Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra NIH (DC014423 og DC016224) og Defense Advanced Research projekt agenturet RealNose projektet. YF boede på Duke University med finansiel støtte fra JSP'ER Program til at fremme strategiske internationale net skal fremskynde omsætning af talentfulde forskere (R2801). Vi takker Sahar Kaleem til redigering af manuskriptet.

1. Hana3A celler kultur
<ol><li>Forberede M10 (Minimum afgørende Medium (MEM) plus 10% v/v føtal bovint serum (FBS)) og M10PSF (M10 plus 100 µg/mL penicillin-streptomycin og 1,25 µg/mL amphotericin B).</li>
	<li>Kultur celler i 10 mL af M10PSF i en 100 mm celle kultur fad i en inkubator, indstillet på 37 ° C og 5% kuldioxid (CO2).</li>
	<li>Opdele celler hver 2 dage på en 20% ratio: når 100% sammenløbet af celler (ca 1,1 x 107 celler) er observeret under et fasekontrast mikroskop, aspire ...

Opfattelsen af lugt er grundlæggende afhængig af aktivering af ORs. Dermed, forståelse af deres funktionalitet er krævede hen til knæk de komplekse mekanismer, som hjernen bruger til at opfatte sin flygtige kemiske miljø. Men forståelsen af denne proces er blevet hæmmet af vanskelighederne med at etablere en robust metode til at screene OR repertoire for funktionalitet mod Duftenes in vitro-. Celle overflade og heterolog udtryk af ORs er blevet delvist løst ved oprettelsen af mærket receptorer<sup clas...

Lugtesansen giver mulighed for terrestriske dyr til at interagere med deres flygtige kemiske miljø til kørsel adfærd og følelser. Fundamentalt, lugt afsløring proces begynder med den første interaktion af lugtstof molekyler med det olfaktoriske system, på niveauet af lugtstof receptorer (ORs)1. I pattedyr udtrykkes ORs individuelt i olfaktoriske sensoriske neuroner (OSNs) beliggende i Lugtepithelet2. De tilhører familien G-protein koblet receptor (GPCR) og mere præcist den rhodopsin-lignende undergruppe (også kaldet klasse A). ORs par med den stimulerende G protein Golf hvis aktivering fører til cAMP produktion efterfulgt af åbningen af cykliske nukleotid gated-kanaler og generation af handling potentialer. Det er accepteret, at en lugt percept bygger på et bestemt mønster af aktiverede ORs3,4 og derfor lugt anerkendelse følger en kombinatorisk kodning ordningen, hvor en OR kan aktiveres ved et sæt af Duftenes og én lugtstof kan aktivere en kombination af ORs. Og gennem sådanne kombinatorisk kodning, det er postuleret at organismer kan registrere og skelne mellem et utal af flygtige lugt molekyler. En af nøglerne til forståelsen af hvordan lugt opfattes er at forstå, hvordan og hvilke ORs er aktiveret af en given lugt.
I et forsøg på at belyse lugtstof- eller interaktioner, in vitro-funktionelle assays har spillet en væsentlig rolle. Identifikation af agonist lugtende ligander for sjældne ORs (OR nedtrapning orphanization) har været en meget aktiv inden for de sidste tyve år, ved hjælp af forskellige in vitro ex vivo og in vivo funktionelle assays5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
In vitro assay systemer er bedst egnet til den detaljerede funktionelle karakterisering af ORs, herunder identifikation af funktionelle domæner og kritisk rester af ORs, såvel som potentielle ingeniørmæssige anvendelser. Dog, yderligere udvikling af værdifulde in vitro-systemer til ORs har været en udfordring, dels på grund af vanskeligheder med dyrkningsbaserede OSNs og funktionelle udtryk af ORs i heterolog celler. Den første udfordring var at fastlægge protokoller, der er tilladt for celle overflade udtryk for funktionelle ORs i kortlægningen af lugtstof-OR interaktioner. En række uafhængige grupper har udnyttet forskellige tilgange5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. Et af de tidligste resultater blev foretaget af Krautwurst et al. i markeret N-terminalen af ORs med en forkortet sekvens af rhodopsin (Rho-tag) og observeret en forbedret overflade udtryk i menneskelige embryonale nyre (HEK) celler13. Ændringer til koden knyttet til OR sekvens er stadig en sti udforskes for at forbedre OR udtryk og funktionalitet19,21. Saito mfl. derefter identificeret receptor-transport protein 1 (RTP1) og RTP2, som letter OR handel. 22 en kortere version af RTP1, kaldet RTP1S, har også vist sig at være endnu mere effektiv end den oprindelige protein23. Udviklingen af en cellelinje (Hana3A), som stabilt udtrykker Golf, REEP1, RTP1 og RTP2 24, kombineret med brugen af cyklisk adenosin fra (cAMP) journalister har muliggjort identifikation af lugtstof-OR interaktioner. Den mekanisme, hvormed RTP receptorgruppen af proteiner fremmer celle overflade udtryk af ORs stadig skal fastlægges.
En advarsel af disse etablerede metoder er at de er afhængige af lugtstof stimulation i flydende fase, hvilket betyder at Duftenes pre opløses i en stimulation medium og stimulere cellerne ved at erstatte mediet. Dette er meget forskellige fra de fysiologiske tilstande hvor lugtstof molekyler nå Lugtepithelet i vapor fase og aktivere ORs ved opløsning i næseslimhinden. For at mere ligner fysiologisk relevante stimulus eksponering, Sanz et al.20 foreslås en analyse baseret på vapor stimulation ved at anvende en dråbe af lugtstof løsning at hænge under indersiden af plastfolie placeret på toppen af celle brønde. De indspillede calcium svar ved at overvåge fluorescens intensitet. Denne metode var først til at bruge air-fase lugtstof stimulation, men det tillade ikke en stor screening af OR aktivering.
Her, udviklet vi en ny metode, der muliggør real-time overvågning af in vitro-OR aktivering via damp fase lugtstof stimulation af Glosensor assay (figur 1). Denne analyse har været anvendt tidligere i forbindelse med flydende lugtstof stimulation18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. luminometrisk overvågning kammer er først ekvilibreres med forstøvet lugtstof før pladen læsning (figur 1A). Lugtstof molekyler er derefter solvated i bufferen, badning Hana3A celler, der udtrykker eller interesse, RTP1S og Glosensor proteiner (figur 1B). Hvis lugtstof er en agonist i regionerne, vil eller skifte til en aktiveret kropsbygning og binde Golf, aktivering adenylyl cyclase (AC) og i sidste ende medføre lejr niveauer til at stige. Denne stigende cAMP vil binder til og aktivere Glosensor proteinet til at generere luminescence katalysere luciferin. Denne luminescence registreres derefter af en luminometrisk og muliggør OR aktivering overvågning. Denne metode er af stor interesse i forbindelse med OR deorphanization som det bringer in vitro-systemer tættere på den fysiske opfattelse af lugte.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Olfaktoriske perception begynder med samspillet mellem duftstoffer med lugtstof receptorer (eller) udtrykt af olfaktoriske sensoriske neuroner (OSN). Lugt anerkendelse følger en kombinatorisk kodning ordningen, hvor en OR kan aktiveres ved et sæt af Duftenes og én lugtstof kan aktivere en kombination af ORs. Gennem sådanne kombinatorisk kodning, kan organismer registrere og skelne mellem et utal af flygtige lugt molekyler. En lugt ved en given koncentration kan således betegnes ved en aktivering mønster af ORs, der er specifikke for hver lugt. I forstand, revner de mekanismer, som hjernen bruger til at opfatte lugt kræver forståelse lugtstof-OR interaktioner. Dette er grunden til, at Fællesskabets lugtesansen er forpligtet til at "de-orphanize" Disse receptorer. Konventionelle in vitro-systemer anvendes til at identificere lugtstof- eller interaktioner har udnyttet kvægbruget celle medier med lugtstof, som er forskellig fra den naturlige påvisning af lugte via damp Duftenes opløsning i næseslimhinden før interagere med ORs. Her, beskriver vi en ny metode, der giver mulighed for tidstro overvågning af OR aktivering via damp-fase duftstoffer. Vores metode er baseret på måling lejr frigivelse af luminescence ved hjælp af Glosensor assay. Det broer nuværende huller mellem in vivo og in vitro-metoder og danner grundlag for en biomimetiske flygtige kemiske sensor.

Vi gennemgået tre mus ORs, Olfr746, Olfr124 og Olfr1093 reaktion ved hjælp af cinnamaldehyd damp stimulation (figur 3). Samtidig, vi brugte en tom vektor kontrol (Rho-pCI) til at forsikre, at de testede ORs lugtstof-induceret aktiviteter var specifikke (fig. 3A). Real-time aktivering af ORs på vapor lugtstof stimulus blev overvåget over 20 måling cyklusser. Data for hver blev godt først normaliseret til tomme vektor kontrol i gennemsnit v?...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fysiologisk, aktiveres lugtstof receptorer af lugtstof molekyler inhaleret i fasen for damp. Dog anvender mest in vitro-systemer flydende fase lugtstof stimulation. Vi præsenterer her, en metode, der giver mulighed for real-time in vitro-overvågning af lugtstof receptor aktivering efter lugtstof stimulation i vapor fase.

Real-time i Vitro overvågning af lugtstof Receptor aktivering af en lugtstof i fasen for damp

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Vores protokol gør det muligt at måle påvisning og diskrimination af flygtige lugte med et panel af lugt receptorer. Denne metode åbner mulighed for at udvikle odorant receptor-baserede biosensorer. Denne teknik giver real-time in vitro overvågning af odorant receptor aktivering på odorant molekyler i dampfase.Det udfylder kløften mellem in vitro og in vivo tilgange. Denne metode kan bruges til at forstå kinetik af hændelser, der fører til lugt perception, herunder den rolle, mucosal metaboliske enzymer. Til at begynde, forberede M10 og M10 PSF i henhold til manuskriptet.Celler dyrkes i 10 milliliter M10 PSF ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. Overhold kulturskålen under et fasekontrastmikroskop. Når den når 100%sammenløb, opdeles cellerne til en lavere koncentration ved at aspirere medierne og vaske cellerne forsigtigt med 10 milliliter PBS.Derefter aspirere PBS og tilsæt tre milliliter trypsin-EDTA. Lad det reagere i ca. et minut, indtil cellerne tager afstand fra skålen. Tilføj fem milliliter M10 for at inaktivere trypsin, og pipette op og ned for at løsne cellerne fastgjort til skålen.De otte milliliter cellesuspension overføres fra skålen til et 15-milliliterrør, og røret centrifugeres ved 200 gange G i fem minutter. Inspirer supernatanten og resuspend cellerne i fem milliliter M10 PSF ved at pipettere op og ned for at bryde enhver cellemasse op. Undgå at skabe bobler i røret.For at opnå 20% sammenløb af celler, tilsæt ni milliliter M10 PSF i en ny 1, 000-millimeter cellekultur skål, og overføre en milliliter af den opslæmrede celleopløsning. Inkubere ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. Denne parabol, siddende på 20% sammenløb, vil nå 100% sammenløb i 48 timer.Placer skålen under et fasekontrastmikroskop, der skal observeres. Tag 1/10 af 100% celle sammenløb kultur parabol. Aspirere mediet og vask cellerne forsigtigt med 10 milliliter PBS.Derefter behandle cellerne med trypsin-EDTA og M10, centrifuge, og behandle igen med M10 PSF som tidligere udført. For at realisere en 96-brønd plade, tilsæt 500 mikroliter fra de fem milliliter resuspenderede celler til 5,5 milliliter frisk M10 PSF. Bland cellerne og M10 PSF uden at generere luftbobler.Pipette 50 mikroliter af de fortyndede suspenderede celler ind i hver brønd af 96-brøndpladen ved hjælp af en multikanalpipette. Inkubere natten over ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. Først skal du placere den 96-brøndplade, der dyrkes natten over under et fasekontrastmikroskop, observere cellesammenløbet, og sørg for, at det er mellem 30% og 50%Forbered en første transfektionsblanding i et 1,5 milliliterrør, der indeholder de plasmider, der er fælles for hele pladen i henhold til manuskriptet.Rho-pCi er en tom-vektor negativ kontrol, og Olfr1377 er en positiv kontrol kendt for at reagere på den testede odorant acetophenone. Opdel blandingen i to transfektionsblandinger, der indeholder en af kontrolplasmiderne. Forbered endnu en transfektionsblanding indeholdende 500 mikroliter MEM og 20 mikroliter lipofectamin 2000 reagens.Tilføj halvdelen af den anden blanding til hver reservoir godt og forsigtigt blandes ved pipettering op og ned. Rørkuber røret i 15 minutter ved stuetemperatur. Tilsæt fem milliliter M10 for en 96-brøndplade.Tilsæt 2,5 milliliter i hver reservoir godt og bland forsigtigt. Udskift M10 PSF i den tidligere belagte 96-brøndplade med 50 mikroliter af det endelige transfektionsmedie. Inkubere natten over ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid.Åbn derefter døren til luminometeret, og sæt det rør, der er forbundet til vakuumpumpen. Støvsug kammeret af luminometeret natten over. Efter transinfektion skal du observere 96-brøndpladen under et fasekontrastmikroskop for at sikre et celle sammenløb mellem 60% og 100%Forbered stimuleringsopløsningen af Hanks balanced saltopløsning indeholdende 10 millimolar HEPES og fem millimolar D-glukose.Fjern transfektionsmediet fra 96-brøndpladen, og vask cellerne ved at tilsætte 50 mikroliter frisk stimulationsopløsning til hver brønd. For at fortynde GloSensor cAMP reagensløsningen skal der pipettes 2,75 milliliter af stimuleringsopløsningen til et fem milliliterrør, og der tilsættes 75 mikroliter af cAMP-reagensopløsningen. Fjern stimuleringsopløsningen fra brøndene, og tilsæt 25 mikroliter fortyndet cAMP reagensopløsning til hver brønd.Inkuber 96-brøndpladen ved stuetemperatur i et mørkt og lugtfrit miljø i to timer. Først fortyndes odorant acetophenone til 1% i 10 milliliter mineralsk olie og hætte røret. Før afslutningen af cAMP reagens inkubationstid, tilsættes 25 mikroliter af lugtopløsningen til hver brønd i en ny 96-brøndplade.Derefter placere denne odorant plade i luminometer kammer i fem minutter til at ligevægte kammeret med flygtige odorant molekyler. Indstil luminometeret til at registrere luminescensen med nul sekunders forsinkelse under 20 cyklusser med 90-sekunders plademåling med 0,7 sekunders interval mellem cyklusser. Lige før du læser pladen, skal du fjerne lugtpladen fra kammeret.I den 96-brønd plade, der indeholder de transficerede celler, tilsættes 25 mikroliter af lugtmiddel i rummet mellem brøndene, og hurtigt sætte pladen tilbage i kammeret. Start luminescensmålingen af alle brønde i 20 cyklusser inden for 30 minutter. Efter luminescensmålingen fjernes det resterende lugtmiddel inde i luminometeret ved at støvsuge lugtstoffer i læsekammeret i udstrakt grad i mindst to timer.Udskift med frisk luft ved at sende trykluft i fem minutter, før inkubering den næste odorant for at undgå krydskontaminering af lugt flygtige stoffer. Hvis du vil starte dataanalyse, skal du eksportere dataene fra luminometersoftwaren. Gennemsnitlig replikaterne af den samme OR for hver optagelsestid.Hvis du vil beregne det normaliserede OR-svar på et eventuelt kontrolelement, skal du dividere den tomme vektorgennemsnitte værdi med den OR-beregnede værdi på hver registreringstid. Normaliser hver ELLER-reaktion på deres basale aktivitet ved at dividere det gennemsnitlige OR-svar ved nul sekunder med hver optagelsestidsrespons. Hvis du vil opnå en enkelt ELLER-svarværdi for kurven for hver OR, skal du lægge alle luminescensværdierne for hver optagelsestid for hver OR for at få området under kurven.I dette eksperiment, real-time aktivering af mus O'er på damp odorant stimulus blev overvåget over 20 måling cykler. En tom vektor kontrol blev brugt til at sikre, at lugt-induceret aktiviteter af de testede ORs var specifikke. Dataene for hver brønd blev først normaliseret til den tomme vektorkontrolgennemsnit værdi for hver cyklus.Derefter, at sammenligne forskellige ORs's svar, dataene blev normaliseret til OR niveauer af basal aktivitet i denne analyse. Enkeltaktiveringsværdier for hver ENKELT OR blev beregnet ved at beregne området under kurven for hver ENKELT ELLER ved at opsummere emissionsværdierne for alle målecyklusser. Derudover, dosis-afhængige svar kan måles ved hjælp af stigende lugtdoser.Olfr1377's respons på acetophenone stimulation ved fem koncentrationer blev registreret. Kun de tre højere koncentrationer var i stand til at aktivere Olfr1377. Den rene sammensatte stimulation viser en tendens til at nedsætte OR respons over tid, sandsynligvis på grund af celletoksicitet.Under trinnet, bør du tilføje den fortyndede lugt mellem brønden, og være parat til at starte hurtigt optagelsen af pladen. Tiden mellem lugtgener og overvågning bør minimeres og konstant mellem to forsøg. I atria celler er biofarligt materiale, så minde om at bortskaffe cellerne i de relevante apoteker.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Laser-induceret Rygmarvsskader model til opgørelse Mekanismer axon Degeneration i realtid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforeret Patch-clamp Registrering af Mouse Olfactory sensoriske neuroner i Intakt neuroepithelium: Funktionel analyse af neuroner udtrykker en identificeret odorantreceptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

En protokol til Administration af Real-Time fMRI Neurofeedback træning

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Analyse til måling af nukleocytoplasmisk transport i realtid inden for motor neuronlignende NSC-34 celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Live-celle måling af lugtstof Receptor aktivering ved hjælp af en Real-time lejr Assay

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Lokalisering af odorantreceptorgener i locustantennet af RNA<em&gt; I situ</em&gt; Hybridisering

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okulær kinematik målt ved In Vitro Stimulation af hjernenerver i skildpadden

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...