Name: excitation-scanning hyperspectral imaging microscopy to efficiently discriminate fluorescence signals
Uploaded: 2019-08-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Excitation-Scanning Hyperspectral Imaging Microscopy to Efficiently Discriminate Fluorescence Signals at JoVE.com

Författarna skulle vilja erkänna stöd från NSF 1725937, NIH P01HL066299, NIH R01HL058506, NIH S10OD020149, NIH UL1 TR001417, NIH R01HL137030, AHA 18PRE34060163, och Abraham Mitchell cancer Research Fund.

1. apparat uppsättning
<ol><li>Ljuskälla: Välj en bredbandspektral ljuskälla med hög uteffekt och hög kollimation (en 300 W XE Arc-lampa användes för dessa studier).</li>
	<li>Slutare (tillval): Lägg till en slutare till den optiska banan för att reducera foto blekning för fotografering med tidsförlopp.</li>
	<li>Avstämbara filtersystem: införliva en mekanisk trimmontering och Thin-Film avstämbara filter (tftf) inställd för att möjliggöra önskad våglängd-justerbar excitation Range (t. ex., 360-485...

Den optimala användningen av excitation-scanning Hyperspektrala Imaging set-up börjar med byggandet av ljusbanan. I synnerhet val av ljuskälla, filter (tunable och Dichroic), filter växling metod och kamera bestämma tillgängliga spektralområdet, möjlig skanningshastighet, detektor känslighet, och rumsliga provtagning. Mercury Arc-lampor erbjuder många excitation våglängd toppar men ger inte en platt spektralutgång och kommer att kräva betydande signal reducering vid utgången toppar för att korrigera spekt...

Spektralavbildning kan utföras på olika sätt och refereras till av flera termer1,2,3,4. I allmänhet avser spektral avbildning data som erhållits i minst två rumsliga dimensioner och en spektraldimension. Multispektrala och Hyperspektrala avbildning kännetecknas oftast av antalet våglängdsband eller om spektralbanden är sammanhängande1. För detta program definieras Hyperspektrala data som spektrala data som erhållits med sammanhängande våglängd band uppnås genom avstånd av centrum våglängder inte mindre än halva full bredd på halva Max (FWHM) av varje bandpass filter som används för excitation (dvs 5 nm mittvåglängdsavstånd för bandpass-filter med 14-20 nm bandbredder). Den sammanhängande karaktären hos data banden möjliggör en översampling av DataSet, vilket säkerställer att Nyquists kriterier uppfylls vid provtagning av spektraldomänen.
Hyperspektrala Imaging utvecklades av NASA under 1970-och 1980-talen i samband med den första LANDSAT Satellite5,6. Att samla in data från flera sammanhängande spektralband tillät uppkomsten av ett utstrålande spektrum av varje pixel. Identifiering och definition av strålningsspektrat av enskilda komponenter gjorde det möjligt att inte bara detektera ytmaterial genom sina karakteristiska spektra, utan också tillåtet för avlägsnande av mellanliggande signaler, såsom variationer i signalen på grund av atmosfäriska förhållanden. Konceptet att detektera material med hjälp av deras karakteristiska spektra tillämpades på biologiska system i 1996 när schröck et al. använde kombinationer av fem olika fluoroforer och deras kända spektra för att särskilja märkta kromosomer i en process som kallas spektralkaryotypning7. Denna teknik utarbetades på 2000 av Tsurui et al. för fluorescens Imaging av vävnadsprover, med hjälp av sju fluorescerande färgämnen och singular värde nedbrytning för att uppnå spektral separation av varje pixel i linjära kombinationer av spektra i referens bibliotek8. Liknar deras fjärranalys motsvarigheter, kan bidraget från varje känd fluorophore beräknas från Hyperspektrala bilden, ges a priori information om spektrumet av varje fluorophore.
Hyperspektral avbildning har också använts inom jordbruksområdet9, astronomi10, biomedicin11, kemisk avbildning12, miljötillämpningar13, ögonvård14, Food Science15, forensisk vetenskap16,17, medicinsk vetenskap18, mineralogi19, och övervakning20. En viktig begränsning av nuvarande fluorescensmikroskop Hyperspektrala avbildningssystem är att standarden Hyperspektrala avbildningsteknik isolerar fluorescens signaler i smala band av 1) först filtrering excitation ljus för att kontrollera prov excitation, sedan 2) ytterligare filtrering avges ljus för att separera fluorescensutsläpp i smala band som senare kan separeras matematiskt21. Filtrering både excitation belysning och utsända fluorescens minskar mängden tillgänglig signal, vilket sänker signal-brus-förhållande och kräver långa förvärvs tider. Den låga signalen och långa förvärvs tider begränsar tillämpligheten av Hyperspektrala avbildning som ett diagnostiskt verktyg.
En bildbehandlings-modalitet har utvecklats som utnyttjar hyperspektral avbildning men ökar den tillgängliga signalen, vilket minskar den nödvändiga förvärvs tiden21,22. Denna nya modalitet, kallad excitation-scanning Hyperspektrala avbildning, förvärvar spektrala bilddata genom att variera excitation våglängd och samla ett brett spektrum av utsläppt ljus. Det har tidigare visats att denna teknik ger order av magnitud ökar i signal-brus-förhållande jämfört med utsläpps skanning tekniker21,22. Ökningen av signal-brus-förhållandet beror till stor del på den breda bandpass (~ 600 Nm) av utsläpps ljus detekteras, medan specificitet tillhandahålls genom filtrering endast excitation ljus i stället för fluorescensutsläpp. Detta gör att alla avgivna ljus (för varje excitation våglängd) för att nå detektorn21. Dessutom kan denna teknik användas för att diskriminera autofluorescence från exogena etiketter. Dessutom minskar förmågan att minska förvärvs tiden på grund av ökad detekterbar signal risken för foto blekning samt möjliggör spektrala skanningar till en förvärvsfrekvens som är godtagbar för spektral video avbildning.
Målet med detta protokoll är att fungera som en datainsamling guide för excitation-scanning Hyperspektrala Imaging mikroskopi. Dessutom ingår beskrivningar som hjälper till att förstå ljusbanan och hårdvaran. Beskrivs också är genomförandet av öppen källkod för en excitation-scanning Hyperspektrala Imaging Mikroskop. Slutligen finns beskrivningar för hur man kalibrerar systemet till en NIST-spårbar standard, justerar program-och maskinvaruinställningar för korrekta resultat och avblandar den upptäckta signalen i bidrag från enskilda komponenter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2119px;" width="2120">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Airway Smooth Muscle Cells</td>
			<td style="width:327px;">National Disease Research Interchange (NDRI)</td>
			<td style="width:360px;">Isolated from human lung tissues obtained from NDRI</td>
			<td style="width:1105px;">Highly autofluorescent, calcium sensitive cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Automated Shutter</td>
			<td style="width:327px;">Thorlabs Inc.</td>
			<td style="width:360px;">SHB1</td>
			<td>Remote-controllable shutter to minimize photobleaching</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Automated Stage</td>
			<td style="width:327px;">Prior Scientific</td>
			<td style="width:360px;">H177P1T4</td>
			<td>Remote-controllable stage for automated multiple field of view or stitched image collection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Automated Stage Controller (XY)</td>
			<td style="width:327px;">Prior Scientific</td>
			<td style="width:360px;">Proscan III (H31XYZE-US)</td>
			<td>For interfacing automated stage with computer and joystick</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Buffer</td>
			<td style="width:327px;">Made in-house</td>
			<td style="width:360px;">Made in-house</td>
			<td>145 mM NaCl, 4 mM KCl, 20 mM HEPES, 10 mM D-glucose, 1 mM MgCl2, and 1mM CaCl2, at pH 7.3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Cell Chamber</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">Attofluor Cell Chamber, A7816</td>
			<td>Coverslip holder composed of surgical stainless steel and a rubber O-ring to seal in media and prevent sample and/or objective contamination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Excitation Filters</td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-378/16</td>
			<td>Center wavelength range (340-378 nm), Bandwidth (Minimum 16 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.88)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-402/16</td>
			<td>Center wavelength range (360-400 nm), Bandwidth (Minimum 16 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-449/15</td>
			<td>Center wavelength range (400-448.8 nm), Bandwidth (Minimum 15 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-501/15</td>
			<td>Center wavelength range (448.8-501.5 nm), Bandwidth (Minimum 15 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.84)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;"></td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">TBP01-561/14</td>
			<td>Center wavelength range (501.5-561 nm), Bandwidth (Minimum 14 nm, nominal FWHM 20 nm), Refractive index (1.83)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Fluorescence Filter Cube Dichroic Beamsplitter</td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">FF495-Di03</td>
			<td>Separates excitation and emission light at 495 nm (&#62;98% reflection between 350-488 nm, &#62;93% transmission between 502-950 nm), Filter effective index (1.78)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Fluorescence Filter Cube Longpass Filter</td>
			<td style="width:327px;">Semrock Inc.</td>
			<td style="width:360px;">FF01 496/LP-25</td>
			<td>Allows passage of light longer than 496 nm ( &#62;93% average transmission between 503.2-1100 nm), Refractive index (1.86)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">GCaMP Probe</td>
			<td style="width:327px;">Addgene</td>
			<td style="width:360px;">G-CaMP3; Plasmid #22692</td>
			<td>A single-wavelength GCaMP2-based genetically encoded calcium indicator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Integrating Sphere</td>
			<td style="width:327px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:360px;">FOIS-1</td>
			<td>Used for accurate measurement of wide-angle illumination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Inverted Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td style="width:360px;">TE2000</td>
			<td>Inverted microscopes allow direct excitation of sample without the need to penetrate layers of media and/or tissue.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Mitotracker Green FM</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">M7514</td>
			<td>Labels mitochondria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">NIST-Traceable Calibration Lamp</td>
			<td style="width:327px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:360px;">LS-1-CAL-INT</td>
			<td>A lamp with a known spectrum for use as a standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">NIST-Traceable Fluorescein</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">F36915</td>
			<td>For verifying appropriate spectral response of the system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">NucBlue</td>
			<td style="width:327px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:360px;">R37605</td>
			<td>Labels cell nuclei</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Objective (10X)</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td style="width:360px;">Plan Apo &#955; 10X/0.45 &#8734;/0.17 MRD00105</td>
			<td>Useful for large fields of view</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Objective (20X)</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td style="width:360px;">Plan Apo &#955; 20X/0.75 &#8734;/0.17 MRD00205</td>
			<td>Most often used for tissue samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Objective (60X)</td>
			<td style="width:327px;">Nikon Instruments</td>
			<td>Plan Apo VC 60X/1.2 WI &#8734;/0.15-0.18 WD 0.27</td>
			<td>Most often used for cell samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">sCMOS Camera</td>
			<td style="width:327px;">Photometrics</td>
			<td style="width:360px;">Prime 95B (Rev A8-062802018)</td>
			<td>For acquiring high-sensitivity digital images</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Spectrometer</td>
			<td style="width:327px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:360px;">QE65000</td>
			<td>Used to measure spectral output of excitation-scanning spectral system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Tunable Filter Changer</td>
			<td style="width:327px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:360px;">Lambda VF-5</td>
			<td>Motorized unit for automated excitation filter tuning/switching</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Xenon Arc Lamp</td>
			<td style="width:327px;">Sunoptic Technologies</td>
			<td style="width:360px;">Titan 300HP Lightsource</td>
			<td>Light source with relatively uniform spectral output</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

excitation-scanning hyperspectral imaging microscopy to efficiently discriminate fluorescence signals

Flera tekniker förlitar sig på detektion av fluorescenssignaler för att identifiera eller studera fenomen eller för att belysa funktioner. Separation av dessa fluorescenssignaler var bevisat besvärliga fram till tillkomsten av Hyperspektrala avbildning, där fluorescens källor kan separeras från varandra samt från bakgrunds signaler och autofluorescence (ges kunskap om deras spektrala signaturer). Men traditionella, utsläpp scanning Hyperspektrala avbildning lider av långsamma förvärvs tider och låg signal-brus-förhållanden på grund av den nödvändiga filtreringen av både excitation och utsläpp ljus. Det har tidigare visats att excitation-scanning Hyperspektrala Imaging minskar den nödvändiga förvärvs tiden samtidigt öka signal-brus-förhållandet av förvärvade data. Med hjälp av kommersiellt tillgänglig utrustning beskriver detta protokoll hur man monterar, kalibrerar och använder en excitation-scanning Hyperspektrala Imaging mikroskopi system för separation av signaler från flera fluorescenskällor i ett enda prov. Även om det är mycket tillämpligt på mikroskopisk avbildning av celler och vävnader, kan denna teknik också vara användbar för alla typer av experiment som utnyttjar fluorescens där det är möjligt att variera excitation våglängder, inklusive men inte begränsat till: kemisk avbildning, miljötillämpningar, ögonvård, livsmedelsvetenskap, forensisk vetenskap, medicinsk vetenskap och mineralogi.

Flera viktiga steg från detta protokoll är nödvändiga för att säkerställa insamling av data som är både korrekt och saknar avbildning och spektrala artefakter. Hoppa över dessa steg kan resultera i data som verkar betydande men inte kan verifieras eller återges med andra spektrala avbildningssystem, vilket effektivt omintetgör alla slutsatser som gjorts med nämnda data. Chief bland dessa viktiga steg är korrekt spektrala output korrigering (avsnitt 3). Korrektionsfaktorn kom...

Watch this Scientific Journal Video about Excitation-Scanning Hyperspectral Imaging Microscopy to Efficiently Discriminate Fluorescence Signals at JoVE.com

Excitation-Scanning Hyperspectral Imaging Microscopy to Efficiently Discriminate Fluorescence Signals

Excitation-scanning Hyperspektrala Imaging mikroskopi att effektivt diskriminera fluorescens signaler

Spectral Imaging har blivit en pålitlig lösning för identifiering och separation av multipla fluorescenssignaler i ett enda prov och kan lätt urskilja signaler av intresse från bakgrund eller autofluorescence. Excitation-scanning Hyperspektrala Imaging förbättrar denna teknik genom att minska den nödvändiga bilden förvärvs tid samtidigt öka signal-brus-förhållande.

Several techniques rely on detection of fluorescence signals to identify or study phenomena or to elucidate functions. Separation of these fluorescence ...

Detta protokoll är betydande eftersom det beskriver en metod som kan användas för att separera flera fluorescerande signaler i ett enda prov. Jämfört med traditionella metoder kan excitation-scanning öka experimentets hastighet och förbättra känsligheten för data. Genom att använda olika belysningskällor som en superkontinuumlaser kan denna metod vara tillämplig på spinnskiva eller laserscanningskonfokalmikroskopsystem.När du utför excitation-scannings, spektral imaging mikroskopi, är det viktigt att kontrollera att magnetiseringen toppen av varje fluorescerande etikett sker vid en annan våglängd. Till att börja med, ställa in en inverterad fluorescens mikroskop och kamera som beskrivs i textprotokollet. Ladda sedan provet på scenen.Från rullgardinsmenyn i huvudfönstret i Micromanager väljer du 475 nanometer för första provvisning. Dubbelklicka sedan vid rutan bredvid exponeringen och ange 100 för att ställa in exponeringstiden till 100 millisekunder. Klicka slutligen på live för att visa exemplet.Klicka nu på Auto. Knappen för automatisk intensitetsvisning av räckvidd för att få in de lägsta och högsta värdena i meningsfulla, visuella intervall. Använd därefter mikroskopets fokusrattar för att fokusera provet.Väl i fokus, justerar du provets position så att det är kant i mitten av synfältet. Finjustera sedan fokus. Provet är i fokus när kantfunktionerna i bilden visas skarpa.Nu, öppna flerdimensionella förvärv verktyg. I menyn klickar du på knappen ladda och välja en förinställd inställning som innehåller en lämplig våglängdsintervall för spektral förvärv. När förvärvsinställningarna har bekräftats flyttar du till en tom region i exemplet och klickar på anskaffa för att samla in en spektralbildstack som innehåller bakgrund och brus som ska användas för subtraktion senare.Sedan flyttar du om provet för att hitta de ljusaste regionerna. Prover kommer sannolikt att ha mer intensiv fluorescens bort från kanten av provet. När den ljusaste regionen är belägen, ta en enda bildstack.Ladda den förvärvade bilden i Bild J och använd Bild J:s måttfunktion för att bekräfta att inga våglängder innehåller överexponerade pixlar. Om en minskad exponeringstid är nödvändig på grund av överexponering, bör bakgrundsbilden återtas med en ny exponeringstid också. Om någon av bilderna visade sig innehålla kamerans uppåtgående detektionsgräns, justera exponeringstiden för spektralskanningen för att säkerställa att den maximala signalen i hela spektralområdet inte överstiger kamerans dynamiska omfång.Med en lämplig exponeringstid nu fastställt, placera ett omärkt prov på scenen. Skaffa spektrala bilddata från det omärkta provet för att avgöra om det finns någon underliggande autofluoresence. Placera sedan ett enkel märkt prov på scenen.Förvärva spektrala bilddata från var och en av de enkelmärkta prover att använda som spektralkontroller för att bygga ett spektralbibliotek. Utför genomsökningen för varje kontrollprov med hjälp av en identisk våglängdsintervallexponeringstid och kamerainställningar. Därefter placerar du en bild som innehåller experimentprovet på mikroskopet.Välj ett synfält som har lämpligt märkta celler och skaffa spektralbilddata från exemplet med hjälp av de fastställda anskaffningsinställningarna. Korrigera bilder till ett platt spektralsvar genom att subtrahera bakgrundsspektrat från provbilden och multiplicera bilden med korrigeringskoefficienten. Här används ett MATLAB-skript för att snabbt bearbeta bilderna.Generera därefter det spektrala biblioteket. För bästa resultat, normalisera varje slutmedlem till våglängdsbandet av största intensitet genom att bestämma vilket våglängdsband som har det mest intensiva värdet och dividera mätningen vid varje våglängdsband med det högsta värdet. Spara sedan spektraldata som en dat-fil.När den är klar, unmix den spektrala bilddata. Den oblandande steg kommer att generera ett överflöd bild för varje fluorescerande etikett, där överflöd är mängden relativa fluorescerande signal i bilden från den blivande etiketten. Därefter öppnar varje oblandad bild för att visuellt inspektera fördelningen av rena komponenter.Jämför omfattningen av felbilden med de oblandade bildernas. Om storleken på felbilden liknar de oblandade överflödets bilder, kan det hända att signalerna i spektralbildsdata inte redovisas korrekt. Kontrollera slutligen att det inte finns några oidentifierade reststrukturer genom att jämföra felbilden med de oblandade bilderna.När den utförs korrekt, tillåter spektrala oblandande processen separation av en spektral bild stack i respektive bidrag från varje fluorescens etikett. Här, en oblandad spektral bild som med enskilda bilder belyser luftvägarna glatt muskel cell autofluorescens, en GCaMP sond och en mitokondriell etikett. Det finns ett stort fel i samband med de nukleära och perinukleära regionerna i cellerna som visar att de uppmätta spektra av dessa regioner inte är väl redovisas av spektra i spektrala biblioteket.Rena spektra som samlats in från märkta celler som också är autofluorescerande kommer sannolikt att förorena spektralprofilen för den rena komponenten. Här kan man se skillnaden av oblandande med rena spektra förorenade med autofluorescens, kontra den korrigerade rena spektra efter skalas subtraktion. Korrekt datainsamling är viktigt när bildframställning känsliga prover som de kanske bara överlever en enda bildbehandling session till skillnad från bakgrunden och kontroller som kan vara reimaged.Se till att rätt inställningar för maskinvara och förvärv är förutbestämda så mycket som möjligt. Som ett nästa steg kan videor som skapats från time-lapse-data som förvärvats med hjälp av detta system användas för att spåra fluorescerande källor på diskreta platser över tiden som andra messenger-signallokalisering. Var försiktig när du använder kraftfulla ljuskällor för att undvika exponering av ögonen.Se också till att bära ordentliga handskar vid hantering av biologiska etiketter.

Research

JoVE Journal

Engineering

Use of a Multi-compartment Dynamic Single Enzyme Phantom for Studies of Hyperpolarized Magnetic Resonance Agents

Användning av en flerfacks Dynamic enda enzym Phantom för studier av hyper Magnetic Resonance ombud

Imaging of hyperpolarized substrates by magnetic resonance shows great clinical promise for assessment of critical biochemical processes in real time. Due ...

Dynamic Pore-scale Reservoir-condition Imaging of Reaction in Carbonates Using Synchrotron Fast Tomography

Dynamisk Pore skala Reservoir-tillstånd avbildning av reaktion i karbonater Använda Synchrotron Snabb Tomography

Underground storage permanence is a major concern for carbon capture and storage. Pumping CO2 into carbonate reservoirs has the potential to dissolve ...

Advanced Compositional Analysis of Nanoparticle-polymer Composites Using Direct Fluorescence Imaging

Advanced analysen av sammansättningen av nanopartiklar-polymerkompositer Använda Direct Fluorescence Imaging

The fabrication of polymer-nanoparticle composites is extremely important in the development of many functional materials. Identifying the precise ...

Sub-nanometer Resolution Imaging with Amplitude-modulation Atomic Force Microscopy in Liquid

Sub-nanometer Resolution Imaging med amplitudmodulering atomkraftsmikroskopi i Liquid

Atomic force microscopy (AFM) has become a well-established technique for nanoscale imaging of samples in air and in liquid. Recent studies have shown ...

Microfluidic Imaging Flow Cytometry by Asymmetric-detection Time-stretch Optical Microscopy (ATOM)

Microfluidic Imaging Flow Cytometry by Asymmetric-detection Time-stretch Optical Microscopy ATOM

Mikrofluidisk Imaging Flödescytometri genom Asymmetrisk Detektering Tidssträckning Optisk Mikroskopi (ATOM)

Scaling the number of measurable parameters, which allows for multidimensional data analysis and thus higher-confidence statistical results, has been the ...

Novel Photoacoustic Microscopy and Optical Coherence Tomography Dual-modality Chorioretinal Imaging in Living Rabbit Eyes

Roman Photoacoustic mikroskopi och optisk koherenstomografi Dual-modalitet korioretinal Imaging i levande kanin ögon

Photoacoustic ocular imaging is an emerging ophthalmic imaging technology that can noninvasively visualize ocular tissue by converting light energy into ...

Synchrotron X-ray Microdiffraction and Fluorescence Imaging of Mineral and Rock Samples

Synkrotron röntgen Microdiffraction och fluorescens avbildning av Mineral och stenprover

In this report, we describe a detailed procedure for acquiring and processing&#160;x-ray microfluorescence (&#956;XRF), and Laue and powder ...

Label-Free Imaging of Single Proteins Secreted from Living Cells via iSCAT Microscopy

Etikett-fri Imaging av enstaka proteiner utsöndras från levande celler via iSCAT mikroskopi

We demonstrate interferometric scattering (iSCAT) microscopy, a method capable of detecting single unlabeled proteins secreted from individual living ...

Multiplexing Focused Ultrasound Stimulation with Fluorescence Microscopy

Multiplexing fokuserat ultraljud stimulering med fluorescensmikroskopi

By focusing low-intensity ultrasound pulses that penetrate soft tissues, LIPUS represents a promising biomedical technology to remotely and safely ...

In Situ Transmission Electron Microscopy with Biasing and Fabrication of Asymmetric Crossbars Based on Mixed-Phased a-VOx

In Situ Transmission Electron Microscopy with Biasing and Fabrication of Asymmetric Crossbars Based on Mixed-Phased a-VOx

In Situ Transmission ElectronMikroskopi med förspänning och tillverkning av asymmetriska tvärstänger baserade på blandade faser a-VOx