Name: analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis
Uploaded: 2019-03-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis at JoVE.com

يتم تعريف لا تضارب في المصالح.

1-مير-143 و 506 مير تعداء
تحذير: استخدام قفازات مطاط والنظارات الواقية، ومعطف مختبر أثناء إجراء التجارب الموصوفة. وعند الاقتضاء، استخدام مجلس الوزراء السلامة الأحيائية مع مروحة مجلس الوزراء، دون عرقلة الخطوط الجوية أو مثيرة للقلق في تدفق الهواء الصفحي. دوماً تعيين حماية زجاج ا?...

<ol>
	<li>Schafer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+cycle:+a+review.">The cell cycle: a review.</a> Veternary Pathology. 35 (6), 461-478 (1998).</li><li>Barnum, K. J., O'Connell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+regulation+by+checkpoints.">Cell cycle regulation by checkpoints.</a> Methods in Molecular Biology. 1170, 29-40 (2014).</li><li>Malumbres, M., Barbacid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle,+CDKs+and+cancer:+a+changing+paradigm.">Cell cycle, CDKs and cancer: a changing paradigm.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (3), 153-166 (2009).</li><li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+CDK+inhibitor+dinaciclib+suppresses+neuroblastoma+growth+via+inhibiting+CDK2+and+CDK9+activity.">Multiple CDK inhibitor dinaciclib suppresses neuroblastoma growth via inhibiting CDK2 and CDK9 activity.</a> Science Repository. 6, 29090 (2016).</li><li>Brown, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDK1+structures+reveal+conserved+and+unique+features+of+the+essential+cell+cycle+CDK.">CDK1 structures reveal conserved and unique features of the essential cell cycle CDK.</a> Nature Communications. 6, 6769 (2015).</li><li>Sanchez-Martinez, C., Gelbert, L. M., Lallena, M. J., de Dios, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+dependent+kinase+(CDK)+inhibitors+as+anticancer+drugs.">Cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors as anticancer drugs.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 25 (17), 3420-3435 (2015).</li><li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval:+Ribociclib+for+the+Treatment+of+Postmenopausal+Women+with+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Advanced+or+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval: Ribociclib for the Treatment of Postmenopausal Women with Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Advanced or Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li><li>Asghar, U., Witkiewicz, A. K., Turner, N. C., Knudsen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+history+and+future+of+targeting+cyclin-dependent+kinases+in+cancer+therapy.">The history and future of targeting cyclin-dependent kinases in cancer therapy.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (2), 130-146 (2015).</li><li>Mullard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+Novartis's+CDK4/6+inhibitor.">FDA approves Novartis's CDK4/6 inhibitor.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (4), 229 (2017).</li><li>Walker, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Palbociclib+in+Combination+with+Fulvestrant+for+the+Treatment+of+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval of Palbociclib in Combination with Fulvestrant for the Treatment of Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. 22 (20), 4968-4972 (2016).</li><li>Hossian, A., Sajib, M. S., Tullar, P. E., Mikelis, C. M., Mattheolabakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipronged+activity+of+combinatorial+miR-143+and+miR-506+inhibits+Lung+Cancer+cell+cycle+progression+and+angiogenesis+in+vitro.">Multipronged activity of combinatorial miR-143 and miR-506 inhibits Lung Cancer cell cycle progression and angiogenesis in vitro.</a> Science Repository. 8 (1), 10495 (2018).</li><li>Inamura, K., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+In+Lung+Cancer:+Novel+Biomarkers+and+Potential+Tools+for+Treatment.">MicroRNA In Lung Cancer: Novel Biomarkers and Potential Tools for Treatment.</a> Journal of Clinical Medicine. 5 (3), (2016).</li><li>Mizuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microRNA+expression+signature+of+small+cell+lung+cancer:+tumor+suppressors+of+miR-27a-5p+and+miR-34b-3p+and+their+targeted+oncogenes.">The microRNA expression signature of small cell lung cancer: tumor suppressors of miR-27a-5p and miR-34b-3p and their targeted oncogenes.</a> Journal of Human Genetics. 62 (7), 671-678 (2017).</li><li>Zhang, B., Pan, X., Cobb, G. P., Anderson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNAs+as+oncogenes+and+tumor+suppressors.">microRNAs as oncogenes and tumor suppressors.</a> Developmental Biology. 302 (1), 1-12 (2007).</li><li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+MicroRNAs+in+human+cancer.">The role of MicroRNAs in human cancer.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 1, 15004 (2016).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+recurrence+in+early+stage+non-small+cell+lung+cancer+using+computer+extracted+nuclear+features+from+digital+H&amp;E+images.">Prediction of recurrence in early stage non-small cell lung cancer using computer extracted nuclear features from digital H&amp;E images.</a> Science Repository. 7 (1), 13543 (2017).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).</li><li>Saxon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p52+expression+enhances+lung+cancer+progression.">p52 expression enhances lung cancer progression.</a> Science Repository. 8 (1), 6078 (2018).</li><li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+Analyzer+for+ImageJ.">Angiogenesis Analyzer for ImageJ.</a> ImageJ User and Developer Conference. , (2012).</li><li>Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=edgeR:+a+Bioconductor+package+for+differential+expression+analysis+of+digital+gene+expression+data.">edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data.</a> Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).</li><li>Robinson, M. D., Oshlack, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+scaling+normalization+method+for+differential+expression+analysis+of+RNA-seq+data.">A scaling normalization method for differential expression analysis of RNA-seq data.</a> Genome Biology. 11 (3), R25 (2010).</li><li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis.">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312 (2014).</li><li>Kong, D. H., Kim, M. R., Jang, J. H., Na, H. J., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Review+of+Anti-Angiogenic+Targets+for+Monoclonal+Antibody+Cancer+Therapy.">A Review of Anti-Angiogenic Targets for Monoclonal Antibody Cancer Therapy.</a> International Journal of Molecular Science. 18 (8), (2017).</li><li>Wong, P. P., Bodrug, N., Hodivala-Dilke, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+Novel+Methods+for+Modulating+Tumor+Blood+Vessels+in+Cancer+Treatment.">Exploring Novel Methods for Modulating Tumor Blood Vessels in Cancer Treatment.</a> Current Biology. 26 (21), R1161-R1166 (2016).</li><li>Evan, G. I., Brown, L., Whyte, M., Harrington, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+and+the+cell+cycle.">Apoptosis and the cell cycle.</a> Current Opinion in Cell Biology. 7 (6), 825-834 (1995).</li><li>Haab, B. B., Dunham, M. J., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+for+highly+parallel+detection+and+quantitation+of+specific+proteins+and+antibodies+in+complex+solutions.">Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions.</a> Genome Biology. 2 (2), RESEARCH0004 (2001).</li><li>Sutandy, F. X., Qian, J., Chen, C. S., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+protein+microarrays.">Overview of protein microarrays.</a> Currrent Protocols in Protein Science. 27, 21 (2013).</li><li>St-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+sequencing+of+neonatal+thymic+epithelial+cells.">Transcriptome sequencing of neonatal thymic epithelial cells.</a> Science Repository. 3, 1860 (2013).</li></ol>

ميرناس يمكن أن تعمل كالعلاجات الموجهة لعلاج السرطان، وإذ تسلم بالتقلبات مستويات التعبير في المريضة مقابل أنسجة طبيعية. هدفت هذه الدراسة إلى تحديد ميرناس التي يحتمل أن تكون وقف تقدم دورة الخلية خلال مراحل متعددة. وقد حددت أن مير-143 و 506 مير وقف دورة الخلية من الخلايا السرطانية، والبروتوكول?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.
One of the authors&#39; names was corrected from:
George Matthaiolampakis
to:
George Mattheolabakis

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.

Erratum: Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

دورة الخلية هو مزيج من الأحداث التنظيمية المتعددة التي تسمح بالازدواجية في انتشار الحمض النووي والخلية عن طريق عملية الانقسامية1. تعتمد على cyclin مؤنزم (كدكس) تنظيم وتعزيز دورة الخلية2. فيما بينها، قد CDK الانقسامية (CDK1) والطور البيني كدكس (CDK2 و CDK4 و CDK6) دوراً محوريا في تطور دورة الخلية3. هو فوسفوريلاتيد البروتين الشبكية (الميزانية العادية) بمجمع CDK4/CDK6 للسماح بتقدم دورة الخلية4، وتفعيل CDK1 أمر ضروري لنجاح انقسام الخلية5. تم تطوير العديد CDK مثبطات وتقييمها في التجارب السريرية على مدى العقود القليلة الماضية، مما يشير إلى إمكانية استهداف كدكس في علاج السرطان. في الواقع، تمت الموافقة على ثلاثة CDK مثبطات لعلاج سرطان الثدي مؤخرا6،،من78،،من910. وهكذا، كدكس، وعلى وجه الخصوص، CDK1 و CDK4/6، ذات أهمية كبيرة في تنظيم تطور سرطان الخلية.
ميرناس (ميرس) يتم الكشف الصغيرة، غير الترميز والمنظمين بوستترانسكريبشونال التعبير الجيني، وتنظيم ما يقرب من 30 في المائة من جميع الجينات البشرية11. يستند نشاطها القمع متعدية أو تدهور رسول الكشف (مرناس)12. توضيحية لأهميتها البيولوجية، تم تحديد أكثر من 5,000 ميرناس ويمكن تنظيم جزيء ميرنا وحيدة متعددة الجينات11،13. الأهم من ذلك، ارتبط تعبير ميرنا من أمراض مختلفة، وحالات المرض، بما في ذلك السرطان13. في الواقع، قد اتسمت ميرناس كما النمطان أو المكثفات الورم، قادرة على تعزيز أو قمع الورم التنمية والتقدم14،15. ويمكن تنظيم التعبير النسبي عن ميرناس في الأنسجة المريضة تطور المرض؛ وهكذا، تسليم خارجية ميرناس إمكانات علاجية.
سرطان الرئة السبب الرئيسي للوفيات الناجمة عن السرطان وأكثر من 60 في المائة من جميع الأورام الخبيثة في الرئة غير الصغيرة خلايا الرئة السرطان16،17، مع معدل البقاء على قيد الحياة 5 سنوات أقل من 20%18. تم تقييم استخدام مير-143-3 ف وف مير-506-3 مؤخرا لاستهداف دورة الخلية في خلايا سرطان الرئة11. مير-143 ومير-506 متواليات التي التكامل بين CDK1 و CDK4/CDK6، وتم تحليل آثار هذه ميرس اثنان على خلايا A549. تفاصيل تجريبية تعرض وتناقش في هذه الورقة. تم تقييم التعبير الجيني، وتقدم دورة الخلية، والمبرمج استخدام تصاميم تجريبية مختلفة وتيميبوينتس عقب تعداء. كنا في الوقت الحقيقي الأساليب الكمية بكر (RT-qPCR) جنبا إلى جنب مع تحليل ميكرواري لقياس التعبير الجيني محددة، واستخدمت الجيل التالي تسلسل الحمض النووي الريبي لتحديد الجينات العالمية التقلبات11. ويحدد طريقة الأخيرة الوفرة النسبية لنسخة كل مورثة مع حساسية عالية وإمكانية تكرار نتائج، بينما آلاف جينات يمكن أن تحلل من تحليل تجريبي واحد. بالإضافة إلى ذلك، أنجز تحليل أبوبتوتيك بسبب العلاج ميرنا ويرد هنا. المعلوماتية الحيوية استكمال تحليل المسار. المقدمة هنا هي البروتوكولات المستخدمة لتحليل العلاجية المحتملة من اندماجي مير-143 ومير-506.
والغرض الرئيسي من هذا البروتوكول تحديد آثار ميرناس في الخلايا، مع تركيز على دورة الخلية. مجموعة متنوعة التقنيات المقدمة هنا تمتد من تحليل التعبير الجيني قبل الترجمة (باستخدام qPCR) لوضع ورواية تقنيات لتحليل الجينات على مستوى البروتين، مثل تحليل ميكرواري. ونأمل أن هذا التقرير مفيد للباحثين المهتمين بالعمل مع ميرناس. بالإضافة إلى ذلك، يتم تقديم منهجية لتحليل تدفق سيتوميتريك دورة الخلية والمبرمج للخلايا.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2067px;" width="2066">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">-80 &#176;C Freezer</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">VWR40086A</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96 well plate</td>
			<td style="width:210px;">CELLTREAT Scientific&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">50-607-511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96-well Microwell Plates&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">12-556-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">A549 Non Small Cell Lung Cancer Cells</td>
			<td style="width:210px;">ATCC</td>
			<td style="width:1167px;">ATCC&#160;CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agarose</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">0710-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td style="width:210px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:1167px;">G2938c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ambion Silencer Negative Control No. 1 siRNA</td>
			<td style="width:210px;">Ambion</td>
			<td>AM4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibiotic-Antimycotic Solution (100x)</td>
			<td style="width:210px;">Gibco</td>
			<td style="width:1167px;">15240-062&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibody Array Assay Kit, 2 Reactions</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">KAS02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Microscoptics&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">IV-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">New Star Environment LLC</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Cycle Antibody Array, 2 Slides</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">ACC058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Logic+ Biosafety Cabinate</td>
			<td style="width:210px;">Labconco</td>
			<td style="width:1167px;">342391100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cellquest Pro</td>
			<td style="width:210px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:1167px;">Steps 5.14; 6.13: Used for calculating the population distrubution according to the cell cycle&#160; phase and for&#160; calculating the population distribution for the analysis of apoptosis&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CFX96 Real Time System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">CFX96 Optics Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CO2 Incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">HERAcell 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td style="width:210px;">Trevigen</td>
			<td style="width:1167px;">3433-010-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">FMA050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM 4.5 g/L Glucose, w/out Sodium Pyruvate, w/ L-Glutamine</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>VWRL0100-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">DNAse I</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>E1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Endothelial Cell Growth Supplement (ECGS)</td>
			<td style="width:210px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:1167px;">356006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Eppendorf Pipette Pick-A-Pack Sets</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">05-403-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethanol, Absolute (200 Proof), Molecular Biology Grade,&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Fisher BioReagents</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ethidium bromide</td>
			<td style="width:210px;">Alfa acar</td>
			<td style="width:1167px;">L07462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">F-12K Nutrient Mixture (Kaighn&#39;s Mod.) with L-glutamine, Corning</td>
			<td style="width:210px;">Corning</td>
			<td>45000-354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">FACS Calibur Flowcytometer</td>
			<td style="width:210px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum - Premium</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fisherbrand Basix Microcentrifuge Tubes with Standard Snap Caps</td>
			<td style="width:210px;">Fisherbrand Basix</td>
			<td style="width:1167px;">02-682-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Forma Series II water Jacket CO2 incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Heparin Solution (5000 U/mL)</td>
			<td style="width:210px;">Hospira</td>
			<td style="width:1167px;">NDC#63739-920-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Horixontal Electrophoresis system</td>
			<td style="width:210px;">Benchtop lab system</td>
			<td style="width:1167px;">BT102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-143-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH01315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-506-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH02824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PHC9394&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:210px;">Individual donors</td>
			<td style="width:1167px;">IRB# A15-3891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">HyClone Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">SH30256FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ingenuity Pathway Analysis</td>
			<td style="width:210px;">Qiagen</td>
			<td style="width:1167px;">Results: Used for bioinformatics pathway analysis</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Invitrogen UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td>10-977-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Lipofectamine 2000&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">11-668-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Loading dye 10X</td>
			<td style="width:210px;">ward&#39;s science+</td>
			<td style="width:1167px;">470024-814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Medium M199 (with Earle&#8242;s salts, L-glutamine and sodium bicarbonate)</td>
			<td style="width:210px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:1167px;">M4530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Microscope Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">MU130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Modfit LT</td>
			<td style="width:210px;">Verity Software</td>
			<td style="width:1167px;">Step 5.15: Alternative software for analysis of cell cycle population distributions</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Nanodrop</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">NanoDrop one C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM</td>
			<td style="width:210px;">Gibco by life technologies</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin-streptomycin 10/10</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>B21210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Power UP sybr green master mix</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td>A25780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Propidium Iodide</td>
			<td style="width:210px;">MP Biochemicals LLC</td>
			<td>IC19545825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Proscanarray HT Microarray scanner</td>
			<td style="width:210px;">Perkin elmer</td>
			<td style="width:1167px;">ASCNPHRG. We used excitation laser wavelength at 543 nm.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">q PCR optical adhesive cover</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;">4360954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Quick-RNA Kits</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R1055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ribonuclease A from Bovine pancreas</td>
			<td style="width:210px;">Sigma</td>
			<td>R6513-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">ScanArray Express</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td style="width:1167px;">Step 7.33: Microarray analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Shaker</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">2314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SimpliAmp Thermal Cycler</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 15ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470224-998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 50ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470225-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TBS Buffer, 20x liquid</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>10791-796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled&#160; centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled micro centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific BioLite Cell Culture Treated Flasks</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12-556-009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Thermo Scientific Pierce BCA Protein Assay</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PI23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Pierce RIPA Buffer</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>PI89900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Thermo-Fast 96-Well Full-Skirted Plates</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">AB0800WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Verso cDNA synthesis Kit (100 runs)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>AB1453B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ultra Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">10597012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">VWR standard solid door laboratory refrigerator</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis

سرطان الرئة (LC) هو السبب الرئيسي للوفيات المتصلة بالسرطان في جميع أنحاء العالم. مماثلة لغيرها من الخلايا السرطانية، سمات أساسية للخلايا LC هو الانتشار غير المنظم وانقسام الخلية. تثبيط الانتشار بوقف تقدم دورة الخلية قد ثبت أن يكون نهجاً واعداً لعلاج السرطان، بما في ذلك قانون العمل.
المداواة ميرنا قد برزت بوصفها المنظمين الجينات بوستترانسكريبشونال هام ومتزايد وتجري الآن دراسة لاستخدامها في علاج السرطان. أننا استخدمت في الأعمال الأخيرة، ميرناس اثنين، مير-143 ومير-506، لتنظيم دورة الخلية التقدم. تم transfected الخلايا السرطانية (NSCLC) الرئة الخلية غير الصغيرة A549، تم تحليل التعديلات التعبير الجيني، وأخيراً وقد تم تحليل نشاط أبوبتوتيك بسبب العلاج. تم الكشف عن دوونريجوليشن من cyclin تعتمد على مؤنزم (كدكس) (أي، CDK1، CDK4 و CDK6)، وتوقف دورة الخلية في التحولات المرحلة G1/S و G2/M. وأظهر تحليل مسار نشاط الأوعية المحتملة للعلاج، مما يمنح هذا النهج مع نشاط متعدد الأوجه. هنا، يتم وصف المنهجيات المستخدمة لتحديد النشاط ميرنا فيما يتعلق بتثبيط دورة الخلية، وتنظيم دورات تعريفية للمبرمج، وآثار العلاج على خلايا بطانية بتثبيط تولد الأوعية. من المؤمل أن الأساليب المعروضة هنا سيدعم البحوث في المستقبل على المداواة ميرنا والنشاط المقابلة وأن بيانات تمثيلية سيرشد الباحثين الآخرين خلال التحليلات التجريبية.

تحليل التعبير الجيني استخدام التفريد RT-قبكر وجل
أظهر تحليل التعبير الجيني التفاضلي استخدام الرايت qPCR downregulation كبيرة من الجينات المستهدفة CDK1 و CDK4 CDK6. وعرضت CDK1 و CDK4/6 أن تكون أداة مفيدة G2/M وانتقالات G1/S، على التوالي. تحليل أداء يسمح ب...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis at JoVE.com

Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

المداواة ميرنا لديها إمكانات كبيرة في تنظيم تطور السرطان. أثبت هنا النهج التحليلية تستخدم لتحديد النشاط لعلاج ميرنا اندماجي في وقف دورة الخلية والأوعية.

تحليل ميرنا اندماجي علاجات لتنظيم دورة الخلية والأوعية

Lung cancer (LC) is the leading cause of cancer-related deaths worldwide. Similar to other cancer cells, a fundamental characteristic of LC cells is ...

هذه الطريقة سوف تساعد على فهم وتنفيذ تقنيات المختبر اللازمة لتحديد نشاط اثنين من ميكرورنا في خلايا سرطان الرئة في المختبر. سرطان الرئة هو السبب الرئيسي للوفاة المرتبطة بالسرطان في جميع أنحاء العالم. هنا، نقدم تقنيات تمتد من منهجيات المختبرات الأساسية إلى بروتوكولات أكثر تعقيدا، مثل تحليل التعبير الجيني وmicroRNA بروتينات الأجسام المضادة، وتستخدم خصيصا لتحديد تأثير الإجراءات microRNA.الأساليب التالية سوف تساعدنا على الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة بتأثير اثنين microRNAs، ميكرورنا 143 وmicroRNA 506، على تنظيم دورة الخلايا في خلايا سرطان الرئة. نقدم تقنيات مختبر مختلفة، مثل نقل الخلايا، واستخراج الحمض النووي الريبي، وكمية في الوقت الحقيقي PCR وتحليل ميكرورنا. ونأمل أن يسهم عرضنا في استكمال هذه التحليلات بنجاح.أولاً، مقعد الخلايا المستزرعة في قارورة مناسبة كافية لاستخراج الحمض النووي الريبي والبروتين، لأداء التعبير الجيني باستخدام تحليل qPCR أو مجموعة صغيرة. ثم احتضان بين عشية وضحاها مع وسائل الإعلام تستكمل مع 10 في المئة FBS و 1 في المئة ستريبتوميسين البنسلين في المئة. في اليوم التالي، إعداد عينة ميكرورنا لtransfection عن طريق تمييع ميكرورنا 143 وmicroRNA 506 في وسائل الإعلام بتركيز 100 نانوموللار لكل منهما.أخرج القارورة من الحاضنة وأزل الوسائط. غسل مع 1X برنامج تلفزيوني. جميع الضوابط غير المعالجة سوف تحتوي على وسائل الإعلام غير مكتملة فقط مع الخلايا.احتضان الخلايا مع وسائل الإعلام transfection لمدة ست ساعات في حاضنة. بعد ست ساعات، قم بإزالة الوسائط واستبدلها بأربعة ملليلترات من الوسائط الجديدة والكاملة. حصاد الخلايا بعد 24 ساعة و 48 ساعة عن طريق التربسينسيس.المقبل، وغسل مرتين مع 1X برنامج تلفزيوني في كل أنبوب وإزالة افر. من أجل إجراء استخراج الحمض النووي الريبي في وقت لاحق، وتجميد الخلايا في ناقص 80 درجة مئوية. تم إجراء استخراج الحمض النووي الريبي باستخدام عدة RNA، بعد تعليمات الشركة المصنعة.أولا، إزالة الأنابيب من ناقص 80 درجة مئوية والسماح للذوبان. إضافة 300 ميكرولترات من عازلة التحلل والماصات صعودا وهبوطا لكسر غشاء الخلية. إضافة حجم متساو من 100 في المئة الإيثانول فائقة النقاء.ثم اخلط جيدا ووضعها في عمود منفصل. الطرد المركزي وإزالة تدفق من خلال. إضافة 400 ميكرولترات من الغسيل والمخزن المؤقت والطرد المركزي لإزالة العازلة.إضافة 5 ميكرولترات من DNAse 1 مع 75 microliters VNA العازلة الهضم في كل عينة، واحتضان لمدة 15 دقيقة. ثم غسل العينة مع 400 microliter RNA الإعدادية العازلة. المقبل، وغسل مرتين مع العازلة غسل RNA.الآن، إضافة المياه خالية من النوى إلى العمود، والطرد المركزي ومن ثم جمع الجيش الملكي النيبالي. قياس تركيز الحمض النووي الريبي. في هذه المرحلة، يمكن إرسال اثنين من ميكروغرام عينة RNA لتسلسل الحمض النووي الريبي.إعداد cDNA وفقا للبروتوكول الموصوف في قسم النص، وذلك باستخدام ثيرموسيكلير. إعداد حلول التمهيدي إلى الأمام وعكس مع DNAse RNAse خالية من المياه إلى تركيز 10 ميكرومولار. إعداد مزيج رئيسي لكل جين ليتم اكتشافه وفقًا لعدد العينات.بالنسبة لكل عينة من عينات cDNA، تكون كمية التفاعل وفقًا للجدول الموضح في النص. ضع كل عينة في آبارها. بالنسبة لـ qPCR ، من الجيد دائمًا إعداد مستند Excel مع تخطيط لوحة 96 جيدًا ، من أجل تتبع العينات.لكل عينة وتحليل الجينات، أداء رد فعلهم في ثلاث نسخ، أو على الأقل مكررة. ختم لوحة من البلاستيك مع شفافة، وتسرب البلاستيك واضحة بصريا. تجنب لمس طبقة رقيقة من البلاستيك مع الأصابع، وهذا يمكن أن تنتج إشارة كاذبة.تدور بسرعة لوحة لخلط كل من الكواشف إلى الجزء السفلي من آبارها. المقبل، تشغيل لوحة عينة باستخدام كمية، في الوقت الحقيقي PCR الجهاز. احصل على قيم CT التي تم إنشاؤها بواسطة جهاز qPCR، ثم قم بتحليل التعبير الجيني النسبي.نقل الخلايا كما هو موضح في القسم السابق من هذا الفيديو. حصاد الخلايا من كل عينة في منفصلة، 15 ملليلتر أنابيب معقم ل تريبسينسيس. بعد ذلك ، قم بغسل الخلايا مرتين مع PBS 1x ، عن طريق الطرد المركزي في 751G لمدة خمس دقائق ، ثم قم بإزالة المابير.إعادة تعليق وكسر لوحة عن طريق إضافة 200 ميكرولتر الجليد الباردة 1X برنامج تلفزيوني من خلال ماصة. إضافة ملليلترين من 70 في المئة الإيثانول الجليد الباردة، قطرة الحكمة إلى الأنبوب، في حين دوامة الأنبوب بلطف لإصلاح الخلايا. احتضن أنابيب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ووضعها في أربع درجات مئوية لمدة ساعة واحدة.إزالة الأنابيب من أربع درجات مئوية والطرد المركزي. إضافة 2ml الجليد البارد برنامج تلفزيوني ودوامة، ومن ثم إزالة supernatant عن طريق الطرد المركزي. إضافة 500 ميكرولتردات من 1x برنامج تلفزيوني تحتوي على يوديد بروبيد وريبونوكleaز A مع تركيز 50 و 200 ميكروغرام لكل ملليلتر، على التوالي، في كل عينة، وتحضن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.نقل العينات إلى أنابيب مناسبة، وحماية من الضوء، وتشغيلها على تدفق مقياس المقاييس. هذه التجربة هي لتحديد جميع دورات الخلايا proteins'expression تغيرت من قبل العلاج ميكرورنا. جمع عينات البروتين وفقا للإجراءات المذكورة في قسم transfection، وقياس مع BCA المقايسة.إزالة الشرائح من ناقص أربع درجات مئوية قبل ساعة واحدة من التجربة لجلب إلى درجة حرارة الغرفة وإزالة الرطوبة. خذ 70 ميكروغرام من عينات البروتين واحضر شرائح العينة وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة ، والتي يتم وصفها أيضًا خطوة بخطوة في قسم النص. هنا أن نلاحظ، غسل السليم من الشرائح مع المياه ديوند نقية جدا خطوة أخرى هامة، وهذا سوف يساعد على الحد من خلفية الشرائح.بالإضافة إلى ذلك، من الأهمية بمكان في هذه التجربة عدم تجفيف الشرائح عينة حتى الخطوة النهائية. وأخيرا، مسح الشريحة باستخدام جهاز الصفيف الصغير وتحليل البيانات. وقد تم تحليل qPCR للعينات المعالجة بالمجهر النووي الريبي الريبي لتحديد التعبير الجيني لل CDK1 و CDK4 و CDK6.هذه الجينات تنظيم دورة الخلية من الخلايا الطبيعية والسرطانية، وقد استهدفت كوسيلة لتثبيط تطور الورم. وأظهرت البيانات تأثير الهادوري لهذه الجينات بسبب العلاج مع ميكرورنا 143 و 506. وأظهرت بيانات توزيع دورة الخلية من قياس التدفق زيادة سكانية في مرحلة G0 وG1، وانخفاضاً سكانياً في المرحلة S بسبب تأثير المعالجة الدمجية للميكروبرنا 143 و506.كشف تحليل مجموعة صغيرة محددة دورة الخلية تغيرات تعبير البروتين من ما يقرب من 60 الجينات. خريطة الحرارة الممثلة المشار إليها downregulation على مستوى البروتين من الجينات المتعددة اللازمة لتطور دورة الخلية والانتشار، مثل CDK2، هيلين 1 و 3، RE2F1. وعلى النقيض من ذلك، فإن البروتينات المعترف بها عادة من قبل تأثيرها المثبط نمت كانت upregulated.وعلى الرغم من أن النتائج شبه كمية، وأن هناك حاجة إلى مزيد من التحليل، فإن تحليل المصفوفة الدقيقة يقدم لمحة سريعة عن نشاط المسار. نعتقد، بعد مشاهدة هذا الفيديو، سوف تكون قادرة على إجراء التجارب الأساسية، ومعقدة جيدا، مختبر التي سوف تساعدك على تحديد نشاط ميكرورنا في الخلايا.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

ميكرورنا استناداً إلى خزعة سائلة: تجربة ميرنا البلازما التوقيع المصنف (MSC) "فحص سرطان الرئة"

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

إعداد الخلايا الأولية من سرطان الدم الليمفاوي الحاد في مراحل مختلفة من دورة الخلية بالطرد المركزي الوترياتيون

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

طريقة بسيطة وسريعة للحصول على جودة عالية الورم الحمض النووي من العينات السريرية المرضية باستخدام جهائز بصمة اللمس

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

جيل وعزل الخلايا القبض على دورة الخلية مع كاريوتيبيس المعقدة

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Phospho Flow Cytometry with Fluorescent Cell Barcoding for Single Cell Signaling Analysis and Biomarker Discovery

والرمات التدفق الخلوي مع الخلية الفلورسنت المتوازية لخلية واحدة فقط مما يشير إلى تحليل واكتشاف العلامات البيولوجية

Aberrant cell signaling plays a central role in cancer development and progression. Most novel targeted therapies are indeed directed at proteins and ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

تحليل مقياس التدفق لأنواع الأكسجين التفاعلي الميتوكوندريا في الجذعية المكونة للدم وخلايا البروجينوتريو وابيضاض الدم المدفوع MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Optimization, Design and Avoiding Pitfalls in Manual Multiplex Fluorescent Immunohistochemistry

التحسين والتصميم وتجنب المزالق في الكيمياء المناعية الفلورية متعددة اليدوية

Microenvironment evaluation of intact tissue for analysis of cell infiltration and spatial organization are essential in understanding the complexity of ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

قياس دورة الخلية محددة من γH2AX والمبرمج بعد الإجهاد السامة الجينية عن طريق قياس التدفق الخلوي

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

تحليل السكان الجانبية في خطوط الخلايا السرطانية الصلبة

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

تقييم موت الخلية باستخدام الخلايا الخالية من البروبيوتيك في الثقافات الكروية ثلاثية الأبعاد للخلايا السرطانية القولون والمستقيم

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...