Name: daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth
Uploaded: 2019-04-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth at JoVE.com

Bu çalışmada gelişimi için Dr Paula da Silveira, Dr Cecília Atem Gonçalves de Araújo Costa, Shawn M. Maule, Shane M. Maule, Dr Malvin N. Janal ve Dr. Iriana Zanin teşekkür ederim. Ayrıca Dr Alexander ö. Johnson (UCSF) Bu çalışmada analiz zorlanma bağış için kabul.

1. Kültür medya hazırlanması
<ol><li>Sabouraud dekstroz agar (SDA) hazırlayın. 65 g kloramfenikol (50 mg/L) 1000 ml distile su ile SDA askıya alma. Orta tamamen erimesi için kaynatın. Tarafından 30 dk. serin ile 45-50 ° c 15 PSI (121 ° C), ısıyla sterilize Mix iyi ve SDA 20 mL steril Petri tabak içine dökün (Boyut: 100 x 15 mm).</li>
	<li>6,7 g YNB ve 18 g dekstroz 1000 ml ultrasaf su karışımı ile 100 mM glikoz ile desteklenmiş Maya azot temel (YNB) orta hazırlayın. Bir karıştırıcı kullanar...

<ol>
	<li>Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).</li><li>Harriott, M. M., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+and+Staphylococcus+aureus+form+polymicrobial+biofilms:+effects+on+antimicrobial+resistance.">Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).</li><li>Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+antifungal+resistance.">Overcoming antifungal resistance.</a> Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).</li><li>Finkel, J. S., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+Candida+albicans+biofilm+development.">Genetic control of Candida albicans biofilm development.</a> Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).</li><li>Zarnowski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+entries+in+a+fungal+biofilm+matrix+encyclopedia.">Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia.</a> MBio. 5, e013333 (2014).</li><li>Mitchell, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Community+participation+in+biofilm+matrix+assembly+and+function.">Community participation in biofilm matrix assembly and function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).</li><li>Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+super+glue:+the+biofilm+matrix+and+its+composition,+assembly,+and+functions.">Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions.</a> PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).</li><li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+light+rescues+mice+from+potentially+fatal+Pseudomonas+aeruginosa+burn+infection:+efficacy,+safety,+and+mechanism+of+action.">Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).</li><li>de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+twice-daily+blue+light+treatment+on+matrix-rich+biofilm+development.">Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development.</a> PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).</li><li>Fontana, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+effect+of+photodynamic+therapy+in+dental+plaque-derived+biofilms.">The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms.</a> Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).</li><li>Donlan, R. M., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+survival+mechanisms+of+clinically+relevant+microorganisms.">Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).</li><li>Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+genes+TEC1+and+EFG1+in+Candida+albicans+influences+extracellular+matrix+composition+and+biofilm+morphology.">Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology.</a> Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).</li><li>Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culturing+and+screening+of+Candida+albicans+biofilms.">In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms.</a> Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).</li><li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection.">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li><li>Kuchar&#237;kov&#225;, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujd&#225;kov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+comparison+of+Candida+albicans+and+Candida+glabrata+biofilms+under+different+conditions+and+their+susceptibility+to+caspofungin+and+anidulafungin.">Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin.</a> Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).</li><li>Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+media+profoundly+affect+Candida+albicans+and+Candida+tropicalis+growth,+adhesion+and+biofilm+development.">Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development.</a> Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).</li><li>Kadosh, D., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+the+Candida+albicans+filamentous+growth+program+by+relief+of+transcriptional+repression:+a+genome-wide+analysis.">Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis.</a> Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).</li><li>Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+on+Streptococcus+mutans+using+curcumin+and+toluidine+blue+activated+by+a+novel+LED+device.">Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device.</a> Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).</li></ol>

Başarılı C. albicans biyofilm kültürü için en kritik adımlar şunlardır: 1) öncesi inoculum ve inoculum ile 100 mM glikoz; tamamlanmaktadır YNB orta yapmak 2) 90 dk yapışma aşama için dikkatli bir şekilde iki kez wells %0,89 ile yıkayın için beklemek NaCl hücrelerin; non yapıştırılır kaldırmak için ve 3) RPMI orta RPMI hif büyüme teşvik edecek bu yana biyofilm oluşumu, başlatmak için yapıştırılan hücrelere eklemek için. Aneuploidies C. albicanskültür oluşabilir...

Diyabet, immünsüpresif tedavi uygulamaları, HIV enfeksiyonu, AIDS salgınının, invaziv klinik yordamlar ve son yıl içinde geniş spektrumlu antibiyotik tüketimi artan insidansı Candida albicans insidansı artmıştır hastalıkları1,2ilgili. C. albicans enfeksiyonları sık biyofilm geliştirilmesi için ilgili ve kandidiyazis veya candidemia1,2gibi sistemik bulgular gibi klinik bulgular neden olabilir. Bir biyofilm büyümenin en önemli virülans faktörlerin ekstraselüler polisakkarit matris olarak tanımlanmıştır. Biyofilm oluşumu için varolan antifungal ilaçlar, çevresel stres ve konak immün mekanizmalar3direncini artırmak için işbirliği yapmaktadır.
C. albicans biyofilm büyüme maya hücreleri substrat yüzey ve hyphal büyüme yoluyla yayılması ve ardından bir substrat erken bağlılığı planktonik hücre ile başlar. Son biyofilm büyüme neyin maya benzeri geliştirme bastırılır, hyphal geliştirme genişletir ve hücre dışı matriks biyofilm4içine alır olgunlaşma aşama aşamadır. C. albicans exopolysaccharides (EPS) matris mannan-glukan karmaşık5,6oluşturmak için etkileşim. Exopolysaccharides etkileşim biyofilmler uyuşturucu7karşı savunma için önemlidir. Bu nedenle, EPS C. albicans hücre dışı matriks gelen azalma oral kandidiyaz denetim için yeni antibiofilm protokolleri gelişimini desteklemek.
Fotodinamik antimikrobiyal kemoterapi (anlaşma) bir antimikrobiyal olarak uygulanmış ve ışık büyüme, gelişme ve çeşitli organizmalar8 davranışını düzenler. ANLAŞMA belirli bir dalga boyu ve bir ışık emici photosensitizer9görünür ışığında uygular. Ancak, dezenfeksiyon biyofilm Penetran zorlukları alt etkinlik10neden vardır. Terapötik ajanlar başarısızlığı tamamen biyofilmler sızmaya biyofilmler geleneksel antimikrobiyal tedavi3,5zaman zaman karşı koymak bir nedenidir. Kapalı mikrobiyal hücreleri devre dışı bırakmak hücre dışı matriks nüfuz antimicrobials gerekir; Yine de, EPS düzeylerini taşıma biyofilm içine isteyen veya matris kendisi ile antimikrobiyal yanıt11etkileyen böyle moleküller için diffusional bir engel karakterize.
ANLAŞMA dezavantajları göz önüne alındığında, ışık tek başına kullanımı değerli bir gelişme olarak ortaya çıkıyor. Tedavi günde iki kez mavi ışık ile önemli ölçüde üretiminde EPS çözünmez Streptococcus mutans çoğunlukla biyofilm inhibe ön veriler saptandı. EPS çözünmez azalma tarafından mavi ışık biyofilm büyüme azalmış. Yine de, kırmızı ışık C. albicans biyofilmler kullanarak fototerapi sonucunu azdır. Bu nedenle, bu soruşturmanın amacı büyüme ve C. albicans biyofilm düzenlenmesi kırmızı ışık kullanarak ne şekilde fototerapi etkiler değerlendirmek için oldu. İki kez günlük tedavi için biz canlılığı, ilgili yanıtları sağlayan bir kolay ve tekrarlanabilir biyofilm modeli sağlamak için bizim laboratuvar 's önceki iletişim kuralları9,12 adapte kuru ağırlık ve ekstraselüler polisakkaritler kırmızı ışık tedavisi. sonra tutarları Aynı iletişim kuralını diğer tedaviler test etmek için kullanılabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1115px;" width="1115">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Clorhexidine 20%&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">C9394</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Dextrose (D-Glucose) Anhydroous</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">D16-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:372px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">DSP-MD.43</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LumaCare LC-122 A&#160;</td>
			<td style="width:372px;">LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">NaCl&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">S641-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Bioreagents&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BP 359-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol 5%</td>
			<td style="width:372px;">Milipore Sigma</td>
			<td style="width:123px;">843984</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino)</td>
			<td style="width:372px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">R7755</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:449px;">Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol</td>
			<td style="width:372px;">Acumedia</td>
			<td style="width:123px;">7306A</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sulfuric acid&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:123px;">SA200-1</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast nitrogen base&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Difco</td>
			<td style="width:123px;">DF0392-15-9</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS</td>
			<td style="width:372px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">M1254</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">&#160;24-well polystyrene plate&#160;</td>
			<td style="width:372px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">353935</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

daily phototherapy with red light to regulate candida albicans biofilm growth

Burada, başına harcırah kırmızı ışık tedavi Candida albicans biyofilm büyüme üzerine sonuçlarını değerlendirmek için bir protokol mevcut. C. albicans SN425 planktonik büyüme artırmak için Maya azot Bankası medyada inoculums büyüdü. Biyofilm oluşumu için amino asit yüksek konsantrasyonda var, RPMI 1640 medya biyofilm büyüme yardımcı olmak için uygulandı. 48 h biyofilmler tutarlı olmayan bir ışık cihazı ile günde 1 dk süreyle tedavi (kırmızı ışık; dalga boyu 635 = nm; enerji yoğunluğu 87.6 J·cm-2=). Olumlu denetim (PC), % 0.12 klorheksidin (CHX) uygulandı ve bir negatif kontrol (NC), %0.89 NaCl biyofilmler için uygulandığı gibi. Birimleri (CFU), oluşturan colony kuru ağırlık, çözünür ve çözünmez exopolysaccharides tedaviler sonra sayısal. Kısaca, burada sunulan iletişim kuralı basit, tekrarlanabilir ve canlılığı, ilgili yanıtlar kırmızı ışık tedavisi. sonra kuru ağırlık ve ekstraselüler polisakkarit tutarları sağlar

Şekil 2 görüntüler sonuçları günlük10 C. albicans CFU/mL kırmızı ışık ile başına yolculuğunu tedaviler sonra 1 dk. kırmızı ışık günlük10 CFU/mL NC karşılaştırıldığında önemli ölçüde azaltılmış (p = 0,004). Şekil 3 günlük tedaviler sonra C. albicans biyofilmler biyokütle (mg) sonuçlarını sunar. Tüm gruplar için NC göre biyolojik kütle göst...

Watch this Scientific Journal Video about Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth at JoVE.com

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

Burada, Candida albicans biyofilm büyüme üzerine kırmızı ışık uygulama sonucu değerlendirmek için bir protokol mevcut. 635 nm dalga boyu ve enerji yoğunluğu 87.6 J·cm-2 , tutarlı olmayan kırmızı ışık aygıtla Candida albicans biyofilmler 48 h için büyüme boyunca uygulandı.

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Candida immünosyonlu konaklarda yaygın mantar enfeksiyonunun en sık nedenidir. Terapötik ajanların matris yüzünden biyofilme tam olarak sızmaması, biyofilmlerin geleneksel tedavilere direnmesinin nedenlerinden biridir. Protokolümüz, kırmızı ışıkta kullanarak fototerapinin Candida albicans biyofilmlerinin büyümesini ve düzenlenmesini nasıl etkilediğini değerlendiriyor.Bu çalışmada kullanılan gerinim in hücre dışı matriks karakterize olduğundan ve ışık cihazı diğer planktonik mikroorganizma süspansiyonlarına ve biyofilmlere başarıyla uygulandığından, uygulanan yöntemler iyi belirlenmiştir. Bu cihazın en büyük avantajı tedavi süresinin azalmasıdır, bu da onu klinik uygulamalar için daha görünür hale getirir. Candida albicans culturing zaman antikorlar elde edilebilir farkında olun.Bu nedenle, yedi günden eski koloniler kullanmamak, plakaları dört santigrat derecede başlatmamak ve mevcut plakalardan hücreleri yeniden çizgile mesken etmemek önemlidir. Aynı şekilde, bir gerginlik bir gecede büyüme 18 saat önce kullanılmalıdır. İlk kez bir spektrofotometre kullanırken, optik yoğunluk değerleri ile ilişkilendirmek için, ilk birim sayıları koloni çiftlik elde etmek önemlidir.Bu nedenle, deneyler mililitre başına 10 ila yedi hücrenin ilk hücre konsantrasyonunda büyüme fazının ortasını kullanmaya başlayacaktır. Bu hücre konsantrasyonunun en bağımlı ve kararlı madde biyofilmlerini sağladığı gösterilmiştir. Başlamak için, SDA 65 gram askıya, Kloramphenicol litre başına 50 miligram ile takviye, içinde 1, bir kabın distile su mililitre.Orta yıtamamen eritmek için kabı kaynamak için bir ısıtıcının üzerine yerleştirin. Sonra bir cam şişe için medya aktarın. Şişe üzerine kapağı yerleştirin, ama şişe havalandırma yapabiliyor sağlamak için tamamen vida yok.Çözeltiyi 15 PSI ve 121 santigrat derecede 30 dakika sterilize etmek için şişeyi bir otoklava yerleştirin. Yaklaşık 45 santigrat derece ye kadar çözeltiyi soğutun. İyi karıştırmak için tek kullanımlık, steril pipet ve steril Petri plakaları içine SDA 20 mililitre pipet kullanın.YNB orta hazırlamak için, 100 milimolar glikoz ile takviye, mix 6.7 YNB gram ve dekstroz 1, bir beher ultra saf su mililitre 18 gram. Kabın içine bir karıştırma çubuğu yerleştirin ve karıştırmak için bir karıştırmak için bir karıştırma kayış üzerine beher koyun. Sterilize etmek için ortamı 0,22 mikrometrelik vakum filtre sisteminden filtreleyin.RPMI-1640 10,4 gram ve MOPS 34 gram karıştırarak RPMI orta hazırlayın, ultra saf su 1.000 mililitre. Isı olmadan bir karıştırıcı karıştırın ve normal bir sodyum hidroksit ekleyerek PH yedi ayarlayın. 0,22 mikrometrevakum filtre sistemi kullanarak ortamı sterilize edin.İlk olarak, ortam sıcaklığında Mikroorganizma Candida albicans SN 425 çözülme. Kloramfenikol ile desteklenen, Daha önce hazırlanmış SDA içeren Petri kapları üzerinde stop kültürünün 10 mikrolitre tohum. Petri yemeklerini aerobik olarak 37 derecede 48 saat kuluçkaya yatırın.Pre-inoculum için Petri kaplarından Candida albicans 10 kolonileri almak ve 10 ynb orta mililitre içeren bir santrifüj tüp içine yerleştirin steril bir madeni kullanın, glikoz ile birlikte. Tüpü aerobik olarak 37 derecede 16 saat kuluçkaya yatırın. Daha sonra, taze YNB orta içine bu başlangıç kültürü ekleyerek inoculums hazırlamak, glikoz ile desteklenen, seyreltme için bir ila 10 oranında.540 nanometre de ilk OD ölçmek için spektrofotometre kullanın. Inokülleri aerobik olarak 37 santigrat derecede sekiz saat kuluçkaya yatırın ve son OD'yi 540 nanometrede ölçün. İnoküllerin OD'sinin orta günlük büyüme aşamasında olup olmadığını kontrol etmek için ilk OD'den son OD'yi çıkarın.Mililitre başına yedi hücreye 10 tane bir inokül elde etmek için, inoculumu 5 dakika 5,500 kez G.'de sentrifuge sodyum hipoklorit içeren bir kabın içine dökün ve inoculumu önceki hacmin yarısına yoğunleştirmek için taze YNB ekleyin. 24 kuyu polistiren plakanın her kuyuya bir mililitre inokül ekleyin. 37 derecede 90 dakika boyunca aerobik olarak kuluçkaya yatırın ve hücrenin kuyuların dibine yapışmasını bekleyin.Pozitif kontrol biyofilmleri için biyofilmleri bir mililitre %0.12 klorheksidin ile bir dakika tedavi edin. Negatif kontrol için, bir dakika boyunca biyofilmleri bir mililitre steril, %0.89 sodyum klorür ile tedavi edin. Daha sonra, yapışık olmayan hücreleri kaldırmak için steril 0,89% sodyum klorür bir mililitre ile, iki kez, bir dakika her kuyuyı yıkayın.Daha sonra tutarlı olmayan bir kırmızı ışığı açın ve ışığın güç yoğunluğunu ölçmek için bir güç ölçer kullanın. Santimetre kare başına 87,6 joule enerji yoğunluğu gereksinimine göre pozlama süresini belirleyin. Plakayı kırmızı ışığın altına yerleştirin.Numunenin ısınmasını önlemek için ışık kaynağı ile biyofilm arasındaki mesafeyi beş mililitreye kadar tutun. Bir dakika maruz kaldıktan sonra, her kuyuya bir mililitre sterilize RPMI ortamı ekleyin ve tabakları gece boyunca 37 derecede kuluçkaya yatırın. Sabahları, rpmi orta ile altı saat boyunca aynı yıkama, ışık tedavisi, pozitif ve negatif kontrol tedavileri ve kuluçka tekrarlayın.Yine, biyofilmleri iki kez yıkayın, kırmızı ışığa maruz kınıyor ve pozitif ve negatif kontrol uygulamaları yapın. Kuyularda çözelti aspire ve RPMI orta ekleyin. 48 saatlik biyofilm gelişimine ulaşana kadar kuluçka, yıkama, ışık tedavisi ve pozitif ve negatif kontrol tedavilerini tekrarlayın.Işleme başlamak için, orta atın ve steril bir mililitre ekleyin, kuyuya% 0.89 sodyum klorür, ve kuyudan biyofilm çizik için bir pipet ucu kullanın. Çıkarılan biyofilmi steril bir tüpe aktarın. Bir mililitre steril, %0.89 sodyum klorür daha ilave edin.Tekrar çizin ve aynı tüp için süspansiyon ekleyin, 2 mililitre toplam hacmi için. Bir dakika lığına biyofilm süspansiyonuna şiddetle girdap. CFU analizi için, biyofilm süspansiyonundan her seyreltme için %0,89 sodyum klorür çözeltisi içeren 900 mikrolitrelik bir mikro santrifüj tüpüne 0,1 mililitrelik bir aliquot aktarın.Biyofilm çözeltisini 10'dan negatif e, 10'dan negatif dörde, tuzlu çözeltide seyreltin. SDA plakaları için her seyreltme 50 mikrolitre tohum ve 48 saat boyunca 37 santigrat derece plakalar kuluçka. Kolonileri say ve formülü uygulayın.Kuru ağırlık analizi için, ilk tartmak ve etiket mikro santrifüj tüpler. Tüplere 0,1 mililitre biyofilm süspansiyonu ve bir mililitre mutlak etanol ekleyin ve 18 saat boyunca negatif 20 santigrat derecede saklayın. Sonra, 10 dakika için 10,000 kez G santrifüj.Supernatant atın ve bir hafta boyunca örnekleri kurutmak için bir kurutucu tüpler yerleştirin. Mikro santrifüj tüplerini tekrar tartın ve biyokütle ağırlığını elde etmek için çıkarma yapın. Bu deneyde, Candida albicans biyofilmbir dakika için kırmızı ışık ile diem tedaviler başına sonra, CFU sodyum klorür ile tedavi negatif kontrol ile karşılaştırıldığında, azaltıldı.Candida albicans biyokütlesinin günlük tedaviler sonrası elde edilen sonuçları, kırmızı ışıktedavi edilen grubun klorheksidin ile tedavi edilen pozitif kontrol grubunda gözlenen biyokütlede benzer bir azalma gösterdiğini göstermektedir. İki grup da birbiriyle istatistiksel benzerlik gösterdi. Her ikisi de biyokütle azalma gösterdi iken, sodyum klorür ile tedavi negatif kontrol ile karşılaştırıldığında.Düşük miktarda Candida albicans çözünür ve çözünmez EPS, pozitif kontrol gözlendi, negatif kontrol ile karşılaştırıldığında. İstatistiksel olarak anlamlı olmasa da, kırmızı ışığın diem uygulaması başına eps çözünür ve EPS çözünmez miktarlarını sayısal olarak azalttı. Negatif kontrol ve kırmızı ışık tedavi grubu, istatistiksel benzerlik gösterdi.Uygulamanın tam sürelerini belirlemek için tedaviye başlamadan önce bir güç ölçer kullanarak ışığın güç yoğunluğunu ölçmek. Bu adımlar, enerji yoğunluğunun her zaman santimetre karesi olan 87,6 joule olmasını garanti ediyor. Daha önce atıfta bulunulan formülü kullanın.Ölçüm, ışıktan plakaşişesine kadar beş milimetre lik bir ölçüm le yapılır. Fototerapi ve antifungal ilaçlar arasındaki bir ilişki kırmızı ışık ile ön tedavi, ilaç uygulaması takip kontrol etmek için incelenebilir, biyofilm içine ilaç penetrasyonu artırır. Günde iki kez tedavi için, kırmızı ışık tedavisinden sonra canlılık, kuru ağırlık ve hücre dışı polisakkarit miktarları ile ilgili cevaplar veren kolay ve tekrarlanabilir biyofilm modeli sağlayarak laboratuvarımızın protokollerini uyarladık.Protokol geneldir ve kırmızı ışığa ek olarak, ilaçlar, diğer ışıklar veya ışık ve ilaçların kombinasyonu da dahil olmak üzere diğer tedavileri test etmek için kullanılabilir. Mikroorganizmalarla çalışmak için güvenlik gözlükleri, düğme laboratuvar önlüğü ve nitro eldivenler gibi özel ekipmanlar gerekmektedir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

İzleme Oluşumu ve Antifungal Duyarlılık Testi için 96 Şey microtiter Levha tabanlı Yöntemi Candida albicans Biyofilmler

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt;: Arası Ana aracılı Etkileşim Modeli<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ve<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Işık tarafa: In Vivo izleme bir diyabetik tüysüz fare modelinde kronik yaralarda Pseudomonas aeruginosa biyofilm enfeksiyonların

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Görselleştirme bir otomatik mikrosıvısal aygıtı kullanarak Candida albicans biyofilm oluşumu

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Derin Dermal enjeksiyon olarak bir Model Candida albicans deri enfeksiyonu histolojik analizler için

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Situ Hibridizasyonfloresan Kullanarak Murine Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Görselleştirilmesi

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Aydınlatma ve Görüntüleme Candida albicans Biyofilmler

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Candida albicans'ı İnhibe Etmek için Gül Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Bir Memeli Konağında Aktif Enfeksiyon Sırasında Candida albicans Mutant Suşlarında Morfogenez Fenotiplerini Taramak için In Vivo Görüntülemenin Kullanımı

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...