Name: an oncogenic hepatocyte-induced orthotopic mouse model of hepatocellular cancer arising in the setting of hepatic inflammation and fibrosis
Uploaded: 2019-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי NIH/NCI R01 CA164335-01A1 (K. F. סטיילי-או'קארול, PI) ו-NIH/NCI R01CA208396 (מארק Kester, Guangfu לי, קווין פ. סטיילי-או'קרול).

הערה: כל ההליכים כולל נושאי בעלי חיים אושרו על ידי IACUC באוניברסיטת מיזורי. כל העכברים קיבלו טיפול הומאני על פי הקריטריונים המתוארים ב"מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה". יש לבצע את ההליך הבא עבור בידוד תאים וחיסונים במכסה ברדס. כל המבצעים צריכים ללבוש את ציוד ההגנה האישי הסטנדרטי לטיפול בעכב?...

<ol>
	<li>O'Connor, S., Ward, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocellular+carcinoma+-+United+States.">Hepatocellular carcinoma - United States.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 517-520 (2010).</li><li>Petrick, J., Kelly, S., Altekruse, S., McGlynn, K., Rosenberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Future+of+Hepatocellular+Carcinoma+Incidence+in+the+United+States+Forecast+Through+2030.">Future of Hepatocellular Carcinoma Incidence in the United States Forecast Through 2030.</a> Journal of clinical oncology: official journal of the American Society of Clinical Oncology. 34, 1787-1794 (2016).</li><li>Greten, T., Lai, C., Li, G., Staveley-O'Carroll, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+and+Immune-based+Therapies+for+Hepatocellular+Carcinoma.">Targeted and Immune-based Therapies for Hepatocellular Carcinoma.</a> Gastroenterology. 156, 510-524 (2019).</li><li>Llovet, J., Zucman-Rossi, J., Pikarsky, E., Sangro, B., Schwartz, M., Sherman, M., Gores, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocellular+Carcinoma.">Hepatocellular Carcinoma.</a> Nature reviews. Disease primers. 2, 16018 (2016).</li><li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+medicine+for+hepatocellular+carcinoma:+driver+mutations+and+targeted+therapy.">Precision medicine for hepatocellular carcinoma: driver mutations and targeted therapy.</a> Oncotarget. 8, 55715-55730 (2017).</li><li>Colombo, M., Maisonneuve, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+liver+cancer+mortality+on+a+global+scale:+still+a+long+way+to+go.">Controlling liver cancer mortality on a global scale: still a long way to go.</a> Journal of Hepatology. 67, 216-217 (2017).</li><li>Llovet, J., Burroughs, A., Bruix, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocellular+carcinoma.">Hepatocellular carcinoma.</a> Lancet. 362, 1907-1917 (2003).</li><li>Parkin, D., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+world+cancer+burden:+Globocan+2000.">Estimating the world cancer burden: Globocan 2000.</a> International Journal of Cancer. 94, 153-156 (2001).</li><li>Thomas, M., Zhu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepocellular+carcinoma:+the+need+for+progress.">Hepocellular carcinoma: the need for progress.</a> Journal of Clinical Oncology. 23, 2892-2899 (2005).</li><li>Llovet, J., Bruix, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+targeted+therapies+in+hepatocellular+carcinoma.">Molecular targeted therapies in hepatocellular carcinoma.</a> Hepatology. 48, 1312-1327 (2008).</li><li>Bruix, J., Sherman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+hepatocellular+carcinoma:+an+update.">Management of hepatocellular carcinoma: an update.</a> Hepatology. 53, 1020-1022 (2011).</li><li>Pang, T., Lam, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+management+of+hepatocellular+carcinoma.">Surgical management of hepatocellular carcinoma.</a> World Journal of Hepatology. 7, 245-252 (2015).</li><li>Llovet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+endpoints+of+clinical+trials+in+hepatocellular+carcinoma.">Design and endpoints of clinical trials in hepatocellular carcinoma.</a> Journal of the National Cancer Institution. 100, 698-711 (2008).</li><li>Mueller, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunology+and+immunotherapy.+Realizing+the+promise.+Introduction.">Cancer immunology and immunotherapy. Realizing the promise. Introduction.</a> Science. 348, 54-55 (2015).</li><li>Gajewski, T., Schreiber, H., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+and+adaptive+immune+cells+in+the+tumor+microenvironment.">Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment.</a> Nature Immunology. 14, 1014-1022 (2013).</li><li>Ribas, A., Wolchok, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+cancer+immunotherapy+and+targeted+therapy.">Combining cancer immunotherapy and targeted therapy.</a> Current Opinion in Immunology. 25, 291-296 (2013).</li><li>Postow, M., Callahan, M., Wolchok, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+checkpoint+blockade+in+cancer+therapy.">Immune checkpoint blockade in cancer therapy.</a> Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 33, 1974-1982 (2015).</li><li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VISTA+is+an+inhibitory+immune+checkpoint+that+is+increased+in+ipilimumab+therapy+in+patients+with+prostate+cancer.">VISTA is an inhibitory immune checkpoint that is increased in ipilimumab therapy in patients with prostate cancer.</a> Nature Medicine. 23, 551-555 (2017).</li><li>Hahn, A., Gill, D., Pal, S., Agarwal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+immune+checkpoint+cancer+therapy+after+PD-1+and+CTLA-4.">The future of immune checkpoint cancer therapy after PD-1 and CTLA-4.</a> Immunotherapy. 9, 681-692 (2017).</li><li>Remon, J., Besse, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+checkpoint+inhibitors+in+first-line+therapy+of+advanced+non-small+cell+lung+cancer.">Immune checkpoint inhibitors in first-line therapy of advanced non-small cell lung cancer.</a> Current Opinion in Oncology. 29, 97-104 (2017).</li><li>Kudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+checkpoint+blockade+in+hepatocellular+carcinoma:+2017+update.">Immune checkpoint blockade in hepatocellular carcinoma: 2017 update.</a> Liver Cancer. 6, 1-12 (2017).</li><li>Kudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+checkpoint+inhibition+in+hepatocellular+carcinoma:+Basics+and+ongoing+clinical+trials.">Immune checkpoint inhibition in hepatocellular carcinoma: Basics and ongoing clinical trials.</a> Oncology. 92, 50-62 (2017).</li><li>Breous, E., Thimme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+of+immunotherapy+for+hepatocellular+carcinoma.">Potential of immunotherapy for hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Hepatology. 54, 830-834 (2011).</li><li>Sprinzl, M., Galle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facing+the+dawn+of+immunotherapy+for+hepatocellular+carcinoma.">Facing the dawn of immunotherapy for hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Hepatology. 59, 9-10 (2013).</li><li>Liu, D., Staveley-O'Carroll, K., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-based+therapy+clinical+trials+in+hepatocellular+carcinoma.">Immune-based therapy clinical trials in hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Clinical Cell Immunology. 6, 376 (2015).</li><li>Greten, T., Wang, X., Korangy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+of+immune+based+treatments+for+patients+with+HCC:+from+basic+science+to+novel+treatment+approaches.">Current concepts of immune based treatments for patients with HCC: from basic science to novel treatment approaches.</a> Gut. 64, 842-848 (2015).</li><li>Koster, B., de Gruijl, T., van den Eertwegh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+and+future+challenges+in+immune+checkpoint+inhibitory+cancer+treatment.">Recent developments and future challenges in immune checkpoint inhibitory cancer treatment.</a> Current Opinion in Oncology. 27, 482-488 (2015).</li><li>Johnson, D., Sullivan, R., Menzies, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+checkpoint+inhibitors+in+challenging+populations.">Immune checkpoint inhibitors in challenging populations.</a> Cancer. 123, 1904-1911 (2017).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+cell+death-1+(PD-1)+checkpoint+blockade+in+combination+with+an+mTOR+inhibitor+restrains+hepatocellular+carcinoma+growth+induced+by+hepatoma+cell-intrinsic+PD-1.">Programmed cell death-1 (PD-1) checkpoint blockade in combination with an mTOR inhibitor restrains hepatocellular carcinoma growth induced by hepatoma cell-intrinsic PD-1.</a> Hepatology. 66, 1920-1933 (2017).</li><li>Heindryckx, F., Colle, I., van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research.">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li><li>Qi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+inCVAX,+in+situ+cancer+vaccine,+and+its+immune+response+in+mice+with+hepatocellular+cancer.">Development of inCVAX, in situ cancer vaccine, and its immune response in mice with hepatocellular cancer.</a> Journal of Clinical and Cellular Immunology. 7, 438 (2016).</li><li>Qi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+radiofrequency+ablation+platform+in+a+clinically+relevant+murine+model+of+hepatocellular+cancer.">Development of a radiofrequency ablation platform in a clinically relevant murine model of hepatocellular cancer.</a> Cancer Biology and Therapy. 16, 1812-1819 (2015).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sunitinib+represses+regulatory+T+cells+to+overcome+immunotolerance+in+a+murine+model+of+hepatocellular+cancer.">Sunitinib represses regulatory T cells to overcome immunotolerance in a murine model of hepatocellular cancer.</a> Oncoimmunology. 7, 1372079 (2017).</li><li>Staveley-O'Carroll, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+ligation+of+CD40+enhances+priming+against+the+endogenous+tumor+antigen+and+promotes+CD8++T+cell+effector+function+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice.">In vivo ligation of CD40 enhances priming against the endogenous tumor antigen and promotes CD8+ T cell effector function in SV40 T antigen transgenic mice.</a> Journal of Immunology. 171, 697-707 (2003).</li><li>Avella, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regression+of+established+hepatocellular+carcinoma+is+induced+by+chemoimmunotherapy+in+an+orthotopic+murine+model.">Regression of established hepatocellular carcinoma is induced by chemoimmunotherapy in an orthotopic murine model.</a> Hepatology. 55, 141-152 (2012).</li><li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+chemoimmunotherapy+against+hepatocellular+cancer+in+a+novel+murine+model.">Successful chemoimmunotherapy against hepatocellular cancer in a novel murine model.</a> Journal of Hepatology. 66, 75-85 (2017).</li><li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoliposome+C6-ceramide+increases+the+anti-tumor+immune+response+and+slows+growth+of+liver+tumors+in+ice.">Nanoliposome C6-ceramide increases the anti-tumor immune response and slows growth of liver tumors in ice.</a> Gastroenterology. 154, 1024-1036 (2018).</li><li>Held, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+antigen+expression+and+tumorigenesis+in+transgenic+mice+containing+a+mouse+major+urinary+protein/SV40+T+antigen+hybrid+gene.">T antigen expression and tumorigenesis in transgenic mice containing a mouse major urinary protein/SV40 T antigen hybrid gene.</a> EMBO Journal. 8, 183-191 (1989).</li><li>Hanahan, D., Weinber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li></ol>

עם פרוטוקול זה, הקמנו מודל מורטין אמין ומהימן של HCC כי מחקה את האדם החניכה של HCC והתקדמות. קלינית, גורמי סיכון רבים לגרום לפציעה בכבד, הכבד פיברוזיס, שחמת והשלב הסופי של HCC. בפרוטוקול שלנו, הזרקת IP של CCl4 משמש לייצר הראשון פיברוזיס של הכבד בעכברים סוג פראי, אשר מאפשר הhepatocytes הבאים ליצור את ...

סרטן hepatocellular (HCC) הוא הסוג הגדל ביותר במהירות של סרטן בארצות הברית (ארה ב)1,2,3. בכל שנה, כ 850,000 מקרים חדשים מאובחנים4,5 ו 700,000 חולים מתים ממחלה קטלנית זו6,7,8,9,10 , מה שהופך אותו לגורם השני בגובהו של מוות הקשור לסרטן ברחבי העולם. הניהול של HCC כולל כריתת כירורגית, השתלת, אבלציה, chemoembolization, או טיפולים מערכתית, כגון sorafenib11. אבחון וניהול מוקדם עם כריתה כירורגית או השתלת יש יתרון ההישרדות הכולל הגבוה ביותר4. למרבה הצער, רוב המטופלים נוכחים בשלב מאוחר יותר ודורשים ניהול עם אבלציה, chemoembolization או sorafenib12. Sorafenib, קולטן טירופין קינאז מעכב (RTKI), אושרה על ידי מינהל המזון והתרופות בשנת 2008 כמו טיפול תרופתי מערכתית היחיד זמין לטיפול HCC מחדש. למרות התרופה רק מספק גידול צנוע בהישרדות הכללית, מ 7.9 עד 10.7 חודשים13, זה סיפק אסטרטגיה טיפולית חדשה שיכול להיות מנוצל כדי לנהל HCC.
שינוי מערכת החיסון כדי לחסל סרטן הוקמה היא שדה גדל במהירות במחקר סרטן14. מחקרים חיסוניים במחסום יש מתקדם במידה ניכרת פיתוח תרופות חיסוני טיפול בסרטן15,16. ה-FDA אישר את השימוש בנוגדנים (Abs) נגד אנטיגן T-לימפוציט לימפוציטים 4 (CTLA-4), מתוכנת חלבון מוות של תאים 1 (PD-1), ואת הליגוה PD-L1 לטיפול של מלנומה, סרטן ריאות, הראש והצוואר סרטן, וסרטן שלפוחית השתן17, מיכל בן 18 , מיכל בן 19 , 20. ניסויים קליניים של מונותרפיה או טיפול משולב באמצעות נוגדנים אחד או מספר נגד PD-1, pd-L1, או ctla-4 לטיפול HCC מתקדם מתמשך21,22,23, וכמה ניסויים הראו תוצאות חיוביות. ב 2017, ה-FDA העניק אישור מואץ עבור נוגדן anti-PD-1 לטיפול בחולים HCC, מי הם התנגדות sorafenib, אבל את קצב התגובה הכולל של טיפול זה הוא רק 14.3%. אסטרטגיות אחרות לא תורגמו לפרקטיקה קלינית בשלב זה24,25. להתגבר על עמידות החיסונית עמוקה מעמיק כדי לשפר את הטיפול במחסום החיסונית26; ניבוי היעילות של טיפול במחסום החיסון; מניעת תופעות לוואי הקשורות למערכת החיסונית; אופטימיזציה של תוואי האדמיניסטרציה, המינון והתדר; ומציאת שילובים יעילים של טיפולים27,28,29 כולם להישאר מאתגרת מאוד משימות.
ישנן מספר גישות קונבנציונליות המשמשות כדי לגרום HCC במודלים העכבר כיום והם מנוצלים בהתאם לשאלה הספציפית של החוקר מחקר30. כימית המושרה מודלים העכבר עם תרכובות גנוטוקסיל לחקות פציעה הנגרמת ממאירות. Xenograft מודלים דרך או השתלת חוץ רחמי או אורתוטופית של קווי תא HCC מתאימים הקרנת סמים. מספר עכברים ששונו גנטית ההונדסים לחקור את הפתופסולוגיה של HCC. עכברים טרנסגניים ביטוי גנים ויראליים, אונגנים ו/או גורמי גדילה מאפשרים זיהוי של מסלולים המעורבים hepatocarcinogenesis. בשל המגבלות הטמונות, מודלים אלה אינם מחדשים את מאפייני החיסון האופייני שנראו ב-HCC האנושי, אשר הייתה מוגבלת באופן משמעותי בהסבר למנגנון הבסיסי ולהתפתחות של אסטרטגיות חיסוני חדשניות14 ,15. לאחרונה יצרנו מודל מורטין רלוונטי קליני. זה מודל הרומן לא רק מחקה האדם התחלה HCC והתקדמות אלא גם משקף את התכונות הטיפוסיות ביותר של המחלה האנושית כולל תפקוד המערכת החיסונית. אנחנו האפיינו את המאפיינים. הביולוגיים והאימונולוגיים שלו מינוף זה מודל הרומן, יש לנו בחנו אסטרטגיות חיסוני שונות לטיפול HCC31,32,33,34,35,36, 37. הפלטפורמה הייחודית הזאת מאפשרת לנו ללמוד מנגנונים של עמידות חיסוני הנגרמת על ידי הגידול ולפתח אסטרטגיות טיפול הוכחה של HCC כלפי בסופו של דבר תרגום קליני.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:848px;" width="847">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Anesthesia machine</td>
			<td style="width:123px;">VETEQUIP</td>
			<td style="width:344px;">IMPAC6</td>
			<td style="width:167px;">anesthesia machine for surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Butterfly needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>8122963</td>
			<td>Needle used for liver perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C57BL/6 mice</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>000664&#160;</td>
			<td>mice used in prototol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td>CRESCENT CHEMICAL</td>
			<td>20402</td>
			<td>carprofen for pain release</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Strainer&#160;</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>REF 431751</td>
			<td>Cell strainer, 70&#181;m, for hepatocytes isolation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Allegra X-30R</td>
			<td>centrifuge for cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clips&#160;</td>
			<td>Teleflex Medical</td>
			<td>REF 523700</td>
			<td>Titanium Clips for spleen</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Primovert&#160;</td>
			<td>microscope for cell observation</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Mtd2 mice</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Gift from Dr. William A Held at roswell Park Cancer Institute in 2002, maintained in our lab</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 305109</td>
			<td>BD precisionglide needle, 27G x 1/2 (0.4mm x 13mm)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>J303H</td>
			<td>coated VICRYL suture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SV40 T Ag antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16879</td>
			<td>anti-SV40 T-antigen antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 309626</td>
			<td>1 mL TB syringe for cell injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T 8154</td>
			<td>Trypan blue solution for cell viability test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wound clips</td>
			<td>Reflex</td>
			<td>reflex9, Part. No. 201-1000</td>
			<td>stainless steel wound clips for wound close</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an oncogenic hepatocyte-induced orthotopic mouse model of hepatocellular cancer arising in the setting of hepatic inflammation and fibrosis

העדר של מודל קליני רלוונטי בעלי חיים התייחסות המאפיינים החיסוניים טיפוסי של סרטן hepatocellular (HCC) יש באופן משמעותי את ההסבר של המנגנונים הבסיסיים ופיתוח של אסטרטגיות חיסוני חדשני. כדי לפתח את המודל החי האידיאלי לחבר את HCC האדם, C57BL זכר המוסמכת/6J העכברים הראשון לקבל פחמן ארבלוריד (CCl4) הזרקה כדי לגרום פיברוזיס בכבד, ולאחר מכן לקבל היסטולוגית נורמלי הפגניים הפטציטים מגבר צעיר SV40 T אנטיגן (תג)-עכברים טרנסגניים (MTD2) על ידי הטחול (ISPL) החיסון. האנדרוגן שנוצר עכברים זכר הנמען בגיל ההתבגרות יוזם ביטוי תג תחת שליטה של מקדם ספציפי לכבד. כתוצאה מכך, hepatocytes הועברו להפוך לתאים סרטניים הגושים הגידול טופס בהגדרה של פיברוזיס בכבד/שחמת. מודל זה הרומן מחקה האדם החניכה HCC והתקדמות בהקשר של פיברוזיס הכבד/שחמת ומשקף את התכונות האופייניות ביותר של HCC האדם כולל תפקוד המערכת החיסונית.

הפטציטים אונגניים מבודדים מעכברים תגים-טרנסגניים (איור 2) נזרע בכבד של עכברים מסוג פראי על ידי הזרקה פנים-הטחול (איור 3). Hepatocytes המושתלים בהצלחה ובאמינות גדל אורתופאהנושא גידולים HCC (איור 4) עם הגידול אנטיגן ספציפי SV40 TAg (איור 5) בהגדרה של דלקת הכבד פיברוזיס ...

Watch this Scientific Journal Video about An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis at JoVE.com

An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded ...

באמצעות רק מודל לפתח מודל מסת סרטן hepatocellular יכול לעזור לאנשים להאיר את האימונוטוסובלנות הנגרמת על ידי הגידול שלהם טיפול ספציפי המושרה, כל immunoresponses הגידול. הגידול אורתוטופי המתפתח עם טכניקת פיברוזיס בכבד מחקה את התכונות הקליניות של סרטן הכבד האנושי. שיטה זו יכולה לספק כלי שימושי במחקר אימונולוגי סרטן hepatocellular.הדגמה חזותית של שיטה זו יכולה להמחיש את השלבים המאתגרים יותר מבחינה טכנית, כגון הזרקת ההזרקה ההיאטרספלנית, החיוניים לביצוע מוצלח של פרוטוקול זה. לאחר מכן, לרסן באופן ידני זכר, שישה עד שמונה שבועות C57 שחור 6 עכבר הגב בצד למעלה. השתמשו במדים חלופיים של 70%אתנול ובתדין כדי לנקות את אתר ההזרקה שלוש פעמים.לאחר מכן לספק 160 microliters של tetrachloride פחמן לעכבר על ידי הזרקה תוך-לידתית ולהחזיר את החיה לכלוב הבית שלה. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, בעכבר מהופנט 40 T אנטיגן בן חמישה חודשים, למקם את העכבר במצב supine ולאבטח את הגפיים עם סרט הדבקה. בצע חתך לפרוטומיה קו האמצע לאורך לינאה אלבה, גדול מספיק כדי לספק חשיפה נאותה של הכבד, ולעקור את המעיים שמאלה.לנתח מעל הכבד לחשיפה את הנבוב הנבוב הנחות. לגרום מלחצי עורקים כדי לצרף את הכלי. השתמש במחט פרפר כדי לקבל גישה תוך וריד לווריד הפורטל ולאבטח ידנית את הקטטר.בזהירות החלפת מזרקים עבור כל פתרון, בהצלחה לספק 15 מיליליטר של פתרון אחד, 15 מיליליטר של 0.75% פתרון קולגנס שתיים, ו 15 מיליליטר של פתרון שני ללא קולגן באמצעות קטטר, ב 8.9 מיליליטר משוער של פתרון לדקה קצב זרימה. בסוף חליטה, לקצור את מסת הגידול לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר המכיל 10 עד 15 מיליליטר של PBS. Excise הגידול מהעכבר הבא MTD2 כפי שהוכח רק.השתמש במספריים כדי לחתוך את הכבדים לחתיכות קטנות יותר. להעביר את הרקמות לתוך מיכל חדש של PBS טרי כדי להסיר את שאר הדם מן הרקמה לפני העברת חתיכות הרקמה לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של מדיום RPMI מלא. טחון את דגימות הכבד שטף עד חתיכות יכול להתאים בקלות דרך קצה של פיפיטר חמישה מיליליטר.מוסיפים מספיק מדיום לצינור כדי להגיע לנפח סופי של 30 מיליליטר. השתמש פיפט חמישה מיליליטר כדי triturate שברי הרקמה, לפני סינון הפתרון באמצעות מסננת 70 מיקרומטר לתוך צינור חדש 50 מיליליטר. לשטוף את מסננת מספר פעמים עם מדיום מלא.כוונן את עוצמת הקול הסופית ל- 50 מיליליטר עם מדיום שלם נוסף. במהירות לסובב את ההשעיה על ידי צנטריפוגה למקסימום של 50 פעמים g לפני עצירת הצנטריפוגה ו decanting את supernatant. ואז תן שימוש חוזר את גלולה ב20 מיליליטר של PBS לספירה.להזרקה תוך-תפל של ההפטוציטים MTD2, טען מזרק של מיליליטר אחד המצויד במחט של 27 מד לכל בעל חיים נמען עם 220 מיקרוליטרים של hepatocytes לכל עכבר. אשר חוסר תגובה לצביטת בוהן בבעל חיים הרדמה, פחמן tetrachloride מטופלים. החל ממש מתחת לשריר עמוד השדרה, הבא, לעשות חתך של סנטימטר אחד על האגף השמאלי במקביל הצלע השלוש עשרה מן הקיצוני הגבי ולהשתמש מטלפים מחודדים קהה כדי להחריח את הטחול.חתוך את הטחול בשני קליפי טיטניום בגודל בינוני בין העורק הטחול לווריד, וספק 200 מיקרוליטרים של תאים לקוטב הנחות של הטחול. חותכים את הענף הנחות של הפדיקל עם קליפ אחד בגודל בינוני וחותכים את הטחול בין שני הקליפים שהוצבו בתחילה. הסר את הקוטב הנחות של הטחול שהוזרק ישירות עם תאים סרטניים ולהשתמש 3-0 פוליגלקטין 910 תפור מופרע כדי לסגור את שכבת השריר הפנימי.לאחר מכן השתמשו בפצעי פלדה מעוקרים כדי לסגור את שכבת העור החיצונית ולנהל תת עורית חמישה מיליגרם לקילוגרם של קרפרופן. לאחר בידוד מעכברים מהו מהודרים אנטיגן T כפי שהוכח, הן hepatocytes ותאים חודרים לגידול ניתן לראות. התאים בדרך כלל מדגימים כמעט 100%הכדאיות לאחר העיבוד.לאחר חיסון תוך-תפל לבעלי חיים שטופלו בפחמן מסוג פראי, ההפטוציטים המושתלים מגדלים בהצלחה ובאמינות גידולי קרצינומה אורתוטופיים המפטיקולריים המבטאים את נגיף הסימאיאן הספציפי לגידול 40 T אנטיגן. הכנת האוכלוסייה בת קיימא וטהור שלנו של hepatocytes מן המסה MTD2 ניהול מדויק של הזרקת intrasplenic חשובים להצלחת ההליך. למרות שהצוות שלנו בדק חיסון hepatocyte לעכברים נמען באמצעות הזרקה תוך-וסקולרית ותוך-עינית, שיטות אחרות אלה לא הצליחו לגרום קרצינומה hepatocellular אורתוטופית.מודל זה מספק פלטפורמה ייחודית המאפשרת חקירה למעקב חיסוני וסובלנות בשלבים המוקדמים והמאוחרים יותר של התקדמות הגידול. אנא היזהר בעת שימוש tetrachloride פחמן, כפי שהוא רעיל.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

בידוד של תאים סרטניים במחזור מודל עכבר אורתופטי של סרטן המעי הגס

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping של Orthotopic מאותו מין (Syngeneic) של KPC העיקרי מאתר אדנוקרצינומה Ductal הלבלב על ידי Cytometry זרימה

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

הדור של הלבלב אורתוטואט גידולים ואפיון Vivo Ex של תאים הסתננות של הגידול תא T

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

הערכה במבחנה של טרנספורמציה אונקוגנית בתאי אפיתל ממ"ר אנושיים

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

מודל עכבר כריתה אורתוטופי של סרטן הלבלב

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

הטיות כימיות של נוגדן מטוהר מכוון DEC-205 עם חלבון באורך מלא למיקוד תאים דנדריטיים של עכבר במבחנה וב- In Vivo

Targeted antigen delivery to cross-presenting dendritic cells (DC) in vivo efficiently induces T effector cell responses and displays a valuable approach ...

A Three-Dimensional Spheroid Model to Investigate the Tumor-Stromal Interaction in Hepatocellular Carcinoma

מודל ספרואידי תלת מימדי לחקר האינטראקציה בין גידולים סרטניים בקרצינומה הפטוקולרית

The aggressiveness and lack of well-tolerated and widely effective treatments for advanced hepatocellular carcinoma (HCC), the predominant form of liver ...