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•
11:42 min
May 10th, 2019
DOI :
10.3791/59375-v
Chapters
0:04
Title
0:38
Determination of MNase Digestion Conditions
4:06
Reverse Crosslinking, Purification of DNA, and Analysis of Digested Chromatin
6:33
Chromatin Immunoprecipitation
9:24
Results: Representative Microphotographs, Agarose Gel Analysis, and Occupancy in the AR Genome
10:42
Conclusion
Transcript
このプロトコルでは、タンパク質とDNAの相互作用を同定し、遺伝子の転写調節を明らかにすることができる。これは、細胞内の分子メカニズムを理解するのに役立ちます.既存のプロトコルを変更し、簡単で明確なアッセイプロトコルを確立します。
最初のステップからプロトコルに従うだけで、アッセイが正常に実行されます。クロスリンクされたクロマチンを調製するには、ヒュームフードに、1%VCaP細胞培養培地の4ミリリットルと18.5%PFAの0.229ミリリットルを6センチメートルの皿に加えます。皿
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Summary
クロマチン免疫沈殿(ChIP)は、遺伝子調節の分子機構を理解するための強力なツールです。しかしながら、この方法は、機械的せん断による再現性クロマチン断片化を得ることに困難を伴う。ここでは、酵素消化を用いたChIPアッセイの改良されたプロトコルを提供する。
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