Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

이 작품은 NIH (DC014423 및 DC016224)와 방위 고급 연구 프로젝트 기관 RealNose 프로젝트에서 교부 금에 의해 지원 되었다. YF 순환 재능 있는 연구원 (R2801)를 가속 화 하기 위해 전략적인 국제 네트워크 발전 위한 JSP 프로그램에서 재정 지원을 가진 듀크 대학에 머물렀다. 우리 감사 Sahar Kaleem 원고 편집.

1. Hana3A 셀 문화
<ol><li>M10 준비 (최소 필수 매체 (MEM) 플러스 10 %v / v 태아 둔감 한 혈 청 (FBS))와 M10PSF (m 10와 100 µ g/mL 페니실린-스 및 1.25 µ g/mL 암포 B).</li>
	<li>37 ° C와 5% 이산화탄소 (CO2)에서 설정 하는 인큐베이터에서 100 mm 셀 문화 접시에 M10PSF의 10 mL에 셀 문화.</li>
	<li>분할 셀 20% 비율로 매 2 일: 셀 (약 107 셀 x 1.1)의 100% 합류 단계 대조 현미경 관찰은, 미디어를 갈망 하 고 인산 염...

냄새의 인식을 근본적으로 ORs의 활성화에 따라 달라 집니다. 따라서, 그들의 기능에 대 한 이해는 뇌의 휘발성 화학 환경 인식에 사용 하는 복잡 한 메커니즘을 깰 필요 합니다. 그러나,이 과정의 이해는 생체 외에서 odorants. 에 대 한 기능 또는 레 퍼 토리에 강력한 방법 수립에 어려움에 의해 방해 되었습니다. 셀 태그 수용 체13,19 의 창조와 발견?...

냄새의 감각 지상파 동물을 그들의 휘발성 화학 환경 드라이브 행동과 감정에 작용할 수 있습니다. 근본적으로, 냄새 탐지 과정 odorant 수용 체 (ORs)1의 수준에 후 각 시스템과 odorant 분자의 첫 상호 작용으로 시작 됩니다. 포유류에서 ORs 개별적으로 후 각 감각 신경 (OSNs)2후 각 상피 위치한 표현 됩니다. 그들은 rhodopsin 같은 하위 가족 (클래스 A 라고도 함) 보다 정확 하 게 G-단백질 결합 수용 체 (GPCR) 가족에 속한다. ORs는 물질로 G 단백질 Golf 의 활성화 캠프 생산 주기적인 뉴클레오티드 문을 단 수로의 개통 및 활동 전위의 발생에 이르게 된 커플. 그것은 허용 냄새 percept 활성화 ORs,34 의 특정 패턴에 의존 하 고 따라서 냄새 인식와 조합 코딩 체계, 한 또는 odorants의 세트에 의해 활성화 될 수 있다와 하나의 odorant 활성화할 수 있는 ORs의 조합입니다. 그리고 이러한 조합 코딩을 통해 그것은 가정 하는 생물 감지 하 고 휘발성 냄새 분자의 무수 한 사이 차별. 냄새 인식 하는 방법을 이해 하는 열쇠 중 하나를 이해 하는 방법 및 ORs 주어진된 냄새에 의해 활성화 되는.
Odorant 명료 하 게 하려고-또는 상호 작용, 생체 기능 분석은 필수적인 역할을 했다. 고아 ORs (OR 드 orphanization)에 대 한 길 항 제 향기가 ligands의 식별 다양 한 생체 외에서, 비보, vivo에서 기능 분석 실험5,6,7 전을 통해 지난 20 년간 매우 활성 필드 되었습니다. ,8,9,10,11,12,13,,1415,16, 17.
생체 외에서 분석 결과 시스템은 ORs, 식별 기능 도메인 및 ORs, 잠재적인 엔지니어링 응용 프로그램의 중요 한 잔류물 등의 상세한 기능 특성에 가장 적합. 그러나, 추가 ORs 위한 귀중 한 생체 외에서 시스템의 개발 자란 OSNs와 어려움과 분리 셀에서 ORs의 기능적 표현 때문에 부분에 도전이 되었습니다. 첫 번째 도전 odorant의 매핑 기능 ORs의 세포 표면 표현에 대 한 허용 하는 프로토콜 설정 있 었-또는 상호 작용. 다양 한 접근5,6,7,,89,10,11,12을 활용 하는 독립적인 그룹 수 14,18,,1920. 초기 성과 중 하나는 Krautwurst 그 외 여러분에 의해 만들어진에 N-말단 ORs의 rhodopsin (Rho-태그)의 단축 시퀀스를 태그 하 고 인간 미 발달 신장 (HEK) 셀13에 향상 된 표면 식을 관찰. 유사 또는 시퀀스에 연결 된 태그를 여전히 OR 표현과 기능19,21을 향상을 위한 탐험 경로입니다. 사이토 외. 다음 수용 체 수송 단백질 1 (RTP1) 식별 및 RTP2 OR 매매를 용이 하 게. 22 RTP1, RTP1S, 라는의 짧은 버전 원래 단백질23보다 훨씬 더 효과적인 것으로 표시 되었습니다 또한. 개발 선의 셀 (Hana3A) Golf를 안정적으로 표현, REEP1, RTP1, RTP2 24, 순환 아데노신 monophosphate (캠프) 기자 들의 사용과 함께 odorant의 활성화-또는 상호 작용. 단백질의 RTP 가족 ORs의 세포 표면 표현 촉진 메커니즘 확인할 수 있다.
이러한 설립된 방법의 하나 주의할 그들이 odorant 자극 액체 단계에서 odorants 자극 매체에 미리 용 해 세포를 자극 하는 매체를 대체 하 여 의미에 의존입니다. 이 생리 적인 조건 odorant 분자 수증기 단계에서 후 각 상피에 도달 하 고 비 강 점 막에 의해 해산 ORs를 활성화 매우 다릅니다. 더 밀접 하 게 닮은 순수 관련 자극 노출, 펠 레 외.20 플라스틱 필름 셀 웰 스 상단에 배치의 내부 얼굴 아래 걸어 odorant 솔루션의 방울을 적용 하 여 증기 자극에 따라 분석 결과 제안. 그들은 형광 강도 모니터링 하 여 칼슘 응답을 기록 했다. 이 메서드는 공기 단계 odorant 자극을 사용 하 여 처음 하지만 또는 활성화의 큰 심사를 허용 하지 않았다.
여기, 우리는 Glosensor 분석 결과 (그림 1)에 의해 증기 위상 odorant 자극을 통해 생체 외에서 또는 활성화의 실시간 모니터링 하는 새로운 방법을 개발 했다. 이 분석 결과 이전 액체 odorant 자극18,19,25,26,,2728,29, 의 맥락에서 사용 되었습니다. 30 , 31. 모니터링 챔버는 루미 노의 플레이트 (그림 1A)를 읽기 전에 증발된 odorant와 equilibrated 처음 이다. Odorant 분자는 버퍼, 관심, RTP1S 및 Glosensor 단백질 (그림 1B) OR을 표현 하는 Hana3A 세포 목욕으로 solvated. odorant or 주 작동 근 이면 OR 전환 활성화 나 란 하 고 바인딩할 Golfadenylyl 있고 (AC), 활성화 되며 궁극적으로 캠프 레벨 상승 원인이. 이 상승 캠프 바인딩할 하 고 발광 소 catalyzing를 생성 하는 Glosensor 단백질을 활성화할 것 이다. 이 발광 다음는 루미 노에 의해 기록 되 고 또는 활성화 모니터링. 이 메서드는 또는 deorphanization의 문맥에 높은 관심의 냄새의 자연 인식에 생체 외에서 시스템 가까이 제공로 서.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

후 각 인식 odorant 수용 체와 odorants의 상호 작용으로 시작 (또는) 후 각 감각 신경 (OSN)에 의해 표현. 냄새 인식 조합 코딩 구성표, 어디 하나 또는 odorants의 세트에 의해 활성화 될 수 있다와 하나의 odorant ORs의 조합을 활성화할 수 있습니다 다음과 같습니다. 이러한 조합 코딩을 통해 생물 감지 하 고 휘발성 냄새 분자의 무수 한 사이 차별 수 있습니다. 따라서, 주어진된 농도에서 냄새는 각 냄새에, ORs의 활성화 패턴으로 설명할 수 있습니다. 그런 의미에서 두뇌를 사용 하 여 냄새 필요 이해 odorant 인식 메커니즘 크래킹-또는 상호 작용. 이 때문에 후각이 지역 사회는 "-orphanize" 이러한 수용 체. 기존의 체 외 시스템 odorant 식별 하는 데 사용-또는 상호 작용 이용 잠복기 셀 미디어 odorant, ORs와 상호 작용 하기 전에 비 강 점 막에 증기 odorants 해산을 통해 냄새의 자연 검색에서 별개입니다. 여기, 우리는 기상 odorants 통해 또는 활성화의 실시간 모니터링을 허용 하는 새로운 방법을 설명 합니다. 우리의 방법은 캠프 릴리스 Glosensor 분석 결과 사용 하 여 발광 측정에 의존 합니다. 그것은 현재 간격 vivo에서 그리고 생체 외에서 접근을 다리 고 biomimetic 휘발성 화학 센서에 대 한 기반을 제공 합니다.

우리는 3 개의 마우스 ORs, Olfr746, Olfr124 및 Olfr1093의 응답 상영 cinnamaldehyde 증기 자극 (그림 3)를 사용 하 여. 동시에, 우리는 테스트 ORs의 odorant 유발 활동은 특정 보장 빈 벡터 제어 (Rho-pCI) 사용 (그림 3A). 증기 odorant 자극 시 ORs의 실시간 활성화 모니터링된 20 측정 주기를 했다. 각 데이터 잘 했다 먼저 정규화 빈 벡터 제어 평균 값을 각 주기 (<...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

순수, odorant 수용 체 odorant 분자 수증기 단계에서 흡입에 의해 활성화 됩니다. 그러나, 대부분의 생체 외에서 시스템 활용 액체 단계 odorant 자극. 여기, 선물이 odorant 자극 기상에 따라 odorant 수용 체 활성화의 실시간 생체 외에서 모니터링 수 방법.

실시간 체 외 Odorant 수용 체 활성화는 Odorant 수증기 단계에서의 모니터링

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

우리의 프로토콜은 냄새 수용체 패널로 휘발성 냄새의 검출 및 차별을 측정 할 수 있습니다. 이 방법은 악취 수용체 기반 바이오 센서를 개발할 가능성을 열어줍니다. 이 기술은 증기 상에서 악취 분자에 악취 수용체 활성화의 실시간 체외 모니터링을 할 수 있습니다.그것은 체외와 생체 내 접근 사이의 간격을 채웁니다. 이 방법은 점막 대사 효소의 역할을 포함하여 악취 지각으로 이끌어 내는 사건의 운동학을 이해하는 데 이용될 수 있습니다. 시작하려면 원고에 따라 M10 및 M10 PSF를 준비하십시오.세포는 섭씨 37도및 이산화탄소 5%에서 M10 PSF의 10밀리리터로 배양됩니다. 상 대비 현미경으로 배양 접시를 관찰한다. 100%의 합류에 도달하면 세포를 미디어를 심고 PBS의 10 밀리리터로 부드럽게 세포를 세척하여 세포를 더 낮은 농도로 분할합니다.그런 다음 PBS를 흡인하고 트립신-EDTA의 3 밀리리터를 추가합니다. 세포가 접시에서 해리 될 때까지 약 1 분 동안 반응하게하십시오. 5 밀리리터의 M10을 추가하여 트립신을 비활성화하고 파이펫을 위아래로 사용하여 접시에 부착 된 세포를 분리합니다.접시에서 15 밀리리터 튜브로 셀 서스펜션 8밀리리터를 옮기고 튜브를 200회 G에서 5분간 원심분리합니다. 수퍼네티드를 흡인시키고 M10 PSF의 5밀리리터에서 세포를 재보페팅하여 세포 질량을 분해하도록 배관합니다. 튜브에 거품을 만들지 마십시오.세포의 20%의 합류를 얻으려면 새로운 1, 000mm 세포 배양 접시에 M10 PSF의 9밀리리터를 추가하고, 재중단된 세포 용액의 1밀리리터를 전달한다. 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 배양합니다. 20%의 합류로 자리한 이 요리는 48시간 만에 100%에 도달할 것입니다.접시를 위상 대비 현미경 아래에 놓아 관찰합니다. 100% 세포 합류 배양 접시의 1/10을 가져 가라. 미디어를 흡인하고 PBS의 10 밀리리터로 부드럽게 세포를 씻으십시오.그런 다음 트립신-EDTA 및 M10, 원심분리기로 세포를 치료하고 M10 PSF로 이전에 수행된 대로 다시 치료합니다. 한 개의 96웰 플레이트를 실현하려면, 5밀리리터의 재부유셀5밀리리터에서 5.5 밀리리터의 신선한 M10 PSF에 500 마이크로리터를 추가합니다.파이펫 50 마이크로리터는 멀티채널 파이펫을 사용하여 96웰 플레이트의 각 웰에 희석된 부유 세포의 마이크로리터를 삽입한다. 하룻밤 사이에 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 배양합니다. 먼저, 위상 대비 현미경으로 하룻밤 사이에 배양된 96웰 플레이트를 배치하고, 세포 합류를 관찰하고, 원고에 따라 전체 플레이트에 공통되는 플라스미드를 포함하는 1.5 밀리리터 튜브에서 첫 번째 경피 혼합물을 준비하여 30%와 50% 사이인지 확인한다.Rho-pCi는 빈 벡터 음성 제어이며, Olfr1377은 시험된 악취 아세토페논에 반응하는 것으로 알려진 양성 대조군이다. 대조군 플라스미드 중 하나를 포함하는 두 개의 투명 혼합물로 믹스를 분할합니다. MEM 500 마이크로리터와 리포펙타민 2000 시약의 20 마이크로리터를 포함하는 두 번째 형질 혼합물을 준비합니다.두 번째 믹스의 절반을 각 저장소에 잘 넣고 위아래로 파이프를 사용하여 부드럽게 섞습니다. 실내 온도에서 15 분 동안 튜브를 배양하십시오. 96웰 플레이트 1개에 M10 5밀리리터를 추가합니다.각 저수지에 2.5 밀리리터를 넣고 부드럽게 섞습니다. 이전에 도금된 96웰 플레이트의 M10 PSF를 최종 경질 매체의 50마이크로리터로 교체한다. 하룻밤 사이에 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 배양합니다.그런 다음 광미계의 문을 열고 진공 펌프에 연결된 튜브를 삽입합니다. 밤새 조명계의 챔버를 진공 청소기로 청소하십시오. 형질 전환 후, 위상 대비 현미경으로 96웰 플레이트를 관찰하여 60%에서 100%사이의 세포 합류를 보장하기 위해 HEPES의 10밀리머와 D-포도당의 5밀리머를 함유한 행크의 균형 잡힌 소금 용액의 자극 용액을 준비한다.96웰 플레이트에서 경피 배지를 제거하고 각 웰에 신선한 자극 용액 50 마이크로리터를 추가하여 세포를 세척합니다. GloSensor cAMP 시약 용액을 희석하기 위해 자극 용액의 파이펫 2.75 밀리리터를 5밀리리터 튜브에 넣고 cAMP 시약 용액의 75마이크로리터를 추가합니다. 우물에서 자극 용액을 제거하고 각 웰에 희석 된 cAMP 시약 용액 25 마이크로 리터를 추가합니다.어둡고 냄새가 없는 환경에서 실온에서 96웰 플레이트를 2시간 동안 배양합니다. 첫째, 미네랄 오일 의 10 밀리리터에 1 %로 냄새아 세트 토페논을 희석하고 튜브를 캡. cAMP 시약 인큐베이션 시간이 끝나기 전에 새로운 96웰 플레이트에 각 음취용액25마이크로리터를 추가합니다.그런 다음 이 냄새상 판을 광미계 챔버에 5분간 배치하여 휘발성 악취 분자로 챔버를 상형화합니다. 90초 플레이트 측정 20사이클 동안 0초의 지연으로 발광을 기록하도록 광도계를 설정하고 사이클 사이에 0.7초 간격을 두릅니다. 접시를 읽기 직전에 챔버에서 냄새 판을 제거하십시오.감염된 세포를 포함하는 96웰 플레이트에서, 우물 사이의 공간에 25 마이크로리터의 오취제를 추가하고 신속하게 챔버에 다시 플레이트를 넣습니다. 30분 이내에 20사이클 동안 모든 우물의 발광 측정을 시작합니다. 발광 측정 후, 적어도 2 시간 동안 광범위하게 독서 챔버에서 냄새를 진공 청소기로 진공 청소기 내부의 나머지 악취를 제거합니다.냄새 휘발성의 교차 오염을 피하기 위해 다음 냄새를 배양하기 전에 5 분 동안 압축 공기를 보내 신선한 공기로 대체하십시오. 데이터 분석을 시작하려면 광미계 소프트웨어에서 데이터를 내보냅니다. 각 녹화 시간에 대해 동일한 OR의 복제를 평균합니다.최종 컨트롤에 정규화된 OR 응답을 계산하려면 빈 벡터 평균 값을 각 레코딩 시간에 OR 평균 값으로 나눕니다. 각 기록 시간 응답에 0초로 평균 OR 응답을 나누어 기초 활동에 대한 각 OR 응답을 정규화합니다. 각 OR의 곡선에 대한 단일 OR 응답 값을 얻으려면 곡선 아래 영역을 얻기 위해 각 또는 에 대한 각 기록 시간의 모든 발광 값을 합산합니다.본 실험에서, 증기 냄새 자극시 마우스 ORs의 실시간 활성화는 20회 이상의 측정 주기를 모니터링하였다. 빈 벡터 제어는 시험된 ORs의 악취 유발 활동이 특정임을 보장하기 위해 사용되었다. 각 웰의 데이터는 먼저 각 주기에 대한 빈 벡터 제어 평균 값으로 정규화되었습니다.그런 다음 다른 ORs의 응답을 비교하기 위해 이 분석에서 데이터가 OR 수준의 기초 활동 수준으로 정규화되었습니다. 각 OR에 대한 단일 활성화 값은 모든 측정 주기의 배출 값을 합산하여 각 또는 곡선 아래 영역을 계산하여 계산되었습니다. 또한, 복용량 의존 응답 증가 냄새 복용량을 사용 하 여 측정될 수 있다.5개의 농도에서 아세토페논 자극에 대한 Olfr1377의 반응이 기록되었다. 만 세 높은 농도 Olfr1377을 활성화 할 수 있었다. 순수한 화합물 자극은 세포 독성으로 인해 시간이 지남에 따라 OR 반응을 감소시키는 경향을 나타낸다.단계 동안, 당신은 우물 사이에 희석 된 냄새제를 추가하고, 신속하게 접시의 녹음을 시작할 준비를해야합니다. 악취 첨가와 모니터링 사이의 시간을 최소화하고 두 실험 사이의 일정해야 합니다. atria 세포는 생체 내재 물질이므로 적절한 진료소에서 세포를 처분하도록 상기시켜줍니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

흡입 피펫 기법을 사용하여 강한 수용체 뉴런에서 기록 Odorant 유발 응답

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

연구

신경과학

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

연체 동물에서 세포 내 칼슘 농도와 시냅틱 효능의 모니터링 변경<em&gt; Aplysia</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 레이저에 의한 척수 손상 모델은 실시간으로 축삭 변성의 메커니즘을 평가하기 위해

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

본래 Neuroepithelium에서 마우스 강한 감각 뉴런의 천공 패치 클램프 녹음 : 확인 된 부 취제 수용체를 발현 뉴런의 기능 분석

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

관리의 실시간 fMRI Neurofeedback 훈련에 대 한 프로토콜

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

모터 뉴런과 유사한 NSC-34 세포 내에서 실시간으로 핵 세포질 수송을 측정하는 분석

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

라이브 셀 측정의 Odorant 수용 체 활성화를 사용 하 여 분석 결과 실시간 캠프

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

RNA에 의한 Locust Antenna 내의 악취 수용체 유전자의 국산화<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드 화

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

눈 기구학 생체 외에서 거북이에 두개골 신경의 자극에 의해 측정

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

탐지 기술 현장에서 혁신적인 RNA에 의해 설치류 핵 Accumbens에서 도파민 D1-알파 수용 체의 식별

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...