Name: analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis
Uploaded: 2019-03-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis at JoVE.com

Ingen interessekonflikter er erklæret.

1. miR-143 og miR 506 Transfektion
Forsigtig: Brug latex handsker, beskyttende briller og en laboratoriekittel mens de udfører de beskrevne eksperimenter. Når det er påkrævet, skal du bruge biosikkerhed kabinet med kabinet fan på, uden at blokere luftvejene eller forstyrre den laminar airflow. Altid sat den beskytte glasrude til passende højde, som beskrevet af fabrikanten.
<ol><li>Frø NSCLC A549 celler i en T25 cm2 kolbe/6/96 godt plade i DMEM/F12K medier suppleret med 10%...

<ol>
	<li>Schafer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+cycle:+a+review.">The cell cycle: a review.</a> Veternary Pathology. 35 (6), 461-478 (1998).</li><li>Barnum, K. J., O'Connell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+regulation+by+checkpoints.">Cell cycle regulation by checkpoints.</a> Methods in Molecular Biology. 1170, 29-40 (2014).</li><li>Malumbres, M., Barbacid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle,+CDKs+and+cancer:+a+changing+paradigm.">Cell cycle, CDKs and cancer: a changing paradigm.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (3), 153-166 (2009).</li><li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+CDK+inhibitor+dinaciclib+suppresses+neuroblastoma+growth+via+inhibiting+CDK2+and+CDK9+activity.">Multiple CDK inhibitor dinaciclib suppresses neuroblastoma growth via inhibiting CDK2 and CDK9 activity.</a> Science Repository. 6, 29090 (2016).</li><li>Brown, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDK1+structures+reveal+conserved+and+unique+features+of+the+essential+cell+cycle+CDK.">CDK1 structures reveal conserved and unique features of the essential cell cycle CDK.</a> Nature Communications. 6, 6769 (2015).</li><li>Sanchez-Martinez, C., Gelbert, L. M., Lallena, M. J., de Dios, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+dependent+kinase+(CDK)+inhibitors+as+anticancer+drugs.">Cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors as anticancer drugs.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 25 (17), 3420-3435 (2015).</li><li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval:+Ribociclib+for+the+Treatment+of+Postmenopausal+Women+with+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Advanced+or+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval: Ribociclib for the Treatment of Postmenopausal Women with Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Advanced or Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li><li>Asghar, U., Witkiewicz, A. K., Turner, N. C., Knudsen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+history+and+future+of+targeting+cyclin-dependent+kinases+in+cancer+therapy.">The history and future of targeting cyclin-dependent kinases in cancer therapy.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (2), 130-146 (2015).</li><li>Mullard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+Novartis's+CDK4/6+inhibitor.">FDA approves Novartis's CDK4/6 inhibitor.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (4), 229 (2017).</li><li>Walker, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Palbociclib+in+Combination+with+Fulvestrant+for+the+Treatment+of+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval of Palbociclib in Combination with Fulvestrant for the Treatment of Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. 22 (20), 4968-4972 (2016).</li><li>Hossian, A., Sajib, M. S., Tullar, P. E., Mikelis, C. M., Mattheolabakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipronged+activity+of+combinatorial+miR-143+and+miR-506+inhibits+Lung+Cancer+cell+cycle+progression+and+angiogenesis+in+vitro.">Multipronged activity of combinatorial miR-143 and miR-506 inhibits Lung Cancer cell cycle progression and angiogenesis in vitro.</a> Science Repository. 8 (1), 10495 (2018).</li><li>Inamura, K., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+In+Lung+Cancer:+Novel+Biomarkers+and+Potential+Tools+for+Treatment.">MicroRNA In Lung Cancer: Novel Biomarkers and Potential Tools for Treatment.</a> Journal of Clinical Medicine. 5 (3), (2016).</li><li>Mizuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microRNA+expression+signature+of+small+cell+lung+cancer:+tumor+suppressors+of+miR-27a-5p+and+miR-34b-3p+and+their+targeted+oncogenes.">The microRNA expression signature of small cell lung cancer: tumor suppressors of miR-27a-5p and miR-34b-3p and their targeted oncogenes.</a> Journal of Human Genetics. 62 (7), 671-678 (2017).</li><li>Zhang, B., Pan, X., Cobb, G. P., Anderson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNAs+as+oncogenes+and+tumor+suppressors.">microRNAs as oncogenes and tumor suppressors.</a> Developmental Biology. 302 (1), 1-12 (2007).</li><li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+MicroRNAs+in+human+cancer.">The role of MicroRNAs in human cancer.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 1, 15004 (2016).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+recurrence+in+early+stage+non-small+cell+lung+cancer+using+computer+extracted+nuclear+features+from+digital+H&amp;E+images.">Prediction of recurrence in early stage non-small cell lung cancer using computer extracted nuclear features from digital H&amp;E images.</a> Science Repository. 7 (1), 13543 (2017).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).</li><li>Saxon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p52+expression+enhances+lung+cancer+progression.">p52 expression enhances lung cancer progression.</a> Science Repository. 8 (1), 6078 (2018).</li><li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+Analyzer+for+ImageJ.">Angiogenesis Analyzer for ImageJ.</a> ImageJ User and Developer Conference. , (2012).</li><li>Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=edgeR:+a+Bioconductor+package+for+differential+expression+analysis+of+digital+gene+expression+data.">edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data.</a> Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).</li><li>Robinson, M. D., Oshlack, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+scaling+normalization+method+for+differential+expression+analysis+of+RNA-seq+data.">A scaling normalization method for differential expression analysis of RNA-seq data.</a> Genome Biology. 11 (3), R25 (2010).</li><li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis.">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312 (2014).</li><li>Kong, D. H., Kim, M. R., Jang, J. H., Na, H. J., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Review+of+Anti-Angiogenic+Targets+for+Monoclonal+Antibody+Cancer+Therapy.">A Review of Anti-Angiogenic Targets for Monoclonal Antibody Cancer Therapy.</a> International Journal of Molecular Science. 18 (8), (2017).</li><li>Wong, P. P., Bodrug, N., Hodivala-Dilke, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+Novel+Methods+for+Modulating+Tumor+Blood+Vessels+in+Cancer+Treatment.">Exploring Novel Methods for Modulating Tumor Blood Vessels in Cancer Treatment.</a> Current Biology. 26 (21), R1161-R1166 (2016).</li><li>Evan, G. I., Brown, L., Whyte, M., Harrington, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+and+the+cell+cycle.">Apoptosis and the cell cycle.</a> Current Opinion in Cell Biology. 7 (6), 825-834 (1995).</li><li>Haab, B. B., Dunham, M. J., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+for+highly+parallel+detection+and+quantitation+of+specific+proteins+and+antibodies+in+complex+solutions.">Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions.</a> Genome Biology. 2 (2), RESEARCH0004 (2001).</li><li>Sutandy, F. X., Qian, J., Chen, C. S., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+protein+microarrays.">Overview of protein microarrays.</a> Currrent Protocols in Protein Science. 27, 21 (2013).</li><li>St-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+sequencing+of+neonatal+thymic+epithelial+cells.">Transcriptome sequencing of neonatal thymic epithelial cells.</a> Science Repository. 3, 1860 (2013).</li></ol>

miRNAs kan fungere som målrettede behandlinger til kræftbehandling, anerkende dysregulering af udtryk niveauer i syge vs normale væv. Denne undersøgelse havde til formål at bestemme miRNAs, der potentielt standse cellecyklus progression i flere faser. Det blev konstateret, at miR-143 og miR 506 standse cellecyklus af kræftceller, og de præsenterede protokoller har til formål at forstå aktiviteten af denne kombinatorisk miRNA behandling.
De beskrevne metoder giver en overordnet forstå...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.
One of the authors&#39; names was corrected from:
George Matthaiolampakis
to:
George Mattheolabakis

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.

Erratum: Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

Cellecyklus er en kombination af flere regulerende begivenheder, der tillader kopiering af DNA og celle spredning gennem mitotiske proces1. Cyclin-afhængig kinaser (CDKs) regulere og fremme celle cyklus2. Blandt dem har den mitotiske CDK (CDK1) og interphase CDKs (CDK2, CDK4 og CDK6) en central rolle i celle cyklus progression3. Retinoblastom protein (Rb) er fosforyleret af den CDK4/CDK6 komplekse at tillade cellecyklus progression4, og CDK1 aktivering er afgørende for vellykket celledeling5. Talrige CDK hæmmere er blevet udviklet og evalueret i kliniske forsøg i de sidste par årtier, med angivelse af potentialet i rettet mod CDKs i kræftbehandling. Faktisk tre CDK hæmmere er blevet godkendt til behandling af brystkræft for nylig6,7,8,9,10. Således er CDKs, og især CDK1 og CDK4/6, er af stor interesse i at regulere kræft celle progression.
miRNAs (miRs) er lille, ikke-kodende RNA'er og post-transcriptional regulatorer af genekspression, regulere ca 30% af alle menneskelige gener11. Deres aktivitet er baseret på translationel undertrykkelse eller forringelse af messenger RNA'er (mRNAs)12. Illustrerende for deres biologiske betydning, mere end 5.000 miRNAs er blevet identificeret og en enkelt miRNA molekyle kan regulere flere gener11,13. Endnu vigtigere, har miRNA udtryk været forbundet med forskellige sygdomme og sygdom statusser, herunder kræft13. Faktisk miRNAs er blevet karakteriseret som mutationer eller tumor undertrykkere, at være i stand til at enten fremme eller undertrykke tumor udvikling og progression14,15. Den relative udtryk for miRNAs i syge væv kan regulere sygdomsprogression; således har eksogene levering af miRNAs terapeutiske potentiale.
Lungekræft er den hyppigste årsag til cancer-relaterede dødsfald og mere end 60% af alle maligne sygdomme lunge er ikke-small cell lunge kræft16,17, med en 5-års overlevelse på mindre end 20%18. Brugen af miR-143-3 p og miR-506-3 p blev for nylig vurderet målretning celle cyklusser i lunge kræft celler11. miR-143 og miR 506 har sekvenser, der er til CDK1 og CDK4/CDK6, og virkningerne af disse to miRs på A549 celler blev analyseret. De eksperimentelle detaljer præsenteres og drøftes i dette dokument. Gen-ekspression, celle cyklus progression og apoptose blev evalueret ved hjælp af forskellige eksperimentelle design og timepoints efter Transfektion. Vi brugte real-time kvantitativ PCR (RT-qPCR) metoder sammen med microarray analyse for at måle specifikke genekspression, og næste generation RNA sekventering blev brugt til at bestemme globale gen dysregulering11. Sidstnævnte metode identificerer den relative forekomst af hvert gen udskrift med høj følsomhed og reproducerbarhed, mens tusindvis af gener, der kan analyseres fra en enkelt eksperimentel analyse. Derudover apoptotiske analyse på grund af miRNA behandling blev udført og er beskrevet her. Bioinformatik suppleret pathway analyse. Præsenteres her er protokoller bruges til analyse af det terapeutiske potentiale i den kombinatoriske miR-143 og miR 506.
Hovedformålet med denne protokol er at identificere virkningerne af miRNAs i celler, med fokus på den celle cyklus. Forskellige teknikker præsenteres her spændvidde fra gen expression analyse præoversættelse (bruger qPCR) til at uddybe og roman teknikker til gen analyser på protein, såsom microarray analyse. Det er håbet, at denne rapport er nyttig for forskere interesseret i at arbejde med miRNAs. Derudover præsenteres metodologi for flow cytometric analyse af cellecyklus og apoptose af celler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2067px;" width="2066">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">-80 &#176;C Freezer</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">VWR40086A</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96 well plate</td>
			<td style="width:210px;">CELLTREAT Scientific&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">50-607-511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96-well Microwell Plates&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">12-556-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">A549 Non Small Cell Lung Cancer Cells</td>
			<td style="width:210px;">ATCC</td>
			<td style="width:1167px;">ATCC&#160;CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agarose</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">0710-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td style="width:210px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:1167px;">G2938c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ambion Silencer Negative Control No. 1 siRNA</td>
			<td style="width:210px;">Ambion</td>
			<td>AM4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibiotic-Antimycotic Solution (100x)</td>
			<td style="width:210px;">Gibco</td>
			<td style="width:1167px;">15240-062&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibody Array Assay Kit, 2 Reactions</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">KAS02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Microscoptics&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">IV-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">New Star Environment LLC</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Cycle Antibody Array, 2 Slides</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">ACC058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Logic+ Biosafety Cabinate</td>
			<td style="width:210px;">Labconco</td>
			<td style="width:1167px;">342391100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cellquest Pro</td>
			<td style="width:210px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:1167px;">Steps 5.14; 6.13: Used for calculating the population distrubution according to the cell cycle&#160; phase and for&#160; calculating the population distribution for the analysis of apoptosis&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CFX96 Real Time System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">CFX96 Optics Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CO2 Incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">HERAcell 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td style="width:210px;">Trevigen</td>
			<td style="width:1167px;">3433-010-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">FMA050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM 4.5 g/L Glucose, w/out Sodium Pyruvate, w/ L-Glutamine</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>VWRL0100-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">DNAse I</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>E1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Endothelial Cell Growth Supplement (ECGS)</td>
			<td style="width:210px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:1167px;">356006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Eppendorf Pipette Pick-A-Pack Sets</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">05-403-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethanol, Absolute (200 Proof), Molecular Biology Grade,&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Fisher BioReagents</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ethidium bromide</td>
			<td style="width:210px;">Alfa acar</td>
			<td style="width:1167px;">L07462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">F-12K Nutrient Mixture (Kaighn&#39;s Mod.) with L-glutamine, Corning</td>
			<td style="width:210px;">Corning</td>
			<td>45000-354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">FACS Calibur Flowcytometer</td>
			<td style="width:210px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum - Premium</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fisherbrand Basix Microcentrifuge Tubes with Standard Snap Caps</td>
			<td style="width:210px;">Fisherbrand Basix</td>
			<td style="width:1167px;">02-682-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Forma Series II water Jacket CO2 incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Heparin Solution (5000 U/mL)</td>
			<td style="width:210px;">Hospira</td>
			<td style="width:1167px;">NDC#63739-920-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Horixontal Electrophoresis system</td>
			<td style="width:210px;">Benchtop lab system</td>
			<td style="width:1167px;">BT102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-143-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH01315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-506-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH02824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PHC9394&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:210px;">Individual donors</td>
			<td style="width:1167px;">IRB# A15-3891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">HyClone Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">SH30256FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ingenuity Pathway Analysis</td>
			<td style="width:210px;">Qiagen</td>
			<td style="width:1167px;">Results: Used for bioinformatics pathway analysis</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Invitrogen UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td>10-977-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Lipofectamine 2000&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">11-668-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Loading dye 10X</td>
			<td style="width:210px;">ward&#39;s science+</td>
			<td style="width:1167px;">470024-814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Medium M199 (with Earle&#8242;s salts, L-glutamine and sodium bicarbonate)</td>
			<td style="width:210px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:1167px;">M4530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Microscope Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">MU130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Modfit LT</td>
			<td style="width:210px;">Verity Software</td>
			<td style="width:1167px;">Step 5.15: Alternative software for analysis of cell cycle population distributions</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Nanodrop</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">NanoDrop one C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM</td>
			<td style="width:210px;">Gibco by life technologies</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin-streptomycin 10/10</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>B21210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Power UP sybr green master mix</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td>A25780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Propidium Iodide</td>
			<td style="width:210px;">MP Biochemicals LLC</td>
			<td>IC19545825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Proscanarray HT Microarray scanner</td>
			<td style="width:210px;">Perkin elmer</td>
			<td style="width:1167px;">ASCNPHRG. We used excitation laser wavelength at 543 nm.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">q PCR optical adhesive cover</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;">4360954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Quick-RNA Kits</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R1055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ribonuclease A from Bovine pancreas</td>
			<td style="width:210px;">Sigma</td>
			<td>R6513-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">ScanArray Express</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td style="width:1167px;">Step 7.33: Microarray analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Shaker</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">2314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SimpliAmp Thermal Cycler</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 15ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470224-998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 50ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470225-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TBS Buffer, 20x liquid</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>10791-796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled&#160; centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled micro centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific BioLite Cell Culture Treated Flasks</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12-556-009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Thermo Scientific Pierce BCA Protein Assay</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PI23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Pierce RIPA Buffer</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>PI89900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Thermo-Fast 96-Well Full-Skirted Plates</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">AB0800WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Verso cDNA synthesis Kit (100 runs)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>AB1453B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ultra Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">10597012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">VWR standard solid door laboratory refrigerator</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis

Lungekræft (LC) er den hyppigste årsag til kræftrelaterede dødsfald på verdensplan. I lighed med andre kræftceller, et grundlæggende kendetegn ved LC celler er uregulerede spredning og celledeling. Hæmning af spredning af standse cellecyklus progression har vist sig at være en lovende tilgang til kræftbehandling, herunder LC.
miRNA therapeutics er dukket op som vigtige post-transcriptional gen regulatorer og er i stigende grad ved at blive undersøgt til brug i kræftbehandling. I de seneste arbejde udnyttede vi to miRNAs, miR-143 og miR-506, at regulere cellecyklus progression. A549 ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) kræftceller var transfekteret, gene expression ændringer blev analyseret og apoptotiske aktivitet på grund af behandlingen blev sidst analyseret. Downregulation af cyclin-afhængig kinaser (CDKs) blev fundet (dvs., CDK1, CDK4 og CDK6), og celle cyklus standset ved faseovergange G1/S og G2/M. Sti analyse viste potentielle antiangiogenic aktivitet af den behandling, der forlener tilgangen med mangefacetteret aktivitet. Her beskrives er de metoder, der anvendes til at identificere miRNA aktivitet vedrørende cellecyklus hæmning, induktion af apoptose og virkninger af behandlingen på endotelceller ved hæmning af angiogenese. Det er håbet, at de metoder, der præsenteres her vil støtte fremtidige forskning på miRNA therapeutics og tilsvarende aktivitet og at den repræsentative data vil guide andre forskere under eksperimentelle analyser.

Gen expression analyse ved hjælp af RT-qPCR og gel elektroforese
Differential gen expression analyse ved hjælp af RT-qPCR demonstreret betydelige downregulation af målrettede generne CDK1, CDK4 og CDK6. CDK1 og CDK4/6 blev vist sig at være medvirkende til G2/M og G1/S overgange, henholdsvis. Den udførte analyse tilladt direkte sammenligning mellem individuelle miRs og kombinatorisk miR aktivitet. Brugen af ...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis at JoVE.com

Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

miRNA therapeutics har betydeligt potentiale i at regulere kræft progression. Vist her er analytiske tilgange bruges til identifikation af aktiviteten af en kombinatoriske miRNA behandling standse cellecyklus og angiogenese.

Analyse af kombinatorisk miRNA behandlinger til at regulere cellecyklus og angiogenese

Lung cancer (LC) is the leading cause of cancer-related deaths worldwide. Similar to other cancer cells, a fundamental characteristic of LC cells is ...

Denne metode vil hjælpe med at forstå og udføre laboratorieteknikker, der er nødvendige for at identificere aktiviteten af to microRNA i lungekræftceller in vitro. Lungekræft er den hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan. Her præsenterer vi teknikker, der spænder fra grundlæggende laboratoriemetoder til mere komplekse protokoller, såsom genekspressionsanalyse og antistofprotein microRNA, der specifikt anvendes til at identificere effekten af microRNA's handlinger.Følgende metoder vil hjælpe os med at besvare centrale spørgsmål vedrørende effekten af to microRNA'er, microRNA 143 og microRNA 506, på regulering af cellecyklus i lungekræftceller. Vi præsenterer forskellige lab teknikker, som celle transfektion, RNA ekstraktion, kvantitativ realtid PCR og microRNA analyse. Vi håber, at vores præsentation vil bidrage til en vellykket gennemførelse af disse analyser.Først skal de dyrkede celler anbringes i en passende kolbe, der er tilstrækkelig til RNA- og proteinekstraktion, til at udføre genekspression ved hjælp af qPCR- eller mikroarrayanalyse. Derefter inkubere natten med medier suppleret med 10 procent FBS og 1 procent penicillin streptomycin. Den næste dag forberedes mikroRNA-prøven til transinfektion ved at fortynde microRNA 143 og microRNA 506 i medier i en koncentration på 100 nanomolar hver.Tag kolben ud af inkubatoren, og fjern mediet. Vask med 1x PBS. Alle ubehandlede kontrolelementer indeholder kun ufuldstændige medier med celler.Inkuber cellerne med transfektionsmedier i seks timer i en kuvøse. Efter seks timer skal du fjerne mediet og erstatte med fire milliliter friske, komplette medier. Høst cellerne efter 24 timer og 48 timer ved trypsinization.Dernæst vaskes to gange med 1x PBS i hvert rør og fjern supernatant. For at udføre RNA-ekstraktion på et senere tidspunkt skal cellerne fryses ved minus 80 grader Celsius. RNA-ekstraktion blev udført ved hjælp af et RNA-kit efter producentens anvisninger.Først skal du fjerne rørene fra minus 80 grader Celsius og lad det tø op. Tilføj 300 mikroliter lysis buffer og pipette op og ned for at bryde cellemembranen. Tilføj samme volumen på 100 procent ultra-ren ethanol.Bland derefter godt og sted i adskilt kolonne. centrifuge og fjerne flow-through. Tilføj 400 mikroliter vask og buffer og centrifuge for at fjerne bufferen.Der tilsættes 5 mikroliter DNAse 1 med 75 mikroliters VNA-fordøjelsesbuffer i hver prøve, og inkuberes i 15 minutter. Derefter vaskes prøven med 400 mikroliter RNA prep buffer. Vask derefter to gange med RNA-vaskebuffer.Nu tilsættes nukleasefrit vand til kolonnen, centrifuge og derefter opsamle RNA'et. Mål RNA-koncentrationen. I denne fase kan der sendes to mikrogram RNA-prøve til RNA-sekvensering.Forbered cDNA i henhold til den protokol, der er beskrevet i tekstsektionen, ved hjælp af termocykstyring. Forbered fremad og tilbage primer løsninger med DNAse RNAse-frit vand til en koncentration på 10 mikromolar. Forbered en master mix for hvert gen, der skal påvises i henhold til antallet af prøver.For hver cDNA-prøve er reaktionsmængden i overensstemmelse med den tabel, der er beskrevet i teksten. Placer hver prøve til deres respektive brønde. For qPCR er det altid godt at forberede et Excel-dokument med 96 brøndpladelayout for at holde styr på prøverne.For hver prøve og analyseret gen udføres deres reaktion i tre eksemplarer eller i det mindste dubletter. Forsegl plastpladen med gennemsigtig, optisk klar plastforsegling. Undgå at røre ved det tynde plastlag med fingrene, da dette kan give falsk signal.Drej hurtigt pladen for at blande alle reagenserne til bunden af deres brønde. Kør derefter prøvepladen ved hjælp af en kvantitativ PCR-maskine i realtid. Hent de CT-værdier, der er genereret af qPCR-maskinen, og analyser for relativt genekspression.Transfect cellerne som beskrevet i den tidligere del af denne video. Høstceller fra hver prøve i separate, 15 milliliter sterile rør til trypsinisering. Dernæst vaskes cellerne to gange med 1x PBS ved centrifugering ved 751G i fem minutter, og fjern derefter supernatanten.Re-suspendere og bryde paletten ved at tilføje 200 mikroliter iskold 1x PBS gennem en pipette. Tilsæt to milliliter 70 procent iskold ethanol, drop-wise til røret, mens vortexing røret forsigtigt at fastsætte cellerne. Inkuber rør i 30 minutter ved stuetemperatur og læg dem i fire grader Celsius i en time.Fjern rørene fra fire grader Celsius og centrifuge. Tilsæt 2 ml iskold PBS og vortex, og fjern derefter supernatanten ved centrifugering. Der tilsættes henholdsvis 500 mikroliter 1x PBS indeholdende propidiumidodid og ribonuclease A med koncentration 50 og 200 mikrogram pr. milliliter i hver prøve, og inkuberes i 30 minutter ved stuetemperatur.Overfør prøverne til passende rør, beskytter mod lys, og køre på flow cytometer. Dette eksperiment er at identificere alle de cellecyklus vej proteiner'expression ændret ved microRNA behandling. Der udtages proteinprøver efter den procedure, der er beskrevet i transfektionssektionen, og kvantificeres med BCA-analyse.Fjern dias fra minus fire grader Celsius en time før eksperiment for at bringe til stuetemperatur og fjerne fugt. Tag 70 mikrogram proteinprøver og forbered prøvedias i henhold til producentens anvisninger, som også beskrives trin for trin i tekstafsnittet. Her for at bemærke, korrekt vask af dias med ultra-rent deioniseret vand er et andet vigtigt skridt, da dette vil bidrage til at reducere baggrunden af dias.Derudover er det meget vigtigt i dette eksperiment ikke at tørre prøven dias indtil det sidste trin. Endelig scanne diaset ved hjælp af mikro-array maskine og analysere data. QPCR-analysen af de mikroRNA-behandlede prøver fandt sted for at bestemme genekspressionen af CDK1, CDK4 og CDK6.Disse gener regulere celle cyklus af normale og kræftceller, og er blevet målrettet som et middel til at hæmme tumor progression. Dataene viste den nedregulatoriske effekt af disse gener på grund af behandlingen med microRNA 143 og 506. Data om fordeling af cellecyklus fra flowcytometri viste en befolkningstilvækst i G0- og G1-fasen og et fald i populationen i S-fasen på grund af effekten af kombinatorisk behandling af microRNA 143 og 506.Cellecyklussens specifikke mikroarrayanalyse påviste proteinudtryksændringer på ca. 60 gener. Det repræsenterede varmekort indikerede nedregulering på proteinniveauet for flere gener, der er nødvendige for udviklingen af cellecyklussen og spredningen, såsom CDK2, Helen 1 og 3, RE2F1. I modsætning hertil, proteiner almindeligt anerkendt af deres dyrkede hæmmende virkning blev upregulated.Selv om resultaterne er semi-kvantitative og yderligere analyse er påkrævet, mikro-array analyse giver et hurtigt overblik over vejen aktivitet. Vi mener, efter at have set denne video, vil du være i stand til at udføre grundlæggende, samt komplekse, lab eksperimenter, der vil hjælpe dig med identifikation af microRNA aktivitet i celler.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MikroRNA baseret flydende biopsi: Oplevelsen af Plasma miRNA signatur klassificering (MSC) til lunge Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

Forberedelse af primære akut lymfoblastær leukæmiceller i forskellige cellecyklus faser af Centrifugal Elutriation

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Enkel og hurtig metode til at opnå høj kvalitet Tumor DNA fra klinisk-patologisk prøvemateriale ved hjælp af Touch aftryk cytologi

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Generation og Isolation af cellecyklus-anholdt celler med komplekse Karyotypes

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Phospho Flow Cytometry with Fluorescent Cell Barcoding for Single Cell Signaling Analysis and Biomarker Discovery

Phospho flowcytometri med fluorescerende celle stregkodesystem for enkelt celle signalering analyse og biomarkør opdagelse

Aberrant cell signaling plays a central role in cancer development and progression. Most novel targeted therapies are indeed directed at proteins and ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Flow Cytometrisk analyse af mitokondrie reaktive oxygen arter i murine hæmatopoietiske stamceller og Progenitorcellerne og MLL-AF9 drevet leukæmi

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Optimization, Design and Avoiding Pitfalls in Manual Multiplex Fluorescent Immunohistochemistry

Optimering, design og undgåelse af faldgruber i manuel multiplex fluorescerende immun histokemi

Microenvironment evaluation of intact tissue for analysis of cell infiltration and spatial organization are essential in understanding the complexity of ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

Celle cyklus-specifik måling af γH2AX og apoptose efter genotoksisk stress ved flow cytometri

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Analyse af sidepopulation i faste tumorcellelinjer

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Evaluering cell død ved hjælp af cellefri supernatant af probiotika i tre-dimensionelle sfæroid kulturer colorectal cancerceller

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...