Name: excitation-scanning hyperspectral imaging microscopy to efficiently discriminate fluorescence signals
Uploaded: 2019-08-22T12:30:00
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저자는 NSF 1725937, NIH P01HL066299, NIH R01HL058506, NIH S10OD020149, NIH UL1 TR001417, NIH R01HL1370, AHA 18PRE34060, AHA 18PRE3406016의 지원을 인정하고 싶습니다.

1. 장치 설정
<ol><li>광원: 높은 출력과 높은 충돌(이러한 연구에 300W Xe 아크 램프가 사용)을 가진 광대역 스펙트럼 광원을 선택합니다.</li>
	<li>셔터(선택 사항): 광학 경로에 셔터를 추가하여 시간 경과 이미징을 위해 광표백을 줄입니다.</li>
	<li>튜닝 가능한 필터 시스템: 원하는 파장 조절 가능한 여기 범위(예: 360-485 nm)를 가능하게 하는 기계적 튜닝 어셈블리 및 박막 튜닝 필터(TFTF) 세트를 통합합...

여기-스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징 셋업의 최적 사용은 광경로의 구성에서 시작됩니다. 특히 광원, 필터(튜닝 및 이색), 필터 스위칭 방법 및 카메라의 선택은 사용 가능한 스펙트럼 범위, 가능한 스캔 속도, 검출기 감도 및 공간 샘플링을 결정합니다. 머큐리 아크 램프는 많은 여기 파장 피크를 제공하지만 평평한 스펙트럼 출력을 제공하지 않으며 NIST 추적 가능한 응답(38)으로 스펙트럼 이미지<s...

스펙트럼 이미징은 다양한 방법으로 수행될 수 있으며여러용어1, 2,3,4에의해 지칭된다. 일반적으로 스펙트럼 이미징은 적어도 2개의 공간 치수와 하나의 스펙트럼 차원에서 수집된 데이터를 말합니다. 다중 스펙트럼 및 하이퍼 스펙트럼 이미징은 파장 대역의 수 또는 스펙트럼 밴드가 연속적인지 여부에 따라 가장 자주 구별됩니다 1. 이 어플리케이션의 경우, 하이퍼스펙트럼 데이터는 여기(즉, 5nm)에 사용되는 각 대역통과 필터의 절반 이하의 전체 폭의 절반 이하의 중앙 파장의 간격으로 달성된 연속 파장 대역으로 획득한 스펙트럼 데이터로 정의됩니다. 14-20 nm 대역폭의 밴드패스 필터의 중심 파장 간격). 데이터 대역의 연속적인 특성을 통해 데이터 집합의 오버샘플링을 허용하므로 스펙트럼 도메인을 샘플링할 때 나이퀴스트 기준이 충족됩니다.
하이퍼 스펙트럼 이미징은 첫 번째 위성 위성과 함께 1970 년대와 1980년대에 NASA에 의해 개발되었다 5,6. 여러 연속 스펙트럼 대역에서 데이터를 수집하여 각 픽셀의 복사 스펙트럼을 생성할 수 있었습니다. 개별 부품의 광도 스펙트럼을 식별하고 정의함으로써 특성 스펙트럼에 의한 표면 물질을 감지할 수 있었지만, 이로 인해 신호의 변동과 같은 중간 신호의 제거도 가능해졌습니다. 대기 조건. 1996년 슈뢰크 등은 5개의 다른 형광단과 그 알려진 스펙트럼의 조합을 사용하여 표지된 염색체를 구별하기 위해 그들의 특성 스펙트럼을 사용하여 물질을 검출하는 개념을 생물학적 시스템에 적용했습니다. 스펙트럼 카요티핑7. 이 기술은 2000년에 Tsurui 등에서 조직 샘플의 형광 이미징을 위해 7개의 형광 염료와 단수 값 분해를 사용하여 각 픽셀을 스펙트럼의 선형 조합으로 참조에서 스펙트럼으로 분리하는 데 사용했습니다. 라이브러리8. 원격 감지 대응과 유사하게, 각 공지된 형광포의 기여도는 각 형광포의 스펙트럼에 대한 선행 정보를 감안할 때, 하이퍼스펙트럼 이미지로부터 계산될 수 있다.
Hyperspectral 화상 진찰은 또한 농업9, 천문학10,생물 의학11,화학 화상 진찰12,환경 응용13,안과배려 14,식품 과학15, 법의학16,17,의료 과학18,광물학19,감시20. 현재 형광 현미경 hyperspectral 화상 진찰 시스템의 중요한 한계는 표준 hyperspectral 화상 진찰 기술이 1) 견본 여기를 통제하기 위하여 여기 빛을 첫째로 여과하여 좁은 대역에서 형광 신호를 격리한다는 것입니다, 그 때 2) 나중에 수학적으로 분리 될 수있는 좁은 밴드로 형광 방출을 분리하기 위해 방출 된 빛을 추가로 필터링21. 여기 조명과 방출형광을 필터링하면 사용 가능한 신호의 양이 줄어들어 신호 대 잡음 비가 낮아지고 수집 시간이 길어질 수 있습니다. 낮은 신호와 긴 수집 시간은 진단 도구로 하이퍼 스펙트럼 이미징의 적용을 제한합니다.
하이퍼스펙트럼 이미징을 사용하지만 사용 가능한 신호를 향상시켜 필요한 수집 시간21,22를줄이는 이미징 양식이 개발되었습니다. 여기 스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징이라고 불리는 이 새로운 양식은 여기 파장을 변화시키고 광범위한 방출 광을 수집하여 스펙트럼 이미지 데이터를 수집합니다. 이 기술은 방출 스캐닝 기술21,22에비해 신호 대 잡음 비의 크기 증가를 산출하는 것으로 이전에 나타났다. 신호 대 잡음 비율의 증가는 주로 검출 된 방출 광의 넓은 대역통과 (~ 600 nm)에 기인하며, 특이성은 형광 방출 대신 여기 광만 필터링하여 제공됩니다. 이렇게 하면 모든 방출된 빛(모든 여기 파장)이 검출기21에도달할 수 있습니다. 추가적으로, 이 기술은 외인성 레이블에서 자기 형광을 구별하기 위하여 이용될 수 있습니다. 또한, 증가된 감지 신호로 인해 획득 시간을 단축하는 기능은 광표백의 위험을 감소시킬 뿐만 아니라 스펙트럼 비디오 이미징에 허용되는 수집 속도로 스펙트럼 스캔을 허용합니다.
이 프로토콜의 목표는 여기 스캐닝 하이퍼 스펙트럼 이미징 현미경 검사법에 대한 데이터 수집 가이드역할을 하는 것입니다. 또한, 조명 경로 및 하드웨어를 이해하는 데 도움이 설명이 포함되어 있습니다. 또한 여기 스캐닝 하이퍼 스펙트럼 이미징 현미경을 위한 오픈 소스 소프트웨어의 구현에 대해서도 설명합니다. 마지막으로, NIST 추적 가능한 표준으로 시스템을 교정하고, 정확한 결과를 위해 소프트웨어 및 하드웨어 설정을 조정하고, 감지된 신호를 개별 구성 요소의 기여로 혼합해제하는 방법에 대한 설명이 제공됩니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2119px;" width="2120">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Airway Smooth Muscle Cells</td>
			<td style="width:327px;">National Disease Research Interchange (NDRI)</td>
			<td style="width:360px;">Isolated from human lung tissues obtained from NDRI</td>
			<td style="width:1105px;">Highly autofluorescent, calcium sensitive cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Automated Shutter</td>
			<td style="width:327px;">Thorlabs Inc.</td>
			<td style="width:360px;">SHB1</td>
			<td>Remote-controllable shutter to minimize photobleaching</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Automated Stage</td>
			<td style="width:327px;">Prior Scientific</td>
			<td style="width:360px;">H177P1T4</td>
			<td>Remote-controllable stage for automated multiple field of view or stitched image collection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Automated Stage Controller (XY)</td>
			<td style="width:327px;">Prior Scientific</td>
			<td style="width:360px;">Proscan III (H31XYZE-US)</td>
			<td>For interfacing automated stage with computer and joystick</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Buffer</td>
			<td style="width:327px;">Made in-house</td>
			<td style="width:360px;">Made in-house</td>
			<td>145 mM NaCl, 4 mM KCl, 20 mM HEPES, 10 mM D-glucose, 1 mM MgCl2, and 1mM CaCl2, at pH 7.3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Cell Chamber</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">Attofluor Cell Chamber, A7816</td>
			<td>Coverslip holder composed of surgical stainless steel and a rubber O-ring to seal in media and prevent sample and/or objective contamination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Excitation Filters</td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-378/16</td>
			<td>Center wavelength range (340-378 nm), Bandwidth (Minimum 16 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.88)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-402/16</td>
			<td>Center wavelength range (360-400 nm), Bandwidth (Minimum 16 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-449/15</td>
			<td>Center wavelength range (400-448.8 nm), Bandwidth (Minimum 15 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-501/15</td>
			<td>Center wavelength range (448.8-501.5 nm), Bandwidth (Minimum 15 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.84)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-561/14</td>
			<td>Center wavelength range (501.5-561 nm), Bandwidth (Minimum 14 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.83)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Fluorescence Filter Cube Dichroic Beamsplitter</td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">FF495-Di03</td>
			<td>Separates excitation and emission light at 495 nm (&#62;98% reflection between 350-488 nm, &#62;93% transmission between 502-950 nm), Filter effective index (1.78)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Fluorescence Filter Cube Longpass Filter</td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">FF01 496/LP-25</td>
			<td>Allows passage of light longer than 496 nm ( &#62;93% average transmission between 503.2-1100 nm), Refractive index (1.86)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">GCaMP Probe</td>
			<td style="width:327px;">Addgene</td>
			<td style="width:360px;">G-CaMP3; Plasmid #22692</td>
			<td>A single-wavelength GCaMP2-based genetically encoded calcium indicator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Integrating Sphere</td>
			<td style="width:327px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:360px;">FOIS-1</td>
			<td>Used for accurate measurement of wide-angle illumination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Inverted Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td style="width:360px;">TE2000</td>
			<td>Inverted microscopes allow direct excitation of sample without the need to penetrate layers of media and/or tissue.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Mitotracker Green FM</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">M7514</td>
			<td>Labels mitochondria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">NIST-Traceable Calibration Lamp</td>
			<td style="width:327px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:360px;">LS-1-CAL-INT</td>
			<td>A lamp with a known spectrum for use as a standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">NIST-Traceable Fluorescein</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">F36915</td>
			<td>For verifying appropriate spectral response of the system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">NucBlue</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">R37605</td>
			<td>Labels cell nuclei</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Objective (10X)</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td style="width:360px;">Plan Apo &#955; 10X/0.45 &#8734;/0.17 MRD00105</td>
			<td>Useful for large fields of view</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Objective (20X)</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td style="width:360px;">Plan Apo &#955; 20X/0.75 &#8734;/0.17 MRD00205</td>
			<td>Most often used for tissue samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Objective (60X)</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td>Plan Apo VC 60X/1.2 WI &#8734;/0.15-0.18 WD 0.27</td>
			<td>Most often used for cell samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">sCMOS Camera</td>
			<td style="width:327px;">Photometrics</td>
			<td style="width:360px;">Prime 95B (Rev A8-062802018)</td>
			<td>For acquiring high-sensitivity digital images</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Spectrometer</td>
			<td style="width:327px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:360px;">QE65000</td>
			<td>Used to measure spectral output of excitation-scanning spectral system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Tunable Filter Changer</td>
			<td style="width:327px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:360px;">Lambda VF-5</td>
			<td>Motorized unit for automated excitation filter tuning/switching</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Xenon Arc Lamp</td>
			<td style="width:327px;">Sunoptic Technologies</td>
			<td style="width:360px;">Titan 300HP Lightsource</td>
			<td>Light source with relatively uniform spectral output</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

excitation-scanning hyperspectral imaging microscopy to efficiently discriminate fluorescence signals

몇몇 기술은 현상을 확인하거나 연구하거나 기능을 해명하기 위하여 형광 신호의 탐지에 의존합니다. 이러한 형광 신호의 분리는 형광 원이 배경 신호 및 자가 형광 (스펙트럼에 대한 지식을 감안할 때)뿐만 아니라 서로 분리 될 수있는 하이퍼 스펙트럼 이미징의 출현까지 성가신 것으로 입증되었습니다. 서명)을 참조하십시오. 그러나 기존의 방출 스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징은 여기및 방출 광을 필터링하는 데 필요한 필터링으로 인해 수집 시간이 느리고 신호 대 잡음 비가 낮습니다. 이전에는 여기-스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징이 필요한 수집 시간을 줄이는 동시에 획득된 데이터의 신호 대 잡음 비를 증가시키는 것으로 나타났습니다. 상용 장비를 사용하는 이 프로토콜은 단일 샘플에서 여러 형광원으로부터 신호를 분리하기 위해 여기 스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징 현미경 시스템을 조립, 교정 및 사용하는 방법을 설명합니다. 세포와 조직의 현미경 이미징에 매우 적합하지만, 이 기술은 화학 적 이미징, 환경 응용 프로그램, 안과 치료, 식품 과학, 법의학, 의학 및 광물학.

이 프로토콜의 몇 가지 중요한 단계는 정확하고 이미징 및 스펙트럼 아티팩트가 없는 데이터의 수집을 보장하는 데 필요합니다. 이러한 단계를 건너뛰면 중요한 것처럼 보이지만 다른 스펙트럼 이미징 시스템으로 는 확인하거나 재현할 수 없는 데이터가 생성되어 해당 데이터로 이루어진 결론을 효과적으로 무효화할 수 있습니다. 이러한 중요한 단계 중 가장 중요한 단?...

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Excitation-Scanning Hyperspectral Imaging Microscopy to Efficiently Discriminate Fluorescence Signals

형광 신호를 효율적으로 구별하기 위한 여기-스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징 현미경 검사법

스펙트럼 이미징은 단일 샘플에서 여러 형광 신호를 식별하고 분리하는 신뢰할 수 있는 솔루션이 되었으며 관심 있는 신호를 배경 또는 자동 형광과 쉽게 구분할 수 있습니다. 여기 스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징은 필요한 이미지 수집 시간을 줄이면서 동시에 신호 대 잡음 비를 증가시킴으로써 이 기술을 향상시킵니다.

Several techniques rely on detection of fluorescence signals to identify or study phenomena or to elucidate functions. Separation of these fluorescence ...

이 프로토콜은 단일 샘플에서 여러 형광 신호를 분리하는 데 사용할 수있는 방법을 설명하므로 중요합니다. 기존의 방법에 비해, 흥분 스캐닝은 실험 속도를 높이고 데이터의 민감도를 향상시킬 수 있습니다. 초응축 레이저와 같은 다른 조명 원을 사용하여, 이 방법은 회전 디스크 또는 레이저 스캐닝 공초점 현미경 시스템에 적용 될 수있다.각 형광성 라벨의 발근 피크가 다른 파장에서 발생하는지 확인하는 것이 중요합니다. 먼저 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 반전형 형광 현미경 및 카메라를 설정합니다. 그런 다음 스테이지에서 샘플을 로드합니다.마이크로 매니저 메인 창의 드롭다운 메뉴에서 초기 샘플 보기를 위해 475 나노미터를 선택합니다. 그런 다음 노출 옆 의 상자를 두 번 클릭하고 100을 입력하여 노출 시간을 100 밀리초로 설정합니다. 마지막으로 라이브를 클릭하여 샘플을 봅니다.이제 자동을 클릭합니다. 최소 값과 최대 값을 의미 있는 시각적 범위로 가져오는 자동 강도 보기 범위 버튼입니다. 다음으로 현미경의 초점 노브를 사용하여 샘플을 집중시하십시오.포커스가 되면 샘플의 위치를 조정하여 가장자리가 시야의 중심에 있도록 합니다. 그런 다음 포커스를 미세 조정합니다. 이미지의 가장자리 피쳐가 선명해 보일 때 샘플이 초점이 맞춰져 있습니다.이제 다차원 수집 도구를 엽니다. 메뉴에서 로드 버튼을 클릭하고 스펙트럼 획득을 위해 적절한 파장 범위를 포함하는 사전 설정 설정을 선택합니다. 획득 설정이 확인되면 샘플의 빈 영역으로 이동하고 획득을 클릭하여 나중에 빼기에 사용할 배경 및 노이즈가 포함된 스펙트럼 이미지 스택을 수집합니다.그런 다음 샘플을 이동하여 가장 밝은 영역을 찾습니다. 견본은 견본의 가장자리에서 멀리 더 강렬한 형광이 있기 위하여 확률이 높습니다. 가장 밝은 영역이 있는 후에는 단일 이미지 스택을 가져 가십시오.획득한 이미지를 이미지 J에 로드하고 이미지 J의 측정 기능을 사용하여 파장이 과다 노출된 픽셀을 포함하지 않는지 확인합니다. 과다 노출로 인해 노출 시간이 단축되면 배경 이미지도 새 노출 시간으로 다시 가져와야 합니다. 카메라의 위쪽 검출 한계를 포함하는 이미지가 발견되면 스펙트럼 스캔의 노출 시간을 조정하여 스펙트럼 범위 전체의 최대 신호가 카메라의 동적 범위를 초과하지 않도록 합니다.적절한 노출 시간이 이제 결정되면 레이블이 지정되지 않은 샘플을 스테이지에 배치합니다. 레이블이 지정되지 않은 샘플에서 스펙트럼 이미지 데이터를 수집하여 기본 자동 불발성이 있는지 확인합니다. 그런 다음 단 하나 레이블이 표시된 샘플을 스테이지에 배치합니다.스펙트럼 라이브러리를 구축하기 위해 스펙트럼 컨트롤로 사용할 단일 레이블이 표시된 각 샘플에서 스펙트럼 이미지 데이터를 수집합니다. 동일한 파장 범위 노출 시간 및 카메라 설정을 사용하여 각 제어 샘플에 대한 스캔을 수행합니다. 다음으로, 현미경에 실험 샘플을 포함하는 슬라이드를 놓는다.셀에 적절하게 레이블이 지정된 뷰 필드를 선택하고 결정된 획득 설정을 사용하여 샘플에서 스펙트럼 이미지 데이터를 수집합니다. 샘플 이미지에서 배경 스펙트럼을 빼고 보정 계수에 의해 이미지를 곱하여 평평한 스펙트럼 응답에 이미지를 수정합니다. 여기에서 MATLAB 스크립트를 사용하여 이미지를 신속하게 처리합니다.다음으로 스펙트럼 라이브러리를 생성합니다. 최상의 결과를 위해 각 엔드 멤버를 가장 강렬한 값을 가지는 파장 대역을 결정하고 각 파장 대역에서 측정값을 최대 값으로 나누어 최상의 강도의 파장 대역으로 정규화합니다. 그런 다음 스펙트럼 데이터를 dat 파일로 저장합니다.완료되면 스펙트럼 이미지 데이터를 혼합 해제합니다. 혼합 해제 단계는 각 형광 라벨에 대한 풍부한 이미지를 생성하며, 여기서 풍부하게 는 잠재 레이블의 이미지에서 상대형 형광 신호의 양입니다. 다음으로 혼합되지 않은 각 이미지를 열어 순수 부품의 분포를 시각적으로 검사합니다.오류 이미지의 크기를 혼합되지 않은 이미지의 크기와 비교합니다. 오류 이미지의 크기가 혼합되지 않은 풍부 이미지와 유사한 경우 스펙트럼 이미지 데이터의 신호가 정확하게 설명되지 않을 수 있습니다. 마지막으로 오류 이미지를 혼합되지 않은 이미지와 비교하여 확인되지 않은 잔류 구조가 없는지 확인합니다.올바르게 수행하면 스펙트럼 언믹싱 프로세스를 통해 스펙트럼 이미지 스택을 각 형광 레이블의 기여로 분리할 수 있습니다. 여기에서, 기도 원활한 근육 세포 자동 형광, GCaMP 프로브 및 미토콘드리아 라벨을 강조하는 개별 이미지와 함께 혼합되지 않은 스펙트럼 이미지 세트. 세포의 핵 및 perinuclear 영역과 관련된 높은 오차가 있는데, 이는 해당 지역의 측정된 스펙트럼이 스펙트럼 라이브러리의 스펙트럼에 의해 잘 설명되지 않는다는 것을 나타낸다.또한 자동 형광인 표지된 세포에서 수집된 순수한 스펙트럼은 순수 성분에 대한 스펙트럼 프로파일을 오염시킬 가능성이 높습니다. 여기서, 하나는 스케일드 뺄셈 후 수정 된 순수한 스펙트럼대, 자동 불발으로 오염 된 순수한 스펙트럼과 혼합해제의 차이를 볼 수 있습니다. 적절한 데이터 수집은 중요한 샘플을 이미징할 때 필수적이며, 이는 다시 이미지될 수 있는 배경 및 컨트롤과는 달리 단일 이미징 세션에서만 살아남을 수 있기 때문에 필수적입니다.적절한 하드웨어 및 획득 설정이 가능한 한 미리 결정되었는지 확인합니다. 다음 단계로, 이 시스템을 사용하여 획득한 타임랩스 데이터에서 생성된 비디오를 사용하여 제2 메신저 신호 현지화와 같은 시간이 지남에 따라 신중한 위치에서 형광원을 추적할 수 있습니다. 눈 노출을 피하기 위해 강력한 광원을 사용할 때주의하십시오.또한 생물학적 라벨을 취급할 때 적절한 장갑을 착용하십시오.

Research

JoVE Journal

Engineering

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연구

공학

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싱크 로트 론 엑스레이 Microdiffraction 및 광물 및 암석 샘플의 형광 이미징

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