यह प्रोटोकॉल कठोर एंजाइमों या अपकेंद्रित्र चरणों के उपयोग के बिना एएससी को अलग करने का एक सरल लागत प्रभावी तरीका प्रदान करता है, जो सेल फेनोटाइप और व्यवहार को बदल सकता है। कठोर कदमों की कमी एंजाइमों और अपकेंद्रित्र का उपयोग कर अलग उन लोगों की तुलना में कम हेरफेर कोशिकाओं पैदावार, के रूप में सवालों को कम करने के लिए कि क्या प्रयोगात्मक टिप्पणियों अलगाव विधि का एक विरूपण साक्ष्य हैं । यह एक्सप्लांट विधि विभिन्न प्रकार की बीमारियों के इलाज या जीवन में विस्तार करने के लिए एक रोगी में पेश किए जाने वाले नैदानिक प्रासंगिक एएससी उत्पन्न कर सकती है।
शब्दों में कीमा विधि को पूर्ण रूप से समझाना मुश्किल है। दृश्य प्रदर्शन अन्य वैज्ञानिकों को अलग ऊतक खुद को तोड़ने के लिए सीखने की परेशानियों की सेवा कर सकते हैं । इसी तरह के एक्सप्लांट तरीकों का उपयोग एमएससी की अन्य आबादी को अलग करने के लिए किया जा सकता है, जैसे कि गर्भनाल ऊतकों से।
एब्डोमिनोप्लास्टी ऊतक नमूनों को कीमा बनाने के लिए, पहले ऊतक को बाँझ 100 मिलीमीटर प्लेट के ढक्कन में स्थानांतरित करें। फिर एक बाँझ सुई का उपयोग करने के लिए जगह में ऊतक का एक टुकड़ा पकड़ और एक बाँझ स्केलपेल का उपयोग करने के लिए एक मिलीमीटर से भी कम टुकड़ों में ऊतक काट । ऊतक को एक ताजा ट्यूब में स्थानांतरित करें और उलटा करें या सभी परतों के मिश्रण को सुनिश्चित करने के लिए नमूना पांच से छह बार हिलाएं।
फिर, एक बाँझ स्पैटुला के साथ, 2.5 से पांच मिलीलीटर ऊतक को 100 मिलीमीटर वैक्यूम गैस प्लाज्मा उपचारित ऊतक संस्कृति प्लेट में स्थानांतरित करें। एक ताजा अपकेंद्रित्र ट्यूब में डालने से नमूने की मात्रा को मापें। इसके बाद, प्लेट में ऊतक संस्कृति मीडिया की एक समकक्ष मात्रा जोड़ें और सामग्री को मिलाने के लिए धीरे-धीरे प्लेट को घूमता है।
थाली के आधार पर पर्याप्त संख्या में कोशिकाओं को देखे जाने तक पांच प्रतिशत कार्बन डाइऑक्साइड में ३७ डिग्री सेल्सियस पर प्लेट को इनक्यूबेट करें । एक बार प्लेट पर या सात दिनों के बाद पर्याप्त संख्या में कोशिकाओं को नोट किया जाता है, जो भी जल्दी हो, ऊतक के शेष सभी टुकड़ों को हटा दें। इसके बाद, ऊतक संस्कृति मीडिया में ASCs संस्कृति जब तक वे ७०% उदारता तक पहुंचने या जब तक समूहों घने हो जाते है जिस बिंदु पर कोशिकाओं को पारित किया जाना है ।
धीरे-धीरे 1X फॉस्फेट बफर नमकीन के साथ थाली कुल्ला। अनुयायी कोशिकाओं को ट्रिपसिनाइज करने के लिए, फॉस्फेट बफर खारा को बढ़ाएं, प्रत्येक प्लेट में 0.25% ईडीटीए के साथ पूरक ट्राइप्सिन का एक मिलीलीटर जोड़ें और पांच मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। ट्राइप्सिन को निष्क्रिय करने के लिए प्लेट में थोड़ी मात्रा में मीडिया जोड़ें।
फिर धीरे से प्लेट के ऊपर से मीडिया ट्रिपसिन को नीचे की ओर पिपेट करें, प्लेट से किसी भी कमजोर संलग्न कोशिकाओं को खो दें। कोशिकाओं को बीज करने के लिए, पहले प्लेट में मीडिया जोड़ें। फिर, कोशिकाओं को ड्रॉपवाइज तरीके से जोड़ें और फिर प्लेट में वितरण सुनिश्चित करने के लिए प्लेट को भंवर करें।
तीन मार्ग के बाद, साइटोमेट्री और भेदभाव परख प्रवाह के लिए आगे बढ़ें। तीन मार्गों के बाद, लिपोस्पिरेट और एब्डोमिनोप्लास्टी नमूनों से अलग एएससी में एक एंजाइमेटिक पाचन के बाद अलग एएससी के समान एमएससी आकृति विज्ञान और फेनोटाइप पाया गया । अन्य एमएससी की तरह, एक्सप्लांट अलग एएससी सीडी 45 के लिए नकारात्मक और सीडी 73, सीडी 90 और सीडी 105 के लिए सकारात्मक हैं।
ऊतक को नख़रे लेते समय, प्रत्येक टुकड़े का सतह क्षेत्र ऊतक से बाहर निकलने के लिए एएससी के लिए पर्याप्त रूप से बड़ा होना चाहिए। ये मौलिक स्टेम सेल हैं जिनका उपयोग अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए किया जा सकता है। अलग एएससी का उपयोग वीवो या इन विट्रो में किसी भी डाउनस्ट्रीम एप्लिकेशन के लिए किया जा सकता है।
