Name: a strategy to identify compounds that affect cell growth and survival in cultured mammalian cells at low-to-moderate throughput
Uploaded: 2019-09-22T13:00:00
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この研究は、NINDS内部壁画研究プログラムによって支援されました。

1. NSC文化
注:ヒトNSCラインの操作は以下に説明しますが、このプロトコルには任意のセルラインを使用できます。すべての細胞培養作業は、生物学的安全キャビネットで行われる。
<ol><li>96ウェルプレートに地下膜/細胞外マトリックス(ECM)を塗ります。<ol>
<li>氷上にNSCの取り付けを容易にするECM(材料の表)のアリコートを解凍します。ECMを10mL塩基媒体(?...

<ol>
	<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Toxicity Testing in the 21st century: A Vision and a Strategy. , (2007).</li><li>Llorens, J., Li, A. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellProfiler:+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes.">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biology. 7 (10), 100 (2006).</li><li>Cerbini, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activator-like+effector+nuclease+(TALEN)-mediated+CLYBL+targeting+enables+enhanced+transgene+expression+and+one-step+generation+of+dual+reporter+human+induced+pluriopotent+stem+cell+(iPSC)+and+neural+stem+cell+(NSC)+lines.">Transcription activator-like effector nuclease (TALEN)-mediated CLYBL targeting enables enhanced transgene expression and one-step generation of dual reporter human induced pluriopotent stem cell (iPSC) and neural stem cell (NSC) lines.</a> PLoS One. 10 (1), 0116032 (2015).</li><li>Lundholt, B. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+the+MTT+assay+to+human+prostate+cancer+cell+lines+in+vitro:+establishment+of+test+conditions+and+assessment+of+hormone-stimulated+growth+and+drug-induced+cytostatic+and+cytotoxic+effects.">Application of the MTT assay to human prostate cancer cell lines in vitro: establishment of test conditions and assessment of hormone-stimulated growth and drug-induced cytostatic and cytotoxic effects.</a> Prostate. 12 (1), 99-110 (1988).</li><li>Jo, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unreliability+of+MTT+assay+in+the+cytotoxic+test+of+primary+cultured+glioblastoma+cells.">The unreliability of MTT assay in the cytotoxic test of primary cultured glioblastoma cells.</a> Experimental Neurobiology. 24 (3), 235-245 (2015).</li><li>Kalinina, M. A., Skvortsov, D. A., Rubtsova, M. P., Komarova, E. S., Dontsova, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+test+based+on+human+cells+labeled+with+fluorescent+proteins:+photography,+and+scanning+for+high-throughput+assay.">Cytotoxicity test based on human cells labeled with fluorescent proteins: photography, and scanning for high-throughput assay.</a> Molecular Imaging and Biology. 20 (3), 368-377 (2018).</li></ol>

この記事の主な目的は、低スループットスクリーニングで細胞増殖に影響を与える化合物を効率的かつ安価に同定できる戦略を説明することでした。2つの直交技術を用いて、細胞数を評価して結論に対する信頼度を高め、1つのアッセイしか使用できない追加の洞察を提供しました。アッセイの1つは、tdTomato陽性細胞を直接カウントするために蛍光細胞イメージャーを使用し、2つ目は、MTTを?...

治療の可能性を有する化学化合物のために決定する必要がある最も重要な特性の一つは、動物細胞への毒性です。この特性は、薬物がより広範な研究のための良い候補であるかどうかを決定します.ほとんどの場合、毒性を最小限に抑えた化合物が求められますが、特定の細胞型を殺す能力を持つ化合物が、例えば抗腫瘍性薬物が関心を持つ状況があります。全動物は全身毒性を決定するための最良のモデルシステムですが、少数の化合物をテストする必要がある場合、関連するコストと労力は非常に高くなります。このような哺乳動物細胞培養は、一般に最も効率的な代替1、2として使用される。小~中スループットの薬物スクリーンは、細胞培養中に毒性を評価できる重要なモダリティである。これらの画面は、個々のシグナリング経路を対象とする注がれたライブラリを調知るために使用できます。このような画面の一般的な形式は、最初に探索的一次毒性スクリーンで単回用量(一般に10μM)でライブラリ内のすべての化合物をテストし、その後、毒性を完全に特徴付けるために詳細な二次用量応答スクリーンを実行することですプライマリ画面からのヒットのプロファイル。この戦略を実装する方法をここで説明し、有毒化合物を識別し、特徴付ける迅速で効率的かつ安価な方法を提供します。
哺乳動物細胞3,4における小さな化合物およびナノ材料の細胞毒性を評価するために、複数の方法が開発されている。特定の材料が誤解を招く結果を提供するアッセイと相互作用することができ、そのような相互作用は毒性スクリーン4からのヒットを特徴付けるときテストされるべきであることに留意すべきです。細胞毒性アッセイは、トリパンブルー排除5、乳酸脱水素酵素(LDH)放出アッセイ6、アラマーブルーアッセイ7、カルシエンアセトキシメチルエステル(AM)8、およびATPアッセイ9を含む。これらのアッセイはすべて、細胞数のプロキシとして機能することができる細胞代謝の様々な側面を測定します。いずれも3-(4,5-ジメチルチゾール-2-yl)-2,5-ジフェニルテルゾリウム臭化物(MTT)、2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニ)-2H-テトラゾリウム(塩-5-カルボニウム)などの塩系アッセイを提供しています。 4-(3-4-ヨウドフェニル]-2-[4-ニトロフェニル]-2H-5-テトラゾリオ)-1,3−ベンゼンジスルホン酸(WST-1)10、11は、低コストで良好な精度と使いやすさを提供します。このデモンストレーションで使用されるMTTは、ミトコンドリア還元酵素によって不溶性のフォルマザンに減少し、この変換の速度は細胞数と強く相関する。このアッセイは、小規模で、最大2,000化合物12のスクリーニングライブラリのために日常的に利用されています。標識マーカーによる細胞の直接カウントは、細胞数を評価する別の方法を提供し、MTTアッセイとは異なり、細胞増殖のダイナミクスに関する追加情報を提供することができます。いくつかの一般に利用可能なアルゴリズムは、自動セル数分析を実行するために利用可能であり、イメージングリーダー13、14のためのソフトウェアパッケージの一部である独自のアルゴリズムもあります。この方法の説明では、tdTomato15を構成的に発現するように遺伝的に編集されたヒト神経幹細胞(NSC)ラインは、MTTアッセイと自動細胞計数との間の細胞生存率の結果を比較するためのテストラインとして機能する。57のテスト化合物の毒性を評価するスクリーンでのアッセイ。この戦略の主な目的は、有毒化合物を同定し、特徴付けさせることでしたが、成長抑制および増殖増強化合物を潜在的に同定する追加の利点があり、したがって、薬物を同定するための効果的な方法を提供します細胞の成長を調節することができます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1292px;" width="1292">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">B-27 (50X)</td>
			<td style="width:237px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">17504001</td>
			<td style="width:720px;">Neural stem cell medium component.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BenchTop pipettor</td>
			<td style="width:237px;">Sorenson Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:119px;">73990</td>
			<td>Provides ability to pipette compound library into a 96-well plate in one shot.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BioLite 96 well multidish</td>
			<td style="width:237px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">130188</td>
			<td>Any 96 well cell culture plate will work.&#160; We use these in our work.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cell culture microscope</td>
			<td style="width:237px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">Eclipse TS100</td>
			<td>Visual inspection of cells to ensure proper density.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cytation 5/ Imaging reader</td>
			<td style="width:237px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;">CYT3MFV</td>
			<td>Used for cell imaging and absorbance readings.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:237px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">610420010</td>
			<td>Solvent for compounds used in screen. Dissolves MTT precipitates to facilitate absorbance measurements.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FGF-basic</td>
			<td style="width:237px;">Peprotech</td>
			<td style="width:119px;">100-18B</td>
			<td>Neural stem cell medium component.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">GelTrex</td>
			<td style="width:237px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A1413202</td>
			<td>Neural stem cell basement membrane matrix.&#160; Allows cells to attach to cell culture plates.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gen5 3.04</td>
			<td style="width:237px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Analysis software to determine cell counts for tdTomato expressing cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glutamine</td>
			<td style="width:237px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">25030081</td>
			<td>Neural stem cell medium component.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microtest U-Bottom</td>
			<td style="width:237px;">Becton Dickinson</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3077</td>
			<td>Storage of compound libraries.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MTT</td>
			<td style="width:237px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">M6494</td>
			<td>Active assay reagent to determine cellular viability.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Multichannel pippette</td>
			<td style="width:237px;">Rainin</td>
			<td style="width:119px;">E8-1200</td>
			<td>Column-by-column addition of cell culture medium, MTT, or DMSO.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Neurobasal medium</td>
			<td style="width:237px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">21103049</td>
			<td>Neural stem cell base medium.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RFP filter cube</td>
			<td style="width:237px;">BioTek</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1225103</td>
			<td>Filter in Cytation 5 used to image tdTomato expressing cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">TrypLE</td>
			<td style="width:237px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">12605036</td>
			<td>Cell dissociation reagent.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a strategy to identify compounds that affect cell growth and survival in cultured mammalian cells at low-to-moderate throughput

細胞毒性は、治療上の利点を有する可能性のある薬物を研究する際に定量化する必要がある重要なパラメータです。このため、多くの薬物スクリーニングアッセイは、個々の化合物に対してプロファイリングされる重要な特性の1つとして細胞毒性を利用する。培養中の細胞は、より高価で労働集約的な動物モデルで有望な鉛化合物のフォローアップを進める前に細胞毒性を評価するのに有用なモデルです。ヒト神経幹細胞(NSC)ラインを発現するtdTomatoの細胞増殖に影響を与える化合物を同定する戦略について述べた。この戦略では、2 つの相補的なアッセイを使用して細胞数を評価します。1つのアッセイは、3-(4,5-ジメチルチゾル-2-yl)-2,5-ジフェニルテルゾルム臭化物(MTT)の還元を介して働き、細胞数のプロキシとして形成し、もう一方はNSCを発現するtdTomatoを直接カウントする。2つのアッセイは単一の実験で同時に行うことができ、労働集約的で、急速で、安価ではない。このデモンストレーションで説明した戦略は、96ウェルプレート形式で毒性のための探索的一次スクリーンで57の化合物をテストしました。3つのヒットは、プライマリ画面と同じアッセイ設定を用いた6点線量応答でさらに特徴付けられた。毒性に対して優れた腐食を提供することに加えて、2つのアッセイからの結果の比較は、細胞増殖の他の側面に影響を与える化合物を同定するのに有効である可能性がある。

自動化された細胞数データは、DMSO制御に正規化された場合、25%未満の生存率を有する11の化合物を同定し、MTTデータはこれらの同じ化合物に加えて2つの追加化合物を同定した(表1および表2、赤色のシェーディング)。MTTアッセイ(ウェルF3およびG10)でのみ有毒であることが判明した2つの化合物は、それぞれ31%および39%であり、対照およびランク順としてのtdTomato陽性細...

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A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

多くの場合、培養細胞上の化合物のセットの潜在的な細胞毒性を評価する必要があります。ここでは、96ウェル形式で有毒化合物を確実にスクリーニングする戦略について説明する。

低から中程度のスループットで培養哺乳動物細胞の細胞増殖と生存に影響を与える化合物を同定する戦略

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

このプロトコルは、細胞増殖に及ぼす影響について、2つのアッセイを同時に使用して数百の化合物をスクリーニングするための迅速かつ効率的な戦略を提供します。アッセイは、特定の化合物が細胞毒性であるか、細胞増殖を阻害するか、または細胞増殖を増強するかに関する情報を提供することができます。2つのアッセイを併用することで、精度を高め、細胞毒性化合物を同定することができます。2つのアッセイの結果が発散する場合、この戦略は、他の手段でさらに調べることができる細胞機能に対するユニークな効果を有する化合物を同定することを可能にする可能性がある。この戦略の主な利点は、迅速で、安価で、非労働集約的であるということです。一度習得すると、研究者は簡単に1週間で最大200化合物の一次スクリーンを実行し、別の週に10〜15化合物に網羅的な用量応答曲線を実行することができます。この手順を実証することは、私と研究室のスタッフ科学者でポストバカロレアフェローのロヒニ・マニカムです。まず、生物学的安全キャビネットにおいて、T75フラスコ内の培養細胞は、アッセイを開始する際に少なくとも80%コンフルエントとなるようにNSC培地を有する。そして、フラスコを摂氏37度と5%の二酸化炭素に設定した細胞培養インキュベーターに入れる。細胞が80%合流したら、インキュベーターからフラスコを取り出し、NSC培地を吸引する。細胞解離試薬を3ミリリットル加え、インキュベーターで5分間インキュベートします。インキュベーション後、七ミリリットルのNSC培地をフラスコに加え、ピペットを精力的に加えて、すべての細胞が剥離されるようにします。解約した細胞溶液を15ミリリットルチューブに移し、遠心分離機をGの200倍で5分間移動する。チューブから上清を取り除き、細胞を10ミリリットルのNSC培地で再懸濁します。細胞を数えるために自動細胞カウンターまたはヘモサイトメーターを使用し、1ミリリットル当たり200,000細胞に細胞の濃度を変更するためにチューブにNSC培地を追加します。次いで、8チャンネルマルチチャネルピペットの8スロットのうち6個を使用して、細胞外マトリックスによってコーティングされた3つの96ウェルプレートの60の内部ウェルにカラムによって細胞混合物カラムの100マイクロリットルをプレートする。細胞を含む最も外側のウェルからの蒸発を最小限に抑えるために、細胞のないすべてのウェルに塩基媒またはNSC培地の100マイクロリットルを加える。細胞培養顕微鏡の下で、3つの96ウェルプレートのそれぞれに少なくとも10個の井戸を視覚的に検査し、細胞が予想される密度に着席していることを確認する。摂氏37度と二酸化炭素5%でインキュベートする。分割後16~24時間後に培養器から細胞培養プレートを取り出し、8つのマルチウェルピペットを用いてカラムでNSC培地カラムを吸引し、8つのマルチウェルスロットのうち6つだけを使用する。3つの複製プレートの各ウェルに95マイクロリットルの新鮮なNSC培地を加え、プレートをインキュベーターに戻します。8チャンネルマルチウェルピペットを使用して、49マイクロリットルのNSC培地を空のU底、Vボトム、またはラウンドボトム96ウェルプレートの内部60ウェルに追加します。準備したマスターコンパウンドプレートをアンシールします。マスタープレートから各々の内部60ウェルにNSC培地を含む化合物の1マイクロリットルをピペットし、希釈した化合物をベンチトップピペットと3回混合する。次に、インキュベーターからNSCの3つの96ウェルプレートを取り除き、希釈した化合物の5マイクロリットルを細胞を含む3つのプレートの各ウェルに分配し、DMSO濃度0.1%の化合物を含む10マイクロモルの最終化合物濃度に対して1〜1000希釈を生じ、シトー毒性アッセイを進めます。用量応答アッセイを行うために、96ウェルを設定する。6つのDMSO制御複製に2列目を使用し、10マイクロモルの高用量から始めて6回の用量で、2倍の連続希釈で最大3つの異なる化合物の三重化をテストする。DMSOで4マイクロリットルのDMSOまたは試験化合物を0.5または1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離管で196マイクロリットルのNSC培地に希釈します。希釈したDMSOの25マイクロリットルを加えて井戸をコントロールし、希釈した試験化合物を50マイクロリットルの希釈した試験化合物を対応するウェルに加えます。96ウェルプレートの内部部分に残りの空の井戸にNSC培地のピペット25マイクロリットル。マルチチャネルピペットを使用して、化合物25マイクロリットルを10マイクロモルウェルから5マイクロモルウェルに移し、少なくとも5回混合する。ピペットの先端を交換し、残りの行を混合して、化合物のそれぞれについて合計6回の用量で2倍希釈液で三重化を生成することによってプロセスを繰り返します。各希釈液の5マイクロリットルを、試験中の培養細胞を持つ新しいプレートに移します。プレートをインキュベーターに摂氏37度、二酸化炭素5%に置きます。細胞を72時間インキュベートした後、インキュベーターからプレートを取り出し、プレートリーダーの中に置きます。イメージャー ソフトウェアを開いて、スタディ用のプロトコルファイルと実験ファイルを設定します。タスク マネージャで Imager 手動モードに移動し、[今すぐキャプチャ] をクリックします。容器のタイプとして96の井戸の版を選びなさい。倍率として10回、tdTomatoをイメージングする場合は赤色蛍光タンパク質531および593を選択します。井戸をクリックしてください。次に、[オートフォーカス]をクリックして画像をフォーカスし、適切な露出時間を自動公開します。必要に応じて、手動でフォーカスと露出を調整します。カメラアイコンをクリックして、画像をキャプチャします。次に、プロトコルの構築を続行するには、上の画像の [分析の処理] をクリックします。をクリックし、[解析]タブを選択します。画像の右側にある [分析の追加] ステップで [セルラー分析] をクリックし、[開始] をクリックします。画像は、個々のセルを示すハイライトされたセルを示しています。[オプション]をクリックすると、蛍光閾値または細胞サイズに基づいてセルをより適切に選択するためのパラメータが変更されます。イメージャーがセルを正しくカウントしている場合は、画面下部の[ステップの追加]をクリックします。画面の上部にあるアイコンをクリックして、イメージセットから実験を作成します。開いているウィンドウで、[プロトコル] タブの [プロシージャ] をクリックします。次に、開いた新しいウィンドウで[読み取り]を選択します。[完全プレート] をクリックして、セルを含む 60 個のウェルのみを選択します。[OK] をクリックして変更を保存します。次に、「手順」ウィンドウで「OK」をクリックします。再生アイコンをクリックして、プレートを実行します。プロンプトでファイルを保存し、プレートのロードのプロンプトで[OK]をクリックします。イメージングが完了したら、セルカウントデータをイメージャーソフトウェアプログラムから分析用のスプレッドシートにダウンロードします。tdTomatoイメージングを完了してから2時間以内に、MTTアッセイを開始します。MTTの25ミリグラムを計量し、1ミリリットルMTTストック溶液あたり5ミリグラムを作るためにNSC培地の5ミリリットルでそれを再中断します。MTTの目に見える沈殿物がなくなるまで、溶液を数分間渦液。培養器から細胞培養プレートを取り出し、細胞培養培地から吸引する。新鮮なNSC培地で1〜10までMTTを希釈し、希釈したMTTの100マイクロリットルを細胞の各ウェルに加えます。37°Cで細胞を2時間インキュベートします。紫色の沈殿物は、ウェル内の細胞の数にほぼ比例して見える。プレートからMTT溶液を吸引し、各ウェルに100%DMSOの50マイクロリットルを加えます。プレートを400RPMで10分間室温のシェーカーに置きます。その後、プレートをプレートリーダーに移します。595ナノメートルのプリセット波長で各ウェルの吸光度を読み取り、データを分析用にスプレッドシートにエクスポートし、細胞数データとまったく同じものを分析します。tdTomato蛍光画像の検査では、MTTと細胞数アッセイの間の毒性に対する2つのウェルが不一致である事が明らかになった。1つの井戸について、細胞数データは毒性がないことを示唆した。しかし、MTTデータはそうでした。もう一つの井戸は、tdTomatoカウントに対してMTTによって細胞数を過大評価し、より大きな細胞を有するように見えたのに対し、MTTがtdTomatoに対して細胞数を過小評価している井戸では、細胞は小さく見えた。要約すると、tdTomatoアッセイは11化合物を毒性、11化合物を増殖抑制剤、成長増強として1つを分類し、34は細胞増殖に明らかな影響を及ぼさない。MTTアッセイは、13の化合物を有毒、2つを増殖抑制剤、1つを増殖促進として分類し、41は細胞増殖に明らかな影響を及ぼさない。化合物WP1066の生存細胞のグラフは、4つの最低濃度の毒性のない比較的平坦な曲線を示す。曲線は5マイクロモル線で急速に低下し、10マイクロモルでほぼ完全な毒性に低下し、tdTomatoアッセイとMTTアッセイの致死量50と4.4および6.0マイクロモルに至る。化合物が用量応答画面で適切に希釈され、正しい用量応答曲線が生成されるようにすることが重要です。細胞増殖に影響を与えるためにこの手順によって同定された化合物は、細胞増殖を制御する潜在的に新しいシグナル伝達経路を同定する機能的アッセイによってさらに特徴付けることができる。神経幹細胞に対して毒性のある化合物は、神経膠芽腫や神経芽細胞腫などの脳癌の潜在的な治療薬としてテストされています。哺乳類の細胞、DMSO、MTTを扱う際には、常に手袋とラボコートを着用してください。お客様の機関の化学物質廃棄物ガイドラインに従ってDMSOとMTTを廃棄してください。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

ミトコンドリアの分離と培養細胞におけるミトコンドリアのカルシウム流入の解析

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

散逸の Microgravimetry 結合タンパク質アネキシン A2 への水晶振動子を用いた固相担脂質膜リン脂質の結合動態を研究するには

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

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C.エレガンス体壁筋肉における生体内カルシウムイメージング

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

Atomic Absorbance Spectroscopy to Measure Intracellular Zinc Pools in Mammalian Cells

哺乳類細胞内の細胞内亜鉛プールを測定するための原子吸光度分光法

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Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

時間分解タンパク質誘導蛍光強化を利用して、一度に1つのαシヌクレインモノマーの安定した局所構造を同定する

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

DNAメチルトランスフェラーゼ阻害剤をスクリーニングするための連続蛍光ベースのエンドヌクレアーゼ共役DNAメチル化アッセイ(英語)

DNA methylation, a form of epigenetic gene regulation, is important for normal cellular function. In cells, proteins called DNA methyltransferases (DNMTs) ...

A Mass Spectrometry-Based Approach to Identify Phosphoprotein Phosphatases and their Interactors

リンタンパク質ホスファターゼとそのインターアクターを同定するための質量分析ベースのアプローチ

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Reconstitution of Septin Assembly at Membranes to Study Biophysical Properties and Functions

生物物理学的特性と機能を研究するための膜でのセプチンアセンブリの再構成

Most cells can sense and change their shape to carry out fundamental cell processes. In many eukaryotes, the septin cytoskeleton is an integral component ...

High-Throughput Screening for Protein Crystallization

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography (Video) | JoVE 

タンパク質結晶構造解析のためのクリスタルヒットを得るためのハイスループットスクリーニング(英語)

X-ray crystallography is the most commonly employed technique to discern macromolecular structures, but the crucial step of crystallizing a protein into ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

ミトコンドリアDNA合成と分布のハイスループット画像ベースの定量

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...