционной антибактериальной терапии3,5. Чтобы деактивировать закрытых микробной клетки, противомикробных препаратов должны проникать через внеклеточная матрица; Тем не менее EPS характеризует диффузионным препятствием для таких молекул, запрашивая их уровень перевозки в биопленки или влияя на ответ антимикробная с самой матрицы11.
Учитывая недостатки Пакт использование света сама по себе выступает как ценный улучшения. Предварительные данные показали, что лечение с голубой свет дважды в день значительно препятствует производства EPS-нерастворимые Streptococcus mutans биопленки. Снижением EPS-нерастворимые синий свет уменьшилась биопленки роста. Тем не менее результаты фототерапии, используя красный свет в C. albicans биоплёнки являются скудными. Таким образом цель данного исследования заключалась в оценке в какой манере фототерапии, используя красный свет влияет на рост и расположение C. albicans биопленки. Два раза в день обращения, мы адаптировали наши лаборатории предыдущих протоколы9,12 обеспечить легкий и воспроизводимые биопленки модель, которая обеспечивает ответы относительно жизнеспособности, сухой вес и внеклеточных полисахаридов суммы после лечения красный свет. Тот же протокол может использоваться для тестирования других терапий.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1115px;" width="1115">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Clorhexidine 20%&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">C9394</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Dextrose (D-Glucose) Anhydroous</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">D16-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:372px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">DSP-MD.43</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LumaCare LC-122 A&#160;</td>
			<td style="width:372px;">LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">NaCl&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">S641-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Bioreagents&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BP 359-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol 5%</td>
			<td style="width:372px;">Milipore Sigma</td>
			<td style="width:123px;">843984</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino)</td>
			<td style="width:372px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">R7755</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol</td>
			<td style="width:372px;">Acumedia</td>
			<td style="width:123px;">7306A</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sulfuric acid&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">SA200-1</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast nitrogen base&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Difco</td>
			<td style="width:123px;">DF0392-15-9</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">M1254</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">&#160;24-well polystyrene plate&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">353935</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth

Здесь мы представляем протокол для оценки результатов лечения суточные красный свет на рост Candida albicans биопленки. Чтобы увеличить планктонных рост SN425 C. albicans , Инокулянты вырос на дрожжи азота базы СМИ. Для биопленки были применены RPMI 1640 СМИ, которые имеют высокие концентрации аминокислот, чтобы помочь росту биопленки. Биоплёнки 48 h относились два раза в день в течение 1 мин с устройством некогерентного света (красный свет, длина волны = 635 нм; плотность энергии = 87,6 J·cm-2). Как положительный контроль (PC), 0,12% хлоргексидин (CHX) был применен и как отрицательный контроль (НК), 0,89% NaCl был применен к биопленки. Колонии, образуя единиц (CFU), сухой вес, растворимых и нерастворимых экзополисахаридов были количественно после лечения. Кратко протокол, представленные здесь прост, воспроизводимые и дает ответы относительно жизнеспособности, сухой вес и внеклеточный полисахарид суммы после лечения красный свет.

Рисунок 2 отображает результаты журнала10 кое/мл C. albicans после суточных лечения с красный свет, красный свет 1 мин значительно уменьшена в журнал10 кое/мл, по сравнению с NC (p = 0,004). Рисунок 3 представлены результаты биомассы (?...

Watch this Scientific Journal Video about Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth at JoVE.com

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Ежедневные фототерапии с красный свет для регулирования Candida albicans биопленки роста

Здесь мы представляем протокол для оценки результатов применения красный свет на рост Candida albicans биопленки. Устройство некогерентный красный свет с длиной волны 635 нм и плотность энергии 87,6 J·cm-2 был применен во всем рост Candida albicans биопленки в течение 48 часов.

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Candida является наиболее распространенной причиной распространенной грибковой инфекции у иммунокомпромиссных хостов. Неспособность терапевтических агентов полностью проникнуть биопленки из-за матрицы является одной из причин, почему биопленки противостоять традиционной терапии. Наш протокол оценивает, как фототерапия, используя красный свет, препятствует росту и расположению биопленок Candida Albicans.Применяемые методы хорошо известны, так как штамм, используемый в данном исследовании, имел свою внеклеточную матрицу, и световое устройство было успешно применено к другим планктонным подвескам и биопленким микроорганизмам. Наибольшее преимущество этого устройства является сокращение времени лечения, что делает его более заметным для клинических применений. При культивировании Candida albicans знать, что антитела могут быть приобретены.Поэтому важно не использовать колонии, которые старше семи дней, не начинать пластины при четырех градусах Цельсия, и не перегоняя клетки из существующих пластин. Аналогичным образом, штамм следует использовать до 18 часов ночного роста. При использовании спектрофотометра впервые важно сначала получить колонию фермы в единицах рассчитывает, соотнести с оптическими значениями плотности.Таким образом, эксперименты начнут использовать середину фазы роста в начальной концентрации клеток от 10 до 7 клеток на миллилитры. Было показано, что эта концентрация клеток обеспечивает наиболее зависимую и стабильную биопленку вещества. Для начала приостанавливаем 65 граммов ПДД, дополненного 50 миллиграммами на литр хлорамфеникол, в 1000 миллилитров дистиллированной воды в стакане.Поместите стакан на нагреватель до кипения, для того, чтобы полностью растворить среду. Затем перенесите средства массовой информации в стеклянную бутылку. Поместите крышку на бутылку, но не винт его полностью, чтобы обеспечить бутылку в состоянии вентиляционные.Поместите бутылку в автоклав для стерилизации раствора при 15 PSI и 121 градусов по Цельсию в течение 30 минут. Охладить раствор до 45 градусов по Цельсию. Используйте одноразовые, стерильные пипетки, хорошо перемешать, и пипетки 20 миллилитров ПДД в стерильные пластины Петри.Для приготовления среды YNB, дополненной 100 миллимолярной глюкозой, смешайте 6,7 грамма YNB и 18 граммов декстрозы до 1000 миллилитров ультра чистой воды в стакане. Поместите бар перемешать в стакан и положить стакан на тарелку перемешать, чтобы смешать. Фильтр среды через 0,22 микрометровый вакуумный фильтр системы для стерилизации.Приготовьте RPMI medium, смешивая 10,4 грамма RPMI-1640 и 34 грамма MOPS, до 1000 миллилитров ультра чистой воды. Смешайте в мешалку без тепла и отрегулируйте PH до семи, добавив один нормальный гидроксид натрия. Стерилизовать среду с помощью 0,22 микрометровой вакуумной фильтровальной системы.Во-первых, оттепель микроорганизм Candida Albicans SN 425 при температуре окружающей среды. Семена 10 микролитров стоп-культуры на ранее приготовленных чашках Петри, содержащих ПДД, дополненных хлорамфениколом. Инкубировать чашки Петри аэробико при 37 градусах по Цельсию в течение 48 часов.Для предварительного инокулума используйте стерилизованную смазку, чтобы выбрать 10 колоний Candida albicans из чашек Петри и поместить их в центрифугу трубку, содержащую 10 миллилитров среды YNB, дополненную глюкозой. Инкубировать трубку аэробно при 37 градусах по Цельсию в течение 16 часов. Затем приготовьте инокулы, добавив эту культуру стартера в свежую среду YNB, дополненную глюкозой, в пропорции от одного до 10 для разбавления.Используйте спектрофотометр для измерения первоначального OD на 540 нанометров. Инкубировать инокулы аэробико на 37 градусов по Цельсию в течение восьми часов, и измерить окончательный OD на 540 нанометров. Вычесть окончательный OD из первоначального OD, чтобы проверить, если OD инокулумов находятся на фазе роста среднего журнала.Чтобы получить инокулум с 10 до 7 клеток на миллилитр, центрифуга инокулума в течение пяти минут при 5500 раз G.Pour супернатант в стакан, содержащий гипохлорит натрия и добавить свежий YNB, чтобы сконцентрировать инокулум до половины предыдущего объема. Добавьте один миллилитр инокулума к каждому колодец из 24 хорошо полистирол пластины. Инкубировать аэробно при 37 градусах по Цельсию в течение 90 минут, чтобы клеточное деление на дно колодцев.Лечить биопленки в течение одной минуты с одним миллилитр 0,12%хлоргексидин для положительного контроля биопленки. Для отрицательного контроля, лечить биопленки в течение одной минуты с одним миллилитр стерильных, 0,89% хлорида натрия. Впоследствии, мыть скважины два раза, по одной минуте каждый, с одним миллилитр стерильных 0,89% хлорида натрия для удаления непритята клеток.Затем включите несоключаемый красный свет и используйте счетчик мощности для измерения плотности мощности света. Определите время экспозиции на основе потребности в плотности энергии в 87,6 джоуля на квадратный сантиметр. Поместите тарелку под красный свет.Держите расстояние между источником света и биопленкой до пяти миллилитров, чтобы избежать потепления образца. После воздействия в течение одной минуты, добавить один миллилитр стерилизованной RPMI среды для каждого хорошо, и инкубировать пластины при 37 градусов по Цельсию в течение ночи. Утром повторите ту же стирку, легкое лечение, положительное и отрицательное контрольное лечение, и инкубацию в течение шести часов со средой RPMI.Опять же, мыть биопленки в два раза, подвергать их красный свет, и выполнять положительные и отрицательные методы контроля. Аспирировать раствор в скважинах и добавить RPMI среды. Повторите инкубацию, стирку, легкую обработку, а также положительные и отрицательные методы контроля, до достижения 48 часов развития биопленки.Чтобы начать обработку, отбросьте среду и добавьте один миллилитр стерильного, 0,89% хлорида натрия в колодец, и используйте наконечник пипетки, чтобы поцарапать биопленку из колодец. Перенесите удаленную биопленку в стерильную трубку. Добавьте еще один миллилитр стерильного, 0,89% хлорида натрия в колодец.Поцарапайте его снова и добавьте подвеску к той же трубке, для общего объема 2 миллилитров. Энергично вихрь биопленки подвески в течение одной минуты. Для анализа CFU перенесите алицит 0,1 миллилитров из подвески биопленки в микро центрифугу, содержащую 900 микролитров раствора хлорида натрия 0,89% для каждого разбавления.Разбавить раствор биопленки от 10 до отрицательного, до 10 до отрицательной четверки, в солевой раствор. Семя 50 микролитров каждого разбавления ПДД пластин, и инкубировать пластины при 37 градусов по Цельсию в течение 48 часов. Подсчитайте колонии и примените формулу.Для анализа сухого веса сначала взвешивают и маркифицировать микро центрифуги. Добавьте 0,1 миллилитров биопленки подвески и один миллилитр абсолютного этанола в трубки, и хранить их при отрицательном 20 градусов по Цельсию в течение 18 часов. Затем центрифуга 10 000 раз G в течение 10 минут.Откажитесь от супернатанта и поместите трубки в децикатор, чтобы высушить образцы в течение одной недели. Взвесить микро центрифуг трубки снова, и сделать вычитание, чтобы получить вес биомассы. В этом эксперименте, после лечения diem с красным светом в течение одной минуты, чтобы Candida albicans биопленки, CFU был сокращен, по сравнению с отрицательным контролем, обработанным хлоридом натрия.Результаты биомассы биопленок Candida albicans после ежедневных процедур показывают, что группа, обработанная красным светом, представила аналогичное сокращение биомассы, наблюдаемое в положительной контрольной группе, обработанной хлоргексидином. Эти две группы также продемонстрировали статистическое сходство друг с другом. Хотя они оба показали снижение биомассы, по сравнению с отрицательным контролем, обработанным хлоридом натрия.Низкое количество Candida albicans растворимых и нерастворимых EPS, наблюдалось в положительном контроле, по сравнению с отрицательным контролем. Несмотря на то, что это не является статистически значимым, применение красного света в расчете на красный свет численно уменьшило количество растворимых EPS и EPS нерастворимых. Отрицательный контроль и красный свет обработанной группы, показали статистическое сходство.Измерение плотности мощности света, используя счетчик мощности перед началом лечения, чтобы определить точные периоды применения. Шаги гарантируют, что плотность энергии всегда будет 87,6 джоулей на сантиметр в квадрате. Используйте ранее приведенную формулу.Измерение делается с использованием того же от света до бутылки пластин, пять миллиметров. Связь между фототерапией и противогрибковых препаратов могут быть изучены, чтобы проверить, если предварительное лечение красным светом, а затем применение препарата, улучшает проникновение наркотиков в биопленку. Для двухразовой ежедневной обработки мы адаптировали протоколы нашей лаборатории, обеспечивая легкую и воспроизводимую модель биопленки, которая дает ответы относительно жизнеспособности, сухого веса и внеклеточного количества полисахаридов после лечения красным светом.Протокол является общим и может быть использован для тестирования других методов лечения, в дополнение к красный свет, в том числе наркотики, другие огни, или сочетание света и наркотиков. Работа с микроорганизмами требует специального оборудования, такого как защитные очки, кнопочные лабораторные пальто и нитро-перчатки.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

96 Ну планшет метода, основанного на формировании мониторинга и тестирования Противогрибковые Восприимчивость Candida Albicans Биопленки

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Изучение микробных сообществ<em&gt; В Vivo</em&gt;: Модель узла опосредованного взаимодействия между<em&gt; Candida Albicans</em&gt; И<em&gt; Синегнойной палочки</em&gt; В Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Приходите в сторону света: В Vivo мониторинг Pseudomonas aeruginosa биопленки инфекций, хронических ран в диабетической голые мышиных модели

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Визуализация биопленки в Candida albicans с помощью автоматизированных Microfluidic устройства

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Глубокий дермальный инъекции как модель кожи инфекции Candida albicans для гистологического анализа

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Визуализация Candida Albicans в Желудочно-кишечном тракте Мурина с использованием флуоресцентных в ситу гибридизации

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Уточнение и изображение Candida Альбиканс Biofilms

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

Ex vivo Assay для изучения Candida Albicans Hyphal Morphogenesis в желудочно-кишечном тракте

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Роза Бенгал-Опосредованная Фотодинамическая Терапия для ингибирования Candida albicans

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Использование визуализации In Vivo для скрининга фенотипов морфогенеза у мутантных штаммов Candida albicans во время активной инфекции у хозяина млекопитающих

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...