Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door subsidies van NIH (DC014423 en DC016224) en het Defense Advanced Research Project Agentschap RealNose-Project. YF bleef aan de Duke University met financiële steun van JSPS programma voor de bevordering van strategische internationale netwerken voor het versnellen van de omloop van getalenteerde onderzoekers (R2801). Wij danken Sahar Kaleem voor het bewerken van het manuscript.

1. Hana3A cellen cultuur
<ol><li>Bereiden M10 (Minimum essentiële Medium (MEM) plus 10% v/v foetale runderserum (FBS)) en M10PSF (M10 plus 100 µg/mL penicilline-streptomycine en 1,25 µg/mL amfotericine B).</li>
	<li>Cultuur van de cellen in 10 mL van de M10PSF in een 100 mm cel cultuur schotel in een incubator vastgesteld op 37 ° C en 5% kooldioxide (CO2).</li>
	<li>Verdeel de cellen om de 2 dagen op een 20%-verhouding: bij 100% samenvloeiing van cellen (ongeveer 1.1 x 107 cellen) wordt waarge...

De perceptie van geur is fundamenteel afhankelijk van de activering van ultraperifere regio's. Bijgevolg, begrip van hun functionaliteit is vereist voor spleet naar de complexe mechanismen waarmee de hersenen zijn vluchtige chemische omgeving waarnemen. Echter heeft het begrip van dit proces belemmerd door de moeilijkheden bij het vaststellen van een robuuste methode om het scherm van het repertoire van de OR voor functionaliteit tegen odorant in vitro. Cel oppervlak en heterologe expressie van ultraperifere reg...

De betekenis van geur kunt landdieren om te interageren met hun vluchtige chemische omgeving station gedrag en emoties. Fundamenteel, is het detectieproces geur begint met de allereerste interactie van odorant moleculen met de olfactorische systeem, op het niveau van odorant receptoren (ORs)1. ORs worden individueel zoogdieren uitgedrukt in olfactorische sensorische neuronen (OSNs) gelegen in de olfactorische epitheel2. Zij behoren tot de familie van de G-eiwit gekoppelde receptor (GPCR) en precies te zijn naar de subgroep van rodopsine-achtige (ook wel klasse A). ORs paar met de stimulerend G eiwit Golf wiens Activering tot cAMP productie leidt, gevolgd door de opening van cyclische nucleotide gated kanalen en de generatie van de actie potentieel. Het is geaccepteerd dat een geur percept is afhankelijk van een specifiek patroon van geactiveerde ORs3,4 en geur erkenning een combinatorische coderingsschema dat volgt, waar een OR kan worden geactiveerd door een reeks van reukstoffen en één odorant kunt activeren een combinatie van ultraperifere regio's. En door middel van dergelijke combinatorische codering, het is gepostuleerd dat organismen kunnen detecteren en onderscheid tussen een groot aantal vluchtige geur moleculen maken. Een van de sleutels tot het inzicht hoe geuren worden waargenomen is te begrijpen hoe en die ultraperifere regio's worden geactiveerd door een bepaalde geur.
In een poging om het verhelderen van odorant- of interacties, in vitro functionele testen een essentiële rol hebben gespeeld. De identificatie van de agonist geurige liganden voor wees ORs (OR ambtshalve orphanization) is een zeer actief gebied geweest voor de afgelopen twintig jaar, door het gebruik van diverse in vitro, ex vivo en in vivo Functionele assays5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
In-vitro-assay systemen zijn zeer geschikt voor de gedetailleerde functionele karakterisering van ultraperifere regio's, met inbegrip van identificatie van de functionele domeinen en kritische residuen van ultraperifere regio's, evenals mogelijke waterbouwkundige toepassingen. Ontwikkeling van waardevolle in vitro systemen voor ultraperifere regio's is echter verder een uitdaging, gedeeltelijk als gevolg van problemen met kweken OSNs en functionele expressie van ultraperifere regio's in heterologe cellen geweest. De eerste uitdaging was geweest om de protocollen die voor de cel-oppervlakte expressie van functionele ultraperifere regio's in de toewijzing van odorant toegestaan-OR interacties. Een aantal onafhankelijke groepen hebben gebruikt verschillende benaderingen5,6,7,8,9,10,11,12, 14,,18,19,20. Een van de vroegste successen geboekt door Krautwurst et al. gelabeld in de N-terminus van ultraperifere regio's met een verkorte opeenvolging van rodopsine (Rho-tag) en een verbeterde oppervlakte expressie in menselijke embryonale nier (HEK) cellen13waargenomen. Voor de tag gekoppeld aan de volgorde van de OR aangebrachte wijzigingen is nog steeds een pad onderzocht voor het verbeteren van de OR expressie en functionaliteit19,-21. Saito et al.. dan vervoer van receptor eiwitten 1 (RTP1) geïdentificeerd en RTP2 die vergemakkelijken OR mensenhandel. 22 een kortere versie van RTP1, genaamd RTP1S, is ook aangetoond dat zelfs effectiever dan de oorspronkelijke eiwit23. De ontwikkeling van een cellijn (Hana3A) die stabiel Golf uitdrukt, REEP1 en RTP1, RTP2 24, in combinatie met het gebruik van cyclisch adenosinemonofosfaat (cAMP) verslaggevers identificatie van odorant heeft ingeschakeld-OR interacties. Het mechanisme waarmee de RTP-familie van eiwitten cel oppervlakte expressie van ultraperifere regio's bevordert moet nog worden bepaald.
Een waarschuwing voor deze gevestigde methoden is dat ze op de stimulatie van de odorant in vloeibare fase vertrouwen, wat betekent dat odorant vooraf in een medium stimulatie opgelost zijn en cellen stimuleren door vervanging van het medium. Dit is zeer verschillend van de fysiologische omstandigheden waar odorant moleculen de olfactorische epitheel in damp fase bereiken en activeren van ORs door ontbinding in de nasale mucosa. Als u wilt meer sterk gelijken op fysiologisch relevante stimulans blootstelling, Sanz et al.20 voorgesteld een bepaling op basis van damp stimulatie door toepassing van een daling van odorant oplossing om op te hangen onder de binnenzijde van een plastic folie geplaatst op de top van cel wells. Zij de calcium antwoorden opgenomen door controle van de intensiteit van de fluorescentie. Deze methode was de eerste die lucht-fase odorant stimulatie, maar deed het niet toestaan dat een grote screening van OR activering.
Hier, ontwikkelden we een nieuwe methode waarmee real-time bewaking van in vitro OR activering via damp fase odorant stimulatie door de bepaling van de Glosensor (Figuur 1). Deze bepaling heeft eerder is gebruikt in het kader van vloeibare odorant stimulatie18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. de controle kamer van de luminometer is eerste geëquilibreerd met gevaporiseerde odorant vóór plaat lezen(Figuur 1). Odorant moleculen zijn dan solvated in de buffer, Baden van Hana3A cellen, uiting geven aan de OR van belang, RTP1S en de Glosensor eiwitten (Figuur 1B). Als de odorant een agonist van de UPR's is, zal de OR overschakelen naar een geactiveerde bevleesdheid en binden de Golf, activeren de adenylyl cyclase (AC) en uiteindelijk leiden tot cAMP niveaus te stijgen. Dit stijgende kamp zal binden aan en activeer het eiwit Glosensor voor het genereren van luminescentie luciferine katalyseren. Deze luminescentie wordt vervolgens geregistreerd door de luminometer en kan OR activering. Deze methode is van groot belang in het kader van OR deorphanization, zoals het in vitro systemen dichter bij de natuurlijke waarneming van geuren brengt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Olfactorische waarneming begint met de interactie van odorant met odorant receptoren (of) uitgedrukt door olfactorische sensorische neuronen (OSN). Geur erkenning volgt een combinatorische coderingsschema dat, waar een OR kan worden geactiveerd door een reeks van odorant en één odorant kan het activeren van een combinatie van ultraperifere regio's. Door dergelijke combinatorische codering, kunnen organismen detecteren en onderscheid maken tussen een groot aantal vluchtige geur moleculen. Dus, een geur met een bepaalde concentratie kan worden beschreven door een patroon voor activering van ultraperifere regio's, die specifiek is voor elke geur. In die zin, het kraken van de mechanismen die de hersenen gebruikt voor het waarnemen van geur vereist het begrip odorant-OR interacties. Dit is de reden waarom de reukzin Gemeenschap streeft naar "--orphanize" deze receptoren. Conventionele in vitro systemen gebruikt voor het identificeren van odorant- of interacties drachtige cel media met odorant, hebben gebruikt die verschilt van de natuurlijke detectie van geuren via damp odorant ontbinding in nasale mucosa voor interactie met ORs. Hier beschrijven we een nieuwe methode waarmee real-time bewaking van OR activering via damp-fase odorant. Onze methode is afhankelijk van de cAMP release door luminescentie met behulp van de bepaling van de Glosensor meten. Het huidige verschillen tussen de in vivo en in vitro benaderingen overbrugt en vormt de basis voor een biomimetische vluchtige chemische sensor.

Wij onderzocht de reactie van drie muis ORs, Olfr746, Olfr124 en Olfr1093 met behulp van cinnamaldehyde damp stimulatie (Figuur 3). Gelijktijdig, gebruikten we een lege vectorbestrijding (Rho-pCI) om te verzekeren dat de activiteiten van odorant-geïnduceerde van de geteste ultraperifere regio's specifieke (Figuur 3A). De real-time activering van de ultraperifere regio's op damp odorant stimulans was gecontroleerde meer dan 20 meting cycli. De g...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fysiologisch, worden odorant receptoren geactiveerd door odorant moleculen in de fase van de damp ingeademd. Echter, meest in vitro systemen gebruiken vloeibare fase odorant stimulatie. Hier presenteren we een methode waarmee in vitro bewaking in real-time van odorant receptor activering op odorant stimulatie in damp fase.

Real-Time In Vitro Monitoring van Odorant Receptor activering door een Odorant in de damp-fase

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Ons protocol maakt het mogelijk om detectie en discriminatie van vluchtige geuren te meten met een panel van geurreceptoren. Deze methode opent de mogelijkheid om geurreceptorgebaseerde biosensoren te ontwikkelen. Deze techniek maakt real-time in vitro monitoring van geurreceptor activering op geurige moleculen in dampfase.Het vult de kloof tussen in vitro en in vivo benaderingen. Deze methode kan worden gebruikt om de kinetiek van gebeurtenissen die leiden tot geurperceptie te begrijpen, met inbegrip van de rol van slijmvlies metabole enzymen. Om te beginnen, bereid M10 en M10 PSF volgens het manuscript.Cellen worden gekweekt in 10 milliliter M10 PSF bij 37 graden Celsius en 5% kooldioxide. Observeer het kweekgerecht onder een contrastmicroscoop voor fases. Wanneer het bereikt 100%samenvloeiing, split de cellen tot een lagere concentratie door aspirating de media en het wassen van de cellen zachtjes met 10 milliliter PBS.Dan aspirate de PBS en voeg drie milliliter trypsin-EDTA. Laat het ongeveer een minuut reageren totdat de cellen zich van de schotel distantiëren. Voeg vijf milliliter M10 toe om de trypsine te activeren en pipet op en neer om de cellen aan de schotel los te maken.Breng de acht milliliter celsuspensie van de schotel naar een buis van 15 milliliter en vercentrifugeer de buis vijf minuten lang op 200-keer G. Aspirate de supernatant en resuspend de cellen in vijf milliliter van M10 PSF door pipetting op en neer te breken elke celmassa. Vermijd het creëren van bubbels in de buis.Om 20% samenvloeiing van cellen te verkrijgen, voeg negen milliliter M10 PSF in een nieuwe 1, 000-millimeter celkweekschotel, en breng één milliliter van de geresuspended celoplossing over. Incubeer bij 37 graden Celsius en 5%kooldioxide. Dit gerecht, gezeten op 20%samenvloeiing, zal bereiken 100% samenvloeiing in 48 uur.Plaats de schotel onder een fase contrast microscoop te observeren. Neem 1/10 van de 100% cel samenvloeiing cultuur gerecht. Spoel de media aan en was de cellen voorzichtig met 10 milliliter PBS.Behandel vervolgens de cellen met trypsine-EDTA en M10, centrifuge en behandel opnieuw met M10 PSF zoals eerder uitgevoerd. Om een 96-well plaat te realiseren, voeg 500 microliter uit de vijf milliliter van geresuspendeerde cellen tot 5,5 milliliter verse M10 PSF. Meng de cellen en M10 PSF zonder het genereren van luchtbellen.Pipette 50 microliters van de verdunde zwevende cellen in elke put van de 96-put plaat met behulp van een multichannel pipet. Incubeer 's nachts bij 37 graden Celsius en 5% kooldioxide. Ten eerste, plaats de 96-well plaat gekweekt 's nachts onder een fase contrastmicroscoop, observeer de cel samenvloeiing, en zorg ervoor dat het tussen de 30%en 50%Bereid een eerste transfectie mix in een 1,5-milliliter buis die de plasmiden gemeenschappelijk voor de gehele plaat volgens het manuscript bevat.Rho-pCi is een lege vector negatieve controle, en Olfr1377 is een positieve controle bekend om te reageren op de geteste geurige acetophenon. Splits de mix in twee transfectiemixen met een van de controleplasmiden. Bereid een tweede transfectiemix voor met 500 microliter MEM en 20 microliter lipofectamine 2000 reagens.Voeg de helft van de tweede mix aan elk reservoir goed en voorzichtig mengen door pipetting op en neer. Incubeer de buis gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Voeg vijf milliliter M10 toe voor één plaat van 96 put.Voeg 2,5 milliliter in elk reservoir goed en meng zachtjes. Vervang de M10 PSF in de eerder vergulde 96-put plaat door 50 microliter van de uiteindelijke transfectiemedia. Incubeer 's nachts bij 37 graden Celsius en 5% kooldioxide.Open vervolgens de deur van de luminometer en plaats de buis die op de vacuümpomp is aangesloten. Vacuüm de kamer van de luminometer 's nachts. Na transfectie, observeer de 96-put plaat onder een fase contrastmicroscoop om een cel samenvloeiing tussen 60%en 100% Bereid de stimulatie oplossing van Hank's Balanced Salt Solution met 10-millimolar van HEPES en vijf millimolar van D-glucose.Verwijder het transfectiemedium van de 96-putplaat en was de cellen door 50 microliter verse stimulatieoplossing aan elke put toe te voegen. Om de GloSensor cAMP reagentageoplossing te verdunnen, u 2,75 milliliter van de stimulatieoplossing in een buis van vijf milliliter gebruiken en 75 microliter van de cAMP-reagensoplossing toevoegen. Verwijder de stimulatieoplossing uit de putten en voeg 25 microliter verdunde cAMP reagensoplossing toe aan elke put.Broed de 96-put plaat bij kamertemperatuur in een donkere en geurvrije omgeving gedurende twee uur. Verdun eerst het geurige acetophenone tot 1% in 10 milliliter minerale olie en dop de buis. Voeg vóór het einde van de cAMP-reagentindiatietijd 25 microliters van de geuroplossing toe aan elke put in een nieuwe 96-putplaat.Plaats vervolgens deze geurplaat vijf minuten in de luminometerkamer om de kamer te equilibreren met vluchtige geurmoleculen. Stel de luminometer in om de luminescentie op te nemen met nul seconden vertraging gedurende 20 cycli van 90-seconden plaatmeting, met 0,7 seconden interval tussen cycli. Vlak voor het lezen van de plaat, verwijder de geurplaat uit de kamer.Voeg in de 96-putplaat met de transfected cellen 25 microliters geurstof toe in de ruimte tussen de putten en zet de plaat snel terug in de kamer. Start de luminescentiemeting van alle putten gedurende 20 cycli binnen 30 minuten. Verwijder na de luminescentiemeting de resterende geurstof in de luminometer door geurstoffen in de leeskamer gedurende ten minste twee uur uitgebreid te stofzuigen.Vervang met frisse lucht door het verzenden van perslucht gedurende vijf minuten voor het uitbroeden van de volgende geurstof om kruisbesmetting van geur vluchtige stoffen te voorkomen. Exporteer de gegevens uit de luminometersoftware om met gegevensanalyse te beginnen. Gemiddeld de replica's van dezelfde OR voor elke opnametijd.Als u de genormaliseerde OF-reactie op een eventueel besturingselement wilt berekenen, deelt u de waarde met lege vectorengemiddelde op elke opnametijd over de door OR gemiddelde waarde. Normaliseer elke OR-reactie op hun basale activiteit door de gemiddelde OR-respons op nul seconden te delen tot elke opnametijdrespons. Als u één OR-responswaarde voor de curve van elke OR wilt verkrijgen, somt u alle luminescentiewaarden van elke opnametijd voor elke OK op om het gebied onder de curve te verkrijgen.In dit experiment werd de real-time activering van mice ORs op damp geur stimulus gecontroleerd over 20 meetcycli. Een lege vectorcontrole werd gebruikt om ervoor te zorgen dat de geur-geïnduceerde activiteiten van de geteste ORs specifiek waren. De gegevens voor elke put werden eerst genormaliseerd naar de lege vectorcontrolegemiddelde waarde voor elke cyclus.Vervolgens, om verschillende ORs'reacties te vergelijken, werden de gegevens genormaliseerd naar de OR-niveaus van basale activiteit in deze test. De waarden voor afzonderlijke activering voor elke OR werden berekend door het gebied onder de curve voor elke OR te berekenen door de emissiewaarden van alle meetcycli op te sommen. Bovendien kunnen dosisafhankelijke reacties worden gemeten met behulp van toenemende geurdoses.De respons van Olfr1377 op acetophenone stimulatie bij vijf concentraties werd geregistreerd. Alleen de drie hogere concentraties konden Olfr1377 activeren. De zuivere samengestelde stimulatie toont een neiging om de OK-respons na verloop van tijd te verminderen, waarschijnlijk als gevolg van celtoxiciteit.Tijdens de stap moet u de verdunde geurstof tussen de put toevoegen en bereid zijn om snel te beginnen met het opnemen van de plaat. De tijd tussen geurige toevoeging en monitoring moet worden geminimaliseerd en constant tussen twee experimenten. In atria cellen zijn biohazardous materiaal, dus eraan te herinneren om de cellen te verwijderen in de juiste apotheken.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Odorant-geïnduceerde responsen Opgenomen van olfactorische receptor neuronen met behulp van de zuignap Pipet Techniek

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Volgen van veranderingen in de intracellulaire calciumconcentratie en Synaptic werkzaamheid in de Mollusc<em&gt; Aplysia</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Een<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-induced Spinal Cord Injury Model Mechanismen van axonale degeneratie Beoordeel in real-time

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Geperforeerde Patch-clamp-opname van de muis olfactorische sensorische neuronen in Intact neuroepithelium: functionele analyse van neuronen uiten van een geïdentificeerd Odorant Receptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Een Protocol voor de administratie van Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Assay voor het meten van nucleocytoplasmisch transport in realtime binnen motor neuronachtige NSC-34 cellen

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Live-cel meting van Odorant Receptor activering met behulp van een Real-time cAMP Assay

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Lokalisatie van Receptorgenen van Reukstof in Locustantenne door RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Oogbeschadigingen en/of Kinematics gemeten door In Vitro stimulatie van de craniale zenuwen in de schildpad

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identificatie van Dopamine D1-Alpha Receptor binnen knaagdier Nucleus Accumbens door een innovatieve RNA In Situ de technologie van de opsporing