Name: a colorimetric assay of citrate synthase activity in drosophila melanogaster
Uploaded: 2020-01-16T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster at JoVE.com

Detta arbete stöddes av bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (31401013 och 31471010), vetenskaps-och teknik kommissionen i Shanghai kommun, Shanghai Pujiang program (14PJ1405900), och Natural Science Foundation of Shanghai (19ZR1446400).

1. kolorimetrisk citrat syntas aktivitetsanalys för D. melanogaster16
<ol><li>Samla tio vuxna flugor för varje prov. Samla in minst tre exemplar prover för varje genotyp.</li>
	<li>Bered 500 μL av iskall extraktionsbuffert som innehåller 20 mM HEPER (pH = 7,2), 1 mM EDTA och 0,1% Triton X-100 i ett prov rör på 1,5 mL för varje prov.</li>
	<li>Anesthetize vuxna flugor med CO2 på en anestesi pad och isolera de önskade vävnaderna. För att isolera den vuxna fluga thor...

<ol>
	<li>Yee, C., Yang, W., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intrinsic+apoptosis+pathway+mediates+the+pro-longevity+response+to+mitochondrial+ROS+in+C.+elegans.">The intrinsic apoptosis pathway mediates the pro-longevity response to mitochondrial ROS in C. elegans.</a> Cell. 157 (4), 897-909 (2014).</li><li>Sarasija, S., Norman, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gamma-Secretase+Independent+Role+for+Presenilin+in+Calcium+Homeostasis+Impacts+Mitochondrial+Function+and+Morphology+in+Caenorhabditis+elegans.">A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (4), 1453-1466 (2015).</li><li>Oxenoid, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">Architecture of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).</li><li>Hekimi, S., Wang, Y., Noe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+ROS+and+the+Effectors+of+the+Intrinsic+Apoptotic+Pathway+in+Aging+Cells:+The+Discerning+Killers!.">Mitochondrial ROS and the Effectors of the Intrinsic Apoptotic Pathway in Aging Cells: The Discerning Killers!.</a> Frontiers in Genetics. 7, 161 (2016).</li><li>Kim, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Biosynthesis+Coordinates+a+Mitochondrial-to-Cytosolic+Stress+Response.">Lipid Biosynthesis Coordinates a Mitochondrial-to-Cytosolic Stress Response.</a> Cell. 166 (6), 1539-1552 (2016).</li><li>Wang, Y., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+longevity+in+animals:+Untangling+the+knot.">Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot.</a> Science. 350 (6265), 1204-1207 (2015).</li><li>Ray, A., Martinez, B. A., Berkowitz, L. A., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction,+oxidative+stress,+and+neurodegeneration+elicited+by+a+bacterial+metabolite+in+a+C.+elegans+Parkinson's+model.">Mitochondrial dysfunction, oxidative stress, and neurodegeneration elicited by a bacterial metabolite in a C. elegans Parkinson's model.</a> Cell Death &amp; Disease. 5, e984 (2014).</li><li>Tronstad, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+quantification+of+cellular+mitochondrial+morphology+and+content.">Regulation and quantification of cellular mitochondrial morphology and content.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (35), 5634-5652 (2014).</li><li>Wiegand, G., Remington, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrate+synthase:+structure,+control,+and+mechanism.">Citrate synthase: structure, control, and mechanism.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 15, 97-117 (1986).</li><li>Lopez-Lluch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+induces+mitochondrial+biogenesis+and+bioenergetic+efficiency.">Calorie restriction induces mitochondrial biogenesis and bioenergetic efficiency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (6), 1768-1773 (2006).</li><li>MacInnis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+mitochondrial+adaptations+in+human+skeletal+muscle+after+interval+compared+to+continuous+single-leg+cycling+matched+for+total+work.">Superior mitochondrial adaptations in human skeletal muscle after interval compared to continuous single-leg cycling matched for total work.</a> Journal of Physiology. 595 (9), 2955-2968 (2017).</li><li>Gillen, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Twelve+Weeks+of+Sprint+Interval+Training+Improves+Indices+of+Cardiometabolic+Health+Similar+to+Traditional+Endurance+Training+despite+a+Five-Fold+Lower+Exercise+Volume+and+Time+Commitment.">Twelve Weeks of Sprint Interval Training Improves Indices of Cardiometabolic Health Similar to Traditional Endurance Training despite a Five-Fold Lower Exercise Volume and Time Commitment.</a> PLoS One. 11 (4), e0154075 (2016).</li><li>Mukherjee, S., Basar, M. A., Davis, C., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+functional+similarities+and+divergences+between+Drosophila+Spargel/dPGC-1+and+mammalian+PGC-1+protein.">Emerging functional similarities and divergences between Drosophila Spargel/dPGC-1 and mammalian PGC-1 protein.</a> Frontiers in Genetics. 5, 216 (2014).</li><li>Mukherjee, S., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spargel/dPGC-1+is+a+new+downstream+effector+in+the+insulin-TOR+signaling+pathway+in+Drosophila.">Spargel/dPGC-1 is a new downstream effector in the insulin-TOR signaling pathway in Drosophila.</a> Genetics. 195 (2), 433-441 (2013).</li><li>Diop, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGC-1/Spargel+Counteracts+High-Fat-Diet-Induced+Obesity+and+Cardiac+Lipotoxicity+Downstream+of+TOR+and+Brummer+ATGL+Lipase.">PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase.</a> Cell Reports. 10 (9), 1572-1584 (2015).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14 (5), 623-634 (2011).</li><li>Wei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNF34+modulates+the+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+capacity+in+muscle+and+lipid+metabolism+through+ubiquitination+of+PGC-1+in+Drosophila.">RNF34 modulates the mitochondrial biogenesis and exercise capacity in muscle and lipid metabolism through ubiquitination of PGC-1 in Drosophila.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 50 (10), 1038-1046 (2018).</li><li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila.">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 105-115 (2014).</li><li>Bosco, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oxygen+concentration+and+pressure+on+Drosophila+melanogaster:+oxidative+stress,+mitochondrial+activity,+and+survivorship.">Effects of oxygen concentration and pressure on Drosophila melanogaster: oxidative stress, mitochondrial activity, and survivorship.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 88 (4), 222-234 (2015).</li></ol>

Metaboliska studier med hjälp av Drosophila som modell måste ta hänsyn till den genetiska bakgrunden, diet, och lagerunderhåll av flugor18. För att undvika effekterna av olika genetiska bakgrunder på mätningen av citrat syntas aktivitet, olika stammar av Drosophila bör backkorsas till kontroll stammen i 10 generationer. Den genetiska bakgrunden till alla Drosophila stammar som används i våra experiment är w1118, så vi använde w11...

Mitokondrier är mest kända som Power-producerande organeller i de flesta eukaryota organismer, som producerar energi valutan, ATP, genom trikarboxylsyracykeln Acid cykel (dvs, Krebs cykel) och oxidativ fosforylering. Mitokonskerna finns också att spela viktiga roller i en massa andra fysiologiska processer, såsom reglering av apoptos1, ca2 + homeostas2,3, reaktiv oxidation arter (ros) generation4, och endoplasmatiska nätmagen (er)-stress Response5. Mitokondriell dysfunktion kan påverka alla organ i kroppen i alla åldrar och är en primär orsak till metabola, åldrande-relaterade6, och neurodegenerativa sjukdomar7. Intakta mitokondrier är mekanistiskt relaterade till mitokondriell funktion. Sålunda, korrekt kvantifiering av intakt mitokondriell massa är mycket viktigt för att utvärdera mitokondriell funktion8. Citratsyntas, ett hastighetsbegränsande enzym i det första steget av trikarboxylsyracykeln9, lokaliseras i den mitokondriella matrisen inom eukaryota celler, och kan därför användas som en kvantitativ markör för närvaron av intakt mitokondriell massa9,10. Citratsyntas aktivitet kan också användas som en normaliserings faktor för intakta mitokondriella proteiner11,12.
Den fruktfluga, Drosophila melanogaster, är ett utmärkt modellsystem för att studera mitokondriell funktion, så många molekyler och vägar som spelar centrala roller i mitokondrier är evolutionärt bevaras från Drosophila till människor13,14,15. Här presenterar vi ett protokoll för en snabb och enkel metod för mätning av citrat syntas aktivitet genom en kolorimetrisk analys i Drosophila vävnad Homogenates16 i en 96 väl plåtformat. I citratsynthase Activity assay, citrat syntas i Drosophila vävnad Homogenatet katalyserar reaktionen av oxaloacetat med acetyl coenzym A (acetyl COA) att bilda citrat COA-sh och H+. CoA-SH reagerar därefter med 5,5 '-dithiobis-(2-nitrobensoesyra) (DTNB) för att generera en färgad produkt, 2-Nitro-5-thiobenzoate (TNB), som lätt kan mätas spektrofotometriskt vid 412 nm. Citratsynthase aktivitet kan återspeglas av graden av färgproduktion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (TRIZMA Base)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-CoA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithio-bis-nitrobenzoic acid (DTNB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxaloacetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet pestle</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>F619072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet pestle motor</td>
			<td>Tiangen</td>
			<td>OSE-Y10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Eon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Assay kit</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>A110694-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a colorimetric assay of citrate synthase activity in drosophila melanogaster

Mitokonbenerna spelar de mest framträdande rollerna i cellulär metabolism genom att producera ATP genom oxidativ fosforylering och reglera en mängd fysiologiska processer. Mitokondriell dysfunktion är en primär orsak till ett antal metabola och neurodegenerativa sjukdomar. Intakt mitokona är avgörande för deras korrekta funktion. Enzymet citrat syntas är lokaliserad i mitokondriell matris och därmed kan användas som en kvantitativ enzym markör för intakt mitokondriell massa. Med tanke på att många molekyler och vägar som har viktiga funktioner i mitokondrierna är starkt bevarade mellan människor och Drosophila, och att en rad kraftfulla genetiska verktyg finns tillgängliga i Drosophila, fungerar Drosophila som ett bra modellsystem för att studera mitokondriell funktion. Här presenterar vi ett protokoll för snabb och enkel mätning av citratsyntas aktivitet i vävnad homogena från vuxna flugor utan att isolera mitokonen. Detta protokoll är också lämpligt för att mäta citratsyntas aktivitet i larver, odlade celler, och däggdjursvävnader.

Figur 1 visar ett exempel på de kinetiska kurvorna för OD-absorbansen vid 412 nm över tid som erhålls med hjälp av citratsynthase aktivitet kolorimetrisk analys för att mäta Drosophila bröstkorgen vävnad homogena av olika genotyper. Det är välkänt att PGC-1 α är en Master regulator av mitokondriell biogenes. PGC-1 α är funktionellt bevarad mellan Drosophila och människor. Drosophila RNF34 (dRNF34) är en E3 ubiquiti...

Watch this Scientific Journal Video about A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster at JoVE.com

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

Vi presenterar ett protokoll för en kolorimetrisk analys av citratsyntas aktivitet för kvantifiering av intakt mitokondriell massa i Drosophila vävnad Homogenates.

En kolorimetrisk analys av Citratsyntas aktivitet i Drosophila melanogaster

Mitochondria play the most prominent roles in cellular metabolism by producing ATP through oxidative phosphorylation and regulating a variety of ...

Drosophila fungerar som bra modellsystem för att studera mitokondriell funktion. Här presenterar vi ett protokoll för mätning citrat syntas verksamhet i vävnad homogenate från vuxna flugor. Detta protokoll kräver inte isolering av mitokondrier.Det är snabbt och enkelt och det är lämpligt för att mäta citratsyntasaktivitet i larver, odlade celler och däggdjursvävnader. Börja med att samla vuxna flugor för varje prov, se till att samla minst tre exemplar prover för varje genotyp. Förbered 500 mikroliter iskall extraktionsbuffert med 20 millimolar HEPES, en millimolar EDTA, och 0,1%triton X-100 i ett provrör på 1,5 milliliter för varje provrör.Bedöva de vuxna flugor med koldioxid på en anestesi pad. För att isolera bröstkorgarna, fixa dem med ett par tång och isolera flug buken genom att skära längs bröstkorgens och bukens gräns med en sax. Samla in flugkorgarna för citratsyntasaktivitetsanalysen.Överför 10 vuxna flyga bröstkorgar till 100 mikroliter av iskall extraktion buffert omedelbart och homogenisera dem med en mortelstöt på is. Håll proverna kalla genom att homogenisera i fem till 10 sekunder på is, låt dem sitta på is i fem sekunder och upprepa sedan tills alla vävnader är helt homogeniserade. Aliquot 10 mikroliter av varje homogeniserat prov i ett nytt rör för proteinhalt mätning, hålla dessa rör på is också.Tillsätt 400 mikroliter av iskall extraktionsbuffert till varje återstående prov för en total volym på 500 mikroliter och pipetten upp och ned försiktigt för att blanda. För varje reaktion, tillsätt en mikroliter av utspädd cell lysate till 150 mikroliter av den nyberedda reaktionslösningen. Blanda noggrant genom att försiktigt pipettera, se till att undvika bubbla bildning, sedan använda en tallrik läsare för att mäta absorbans vid 412 nanometer var 10 till 30 sekunder i fyra minuter vid 25 grader Celsius.Rita data som absorbans över tiden och beräkna sedan lutningen för den linjära delen av kurvan. Slutligen, dela reaktionshastigheten eller lutningen med provproteinkoncentrationen för att normalisera citratsyntasaktiviteten. Det var en hypotes om att knockdown av dRNF34 i Drosophila muskel skulle öka mitokondriellt citrat syntas aktivitet medan knockdown av dPGC-1 skulle vända denna ökning.En initial linjär enzymatisk hastighet fastställdes för varje haltbestämning;trendlinjernas sluttningar representerar de maximala reaktionshastigheterna som är likvärdiga med de olika genotypernas maximala citratsyntasaktiviteter. Maximalcitratsyntasaktiviteterna beräknades från de kinetiska kurvorna och normaliserades genom proteinkoncentration. Resultaten visade att syntasaktiviteten hos flyga thoraxer verkligen ökade med muskelspecifika dRNF34 knockdown och ökningen återfördes av muskelspecifika dPGC-1 knockdown.Vid homogenisering av provet är det viktigt att tippa röret och kontrollera homogenatet för att se till att det inte finns några proppar och att vävnaderna i röret är helt homogeniserade. Efter provsamling ska alla provbehandlingar utföras på is. Den citrat syntas aktivitetsanalys används för att kvantifiera intakt mitokondriell massa.Korrekt kvantifiering av intakt mitokondriell massa är mycket viktigt för att utvärdera mitokondriell funktion.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detektering av den pH-beroende aktivitet för<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; och<em&gt; In Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

A Fluorescence-based Assay of Phospholipid Scramblase Activity

En fluorescensbaserad analys av Phospholipid Scramblase Aktivitet

Scramblases translocate phospholipids across the membrane bilayer bidirectionally in an ATP-independent manner. The first scramblase to be identified and ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

En kolorimetrisk metod för att mäta järnhalten i växter

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Kartläggning Metabolism: Övervakning av laktatdehydrogenas aktivitet direkt i vävnad

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

En In Vitro Assay att upptäcka tRNA-Isopentenyl transferas aktivitet

N6-isopentenyladenosine RNA modifications are functionally diverse and highly conserved among prokaryotes and eukaryotes. One of the most highly conserved ...

Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions

Koffein utvinning, enzymaktivitet och genuttryck av koffein syntas från växten cellsuspensioner

Caffeine (1,3,7-trimethylxanthine) is a purine alkaloid present in popular drinks such as coffee and tea. This secondary metabolite is regarded as a ...

A Fluorogenic Peptide Cleavage Assay to Screen for Proteolytic Activity: Applications for coronavirus spike protein activation

En Fluorogenic peptid klyvning analysen till skärmen för den proteolytiska aktiviteten: program för coronavirus spike protein aktivering

Enveloped viruses such as coronaviruses or influenza virus require proteolytic cleavage of their fusion protein to be able to infect the host cell. Often ...

Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

Kontinuerlig fluorescensbaserad endonukleaskopplad DNA-metyleringsanalys för att screena för DNA-metyltransferashämmare

DNA methylation, a form of epigenetic gene regulation, is important for normal cellular function. In cells, proteins called DNA methyltransferases (DNMTs) ...

Measuring Caspase Activity Using a Fluorometric Assay or Flow Cytometry

Mätning av kaspasaktivitet med hjälp av en fluorometrisk analys eller flödescytometri

The activation of cysteine proteases, known as caspases, remains an important process in multiple forms of cell death. Caspases are critical initiators ...

Smartphone as an Analytical Device to Quantify Protein Using Bradford Assay

RGBradford: Protein Quantitation with a Smartphone Camera

An Alternative Approach to Protein Quantification by Bradford Assay Using a Smartphone (Video) | JoVE

RGBradford: Proteinkvantifiering med en smartphonekamera

Protein quantitation is an essential procedure in life sciences research. Amongst several other methods, the Bradford assay is one of the most used. ...