Name: a colorimetric assay of citrate synthase activity in drosophila melanogaster
Uploaded: 2020-01-16T12:00:00
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इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (३१४०१०१३ और ३१४७१०१०), शंघाई नगर पालिका के विज्ञान और प्रौद्योगिकी आयोग, शंघाई पुजियांग कार्यक्रम (14PJ1405900), और प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था शंघाई (19ZR1446400) ।

1. डी मेलानोगास्टर16 के लिए कोलोरीमेट्रिक साइट्रेट सिंथासे गतिविधि परख
<ol><li>प्रत्येक नमूने के लिए दस वयस्क मक्खियों को इकट्ठा करें। प्रत्येक जीनोटाइप के लिए कम से कम ट्रिपलीकेट नमूने एकत्र...

<ol>
	<li>Yee, C., Yang, W., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intrinsic+apoptosis+pathway+mediates+the+pro-longevity+response+to+mitochondrial+ROS+in+C.+elegans.">The intrinsic apoptosis pathway mediates the pro-longevity response to mitochondrial ROS in C. elegans.</a> Cell. 157 (4), 897-909 (2014).</li><li>Sarasija, S., Norman, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gamma-Secretase+Independent+Role+for+Presenilin+in+Calcium+Homeostasis+Impacts+Mitochondrial+Function+and+Morphology+in+Caenorhabditis+elegans.">A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (4), 1453-1466 (2015).</li><li>Oxenoid, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">Architecture of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).</li><li>Hekimi, S., Wang, Y., Noe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+ROS+and+the+Effectors+of+the+Intrinsic+Apoptotic+Pathway+in+Aging+Cells:+The+Discerning+Killers!.">Mitochondrial ROS and the Effectors of the Intrinsic Apoptotic Pathway in Aging Cells: The Discerning Killers!.</a> Frontiers in Genetics. 7, 161 (2016).</li><li>Kim, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Biosynthesis+Coordinates+a+Mitochondrial-to-Cytosolic+Stress+Response.">Lipid Biosynthesis Coordinates a Mitochondrial-to-Cytosolic Stress Response.</a> Cell. 166 (6), 1539-1552 (2016).</li><li>Wang, Y., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+longevity+in+animals:+Untangling+the+knot.">Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot.</a> Science. 350 (6265), 1204-1207 (2015).</li><li>Ray, A., Martinez, B. A., Berkowitz, L. A., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction,+oxidative+stress,+and+neurodegeneration+elicited+by+a+bacterial+metabolite+in+a+C.+elegans+Parkinson's+model.">Mitochondrial dysfunction, oxidative stress, and neurodegeneration elicited by a bacterial metabolite in a C. elegans Parkinson's model.</a> Cell Death &amp; Disease. 5, e984 (2014).</li><li>Tronstad, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+quantification+of+cellular+mitochondrial+morphology+and+content.">Regulation and quantification of cellular mitochondrial morphology and content.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (35), 5634-5652 (2014).</li><li>Wiegand, G., Remington, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrate+synthase:+structure,+control,+and+mechanism.">Citrate synthase: structure, control, and mechanism.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 15, 97-117 (1986).</li><li>Lopez-Lluch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+induces+mitochondrial+biogenesis+and+bioenergetic+efficiency.">Calorie restriction induces mitochondrial biogenesis and bioenergetic efficiency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (6), 1768-1773 (2006).</li><li>MacInnis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+mitochondrial+adaptations+in+human+skeletal+muscle+after+interval+compared+to+continuous+single-leg+cycling+matched+for+total+work.">Superior mitochondrial adaptations in human skeletal muscle after interval compared to continuous single-leg cycling matched for total work.</a> Journal of Physiology. 595 (9), 2955-2968 (2017).</li><li>Gillen, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Twelve+Weeks+of+Sprint+Interval+Training+Improves+Indices+of+Cardiometabolic+Health+Similar+to+Traditional+Endurance+Training+despite+a+Five-Fold+Lower+Exercise+Volume+and+Time+Commitment.">Twelve Weeks of Sprint Interval Training Improves Indices of Cardiometabolic Health Similar to Traditional Endurance Training despite a Five-Fold Lower Exercise Volume and Time Commitment.</a> PLoS One. 11 (4), e0154075 (2016).</li><li>Mukherjee, S., Basar, M. A., Davis, C., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+functional+similarities+and+divergences+between+Drosophila+Spargel/dPGC-1+and+mammalian+PGC-1+protein.">Emerging functional similarities and divergences between Drosophila Spargel/dPGC-1 and mammalian PGC-1 protein.</a> Frontiers in Genetics. 5, 216 (2014).</li><li>Mukherjee, S., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spargel/dPGC-1+is+a+new+downstream+effector+in+the+insulin-TOR+signaling+pathway+in+Drosophila.">Spargel/dPGC-1 is a new downstream effector in the insulin-TOR signaling pathway in Drosophila.</a> Genetics. 195 (2), 433-441 (2013).</li><li>Diop, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGC-1/Spargel+Counteracts+High-Fat-Diet-Induced+Obesity+and+Cardiac+Lipotoxicity+Downstream+of+TOR+and+Brummer+ATGL+Lipase.">PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase.</a> Cell Reports. 10 (9), 1572-1584 (2015).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14 (5), 623-634 (2011).</li><li>Wei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNF34+modulates+the+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+capacity+in+muscle+and+lipid+metabolism+through+ubiquitination+of+PGC-1+in+Drosophila.">RNF34 modulates the mitochondrial biogenesis and exercise capacity in muscle and lipid metabolism through ubiquitination of PGC-1 in Drosophila.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 50 (10), 1038-1046 (2018).</li><li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila.">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 105-115 (2014).</li><li>Bosco, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oxygen+concentration+and+pressure+on+Drosophila+melanogaster:+oxidative+stress,+mitochondrial+activity,+and+survivorship.">Effects of oxygen concentration and pressure on Drosophila melanogaster: oxidative stress, mitochondrial activity, and survivorship.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 88 (4), 222-234 (2015).</li></ol>

एक मॉडल के रूप में ड्रोसोफिला का उपयोग करमेटाबोलिक अध्ययनों को आनुवंशिक पृष्ठभूमि, आहार और मक्खियों के स्टॉक रखरखाव को ध्यान में रखना चाहिए18। साइट्रेट सिंथाज गतिविधि के माप पर विभिन्न आन...

माइटोकॉन्ड्रिया को सबसे अधिक यूकेरियोटिक जीवों में बिजली उत्पादक ऑर्गेनेल्स के रूप में जाना जाता है, जो ट्राइकार्बोक्लिक एसिड चक्र (यानी, क्रेब्स चक्र) और ऑक्सीडेटिव फास्फोरिलाइजेशन के माध्यम से ऊर्जा मुद्रा, एटीपी का उत्पादन करते हैं। माइटोकॉन्ड्रिया कई अन्य शारीरिक प्रक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिकाएं निभाने के लिए भी पाया जाता है, जैसे एपोप्टोसिस1,सीए2 + होमोस्टोसिस2,3,प्रतिक्रियाशील ऑक्सीकरण प्रजातियां (आरओएस) पीढ़ी4,और एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ईआर)-तनाव प्रतिक्रिया5। माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन किसी भी उम्र में शरीर में किसी भी अंग को प्रभावित कर सकता है और मेटाबोलिक, उम्र बढ़ने से संबंधित6और न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों का प्राथमिक कारण है7। अक्षुण्ण माइटोकॉन्ड्रिया मशीनी रूप से माइटोकॉन्ड्रियल समारोह से संबंधित हैं। इस प्रकार, माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन8के मूल्यांकन के लिए अक्षुण्ण माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान का उचित मात्राकरण बहुत महत्वपूर्ण है। ट्राइकार्बॉक्सिक एसिड चक्र9के पहले चरण में एक दर-सीमित एंजाइम, सिट्रेट सिंथासे को यूकेरियोटिक कोशिकाओं के भीतर माइटोकॉन्ड्रियल मैट्रिक्स में स्थानीयकृत किया गया है, और इस प्रकार बरकरार माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान9,10की उपस्थिति के लिए मात्रात्मक मार्कर के रूप में उपयोग किया जा सकता है। सिट्रेट सिंथाज गतिविधि को अक्षुण्ण माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन11,12के लिए सामान्यीकरण कारक के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है ।
फल मक्खी, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर,माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली है, क्योंकि माइटोकॉन्ड्रिया में निर्णायक भूमिका निभाने वाले कई अणु ओं और रास्ते को ड्रोसोफिला से मनुष्योंतक 13,14,15को विकासात्मक रूप से संरक्षित किया जाता है। यहां, हम एक 96 अच्छी प्लेट प्रारूप में ड्रोसोफिला ऊतक समरूप16 में एक रंगीन परख द्वारा साइट्रेट सिंथाज गतिविधि के मापने के लिए एक तेज और सरल विधि के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं। सिट्रेट सिंथाज गतिविधि परख में, ड्रोसोफिला ऊतक में साइट्रेट सिंथाज सिटाइल कोएंजाइम ए (एसीटिल सीओए) के साथ ऑक्सालोसेटेट की प्रतिक्रिया को कैटरेट सीओए-एसएच और एच+बनाने के लिए उत्प्रेरक करता है। सीओए-एसएच बाद में एक रंगीन उत्पाद उत्पन्न करने के लिए 5,5'-डिथिओबिस-(2-नाइट्रोबेंजोइक एसिड) (डीटीएनबी) के साथ प्रतिक्रिया करता है, जिसे आसानी से 412 एनएम पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिकल रूप से मापा जा सकता है। सिट्रेट सिंथाज गतिविधि रंग उत्पादन की दर से परिलक्षित हो सकती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (TRIZMA Base)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-CoA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithio-bis-nitrobenzoic acid (DTNB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxaloacetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet pestle</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>F619072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet pestle motor</td>
			<td>Tiangen</td>
			<td>OSE-Y10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Eon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Assay kit</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>A110694-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a colorimetric assay of citrate synthase activity in drosophila melanogaster

माइटोकॉन्ड्रिया ऑक्सीडेटिव फॉस्फोरिलेशन के माध्यम से एटीपी का उत्पादन करके और विभिन्न प्रकार की शारीरिक प्रक्रियाओं को विनियमित करके सेलुलर मेटाबोलिज्म में सबसे प्रमुख भूमिकाएं निभाते हैं। माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन कई मेटाबोलिक और न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों का प्राथमिक कारण है। उनके उचित कामकाज के लिए अक्षुण्ण माइटोकॉन्ड्रिया महत्वपूर्ण हैं। एंजाइम साइट्रेट सिंथाज माइटोकॉन्ड्रियल मैट्रिक्स में स्थानीयकृत है और इस प्रकार बरकरार माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान के मात्रात्मक एंजाइम मार्कर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। यह देखते हुए कि माइटोकॉन्ड्रिया में महत्वपूर्ण कार्यों वाले कई अणु और रास्ते मनुष्यों और ड्रोसोफिला केबीच अत्यधिक संरक्षित हैं, और ड्रोसोफिलामें शक्तिशाली आनुवंशिक उपकरणों की एक सरणी उपलब्ध है, ड्रोसोफिला माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए एक अच्छी मॉडल प्रणाली के रूप में कार्य करता है। यहां, हम माइटोकॉन्ड्रिया को अलग किए बिना वयस्क मक्खियों से होमोग्नेट ऊतक में साइट्रेट सिंथाज गतिविधि के तेज और सरल माप के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं। यह प्रोटोकॉल लार्वा, सुसंस्कृत कोशिकाओं और स्तनधारी ऊतकों में साइट्रेट सिंथाज गतिविधि को मापने के लिए भी उपयुक्त है।

चित्रा 1 विभिन्न जीनोटाइप के ड्रोसोफिला छाती ऊतक समरूपों को मापने के लिए साइटरेट सिंथासे गतिविधि रंगीन परख का उपयोग करके प्राप्त समय के साथ 412 एनएम पर ओडी अवशोषण के लिए गतिज घ...

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A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

हम ड्रोसोफिला ऊतक समरूपों में बरकरार माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान की मात्रा के लिए साइट्रेट सिंथाज गतिविधि के एक रंगीन परख के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं।

ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में सिट्रेट सिंथासे गतिविधि का एक कोलोरीमेट्रिक परख

Mitochondria play the most prominent roles in cellular metabolism by producing ATP through oxidative phosphorylation and regulating a variety of ...

ड्रोसोफिला माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए अच्छी मॉडल प्रणाली के रूप में कार्य करता है। यहां हम वयस्क मक्खियों से ऊतक समरूप में साइट्रेट सिंथेस गतिविधि को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस प्रोटोकॉल में माइटोकॉन्ड्रिया के अलगाव की आवश्यकता नहीं है।यह तेज और सरल है और यह लार्वा, सुसंस्कृत कोशिकाओं और स्तनधारी ऊतकों में साइट्रेट सिंथेस गतिविधि को मापने के लिए उपयुक्त है। प्रत्येक नमूने के लिए वयस्क मक्खियों को इकट्ठा करके शुरू करें, जिससे प्रत्येक जीनोटाइप के लिए कम से कम ट्रिपलिकेट नमूने एकत्र करना सुनिश्चित करें। प्रत्येक नमूने के लिए 1.5 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब में 20 मिलीमोलर एचईपीई, एक मिलीमोलर ईडीए, और 0.1% ट्राइटन एक्स-100 के साथ बर्फ-ठंड निष्कर्षण बफर के 500 माइक्रोलीटर तैयार करें।एनेस्थीसिया पैड पर कार्बन डाइऑक्साइड के साथ वयस्क मक्खियों को एनेस्थेटाइज करें। छाती को अलग करने के लिए, उन्हें एक जोड़ी संदंश के साथ ठीक करें और कैंची और पेट की सीमा के साथ कैंची और पेट की सीमा के साथ काटकर फ्लाई पेट को अलग करें। साइट्रेट सिंथेस गतिविधि परख के लिए फ्लाई थोरेक्स लीजिए।बर्फ-ठंड निकालने बफर के 100 माइक्रोलीटर को 10 वयस्क फ्लाई थोरेक्स को तुरंत स्थानांतरित करें और उन्हें बर्फ पर मूसल के साथ समरूप करें। बर्फ पर पांच से 10 सेकंड के लिए समरूप द्वारा नमूनों को ठंडा रखें, उन्हें पांच सेकंड के लिए बर्फ पर बैठने दें, फिर तब तक दोहराएं जब तक कि सभी ऊतक पूरी तरह से समरूप न हो जाएं। एलिकोट प्रत्येक समरूप नमूने के 10 माइक्रोलीटर प्रोटीन सामग्री माप के लिए एक नई ट्यूब में, बर्फ पर इन ट्यूबों को भी रखते हुए।500 माइक्रोलीटर की कुल मात्रा के लिए प्रत्येक शेष नमूने में बर्फ-ठंड निष्कर्षण बफर के 400 माइक्रोलीटर जोड़ें और मिश्रण करने के लिए धीरे-धीरे ऊपर और नीचे पिपेट करें। प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए, हौसले से तैयार प्रतिक्रिया समाधान के 150 माइक्रोलीटर में पतला सेल lysate का एक माइक्रोलीटर जोड़ें। धीरे-धीरे पाइपिंग करके अच्छी तरह से मिलाएं, बुलबुला गठन से बचना सुनिश्चित करें, फिर 25 डिग्री सेल्सियस पर चार मिनट के लिए हर 10 से 30 सेकंड में 412 नैनोमीटर पर अवशोषण को मापने के लिए एक प्लेट रीडर का उपयोग करें।समय के साथ अवशोषण के रूप में डेटा प्लॉट, तो वक्र के रैखिक भाग के लिए ढलान की गणना । अंत में, साइट्रेट सिंथेस गतिविधि को सामान्य बनाने के लिए नमूना प्रोटीन एकाग्रता द्वारा प्रतिक्रिया दर या ढलान को विभाजित करें। यह परिकल्पना की गई थी कि ड्रोसोफिला मांसपेशियों में DRNF34 के नॉकआउट माइटोकॉन्ड्रियल साइट्रेट सिंथेस गतिविधि में वृद्धि होगी, जबकि डीपीजीसी-1 का नॉकआउट इस वृद्धि को उलट देगा।प्रत्येक परख के लिए एक प्रारंभिक रैखिक एंजाइमेटिक दर स्थापित की गई थी; ट्रेंडलाइन की ढलान अधिकतम प्रतिक्रिया दरों का प्रतिनिधित्व करती हैं जो विभिन्न जीनोटाइप की अधिकतम साइट्रेट सिंथेस गतिविधियों के बराबर हैं। अधिकतम साइट्रेट सिंथेस गतिविधियों की गणना गतिज घटता से की जाती थी और प्रोटीन एकाग्रता द्वारा सामान्यीकृत की जाती थी। परिणामों से पता चला है कि फ्लाई थोरेक्स की सिंथेस गतिविधि वास्तव में मांसपेशियों-विशिष्ट DRNF34 नॉकडाउन के साथ बढ़ी है और वृद्धि मांसपेशियों-विशिष्ट डीपीजीसी-1 नॉकआउट से उलट गई थी।जब नमूना समरूप, यह ट्यूब टिप और समरूप की जांच करने के लिए सुनिश्चित करें कि वहां कोई थक्के है और ट्यूब में ऊतकों पूरी तरह से समरूप हैं बनाने के लिए महत्वपूर्ण है । नमूना संग्रह के बाद, सभी नमूना उपचार बर्फ पर किया जाना चाहिए। सिट्रेट सिंथेस गतिविधि परख का उपयोग अक्षुण्ण माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है।माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के मूल्यांकन के लिए अक्षुण्ण माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान का उचित मात्राकरण बहुत महत्वपूर्ण है।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

के पीएच निर्भर गतिविधि का पता लगाने<em&gt; कोलाई</em&gt; निगरानी HdeB<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

A Fluorescence-based Assay of Phospholipid Scramblase Activity

Phospholipid Scramblase गतिविधि का एक प्रतिदीप्ति आधारित परख

Scramblases translocate phospholipids across the membrane bilayer bidirectionally in an ATP-independent manner. The first scramblase to be identified and ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

पौधों में लौह सामग्री को मापने के लिए एक वर्णमिति विधि

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

मानचित्रण चयापचय: निगरानी स्तनपान डिहाइड्रोजनेज गतिविधि सीधे ऊतक में

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

एक इन विट्रो परख tRNA-Isopentenyl ट्रांस्फ़्रेज़ गतिविधि का पता लगाने के लिए

N6-isopentenyladenosine RNA modifications are functionally diverse and highly conserved among prokaryotes and eukaryotes. One of the most highly conserved ...

Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions

कैफीन निष्कर्षण, एंजाइमी गतिविधि और संयंत्र सेल सस्पेंशन से कैफीन सिंथेस की जीन अभिव्यक्ति

Caffeine (1,3,7-trimethylxanthine) is a purine alkaloid present in popular drinks such as coffee and tea. This secondary metabolite is regarded as a ...

A Fluorogenic Peptide Cleavage Assay to Screen for Proteolytic Activity: Applications for coronavirus spike protein activation

Proteolytic गतिविधि के लिए स्क्रीन करने के लिए एक Fluorogenic पेप्टाइड दरार परख: कोरोनावायरस कील प्रोटीन सक्रियण के लिए आवेदन

Enveloped viruses such as coronaviruses or influenza virus require proteolytic cleavage of their fusion protein to be able to infect the host cell. Often ...

Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

डीएनए मेथिलट्रांसफेरेज़ इनहिबिटर के लिए स्क्रीन करने के लिए निरंतर फ्लोरेसेंस-आधारित एंडोन्यूक्लिज़-युग्मित डीएनए मिथाइलेशन परख

DNA methylation, a form of epigenetic gene regulation, is important for normal cellular function. In cells, proteins called DNA methyltransferases (DNMTs) ...

Measuring Caspase Activity Using a Fluorometric Assay or Flow Cytometry

फ्लोरोमेट्रिक परख या फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके कैस्पेज़ गतिविधि को मापना

The activation of cysteine proteases, known as caspases, remains an important process in multiple forms of cell death. Caspases are critical initiators ...

Smartphone as an Analytical Device to Quantify Protein Using Bradford Assay

RGBradford: Protein Quantitation with a Smartphone Camera

An Alternative Approach to Protein Quantification by Bradford Assay Using a Smartphone (Video) | JoVE

RGBradford: स्मार्टफोन कैमरा के साथ प्रोटीन क्वांटिटेशन

Protein quantitation is an essential procedure in life sciences research. Amongst several other methods, the Bradford assay is one of the most used. ...