Name: a colorimetric assay of citrate synthase activity in drosophila melanogaster
Uploaded: 2020-01-16T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31401013 ve 31471010), Şangay Belediyesi Bilim ve Teknoloji Komisyonu, Şangay Pujiang Programı (14PJ1405900) ve Doğa Bilimleri Vakfı hibe tarafından desteklenmiştir Şangay (19ZR1446400).

1. D. melanogasteriçin Kolorimetrik Sitrat Synthase Aktivite Teşbesi16
<ol><li>Her örnek için on yetişkin sinek toplayın. Her genotip için en az üçe trilikat örnekleri toplayın.</li>
	<li>Her numune için 1,5 mL test tüpünde 20 mM HEPES (pH = 7,2), 1 mM EDTA ve %0,1 triton X-100 içeren 500 μL buz gibi ekstraksiyon tamponu hazırlayın.</li>
	<li>Anestezi pedüzerinde CO2 ile yetişkin sinekler anestezi ve istenilen dokuları izole. Yetişkin sinek toraksları i...

<ol>
	<li>Yee, C., Yang, W., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intrinsic+apoptosis+pathway+mediates+the+pro-longevity+response+to+mitochondrial+ROS+in+C.+elegans.">The intrinsic apoptosis pathway mediates the pro-longevity response to mitochondrial ROS in C. elegans.</a> Cell. 157 (4), 897-909 (2014).</li><li>Sarasija, S., Norman, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gamma-Secretase+Independent+Role+for+Presenilin+in+Calcium+Homeostasis+Impacts+Mitochondrial+Function+and+Morphology+in+Caenorhabditis+elegans.">A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (4), 1453-1466 (2015).</li><li>Oxenoid, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">Architecture of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).</li><li>Hekimi, S., Wang, Y., Noe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+ROS+and+the+Effectors+of+the+Intrinsic+Apoptotic+Pathway+in+Aging+Cells:+The+Discerning+Killers!.">Mitochondrial ROS and the Effectors of the Intrinsic Apoptotic Pathway in Aging Cells: The Discerning Killers!.</a> Frontiers in Genetics. 7, 161 (2016).</li><li>Kim, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Biosynthesis+Coordinates+a+Mitochondrial-to-Cytosolic+Stress+Response.">Lipid Biosynthesis Coordinates a Mitochondrial-to-Cytosolic Stress Response.</a> Cell. 166 (6), 1539-1552 (2016).</li><li>Wang, Y., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+longevity+in+animals:+Untangling+the+knot.">Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot.</a> Science. 350 (6265), 1204-1207 (2015).</li><li>Ray, A., Martinez, B. A., Berkowitz, L. A., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction,+oxidative+stress,+and+neurodegeneration+elicited+by+a+bacterial+metabolite+in+a+C.+elegans+Parkinson's+model.">Mitochondrial dysfunction, oxidative stress, and neurodegeneration elicited by a bacterial metabolite in a C. elegans Parkinson's model.</a> Cell Death &amp; Disease. 5, e984 (2014).</li><li>Tronstad, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+quantification+of+cellular+mitochondrial+morphology+and+content.">Regulation and quantification of cellular mitochondrial morphology and content.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (35), 5634-5652 (2014).</li><li>Wiegand, G., Remington, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrate+synthase:+structure,+control,+and+mechanism.">Citrate synthase: structure, control, and mechanism.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 15, 97-117 (1986).</li><li>Lopez-Lluch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+induces+mitochondrial+biogenesis+and+bioenergetic+efficiency.">Calorie restriction induces mitochondrial biogenesis and bioenergetic efficiency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (6), 1768-1773 (2006).</li><li>MacInnis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+mitochondrial+adaptations+in+human+skeletal+muscle+after+interval+compared+to+continuous+single-leg+cycling+matched+for+total+work.">Superior mitochondrial adaptations in human skeletal muscle after interval compared to continuous single-leg cycling matched for total work.</a> Journal of Physiology. 595 (9), 2955-2968 (2017).</li><li>Gillen, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Twelve+Weeks+of+Sprint+Interval+Training+Improves+Indices+of+Cardiometabolic+Health+Similar+to+Traditional+Endurance+Training+despite+a+Five-Fold+Lower+Exercise+Volume+and+Time+Commitment.">Twelve Weeks of Sprint Interval Training Improves Indices of Cardiometabolic Health Similar to Traditional Endurance Training despite a Five-Fold Lower Exercise Volume and Time Commitment.</a> PLoS One. 11 (4), e0154075 (2016).</li><li>Mukherjee, S., Basar, M. A., Davis, C., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+functional+similarities+and+divergences+between+Drosophila+Spargel/dPGC-1+and+mammalian+PGC-1+protein.">Emerging functional similarities and divergences between Drosophila Spargel/dPGC-1 and mammalian PGC-1 protein.</a> Frontiers in Genetics. 5, 216 (2014).</li><li>Mukherjee, S., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spargel/dPGC-1+is+a+new+downstream+effector+in+the+insulin-TOR+signaling+pathway+in+Drosophila.">Spargel/dPGC-1 is a new downstream effector in the insulin-TOR signaling pathway in Drosophila.</a> Genetics. 195 (2), 433-441 (2013).</li><li>Diop, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGC-1/Spargel+Counteracts+High-Fat-Diet-Induced+Obesity+and+Cardiac+Lipotoxicity+Downstream+of+TOR+and+Brummer+ATGL+Lipase.">PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase.</a> Cell Reports. 10 (9), 1572-1584 (2015).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14 (5), 623-634 (2011).</li><li>Wei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNF34+modulates+the+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+capacity+in+muscle+and+lipid+metabolism+through+ubiquitination+of+PGC-1+in+Drosophila.">RNF34 modulates the mitochondrial biogenesis and exercise capacity in muscle and lipid metabolism through ubiquitination of PGC-1 in Drosophila.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 50 (10), 1038-1046 (2018).</li><li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila.">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 105-115 (2014).</li><li>Bosco, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oxygen+concentration+and+pressure+on+Drosophila+melanogaster:+oxidative+stress,+mitochondrial+activity,+and+survivorship.">Effects of oxygen concentration and pressure on Drosophila melanogaster: oxidative stress, mitochondrial activity, and survivorship.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 88 (4), 222-234 (2015).</li></ol>

Bir model olarak Drosophila kullanarak Metabolik çalışmalar dikkate genetik arka plan, diyet almak gerekir, ve sineklerin stok bakım18. Farklı genetik arka planların sitrat sintaz aktivitesinin ölçümü üzerindeki etkilerini önlemek için, Drosophila'nın farklı suşları 10 nesil boyunca kontrol etütlerine geri geçilmelidir. Deneylerimizde kullanılan tüm Drosophila suşlarının genetik arka planı w1118'dir,bu yüzden w1118'i...

Mitokondri en iyi enerji para birimi, ATP, trikarboksilik asit döngüsü (yani, Krebs döngüsü) ve oksidatif fosforilasyon yoluyla üretmek çoğu ökaryotik organizmalar, güç üreten organeller olarak bilinir. Mitokondri de apoptoz1düzenlenmesi gibi diğer fizyolojik süreçlerin bir çok önemli rol oynadığı bulunmuştur, Ca2 + homeostazı2,3, reaktif oksidasyon türleri (ROS) nesil4, ve endoplazmik retikulum (ER)-stres yanıtı5. Mitokondriyal disfonksiyon herhangi bir yaşta vücutta herhangi bir organı etkileyebilir ve metabolik birincil nedenidir, yaşlanma ile ilgili6, ve nörodejeneratif hastalıklar7. Bozulmamış mitokondri mekanistik mitokondriyal fonksiyon ile ilgilidir. Bu nedenle, bozulmamış mitokondriyal kütlenin doğru nicelleştirilmesi mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesi için çok önemlidir8. Sitrat synthase, trikarboksilik asit döngüsünün ilk adımda bir oran sınırlayıcı enzim9, ökaryotik hücreler içinde mitokondriyal matris lokalize, ve böylece bozulmamış mitokondriyal kitle nin varlığı için bir nicel belirteç olarak kullanılabilir9,10. Sitrat sintaz aktivitesi de bozulmamış mitokondriyal proteinler için bir normalleşme faktörü olarak kullanılabilir11,12.
Meyve sinek, Drosophila melanogaster, mitokondriyal fonksiyon eğitimi için mükemmel bir model sistemidir, mitokondri de önemli roller oynayan birçok molekül ve yollar evrimsel olarak Insanlara Drosophila korunur13,14,15. Burada, Drosophila dokusunda kolorimetrik bir test ile sitrat synthase aktivitesinin ölçülmesi için hızlı ve basit bir yöntem için bir protokol savuruyoruz16 iyi plaka biçiminde homojen. Sitrat synthase aktivite sintaz, Drosophila doku homojenate sitrat synthase asetil koenzim A ile oksaloasetat reaksiyonu katalizler (asetil CoA) sitrat CoA-SH ve H+oluşturmak için . CoA-SH daha sonra 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoik asit) (DTNB) ile reaksiyona girarak 412 nm'de spektrofotometrik olarak kolayca ölçülebilen renkli bir ürün olan 2-nitro-5-tiobenzoat (TNB) üretir. Sitrat synthase aktivitesi renk üretim hızı ile yansıtılabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (TRIZMA Base)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-CoA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithio-bis-nitrobenzoic acid (DTNB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V900106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxaloacetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet pestle</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>F619072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet pestle motor</td>
			<td>Tiangen</td>
			<td>OSE-Y10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Eon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Assay kit</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>A110694-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a colorimetric assay of citrate synthase activity in drosophila melanogaster

Mitokondri oksidatif fosforilasyon yoluyla ATP üreterek ve çeşitli fizyolojik süreçleri düzenleyerek hücresel metabolizmada en önemli rolleri oynar. Mitokondriyal disfonksiyon metabolik ve nörodejeneratif hastalıkların bir dizi birincil nedenidir. Bozulmamış mitokondri onların düzgün çalışması için kritik öneme sahiptir. Enzim sitrat sintaz mitokondriyal matriks lokalize ve böylece bozulmamış mitokondriyal kitlenin bir nicel enzim belirteci olarak kullanılabilir. Mitokondri önemli işlevleri olan birçok molekül ve yollar son derece insanlar ve Drosophilaarasında korunmuş olduğu göz önüne alındığında , ve güçlü genetik araçlar bir dizi Drosophilamevcuttur , Drosophila mitokondriyal fonksiyonu incelemek için iyi bir model sistemi olarak hizmet vermektedir. Burada, mitokondriyi izole etmeden yetişkin sineklerinden homojen dokudaki sitrat sintaz aktivitesinin hızlı ve basit ölçümü için bir protokol sıyoruz. Bu protokol aynı zamanda larvalar, kültürlü hücreler ve memeli dokularında sitrat synthase aktivitesini ölçmek için de uygundur.

Şekil 1, farklı genotiplerin Drosophila toraks dokusu homojenatlarını ölçmek için sitrat sintaz aktivitesi kolorimetrik töz kullanılarak elde edilen 412 nm'de OD absorbansı için kinetik eğrilerin bir örneğini sunar. PGC-1α'nın mitokondriyal biyogenezin ana düzenleyicisi olduğu bilinmektedir. PGC-1α, Drosophila ve insanlar arasında fonksiyonel olarak korunur. Drosophila RNF34 (dRNF34) Drosophila PGC-1α, ...

Watch this Scientific Journal Video about A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster at JoVE.com

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

Drosophila doku homojenlerinde bozulmamış mitokondriyal kütlenin nicelleştirilmesi için sitrat sintaz aktivitesinin kolorimetrik testi için bir protokol sönmesin.

Drosophila Melanogaster'de Sitrat Synthase Aktivitesinin Kolorimetrik Tsöplini

Mitochondria play the most prominent roles in cellular metabolism by producing ATP through oxidative phosphorylation and regulating a variety of ...

Drosophila mitokondriyal fonksiyon eğitimi için iyi bir model sistemi olarak hizmet vermektedir. Burada yetişkin sineklerden homojen dokudaki sitrat sintaz aktivitesini ölçmek için bir protokol salıyoruz. Bu protokol mitokondri izolasyon gerektirmez.Hızlı ve basittir ve larvalarda, kültürlü hücrelerde ve memeli dokularında sitrat sintaz aktivitesini ölçmek için uygundur. Her örnek için yetişkin sinekler toplayarak başlayın, her genotip için en az üç aylili örnekler toplamak için emin olun. Her numune için 1,5 mililitrelik bir test tüpünde 20 milimolar HEPES, bir milimolar EDTA ve %0,1 triton X-100 içeren 500 mikrolitre buz gibi ekstraksiyon tamponu hazırlayın.Anestezi pedinde karbondioksit le yetişkin sineklerini anesthetize edin. Toraks izole etmek için, bir çift forceps ile düzeltmek ve bir makas ile toraks ve karın sınırı boyunca keserek sinek karın izole. Sitrat synthase aktivite analizi için sinek toraks toplamak.10 yetişkin sinek tothoraxes buz gibi ekstraksiyon tampon 100 mikrolitre hemen aktarın ve buz üzerinde bir havaneli ile homojenize. Buzüzerinde 5-10 saniye homojenize ederek numuneleri soğuk tutun, beş saniye boyunca buzun üzerinde bekletin, sonra tüm dokular tamamen homojenize olana kadar tekrarlayın. Aliquot 10 mikrolitre her homojenize örnek protein içeriği ölçümü için yeni bir tüp içine, buz da bu tüpler tutarak.Toplam hacmi 500 mikrolitre ve pipet yavaşça karıştırmak için kalan her numuneye 400 mikrolitre buz gibi çıkarma tamponu ekleyin. Her reaksiyon için, yeni hazırlanmış reaksiyon çözeltisinin 150 mikrolitresine bir mikrolitre seyreltilmiş hücre lisat ekleyin. Kabarcık oluşumunu önlemek için emin, yavaşça pipetleme tarafından iyice karıştırın, sonra 25 derece santigrat dört dakika boyunca her 10 ila 30 saniyede 412 nanometre emici ölçmek için bir plaka okuyucu kullanın.Verileri zaman içinde emici olarak çizin ve eğrinin doğrusal kısmının eğimini hesaplayın. Son olarak, sitrat synthase aktivitesini normalleştirmek için reaksiyon hızını veya eğimi örnek protein konsantrasyonu ile bölün. Drosophila kasdrNF34 knockdown dPGC-1 nakavt bu artışı tersine çevirecek iken mitokondriyal sitrat sitrat aktivitesini artıracağı varsayımında idi.Her bir töz için başlangıç lineer enzimatik oran oluşturulmuştur;eğilim çizgilerinin eğimleri, farklı genotiplerin maksimal sitrat sintaz aktivitelerine eşdeğer olan maksimal reaksiyon oranlarını temsil eder. Maksimal sitrat sintaz aktiviteleri kinetik eğrilerden hesaplandı ve protein konsantrasyonu ile normalleştirildi. Sonuçlar, sinek torakslarının sintaz aktivitesinin kaslara özgü dRNF34 nakavtı ile arttığını ve artışın kaslara özgü dPGC-1 nakavtı ile tersine çevrildiğini göstermiştir.Numuneyi homojenize ederken, pıhtı olmadığından ve tüpteki dokuların tamamen homojenleştirildiğinden emin olmak için tüpün ucunun ucu ve homojenin kontrol etmesi önemlidir. Numune nin toplanmasından sonra tüm numune tedavileri buz üzerinde yapılmalıdır. Sitrat synthase aktivitesi testi bozulmamış mitokondriyal kütleyi ölçmek için kullanılır.Bozulmamış mitokondriyal kütlenin doğru nicelleştirilmesi mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesi için çok önemlidir.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

pH bağımlı aktivitenin tespiti<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; İn Vitro</em&gt; ve<em&gt; İn Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

A Fluorescence-based Assay of Phospholipid Scramblase Activity

Fosfolipid Scramblase Aktivitesinin bir floresan bazlı analiz

Scramblases translocate phospholipids across the membrane bilayer bidirectionally in an ATP-independent manner. The first scramblase to be identified and ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Eşleme metabolizma: doğrudan dokusunda laktat dehidrogenaz etkinliğini izleme

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

TRNA-Isopentenyl transferaz aktivite tespit etmek için bir In Vitro tahlil

N6-isopentenyladenosine RNA modifications are functionally diverse and highly conserved among prokaryotes and eukaryotes. One of the most highly conserved ...

Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions

Kafein ayıklama, enzimatik aktivite ve kafein Synthase bitki hücre kullanılamaz hale gelen gen ifadesi

Caffeine (1,3,7-trimethylxanthine) is a purine alkaloid present in popular drinks such as coffee and tea. This secondary metabolite is regarded as a ...

A Fluorogenic Peptide Cleavage Assay to Screen for Proteolytic Activity: Applications for coronavirus spike protein activation

Bir Fluorogenic peptid bölünme tahlil için proteolitik aktivite ekran: coronavirus uygulamalarda spike protein etkinleştirme

Enveloped viruses such as coronaviruses or influenza virus require proteolytic cleavage of their fusion protein to be able to infect the host cell. Often ...

Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

DNA Metiltransferaz İnhibitörlerini Taramak için Sürekli Floresan Bazlı Endonükleaz Bağlantılı DNA Metilasyon Testi

DNA methylation, a form of epigenetic gene regulation, is important for normal cellular function. In cells, proteins called DNA methyltransferases (DNMTs) ...

Measuring Caspase Activity Using a Fluorometric Assay or Flow Cytometry

Florometrik Tahlil veya Akış Sitometrisi Kullanarak Kaspaz Aktivitesinin Ölçülmesi

The activation of cysteine proteases, known as caspases, remains an important process in multiple forms of cell death. Caspases are critical initiators ...

Smartphone as an Analytical Device to Quantify Protein Using Bradford Assay

RGBradford: Protein Quantitation with a Smartphone Camera

An Alternative Approach to Protein Quantification by Bradford Assay Using a Smartphone (Video) | JoVE

RGBradford: Akıllı Telefon Kamerası ile Protein Kantitasyonu

Protein quantitation is an essential procedure in life sciences research. Amongst several other methods, the Bradford assay is one of the most used. ...