Name: nitropeptide profiling and identification illustrated by angiotensin ii
Uploaded: 2019-06-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av American Cancer Society institusjonelle Research Grant IRG-14-195-01 (M. Sharon stack er rektor etterforsker; X.L. er en subrecipient etterforsker). Denne publikasjonen ble gjort mulig med delvis støtte fra Grant Numbers KL2 TR002530 og UL1 TR002529 (A. Shekhar, PI) fra National Institutes of Health, nasjonalt senter for fremmarsj translational Sciences, Clinical og translational Sciences Award. X. L. er en mottaker av Indiana CTSI KL2 Young etterforsker Award. S. F. er støttet av Walther Cancer Foundation fremmarsj Basic Cancer tilskudd. X. W. støttes av National Natural Science Foundation i Kinas General program (Grant no. 817773047).

1. nitreringsbestandighet av angiotensin II
<ol><li>For å generere Nitro peptid, fortynne 10 μL av angiotensin II (DRVYIHPF) forelder løsning (2 mM i vann) i 390 μL PBS løsning (10 mM NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7,4) ved den endelige konsentrasjonen av 50 μM.</li>
	<li>Tilsett 10 μL av peroxynitrite (200 mM i 4,7% NaOH) til angiotensin II-løsningen for å gjøre den endelige konsentrasjonen av peroxynitrite 5 mM. Merk: Peroxynitrite er ustabil og lett å løse når den er i syre form, så ...

<ol>
	<li>Radi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide,+oxidants,+and+protein+tyrosine+nitration.">Nitric oxide, oxidants, and protein tyrosine nitration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 4003-4008 (2004).</li><li>Radi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+tyrosine+nitration:+biochemical+mechanisms+and+structural+basis+of+functional+effects.">Protein tyrosine nitration: biochemical mechanisms and structural basis of functional effects.</a> Accounts of Chemical Research. 46, 550-559 (2013).</li><li>Zhan, X., Desiderio, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALDI-induced+fragmentation+of+leucine+enkephalin,+nitro-Tyr-leucine+enkaphalin,+and+d5-Phe-nitro-Tyr-leucine+enkephalin.">MALDI-induced fragmentation of leucine enkephalin, nitro-Tyr-leucine enkaphalin, and d5-Phe-nitro-Tyr-leucine enkephalin.</a> Int. J Mass Spectrometry. 287, 77-86 (2009).</li><li>Batthy&#225;ny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyrosine-Nitrated+Proteins:+Proteomic+and+Bioanalytical+Aspects.">Tyrosine-Nitrated Proteins: Proteomic and Bioanalytical Aspects.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 26, 313-328 (2017).</li><li>Feeney, M. B., Sch&#246;neich, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+approaches+to+analyze+protein+tyrosine+nitration.">Proteomic approaches to analyze protein tyrosine nitration.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 19, 1247-1256 (2013).</li><li>Zhan, X., Desiderio, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroproteins+from+a+human+pituitary+adenoma+tissue+discovered+with+a+nitrotyrosine+affinity+column+and+tandem+mass+spectrometry.">Nitroproteins from a human pituitary adenoma tissue discovered with a nitrotyrosine affinity column and tandem mass spectrometry.</a> Analytical Biochemistry. 354, 279-289 (2006).</li><li>Zhan, X., Wang, X., Desiderio, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+analysis+of+nitrotyrosine-containing+proteins.">Mass spectrometry analysis of nitrotyrosine-containing proteins.</a> Mass Spectrometry Reviews. 34, 423-448 (2015).</li><li>Abello, N., Barroso, B., Kerstjens, H. A. M., Postma, D. S., Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+labeling+and+enrichment+of+nitrotyrosine-containing+peptides.">Chemical labeling and enrichment of nitrotyrosine-containing peptides.</a> Talanta. 80, 1503-1512 (2010).</li><li>Chiappetta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+identification+of+protein+nitration+sites.">Quantitative identification of protein nitration sites.</a> Proteomics. 9, 1524-1537 (2009).</li><li>Dekker, F., Abello, N., Wisastra, R., Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+and+detection+of+tyrosine-nitrated+proteins.">Enrichment and detection of tyrosine-nitrated proteins.</a> Current Protocols in Protein Science. , (2012).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+selective+enrichment+and+analysis+of+nitrotyrosine-containing+peptides+in+complex+proteome+samples.">A method for selective enrichment and analysis of nitrotyrosine-containing peptides in complex proteome samples.</a> Journal of Proteome Research. 6, 2257-2268 (2007).</li><li>Feng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid-derived+suppressor+cells+inhibit+T+cell+activation+through+nitrating+LCK+in+mouse+cancers.">Myeloid-derived suppressor cells inhibit T cell activation through nitrating LCK in mouse cancers.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115, 10094-10099 (2018).</li><li>Boersema, P. J., Raijmakers, R., Lemeer, S., Mohammed, S., Heck, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+peptide+stable+isotope+dimethyl+labeling+for+quantitative+proteomics.">Multiplex peptide stable isotope dimethyl labeling for quantitative proteomics.</a> Nature Protocol. 4, 484-494 (2009).</li></ol>

Protokollen her beskriver nitropeptide berikelse og profilering. Bruke angiotensin II som modell peptid, illustrerte vi prosedyren vist i figur 1. Etter å ha innhentet Nitro-angiotensin II, den primære Amin på peptid bør blokkeres for å unngå ytterligere Amin Bøyning, som er en av de mest kritiske skritt i protokollen. I den gjeldende protokollen, dimethyl merking brukes til å blokkere den primære aminer av to grunner: for det første, gjør det oppkjøpet av kvantitative resultater...

Nitreringsbestandighet av tyrosin rester i proteiner for å danne 3-nitrotyrosine regulerer mange biologiske prosesser. På grunn av de forskjellige kjemiske egenskapene mellom tyrosin og 3-nitrotyrosine, kan et Nitro protein ha perturbed signal aktivitet1,2. Derfor er det viktig å utvikle metoder som kan berike og identifisere nitreringsbestandighet områder på proteiner effektivt. Som 3-nitrotyrosine er en lav overflod modifikasjon på proteiner i forhold til andre former for PTM, som fosforylering og acetylering, er det utfordrende å identifisere endogene nitreringsbestandighet områder direkte fra cellelinjer eller vevsprøver. Likevel, metodikk for å bruke masse massespektrometri (MS) til å karakterisere fragmentering mønster av nitrotpeptide er utviklet (for eksempel Zhan & Desiderio3), som legger grunnlaget for nye metoder for nitroproteomics.
Aktuelle, en berikelse steg føle etter av MULTIPLE SCLEROSIS er de fleste kraftfull strategi for nitropeptide profilering4,5. Den berikelse metoder kan klassifiseres i to klasser. En klasse er basert på antistoffer som kan gjenkjenne 3-nitrotyrosine spesielt, mens den andre klassen er basert på den kjemiske avledning som reduserer en Nitro gruppe til et Amin gruppe4,5. For antistoff-basert metode, nitrotyrosine affinitet kolonnen brukes for berikelse, som eluert materialet er ytterligere løst og analyseres av høy oppløsning MS6,7. For kjemisk avledning-basert metode, Amin grupper ved N-Terminus av peptid eller lysin bør være blokkert i første trinn enten ved acetylering, isobar koder for relative og absolutte kvantifisering (iTRAQ), eller tandem Mass Tags (TMT) reagenser. Deretter brukes et redusering for å redusere nitrotyrosine til aminotyrosine etterfulgt av å endre den nyopprettede Amin gruppen, som inkluderer biotin ligation, sulphydryl peptid konvertering, eller andre typer tagging systemer8,9, 10,11. De fleste protokollene som er etablert så langt er basert på in vitro -Nitro proteiner, istedenfor endogenously Nitro proteiner.
I denne studien, en modifisert prosedyre av kjemisk avledning av nitrotyrosine er utviklet for nitropeptide berikelse og identifisering, som viser forbedret følsomhet under MS deteksjon og er egnet for kvantifisering formål. Vår nylige studien ansette denne metoden i biologiske systemer identifisert som nitreringsbestandighet av lymfocytter-spesifikke protein tyrosin kinase (LCK) på Tyr394 av RNS produsert fra myelogen-avledet Suppressor celler (MDSCs) spiller en viktig rolle i immunsuppresjon av tumor mikromiljøet12. Derfor vår metode for nitropeptide identifisering kan brukes til komplekse biologiske prøver også. Her beskriver vi vår protokoll ved hjelp av modellen peptid angiotensin II, hvorav fragmentering mønsteret er kjent og mye brukt i nitroproteomic studier8,9,10,11, som et eksempel.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:756px;" width="756">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20">Acclaim pepmap 100 C18 column</td>
			<td style="width:197px;">Thermo-Fisher</td>
			<td style="width:119px;">164534</td>
			<td style="width:195px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">1 M TEAB solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">50% hydroxylamine</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>90115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Acetonitrile</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>A955</td>
			<td>MS Grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">formaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td>Molecular Biology Grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22">formaldehyde-D2</td>
			<td>Toronto Research Chemicals</td>
			<td>F691353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22">formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>695076</td>
			<td>ACS reagent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22">Fusion Lumos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">isoacetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Methanol</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>A456</td>
			<td>MS Grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">NHS-S-S-bition</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Oasis HLB column (10 mg)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186000383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">peroxynitrite</td>
			<td>Merck-Millipore</td>
			<td>516620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">sodium cyanoborohydrite</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>42077</td>
			<td>PhamaGrade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">sodium dithionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>157953</td>
			<td>Technical Grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Streptavidin Sepharose</td>
			<td>GE Healcare</td>
			<td>GE17-5113-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Ultimate 3000 nanoLC</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nitropeptide profiling and identification illustrated by angiotensin ii

Protein nitreringsbestandighet er en av de viktigste post-translational modifikasjoner (PTM) på tyrosin rester og det kan bli indusert av kjemiske handlinger av reaktive oksygen arter (ROS) og reaktive nitrogen arter (RNS) i eukaryote celler. Presis identifisering av nitreringsbestandighet områder på proteiner er avgjørende for å forstå fysiologiske og patologiske prosesser knyttet til protein nitreringsbestandighet, slik som betennelser, aldring og kreft. Siden Nitro proteiner er av lav overflod i celler selv under indusert forhold, ingen universelle og effektive metoder har blitt utviklet for profilering og identifisering av protein nitreringsbestandighet nettsteder. Her beskriver vi en protokoll for nitropeptide berikelse ved hjelp av en kjemisk reduksjons reaksjon og biotin merking, etterfulgt av høy oppløsning masse massespektrometri. I vår metode kan nitropeptide derivater identifiseres med høy nøyaktighet. Vår metode har to fordeler sammenlignet med tidligere rapporterte metoder. Først, dimethyl merking brukes til å blokkere det primære Amin på nitropeptides, som kan brukes til å generere kvantitative resultater. For det andre brukes en disulfide obligasjon som inneholder NHS-biotin-reagens for berikelse, som kan bli ytterligere redusert og alkylated for å forbedre deteksjons signalet på en masse spektrometer. Denne protokollen har blitt brukt på modellen peptid angiotensin II i gjeldende papir.

Flytskjemaet for nitropeptide profilering i dette manuskriptet er vist i figur 1. Figur 2, 3, 4 og 5 viser massen SPECTRA av angiotensin II, Nitro-ANGIOTENSIN II, dimethyl merket Nitro-angiotensin II og dimethyl merket amino angiotensin II, henholdsvis. Molekylvekten av det sammensatte kan reflekteres av m/z verdier av mono-isotop Peak i hver figur, indikerer kjemisk modifikasjon på angiotensin II ble vellykket...

Watch this Scientific Journal Video about Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II at JoVE.com

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Nitropeptide profilering og identifisering illustrert av angiotensin II

Proteomikk profilering av tyrosin-Nitro proteiner har vært en utfordrende teknikk på grunn av den lave overflod av 3-nitrotyrosine modifikasjon. Her beskriver vi en ny tilnærming for nitropeptide berikelse og profilering ved å bruke angiotensin II som modell. Denne metoden kan utvides for andre in vitro -eller in vivo -systemer.

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

Dette budskapet som kan bidra til å svare på viktige spørsmål om hvordan å berike og identifisere nitropeptider ved en kjemisk tilnærming og massespektrometri. Denne teknikken har en forbedret følsomhet for å oppdage nitropeptider ved massespektrometri, og som kan brukes på både in vitro biokjemiske systemer og endogene biologiske vev. For nitro-angiotensin II desalting, bruk en en milliliter pipet for å precondition en omvendt fase solid-fase ekstraksjon eller SPE kolonne med tillegg av 500 mikroliter metanol og 500 mikroliter vann i toppen av kolonnen.Når alt vannet har gått gjennom kolonnen, last 410 mikroliter nitro-angiotensin II-løsning på kolonnen. Vask kolonnen med 500 mikroliter på 5% metanol og vann og 300 mikroliter på 80% metanol og vann for å elute nitropeptid. Tørk deretter eluatet etter hastighetsvakuum i standardinnstillingen ved romtemperatur.For primær aminalkylering må den pulveriserte nitro-angiotensin II i 100 mikroliter på 100 millimolar Triethylammonium bikarbonatoppløsning og tilsett 400 mikroliter med 4% formaldehyd til løsningen i en røykhette med kort blanding. Deretter legger du til fire mikroliter på 0,6 molar natrium cyanoborohydride til løsningen med risting ved 400 rotasjoner per minutt i en time ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen slukker du merkereaksjonen med 16 mikroliter med 1% ammoniakkoppløsning i fem minutter ved romtemperatur etterfulgt av forsuring med åtte mikroliter maursyre.Deretter avsalte løsningen i en ny omvendt fase SPE kolonne som nettopp demonstrert. For nitrotyrosin til aminotyrosinreduksjon, rekonstituer dimetylmerket nitro-angiotensin II i 500 mikroliter PBS og tilsett 10 mikroliter av en molarnatriumditionat i en time inkubasjon ved romtemperatur. Etter reduksjonsreaksjonen vil den gule løsningen bli klar.Desalt den reduserte prøven i en ny omvendt fase SPE kolonne som demonstrert. For biotinylering og berikelse, rekonstituer dimetyl-merket aminoangiotensin II i 500 mikroliter PBS etterfulgt av tillegg av fem mikroliter på 40 nanomolar NHS-S-S biotin oppløst i dimetylsulfoksid i en to timers inkubasjon ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen, slukke reaksjonen med en mikroliter på 5% hydroksylamin og tilsett 500 mikroliter av friske PBS til 100 mikroliter streptavidin Agarose perler for likevekt av tre separate sentrifugasjoner.Etter den siste sentrifugeringen, legg til 100 mikroliter perler til reaksjonssystemet i en time inkubasjon på en Rotary Shaker ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen, vask systemet fire ganger med 500 mikroliter frisk PBS per vask etterfulgt av tillegg av 400 mikroliter på 10 millimolar dithiothreitol for en 45 minutters inkubasjon ved 50 grader Celsius. På slutten av inkubasjonen, spinn ned kolonnen og overfør supernatanten til et nytt rør som inneholder 20 mikroliter på 0,5 molar iodoacetamid i en 20 minutters inkubasjon i mørket.Deretter avsalte løsningen i en ny spe-kolonne i omvendt fase som demonstrert og løse det tørre peptidet i 20 mikroliter på 0,1 % maursyre. For deteksjon, last produktet på en flytende kromatograf med et tandemmassespektrometer. Skill de modifiserte angiotensin II peptidene med en 60 minutters gradient elusion med en strømningshastighet på 0,3 mikroliter per minutt med nanohøytrykksvæskekromatografisystemet som er direkte grensesnitt med høyoppløsningsmassespektrometeret.I den dataavhengige anskaffelsesmodusen angir du ett enkelt massespektrum for full skanning i massespektrometeret, etterfulgt av 20 dataavhengige tandemmassespektrometerskanninger ved 28 % normalisert kollisjonsenergi. Åpne deretter massespektradataene og identifiser toppene av produktet i hvert trinn for å bekrefte at den kjemiske reaksjonen er utført. Her kan representativ massespektra av angiotensin II før og etter hver kjemiske modifikasjon som demonstrert observeres.Den molekylære vekten av forbindelsen indikeres av masse-til-lade-forholdsverdiene til monoisotoptoppen, noe som indikerer at den kjemiske modifikasjonen på angiotensin II ble oppnådd for dette trinnet. Her vises det endelige produktet som oppdaget og preget av flytende kromatografi med tandemmassespektrometri. Kvantitativ analyse av nitropeptider ved dimetylmerking gjør det mulig å beregning av de relative mengdene lett og tung ved sammenligning av intensiteten til monoisotoptoppen i hver gruppe, slik at kvantifisering av de berikede nitropeptider fra forskjellige grupper.Etter fremgangsmåten kan du bruke en programsøkemotor, for eksempel SEQUEST maks antall pFIND for å identifisere potensielle nitropeptider. Etter utviklingen banet denne teknikken veien for starten av de biologiske funksjonene til spesifikke nitrasjonssteder.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Identifisering av lite molekyl bindende proteiner i en Native Cellular Miljø via Live-celle Photoaffinity Merking

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Løse affinitetsrenset protein komplekser av Blå Native PAGE og Protein korrelasjon Profiling

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Deep Proteome Profiling by Isobaric Labeling, Extensive Liquid Chromatography, Mass Spectrometry, and Software-assisted Quantification

Dyp proteom profilering av isobar merking, omfattende flytende Ture, massespektrometri og Software-baserte kvantifisering

Many exceptional advances have been made in mass spectrometry (MS)-based proteomics, with particular technical progress in liquid chromatography (LC) ...

Genome-wide Quantification of Translation in Budding Yeast by Ribosome Profiling

Genomet hele kvantifisering av oversettelse i spirende gjær av ribosom profilering

Translation of mRNA into proteins is a complex process involving several layers of regulation. It is often assumed that changes in mRNA transcription ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome profilering i Leishmania, menneskelige celler og mus testikkel

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Identifikasjon av Cyclin-avhengige Kinase 1 bestemt fosforylering områder av en In Vitro Kinase analysen

Cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) is a master controller for the cell cycle in all eukaryotes and phosphorylates an estimated 8 - 13% of the proteome; ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Fangst og identifikasjon av RNA-bindende proteiner ved hjelp av Klikk kjemi-assistert RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods

Identifisering av orexin og Endocannabinoid reseptorer i Adult sebrafisk bruke Immunoperoxidase og Immunofluorescence metoder

Immunohistochemistry (IHC) is a highly sensitive and specific technique involved in the detection of target antigens in tissue sections with labeled ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

DNA Sequence anerkjennelse av DNA Primase ved hjelp av høy gjennomstrømming Primase profilering

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

Høyoppløselig Complexome profilering av Cryoslicing BN-MS analyse

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...