Name: nitropeptide profiling and identification illustrated by angiotensin ii
Uploaded: 2019-06-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II at JoVE.com

Detta arbete stöddes av American Cancer Society institutionell Research Grant IRG-14-195-01 (M. Sharon stack är ansvarig utredare; X.L. är en subrecipient utredare). Denna publikation möjliggjordes med partiellt stöd från Grant Numbers KL2 TR002530 och UL1 TR002529 (A. Shekhar, PI) från nationella institut för hälsa, nationellt centrum för främjande av translationell vetenskap, klinisk och translationell vetenskap Award. X. L. är mottagare av Indiana CTSI KL2 Young Investigator Award. S. F. stöds av Walther cancer Foundation främja grundläggande cancer bidrag. X. W. stöds av National Natural Science Foundation i Kina General program (Grant nr. 817773047).

1. nitrering av angiotensin II
<ol><li>För att generera nitrerad peptid, späd 10 μL av den överordnade lösningen av angiotensin II (DRVYIHPF) (2 mM i vatten) i 390 μL PBS-lösning (10 mM NaH2Po4, 150 mm nacl, pH 7,4) vid den slutliga koncentrationen på 50 μM.</li>
	<li>Tillsätt 10 μL peroxynitrit (200 mM i 4,7% NaOH) till angiotensin II-lösningen för att göra den slutliga koncentrationen av peroxynitrit 5 mM. Obs: Peroxynitrit är instabilt och lätt att lösa när det är i syra f...

<ol>
	<li>Radi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide,+oxidants,+and+protein+tyrosine+nitration.">Nitric oxide, oxidants, and protein tyrosine nitration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 4003-4008 (2004).</li><li>Radi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+tyrosine+nitration:+biochemical+mechanisms+and+structural+basis+of+functional+effects.">Protein tyrosine nitration: biochemical mechanisms and structural basis of functional effects.</a> Accounts of Chemical Research. 46, 550-559 (2013).</li><li>Zhan, X., Desiderio, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALDI-induced+fragmentation+of+leucine+enkephalin,+nitro-Tyr-leucine+enkaphalin,+and+d5-Phe-nitro-Tyr-leucine+enkephalin.">MALDI-induced fragmentation of leucine enkephalin, nitro-Tyr-leucine enkaphalin, and d5-Phe-nitro-Tyr-leucine enkephalin.</a> Int. J Mass Spectrometry. 287, 77-86 (2009).</li><li>Batthy&#225;ny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyrosine-Nitrated+Proteins:+Proteomic+and+Bioanalytical+Aspects.">Tyrosine-Nitrated Proteins: Proteomic and Bioanalytical Aspects.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 26, 313-328 (2017).</li><li>Feeney, M. B., Sch&#246;neich, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+approaches+to+analyze+protein+tyrosine+nitration.">Proteomic approaches to analyze protein tyrosine nitration.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 19, 1247-1256 (2013).</li><li>Zhan, X., Desiderio, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroproteins+from+a+human+pituitary+adenoma+tissue+discovered+with+a+nitrotyrosine+affinity+column+and+tandem+mass+spectrometry.">Nitroproteins from a human pituitary adenoma tissue discovered with a nitrotyrosine affinity column and tandem mass spectrometry.</a> Analytical Biochemistry. 354, 279-289 (2006).</li><li>Zhan, X., Wang, X., Desiderio, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+analysis+of+nitrotyrosine-containing+proteins.">Mass spectrometry analysis of nitrotyrosine-containing proteins.</a> Mass Spectrometry Reviews. 34, 423-448 (2015).</li><li>Abello, N., Barroso, B., Kerstjens, H. A. M., Postma, D. S., Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+labeling+and+enrichment+of+nitrotyrosine-containing+peptides.">Chemical labeling and enrichment of nitrotyrosine-containing peptides.</a> Talanta. 80, 1503-1512 (2010).</li><li>Chiappetta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+identification+of+protein+nitration+sites.">Quantitative identification of protein nitration sites.</a> Proteomics. 9, 1524-1537 (2009).</li><li>Dekker, F., Abello, N., Wisastra, R., Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+and+detection+of+tyrosine-nitrated+proteins.">Enrichment and detection of tyrosine-nitrated proteins.</a> Current Protocols in Protein Science. , (2012).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+selective+enrichment+and+analysis+of+nitrotyrosine-containing+peptides+in+complex+proteome+samples.">A method for selective enrichment and analysis of nitrotyrosine-containing peptides in complex proteome samples.</a> Journal of Proteome Research. 6, 2257-2268 (2007).</li><li>Feng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid-derived+suppressor+cells+inhibit+T+cell+activation+through+nitrating+LCK+in+mouse+cancers.">Myeloid-derived suppressor cells inhibit T cell activation through nitrating LCK in mouse cancers.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115, 10094-10099 (2018).</li><li>Boersema, P. J., Raijmakers, R., Lemeer, S., Mohammed, S., Heck, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+peptide+stable+isotope+dimethyl+labeling+for+quantitative+proteomics.">Multiplex peptide stable isotope dimethyl labeling for quantitative proteomics.</a> Nature Protocol. 4, 484-494 (2009).</li></ol>

Protokollet beskriver här nitropeptid berikning och profilering. Med angiotensin II som modell peptid illustrerade vi proceduren som visas i figur 1. Efter att ha erhållit Nitro-angiotensin II bör den primära aminan på peptiden blockeras för att undvika ytterligare aminkonjugering, vilket är ett av de mest kritiska stegen i protokollet. I det nuvarande protokollet används dimetylmärkning för att blockera primära aminer av två anledningar: för det första möjliggör förvärvet ...

Nitrering av tyrosin rester i proteiner för att bilda 3-nitrotyrosin reglerar många biologiska processer. På grund av de olika kemiska egenskaperna mellan tyrosin och 3-nitrotyrosin, kan ett nitrerat protein ha orolig signalering aktivitet1,2. Därför är det viktigt att utveckla metoder som kan berika och identifiera nitrations platser på proteiner effektivt. Eftersom 3-nitrotyrosin är ett lågt överflöd modifiering på proteiner jämfört med andra former av PTM, såsom fosforylering och Acetylering, är det svårt att identifiera endogena nitrering platser direkt från cellinjer eller vävnadsprover. Icke desto mindre har metoden att använda masspektrometri (MS) för att karakterisera fragmenteringsmönstret av nitrotpeptid utvecklats (till exempel Zhan & Desiderio3), som lägger grunden för nya metoder för nitroproteomik.
För närvarande är ett anriknings steg följt av MS den mest kraftfulla strategin för nitropeptid profilering4,5. Anriknings metoderna kan indelas i två klasser. En klass är baserad på anti kroppar som kan känna igen 3-nitrotyrosin specifikt, medan den andra klassen är baserad på kemisk härledning som minskar en Nitro grupp till en Amin grupp4,5. För den antikroppsbaserade metoden används kolonn för nitrotyrosin-tillhörighet för berikningen, från vilken det eluerade materialet ytterligare löses och analyseras med hög upplöst MS6,7. För kemisk derivation-baserad metod, bör amingrupperna vid N-Terminus av peptiden eller lysin blockeras i det första steget antingen genom Acetylering, isobariska Taggar för relativ och absolut kvantitation (iTRAQ), eller tandem massa Taggar (TMT) reagenser. Nästa, en Reducer används för att minska nitrotyrosin till aminotyrosin följt genom att ändra den nybildade amine gruppen, som omfattar biotin ligation, sulfydrylgrupper peptid omvandling, eller andra typer av märknings system8,9, 10,11. De flesta av de protokoll som hittills upprättats bygger på in vitro -Nitrerade proteiner, i stället för endogent Nitrerade proteiner.
I den här studien är ett modifierat förfarande för kemisk härledning av nitrotyrosin utvecklat för nitropeptid-berikning och-identifiering, vilket visar förbättrad känslighet vid MS-detektion och är lämpligt för kvantifieringsändamål. Vår nyligen genomförda studie med denna metod i biologiska system identifierade att nitrering av lymfocytspecifikt protein tyrosinkinas (LCK) vid Tyr394 av RNS framställt av myeloida-härledda suppressor celler (MDSCs) spelar en viktig roll i immunsuppression av tumörmikromiljön12. Därför kan vår metod för nitropeptid identifiering tillämpas på komplexa biologiska prover samt. Här beskriver vi vårt protokoll genom att använda modell peptiden angiotensin II, där fragmenteringssmönstret är känt och allmänt använt i nitroproteomiska studier8,9,10,11, som exempel.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:756px;" width="756">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20">Acclaim pepmap 100 C18 column</td>
			<td style="width:197px;">Thermo-Fisher</td>
			<td style="width:119px;">164534</td>
			<td style="width:195px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">1 M TEAB solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">50% hydroxylamine</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>90115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Acetonitrile</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>A955</td>
			<td>MS Grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">formaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td>Molecular Biology Grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22">formaldehyde-D2</td>
			<td>Toronto Research Chemicals</td>
			<td>F691353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22">formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>695076</td>
			<td>ACS reagent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22">Fusion Lumos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">isoacetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Methanol</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>A456</td>
			<td>MS Grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">NHS-S-S-bition</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>21441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Oasis HLB column (10 mg)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186000383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">peroxynitrite</td>
			<td>Merck-Millipore</td>
			<td>516620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">sodium cyanoborohydrite</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>42077</td>
			<td>PhamaGrade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">sodium dithionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>157953</td>
			<td>Technical Grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Streptavidin Sepharose</td>
			<td>GE Healcare</td>
			<td>GE17-5113-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20">Ultimate 3000 nanoLC</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nitropeptide profiling and identification illustrated by angiotensin ii

Protein nitrering är en av de viktigaste post-translational modifieringar (PTM) på tyrosinrester och det kan induceras av kemiska åtgärder av reaktiva syreradikaler (ROS) och reaktiva kväve arter (RNS) i eukaryotiska celler. Exakt identifiering av nitrations platser på proteiner är avgörande för förståelsen av fysiologiska och patologiska processer relaterade till protein nitrering, såsom inflammation, åldrande och cancer. Eftersom de Nitrerade proteinerna är av låg förekomst i celler även under inducerade förhållanden, har inga universella och effektiva metoder utvecklats för profilering och identifiering av proteinnitreringsanläggningar. Här beskriver vi ett protokoll för nitropeptid berikning med hjälp av en kemisk Reduktions reaktion och biotin märkning, följt av hög upplöst masspektrometri. I vår metod kan nitropeptidderivat identifieras med hög noggrannhet. Vår metod uppvisar två fördelar jämfört med tidigare rapporterade metoder. Först, dimetyl märkning används för att blockera den primära Amin på nitropeptider, som kan användas för att generera kvantitativa resultat. För det andra används en disulfidbindning som innehåller NHS-biotin-reagens för berikningen, som kan minskas ytterligare och alkyleras för att förbättra detekterings signalen på en masspektrometer. Detta protokoll har tillämpats framgångs rikt på modellen peptid angiotensin II i det aktuella papperet.

Flödesschemat för nitropeptid profilering i detta manuskript visas i figur 1. Figur 2, 3, 4 och 5 visar Mass spektra av angiotensin II, Nitro-angiotensin II, dimetylmärkt Nitro-ANGIOTENSIN II och dimetylmärkt amino angiotensin II, respektive. Den molekyl ära vikten av föreningen kan återspeglas av m/z-värden för mono-isotop topp i varje siffra, vilket tyder på kemisk modifiering av angiotensin II uppn?...

Watch this Scientific Journal Video about Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II at JoVE.com

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Nitropeptid profilering och identifiering illustrerad av angiotensin II

Proteomisk profilering av tyrosin-Nitrerade proteiner har varit en utmanande teknik på grund av det låga överflöd av 3-nitrotyrosin modifiering. Här beskriver vi en ny metod för nitropeptid berikning och profilering genom att använda angiotensin II som modell. Denna metod kan för längas för andra in vitro -eller in vivo -system.

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

Detta meddelande som kan hjälpa till att svara på viktiga frågor om hur man berikar och identifierar nitropeptider genom en kemisk strategi och masspektrometrin. Denna teknik har en förstärkt känslighet för att upptäcka nitropeptider genom masspektrometri och som kan appliceras på både in vitro biokemiska system och endogena biologiska vävnader. För nitro-angiotensin II-desalting, använd en en milliliter pipet för att prekonditionera en reverse-phase solid-phase extraktion eller SPE-kolonn med tillsats av 500 mikroliter metanol och 500 mikroliter vatten i kolonnens överkant.När allt vatten har gått genom kolonnen, ladda 410 mikroliter av nitro-angiotensin II lösning på kolonnen. Tvätta kolonnen med 500 mikroliter av 5%metanol och vatten och 300 mikroliter av 80%metanol och vatten för att elituera nitropeptiden. Torka sedan eluatet genom hastighetsvakuum i standardinställningen vid rumstemperatur.För primär aminalkylering, rekonstituera den pulveriserade nitro-angiotensin II i 100 mikroliters på 100 millimolar Triethylammonium bikarbonatlösning och tillsätt 400 mikroliter av 4%formaldehyd till lösningen i en fume huva med kort blandning. Därefter lägger du till fyra mikroliter på 0,6 molar natriumcyanoborohydrid till lösningen med skakningar vid 400 rotationer per minut under en timme vid rumstemperatur. I slutet av inkubationen, släcka märkningsreaktionen med 16 mikroliter av 1%ammoniaklösning i fem minuter vid rumstemperatur följt av försurning med åtta mikroliter av myrsyra.Desalt sedan lösningen i en ny omvänd fas SPE kolumn som just visat. För nitrotyrosin till aminotyrosinreduktion, rekonstruera dimetylmärkt nitro-angiotensin II i 500 mikroliter av PBS och tillsätt 10 mikroliter av en molar natrium dithionat för en timmes inkubation vid rumstemperatur. Efter reduktionsreaktionen kommer den gula lösningen att bli klar.Desalt det reducerade provet i en ny reverse-phase SPE-kolumn som visats. För biotinylation och anrikning, rekonstruera dimetylmärkta aminoangiotensin II i 500 mikroliter av PBS följt av tillsats av fem mikroliter av 40 nanomolar NHS-S-S biotin upplöst i dimetylsulfoxid för en två timmars inkubation vid rumstemperatur. Vid inkubationens, släck reaktionen med en mikroliter på 5%hydroxylamin och tillsätt 500 mikroliter färska PBS till 100 mikroliter streptavidin Agarose pärlor för jämvikten genom tre separata centrifugeringar.Efter den sista centrifugeringen, tillsätt 100 mikroliter av pärlor till reaktionssystemet för en en timmes inkubation på en Roterande Shaker i rumstemperatur. Vid slutet av inkubationen, tvätta systemet fyra gånger med 500 mikroliter färska PBS per tvätt följt av tillsats av 400 mikroliter av 10 millimolar dithiothreitol för en 45 minuters inkubation vid 50 grader Celsius. I slutet av inkubationen snurrar du ner kolonnen och överför supernatanten i ett nytt rör som innehåller 20 mikroliter på 0,5 molar iodoacetamid för en 20 minuters inkubation i mörker.Desalta sedan lösningen i en ny reverse-phase SPE-kolumn som den demonstreras och löse den torra peptiden i 20 mikroliter av 0,1%myrsyra. För detektion, lasta produkten på en vätskekromatograf med en tandemmasspektrometer. Separera de modifierade angiotensin II-peptiderna med en 60 minuters gradient elusion med en flödeshastighet på 0,3 mikroliter per minut med det nanohögtrycksvätgaskromatografisystem som är direkt gränssnittsbetonat med den högupplösta masspektrometern.I det databeroende anskaffningsläget ställer du in ett enda fullständigt massspektrum i masspektrometern, följt av 20 databeroende tandemmasspektrometerskanningar vid 28%normaliserad kollisionsenergi. Öppna sedan massspektradata och identifiera produktens toppar i varje steg för att bekräfta att den kemiska reaktionen har utförts framgångsrikt. Här kan representativa masspektra av angiotensin II före och efter varje kemisk modifiering som påvisas observeras.Molekylvikten för föreningen anges med mass-till-charge-kvotvärdena för monoisotoptoptoppen, vilket indikerar att den kemiska modifieringen på angiotensin II uppnåddes framgångsrikt för det steget. Här visas slutprodukten som detekterats och karakteriseras av vätskekromatografi med tandemmasspektrometri. Kvantitativ analys av nitropeptiderna genom dimetylmärkning möjliggör beräkning av de relativa mängderna ljus och tung via jämförelse av intensiteten hos monoisotoptoppen i varje grupp, vilket möjliggör kvantifiering av de berikade nitropeptiderna från olika grupper.Efter förfarandet kan du använda ett program sökmotor såsom SEQUEST max räkning av pFIND att identifiera de potentiella nitropeptider. Efter dess utveckling banade denna teknik vägen för start av de biologiska funktionerna hos specifika nitrationsplatser.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Identifiering av liten molekyl-bindande proteiner i en Native Cellular miljö med Live-cell fotoaffinitetsmärkning

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Lösa affinitetsrenat proteinkomplex av Blue Native PAGE och protein Korrelation profilering

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Deep Proteome Profiling by Isobaric Labeling, Extensive Liquid Chromatography, Mass Spectrometry, and Software-assisted Quantification

Djupa proteomet profilering av isobariska märkning, omfattande vätskekromatografi, masspektrometri och programvara-assisted kvantifiering

Many exceptional advances have been made in mass spectrometry (MS)-based proteomics, with particular technical progress in liquid chromatography (LC) ...

Genome-wide Quantification of Translation in Budding Yeast by Ribosome Profiling

Genome-wide kvantifiering av översättning i spirande jäst av Ribosomen profilering

Translation of mRNA into proteins is a complex process involving several layers of regulation. It is often assumed that changes in mRNA transcription ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome profilering i Leishmania, mänskliga celler och mus Testis

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Identifiering av cyklin-beroende Kinase 1 särskilda fosforylering platser av ett In Vitro -Kinas Assay

Cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) is a master controller for the cell cycle in all eukaryotes and phosphorylates an estimated 8 - 13% of the proteome; ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Fånga och identifiering av RNA-bindande proteiner med hjälp av klick kemi-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods

Identifiering av Orexin och Endocannabinoid receptorer hos vuxna zebra fiskar med Immunoperoxidas och immunofluorescens metoder

Immunohistochemistry (IHC) is a highly sensitive and specific technique involved in the detection of target antigens in tissue sections with labeled ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

DNA-sekvens erkännande av DNA-Primase med hög genomströmning Primase profilering

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

Högupplöst Complexome-profilering genom att Cryoslicing BN-MS Analysis

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...