Name: robust comparison of protein levels across tissues and throughout development using standardized quantitative western blotting
Uploaded: 2019-04-09T15:00:00
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E.J.N.G. は、Wellcome の信頼 (グラント 106098/Z/14/Z) によってサポートされます。SMA 信託 (SMA 英国協会によって提供されているその他の資金T.H.G. & Y TH.)、SMA ヨーロッパ (T.H.G ・ D.v.D.H. ・ E.J.N.G.)、精密医学 (T.H.G., l. l. ・ A.M.M)、エジンバラ大学の DTP、運動ニューロン病の研究 (T.H.G) のユアン ・ マクドナルド センター。

このプロシージャのためのティッシュは、エジンバラ大学の内部倫理委員会によって承認された、制度的に見合って、関連の権限の下で英国ホーム オフィスの規制を行った動物の研究から得られました。個人とプロジェクトのライセンス。
注: このプロトコルは再現性を高めるために標準化された、市販のキットおよび試薬の使用を最適化されています (材料の表<...

<ol>
	<li>Bertoni, T. A., Perenha-Viana, M. C., Patussi, E. V., Cardoso, R. F., Svidzinski, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Western+blotting+is+an+efficient+tool+for+differential+diagnosis+of+paracoccidioidomycosis+and+pulmonary+tuberculosis.">Western blotting is an efficient tool for differential diagnosis of paracoccidioidomycosis and pulmonary tuberculosis.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 19 (11), 1887-1888 (2012).</li><li>Hutchinson, A. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+protein+analysis+as+a+reliable+loading+control+for+quantitative+fluorescent+Western+blotting.">Total protein analysis as a reliable loading control for quantitative fluorescent Western blotting.</a> PloS One. 8 (8), e72457 (2013).</li><li>Ghosh, R., Gilda, J. E., Gomes, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+necessity+of+and+strategies+for+improving+confidence+in+the+accuracy+of+western+blots.">The necessity of and strategies for improving confidence in the accuracy of western blots.</a> Expert Rev Proteomics. 11 (5), 549-560 (2014).</li><li>Jensen, B. C., Swigart, P. M., Simpson, P. 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C., Berkelman, T., Yadav, G., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+defined+methodology+for+reliable+quantification+of+Western+blot+data.">A defined methodology for reliable quantification of Western blot data.</a> Molecular Biotechnology. 55 (3), 217-226 (2013).</li><li>Goasdoue, K., Awabdy, D., Bjorkman, S. T., Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+loading+controls+are+not+reliable+for+Western+blot+quantification+across+brain+development+or+in+pathological+conditions.">Standard loading controls are not reliable for Western blot quantification across brain development or in pathological conditions.</a> Electrophoresis. 37 (4), 630-634 (2016).</li><li>Rocha-Martins, M., Njaine, B., Silveira, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+pitfalls+of+internal+controls:+validation+of+reference+genes+for+analysis+by+qRT-PCR+and+Western+blot+throughout+rat+retinal+development.">Avoiding pitfalls of internal controls: validation of reference genes for analysis by qRT-PCR and Western blot throughout rat retinal development.</a> PloS One. 7 (8), e43028 (2012).</li><li>Aghamaleky Sarvestany, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantitative+proteomic+profiling+identifies+disruption+of+ubiquitin+homeostasis+as+a+key+driver+of+Schwann+cell+defects+in+spinal+muscular+atrophy.">Label-free quantitative proteomic profiling identifies disruption of ubiquitin homeostasis as a key driver of Schwann cell defects in spinal muscular atrophy.</a> Journal of Proteome Research. 13 (11), 4546-4557 (2014).</li><li>Fuller, H. 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適切な実験計画、対策と統計分析、西部にしみが付くことは蛋白質の表現内および多様な生体試料間の信頼性の高い定量的評価をする使用できます。我々 現在の原稿で説明するプロトコル蛍光ベースの組み合わせを使用して、サンプルのより大きくより複雑なグループ間で定量分析を実施するウエスタンブロットを使用している研究者のためのガイドラインとして提供することを目的と検出...

西部にしみが付くことは、検出し、タンパク質発現、組織ホモジネートまたは抽出物などを定量化に使われている手法です。年間で、この手法は、病1,2の存在を確認する診断ツールとして使用することができます基礎と臨床の研究には多くの進歩につながっています。1979 年に硝酸セルロース シートにポリアクリルアミドのゲルからタンパク質を転送し、その後放射能標識または蛍光標識された二次抗体を用いたタンパク質を視覚化する方法としてまず述べた西部にしみが付くことまたはペルオキシダーゼ3。市販のキットや装置の開発、西部のしみが付く方法がますます標準化し、長年にわたって簡素化します。確かに、手法が今容易にさまざまな背景や経験のレベルで科学者によって実行されます。ただし、多くの同様の実験的手法と西部のしみの分析の結果簡単に選択して設計と実験の実行にも影響されます。したがっては、標準化された西部のしみが付くメソッドへのアクセスはない慎重な実験計画の必要性を隠蔽し、デザインする、それが重要です。実験的考察などに限られた、サンプル準備および処理、選択とタンパク質検出用抗体の検証、特に小規模または大規模のゲル-膜転送効率は (< 10 または > 140 kDa)蛋白質4,5,6,7,8,9。元のサンプルの蛋白質の品質は、その後西部のしみの分析の結果を決定する上で重要な役割を果たしています。さまざまなサンプルとソース、細胞株、動物モデルから組織死後人間組織などからタンパク質を得ることができると再現性のある結果を取得する処理と処理の一貫性が必要です。たとえば、サンプルの蛋白質の抽出のための長期的なストレージが必要な場合、それは、蛋白質は-80 ° C で一般的に安定しているが、抽出されたタンパク質と-80 ° C でそのまま組織の蛋白質の安定性の違いされている実現するために重要です報告された10。さらに、蛋白質量の再現性のある推定値を得るためには、サンプルの一貫した均質化が重要です。異なる換散バッファーと均質化法 (例えば、手動均質化自動化された方法と比べた場合) を最適化することは、大規模な定量実験を開始する前に必要があります。
蛋白質の表現の堅牢な定量的な結果を取得する蛋白質の読み込みと定量化の変動を補正するための正規化戦略が欠かせない。タンパク質 β-アクチンなどのハウスキーピング、グリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素 (GAPDH)、β-チューブリン α-チューブリン伝統的に使用されている定量化のための蛋白質のレベルを正規化します。しかし、過去数年11,12ますます特定のハウスキーピング タンパク質定量用の正規化を批判されています。たとえば、ハウスキーピング タンパクの発現は4の同じ動物と条件病気様々 な4,15 の下の組織にわたって発達段階別13,14, で変化するか ,16,17。したがって、特定のハウスキーピング蛋白質の使用は、異なる縦長で、様々 な実験条件の下で、さまざまな組織からタンパク質発現の間のより複雑な比較を行うの可能性を制限します。ハウスキーピング蛋白質蛋白質の変化の読み込みのコントロールにする代わりに総蛋白汚れ (TPS) の使用は、そのラベルとサンプルで現在のすべての蛋白質を可視化します。1 つの特定の蛋白質のレベルしたがって TPS 信号の定量化され匹敵する、再現可能な実験条件、サンプル タイプまたは発達 timepoint に関係なくするのではなく、TP により総蛋白負荷に基づいて信号の正規化.総蛋白質の汚れには、Ponceau S、ゲルの染色無料、Coomassie R-350、可視ルビー、Epicocconone、Amydo ブラック、Cy5 (文献参考文献 18) があります。これらの各メソッドは、特定の利点と制限、方法の選択は実験のセットアップ4,18と同様、時間と利用可能なツールによって異なります。
膜内で読み込みと数量の変動を補正するため、TPS を使用、に加えて大規模なタンパク質発現解析を実行するときに特に別の膜間のサンプルを比較する必要がある場合があります。ただし、抗体の結合を効率と総蛋白質染色強度などの要因で変動は可能性があります別のゲルの分析は蛋白質のサンプルと膜間のばらつきに導入。このような状況で堅牢な定量化のために膜間の可変性を考慮してさらに正規化ステップを導入する必要です。これは、各実験の間で一定に保たれる個別に分析された膜の内部負荷標準を含めることによって達成することができます。この規格は、あらゆる蛋白質の溶解実験に含まれているすべての膜を渡る使用される十分な量で取得可能の形をとることができます。ここで、脳はすぐに均質化し、ライセート得られたタンパク質は、高濃度の蛋白質の重要な量を含んでいる (生後 5 日のマウスから得られた)、マウス脳のライセート使用します。3 通の内部標準を読み込み正規化し、直接比較する別の膜のサンプルをことができます。
ここでは、さまざまな組織、マウス モデル (疾患モデルを含む)、および発達縦長19間でタンパク質発現の多様性の複雑な比較を行うことを許可するように開発した詳細なプロトコルについて述べる。内部の読み込み標準の使用と蛍光 TPS を組み合わせて、サンプルおよび単一の実験内で比較することができます実験条件の数の既存の制限を克服することができました。このアプローチよりさまざまな組織、サンプル間で発現を探索する研究者、伝統的な西部のしみの技術の使用を拡大します。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fine Tipped Gel Loading Tips</td>
			<td>Alpha Laboratories</td>
			<td>GL20057SNTL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free 100x 5mL</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>78437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld homogeniser&#160;</td>
			<td>VWR Collection</td>
			<td>431-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iBlot 2 Gel Transfer Device</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>IB21001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iBlot Transfer Stack, PVDF, regular size</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>IB401031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio Lite</td>
			<td>Licor</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Free download from https://www.licor.com/bio/products/software/image_studio_lite/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRDye 800CW secondary antibodies</td>
			<td>Licor</td>
			<td>--</td>
			<td>Select appropriate secondary antibody that is specific against host of primary antibody.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex Sharp Pre-stained Protein Standard</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>LC5800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels, 1.0 mm, 15-well</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>NP0323BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE LDS Sample Buffer (4X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>NP0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE MOPS SDS Running Buffer (20X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>NP0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Odyssey Blocking Buffer</td>
			<td>Licor</td>
			<td>927-40000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Mouse anti-SMN (survival motor neuron) monoclonal antibody</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>610646</td>
			<td>Is used extensively in the SMN/SMA literature and gives consistent results regardsless of lot number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REVERT Total Protein Stain, 250 mL&#160;</td>
			<td>Licor</td>
			<td>926-11021&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REVERT Wash Solution&#160;</td>
			<td>Licor</td>
			<td>926-11012&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA Lysis and Extraction Buffer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>89900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XCell&#160;SureLock Mini-Cell</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>EI0001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

robust comparison of protein levels across tissues and throughout development using standardized quantitative western blotting

西部にしみが付くことは、検出し、タンパク質の発現を定量化によく使用される手法です。長年にわたってこのテクニックは基礎と臨床の研究には多くの進歩につながっています。ただし、多くの同様の実験的手法と西部のしみの分析の結果簡単に選択して設計と実験の実行にも影響されます。特定ハウスキーピング蛋白質は定量化のための蛋白質のレベルを正規化する伝統的に使用されている、しかし、これらは制限数と過去数年間でますます批判されているため。ここでは、さまざまな組織、マウス モデル (疾患モデルを含む)、および発達縦長でタンパク質発現の多様性の複雑な比較を行うことを許可するように開発した詳細なプロトコルについて述べる。蛍光蛋白汚れを使用し、内部ロードの標準的な使用を導入、実験内で比較することができ、全体蛋白質のレベルを体系的に比較するサンプルの数の既存の制限事項を克服するために不可能だ、実験条件の範囲。このアプローチよりさまざまな組織、サンプル間で発現を探索する研究者、伝統的な西部のしみの技術の使用を拡大します。

組織と時間点にわたってタンパク質レベルの比較を容易にする TPS と内部標準物質の使用の例が含まれます。図 1は、新生児 (生後 5 日目) (週齢 10) 大人のマウスと比較してから得られた組織から抽出したタンパク質のウェスタンブロットの結果を示しています。図 1 aは、Cには TPS と召イムノブロットを示しま?...

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Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

このメソッドでは、標準化された定量的西部のしみが付くアプローチを使用して異なる発達縦長で種々 の組織における蛋白質レベルの比較のための堅牢かつ再現可能なアプローチについて説明します。

タンパク質レベルの組織や標準化された定量ウェスタンブロットによる開発全体の堅牢な比較

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

このプロトコルは、異なる組織とポイント間のタンパク質発現を見て、基礎的および臨床研究における重要な問題に対処するために使用することができます。信頼性の高い定量的なウエスタンブロッティングを行うために、蛍光全タンパク質染色と内部ローディングコントロールを組み合わせています。これは、実験条件間で様々な組織を比較するときに生じる限界を克服します。スナップ凍結細胞または組織サンプルからタンパク質を抽出するには、必要に応じてサンプルを洗浄する前に氷上のマイナス80度サンプルを解凍します。ポリプロピレンの害虫を使用してハンドヘルド電気ホモジナイザーを使用して、洗浄されたサンプルを均質化し、二重蒸留水で害虫を洗い流し、サンプル間のきれいな組織で乾燥させます。サンプルを氷の上に10分間放置し、その後遠心分離します。次に、タンパク質サンプル含有上清をペレットを邪魔することなく、氷上の新しいチューブに移します。タンパク質濃度を定量化するために、3重化中の濃度を増加させると牛血清アルブミン標準を設定し、各タンパク質サンプルの1マイクロリットルを重複して96ウェル光学プレートの適切なウェルに追加します。タンパク質濃度が低いと予想される場合は、60°Cの熱ブロックでタンパク質を10分以上インキュベートし、プレートリーダー上の560ナノメートルで吸収を測定します。プレートリーダーの測定値をエクスポートし、各サンプルの平均吸光度値をタンパク質標準を使用して得られた標準曲線と比較して、タンパク質濃度を計算します。タンパク質の量を正常化するには、サンプルバッファーと超純水中のタンパク質サンプルの希釈液を調製し、70°Cの熱ブロックでサンプルを10分間インキュベートします。次に、渦を巻き、一時的に遠心分離する前に、サンプルを氷の上に置きます。電気泳動の場合、ゲル電気泳動チャンバシステムに4~12%のBis-Tris勾配ゲルをプレキャストし、タンパク質標準物の3.5マイクロリットルをウェルにロードします。膜間正規化の内部標準を使用する場合は、他のサンプルと同等の量をタンパク質ラダーの隣の最初の3つのウェルにロードし、各サンプルの30マイクログラムを残りのウェルにロードします。その後、サンプルを80ボルトで10分間実行し、さらに45〜60分間150ボルトを実行します。電気泳動の終わりに、転写スタックを組み立てるには、ポリビニリデンジフルオリド膜を含む底面スタック上にプロテインゲルを置き、その後ろろをろ紙に置く。ブロッティングローラーを使用して気泡を取り除き、上部のスタックをフィルターペーパーの上に置いてから、もう一度スタックを転がして気泡を取り除きます。デバイスの左側にある電極を使用して、スタック全体を転送デバイスに転送し、スポンジがデバイス上の対応する電気接点に合うように、ゲルスポンジをスタックの上に置きます。蓋を閉じた後、適切なプログラムを選択して起動します。プログラムの最後に、膜をゲルサイズにカットし、切断された膜を二重蒸留水で素早く洗ってから、タンパク質の全汚れを継続します。全タンパク質染色の場合は、膜をタンパク質側を内側に向けた50ミリリットルチューブに転がし、ヒュームフードの室温で5分間ローラーに5ミリリットルのタンパク質汚れ溶液を付けて膜にラベルを付けます。インキュベーションの終わりに、洗浄液の5ミリリットルで素早く膜を洗い、チューブを洗浄の間のローラーに短時間戻し、続いて超純水で短いすすがします。3ミリリットルのブロッキングバッファーを膜に加え、室温で30分間ローラーに戻します。適切な最適化された濃度で目的の一次抗体とブロッキングバッファーを交換し、一晩4°Cでローラー上の膜をインキュベートします。翌日、室温でローラーに洗浄1回5ミリリットルの新鮮なPBSで5分間膜を6回洗浄します。最後の洗浄後、ローラ上の適切な二次抗体溶液を用いて膜を室温で1時間培養し、洗浄ごとに30分間3回洗浄します。最後の洗浄後、膜を乾燥させ、アルミニウム箔を使用して膜を光から保護します。画像取得のために、タンパク質側を下に向けてスキャナー上に膜を置き、ソフトウェア内のスキャン領域を選択します。そして、両方のチャンネルの画像を取得し、適切な画像解析プログラムにエクスポートします。700ナノメートルのチャンネルを表示して、タンパク質染色結果の合計を表示し、正規化の対象領域を定義する[解析と矩形を描画]を選択します。次に、最初の長方形領域をコピーして個々のサンプルに貼り付け、定義された領域が解析されたすべてのレーンで同じサイズであることを確認します。各レーンのタンパク質濃度を定量化するには、合計タンパク質染色と目的のタンパク質の両方の結果をスプレッドシートプログラムにコピーし、最大の全タンパク質染色シグナルを決定します。次に、各タンパク質染色シグナル値をこの値で割って、正規化されたタンパク質負荷値を求め、各個体のシグナル値を対応する正規化されたタンパク質値で割って、異なるサンプルにおける相対的なタンパク質発現率を算出した。これらの代表的なウエスタンブロットでは、5日目の出生後5日目から得られた組織から抽出されたタンパク質が、10週齢の成体マウスから抽出されたタンパク質と比較される。全タンパク質染色の蛍光強度の定量は、各レーン上の長方形ボックス内の蛍光強度を測定することによって達成された。レーン全体を解析する場合、蛍光強度はサンプル間で比較的類似したままであり、全タンパク質染色を正規化に使用することがこの目的に適していることを示しています。蛍光総タンパク質染色は、異なる発達時のタンパク質レベルを比較するためにも使用できます。例えば、生存運動ニューロンタンパク質レベルはマウスの年齢とともに明らかに減少するが、全タンパク質染色定量は一定のままである。内部標準、蛍光ベースの正規化、および適切な統計を使用すると、さまざまな条件にわたる複雑なタンパク質発現解析の堅牢性が向上します。このプロトコルは、従来のウェスタンブロット技術を追加し、実験バッチ間で適切なローディング制御と比較の問題を克服し、タンパク質発現解析のための柔軟性を提供します。このアプローチは、他の実験条件下でのタンパク質発現の比較まで拡張することができる。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

足場リポソームを使用することにより、脂質近位タンパク質 - タンパク質相互作用を再構成します<em&gt;インビトロ</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

SorLA and CLC:CLF-1-dependent Downregulation of CNTFR&#945; as Demonstrated by Western Blotting, Inhibition of Lysosomal Enzymes, and Immunocytochemistry

SorLA and CLC:CLF-1-dependent Downregulation of CNTFRÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â± as Demonstrated by Western Blotting, Inhibition of Lysosomal Enzymes, and Immunocytochemistry

SorLAとCLC：ウェスタンブロッティング、リソソーム酵素の阻害、および免疫細胞化学によって実証されるようにCNTFRαのCLF-1依存ダウンレギュレーション

The heterodimeric cytokine Cardiotrophin-like Cytokine:Cytokine-like Factor-1 (CLC:CLF-1) targets the glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored ...

Enhanced Sample Multiplexing of Tissues Using Combined Precursor Isotopic Labeling and Isobaric Tagging (cPILOT)

Enhanced Sample Multiplexing of Tissues Using Combined Precursor Isotopic Labeling and Isobaric Tagging cPILOT

拡張サンプル複合前駆同位体標識と同重体タグ付けを使用して組織の多重化（cPILOT）

There is an increasing demand to analyze many biological samples for disease understanding and biomarker discovery. Quantitative proteomics strategies ...

A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells

西部のしみが付くプロトコル造血幹細胞の数が少ない

Hematopoietic stem cells (HSCs) are rare cells, with the mouse bone marrow containing only ~25,000 phenotypic long term repopulating HSCs. A Western ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

高スループット、定量的なドットを使用して組織レベルで選択されたタンパク質の含有量の絶対測定のしみの分析 (おっ)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

A11-positive &#946;-amyloid Oligomer Preparation and Assessment Using Dot Blotting Analysis

A11-positive ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-amyloid Oligomer Preparation and Assessment Using Dot Blotting Analysis

A11 肯定的なアミロイド β オリゴマーの合成と評価を使用してドットのしみが付く分析

&#946;-amyloid (A&#946;) is a hydrophobic peptide with an intrinsic tendency to self-assemble into aggregates. Among various aggregates, A&#946; oligomer ...

Identification of Functional Protein Regions Through Chimeric Protein Construction

キメラ蛋白質の構築による機能性タンパク質領域の同定

The goal of this protocol encompasses the design of chimeric proteins in which distinct regions of a protein are replaced by their corresponding sequences ...

Characterization at the Molecular Level using Robust Biochemical Approaches of a New Kinase Protein

新しいキナーゼタンパク質の堅牢な生化学的アプローチを用いて分子レベルでの特性解析

Extensive whole genome sequencing has identified many Open Reading Frames (ORFs) providing many potential proteins. These proteins may have important ...