Name: analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis
Uploaded: 2019-03-30T14:00:00
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Keine Interessenkonflikte werden erklärt.

1. MiR-143 und MiR-506 Transfektion
Achtung: Verwenden Sie Latexhandschuhe, schützende Brillen und einen Laborkittel während der Durchführung der beschriebenen Experimente. Bei Bedarf verwenden Sie das Biosafety-Gehäuse mit dem Gehäuse Lüfter, ohne die Atemwege blockieren oder stören die laminare Luftströmung. Immer die schützende Glasscheibe auf die passende Höhe eingestellt, wie vom Hersteller beschrieben.
<ol><li>Samen NSCLC A549 Zellen in ein T25 cm2 Kolben/6/96 well...

<ol>
	<li>Schafer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+cycle:+a+review.">The cell cycle: a review.</a> Veternary Pathology. 35 (6), 461-478 (1998).</li><li>Barnum, K. J., O'Connell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+regulation+by+checkpoints.">Cell cycle regulation by checkpoints.</a> Methods in Molecular Biology. 1170, 29-40 (2014).</li><li>Malumbres, M., Barbacid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle,+CDKs+and+cancer:+a+changing+paradigm.">Cell cycle, CDKs and cancer: a changing paradigm.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (3), 153-166 (2009).</li><li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+CDK+inhibitor+dinaciclib+suppresses+neuroblastoma+growth+via+inhibiting+CDK2+and+CDK9+activity.">Multiple CDK inhibitor dinaciclib suppresses neuroblastoma growth via inhibiting CDK2 and CDK9 activity.</a> Science Repository. 6, 29090 (2016).</li><li>Brown, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDK1+structures+reveal+conserved+and+unique+features+of+the+essential+cell+cycle+CDK.">CDK1 structures reveal conserved and unique features of the essential cell cycle CDK.</a> Nature Communications. 6, 6769 (2015).</li><li>Sanchez-Martinez, C., Gelbert, L. M., Lallena, M. J., de Dios, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+dependent+kinase+(CDK)+inhibitors+as+anticancer+drugs.">Cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors as anticancer drugs.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 25 (17), 3420-3435 (2015).</li><li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval:+Ribociclib+for+the+Treatment+of+Postmenopausal+Women+with+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Advanced+or+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval: Ribociclib for the Treatment of Postmenopausal Women with Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Advanced or Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li><li>Asghar, U., Witkiewicz, A. K., Turner, N. C., Knudsen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+history+and+future+of+targeting+cyclin-dependent+kinases+in+cancer+therapy.">The history and future of targeting cyclin-dependent kinases in cancer therapy.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (2), 130-146 (2015).</li><li>Mullard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+Novartis's+CDK4/6+inhibitor.">FDA approves Novartis's CDK4/6 inhibitor.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (4), 229 (2017).</li><li>Walker, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Palbociclib+in+Combination+with+Fulvestrant+for+the+Treatment+of+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval of Palbociclib in Combination with Fulvestrant for the Treatment of Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. 22 (20), 4968-4972 (2016).</li><li>Hossian, A., Sajib, M. S., Tullar, P. E., Mikelis, C. M., Mattheolabakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipronged+activity+of+combinatorial+miR-143+and+miR-506+inhibits+Lung+Cancer+cell+cycle+progression+and+angiogenesis+in+vitro.">Multipronged activity of combinatorial miR-143 and miR-506 inhibits Lung Cancer cell cycle progression and angiogenesis in vitro.</a> Science Repository. 8 (1), 10495 (2018).</li><li>Inamura, K., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+In+Lung+Cancer:+Novel+Biomarkers+and+Potential+Tools+for+Treatment.">MicroRNA In Lung Cancer: Novel Biomarkers and Potential Tools for Treatment.</a> Journal of Clinical Medicine. 5 (3), (2016).</li><li>Mizuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microRNA+expression+signature+of+small+cell+lung+cancer:+tumor+suppressors+of+miR-27a-5p+and+miR-34b-3p+and+their+targeted+oncogenes.">The microRNA expression signature of small cell lung cancer: tumor suppressors of miR-27a-5p and miR-34b-3p and their targeted oncogenes.</a> Journal of Human Genetics. 62 (7), 671-678 (2017).</li><li>Zhang, B., Pan, X., Cobb, G. P., Anderson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNAs+as+oncogenes+and+tumor+suppressors.">microRNAs as oncogenes and tumor suppressors.</a> Developmental Biology. 302 (1), 1-12 (2007).</li><li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+MicroRNAs+in+human+cancer.">The role of MicroRNAs in human cancer.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 1, 15004 (2016).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+recurrence+in+early+stage+non-small+cell+lung+cancer+using+computer+extracted+nuclear+features+from+digital+H&amp;E+images.">Prediction of recurrence in early stage non-small cell lung cancer using computer extracted nuclear features from digital H&amp;E images.</a> Science Repository. 7 (1), 13543 (2017).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).</li><li>Saxon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p52+expression+enhances+lung+cancer+progression.">p52 expression enhances lung cancer progression.</a> Science Repository. 8 (1), 6078 (2018).</li><li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+Analyzer+for+ImageJ.">Angiogenesis Analyzer for ImageJ.</a> ImageJ User and Developer Conference. , (2012).</li><li>Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=edgeR:+a+Bioconductor+package+for+differential+expression+analysis+of+digital+gene+expression+data.">edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data.</a> Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).</li><li>Robinson, M. D., Oshlack, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+scaling+normalization+method+for+differential+expression+analysis+of+RNA-seq+data.">A scaling normalization method for differential expression analysis of RNA-seq data.</a> Genome Biology. 11 (3), R25 (2010).</li><li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis.">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312 (2014).</li><li>Kong, D. H., Kim, M. R., Jang, J. H., Na, H. J., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Review+of+Anti-Angiogenic+Targets+for+Monoclonal+Antibody+Cancer+Therapy.">A Review of Anti-Angiogenic Targets for Monoclonal Antibody Cancer Therapy.</a> International Journal of Molecular Science. 18 (8), (2017).</li><li>Wong, P. P., Bodrug, N., Hodivala-Dilke, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+Novel+Methods+for+Modulating+Tumor+Blood+Vessels+in+Cancer+Treatment.">Exploring Novel Methods for Modulating Tumor Blood Vessels in Cancer Treatment.</a> Current Biology. 26 (21), R1161-R1166 (2016).</li><li>Evan, G. I., Brown, L., Whyte, M., Harrington, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+and+the+cell+cycle.">Apoptosis and the cell cycle.</a> Current Opinion in Cell Biology. 7 (6), 825-834 (1995).</li><li>Haab, B. B., Dunham, M. J., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+for+highly+parallel+detection+and+quantitation+of+specific+proteins+and+antibodies+in+complex+solutions.">Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions.</a> Genome Biology. 2 (2), RESEARCH0004 (2001).</li><li>Sutandy, F. X., Qian, J., Chen, C. S., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+protein+microarrays.">Overview of protein microarrays.</a> Currrent Protocols in Protein Science. 27, 21 (2013).</li><li>St-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+sequencing+of+neonatal+thymic+epithelial+cells.">Transcriptome sequencing of neonatal thymic epithelial cells.</a> Science Repository. 3, 1860 (2013).</li></ol>

MiRNAs können agieren als zielgerichtete Therapien zur Behandlung von Krebs, erkennen die Dysregulation der Ausdruck Ebenen in erkrankten vs. normale Gewebe. Diese Studie soll MiRNAs zu bestimmen, die potenziell Zellzyklus Fortschreiten in mehreren Phasen zu stoppen. Es wurde festgestellt, dass MiR-143 und MiR-506 stoppen den Zellzyklus der Krebszellen und der vorgestellten Protokolle zielte darauf ab, die Aktivität dieser kombinatorischen MiRNA-Behandlung zu verstehen.
Die beschriebenen Met...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.
One of the authors&#39; names was corrected from:
George Matthaiolampakis
to:
George Mattheolabakis

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.

Erratum: Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

Der Zellzyklus ist eine Kombination aus mehreren regulatorischen Ereignisse, die Vervielfältigung der DNA und Zellproliferation durch den mitotischen Prozess1ermöglichen. Cyclin-abhängigen Kinasen (CDKs) regulieren und fördern die Zellzyklus-2. Unter anderem haben die mitotische CDK (CDK1) und Interphase CDKs (CDK2, CDK4 und CDK6) eine zentrale Rolle im Zellzyklus Progression3. Retinoblastom-Protein (Rb) ist von der CDK4/CDK6 komplexe erlauben Zellzyklus Fortschreiten4phosphoryliert und CDK1 Aktivierung ist unerlässlich für erfolgreiche Zellteilung5. Zahlreiche CDK-Inhibitoren wurden entwickelt und bewertet in klinischen Studien in den letzten Jahrzehnten zeigt das Potenzial des Zielens CDKs in der Krebsbehandlung. In der Tat drei CDK-Inhibitoren zur Behandlung von Brustkrebs genehmigt worden vor kurzem6,7,8,9,10. So CDKs und insbesondere CDK1 und CDK4/6, sind von großem Interesse bei der Regulierung der Zelle Tumorprogression.
MiRNAs (MiRs) sind kleine, nicht-kodierende RNAs und posttranskriptionelle Regulatoren der Genexpression, Regulierung von ca. 30 % aller menschlichen Gene11. Ihre Tätigkeit basiert auf translationale Repression oder zum Abbau von Messenger-RNAs (mRNAs)12. Beispielhaft für ihre biologische Bedeutung, mehr als 5.000 MiRNAs wurden identifiziert und ein einzelnes MiRNA-Molekül kann mehrere Gene11,13regulieren. Noch wichtiger ist, wurde MiRNA Ausdruck verschiedener Krankheiten und Zustände von Krankheit, einschließlich Krebs13zugeordnet. In der Tat MiRNAs haben so onkogenen gekennzeichnet worden oder Tumor-Suppressoren, fähig zu fördern oder zu unterdrücken Tumor Entwicklung und Progression14,15. Die relative Expression von MiRNAs in erkrankten Geweben kann Fortschreiten der Krankheit regulieren; so hat die exogene Lieferung von MiRNAs therapeutisches Potenzial.
Lungenkrebs ist die häufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle und mehr als 60 % aller malignen Erkrankungen Lunge nicht klein sind Zelle Lungenkrebs Krebs16,17, mit einer 5-Jahres-Überlebensrate von weniger als 20 %18. Die Verwendung von MiR-143-3 p und MiR-506-3 p wurde vor kurzem für die Ausrichtung der Zelle Zyklen in der Lunge Krebs Zellen11bewertet. MiR-143 und MiR-506 Sequenzen, die Komplementarität CDK1 und CDK4/CDK6 sind, und die Auswirkungen dieser beiden MiRs auf A549 Zellen wurden analysiert. Die experimentelle Details werden vorgestellt und diskutiert in diesem Papier. Genexpression, Zellzyklus Progression und Apoptose wurden mit verschiedenen experimentellen Designs und Zeitpunkte nach Transfektion ausgewertet. Wir Real-time quantitative PCR (RT-qPCR) Methoden zusammen mit Microarray-Analyse zur Messung der spezifischen Gen-Expression und RNA Sequenzierung der nächsten Generation wurde verwendet, um globale gen Dysregulation11bestimmen. Die letztere Methode identifiziert die relative Häufigkeit jedes Gen Abschrift mit hoher Sensitivität und Reproduzierbarkeit, während Tausende von Genen aus einer einzigen experimentellen Analyse analysiert werden können. Darüber hinaus Apoptotic Analyse aufgrund der MiRNA-Behandlung wurde durchgeführt und wird hier beschrieben. Bioinformatik ergänzt die Pfad-Analyse. Hier werden Protokolle zur Analyse der das therapeutische Potenzial der kombinatorischen MiR-143 und MiR-506 verwendet.
Der Hauptzweck dieses Protokolls ist es, die Auswirkungen von MiRNAs in Zellen, mit einem Fokus auf den Zellzyklus. Die Vielfalt der Techniken hier vorgestellten Spanne von gen Expressionsanalyse Vorübersetzung (mit qPCR) zu erarbeiten und neue Techniken für die Genanalyse auf Proteinebene, wie Microarray-Analyse. Es ist zu hoffen, dass dieser Bericht hilfreich für Forscher in Zusammenarbeit mit MiRNAs interessiert ist. Darüber hinaus präsentiert Methodik zur durchflusszytometrischen Analyse des Zellzyklus und Apoptose der Zellen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2067px;" width="2066">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">-80 &#176;C Freezer</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">VWR40086A</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96 well plate</td>
			<td style="width:210px;">CELLTREAT Scientific&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">50-607-511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96-well Microwell Plates&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">12-556-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">A549 Non Small Cell Lung Cancer Cells</td>
			<td style="width:210px;">ATCC</td>
			<td style="width:1167px;">ATCC&#160;CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agarose</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">0710-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td style="width:210px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:1167px;">G2938c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ambion Silencer Negative Control No. 1 siRNA</td>
			<td style="width:210px;">Ambion</td>
			<td>AM4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibiotic-Antimycotic Solution (100x)</td>
			<td style="width:210px;">Gibco</td>
			<td style="width:1167px;">15240-062&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibody Array Assay Kit, 2 Reactions</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">KAS02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Microscoptics&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">IV-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">New Star Environment LLC</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Cycle Antibody Array, 2 Slides</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">ACC058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Logic+ Biosafety Cabinate</td>
			<td style="width:210px;">Labconco</td>
			<td style="width:1167px;">342391100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cellquest Pro</td>
			<td style="width:210px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:1167px;">Steps 5.14; 6.13: Used for calculating the population distrubution according to the cell cycle&#160; phase and for&#160; calculating the population distribution for the analysis of apoptosis&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CFX96 Real Time System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">CFX96 Optics Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CO2 Incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">HERAcell 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td style="width:210px;">Trevigen</td>
			<td style="width:1167px;">3433-010-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">FMA050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM 4.5 g/L Glucose, w/out Sodium Pyruvate, w/ L-Glutamine</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>VWRL0100-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">DNAse I</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>E1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Endothelial Cell Growth Supplement (ECGS)</td>
			<td style="width:210px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:1167px;">356006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Eppendorf Pipette Pick-A-Pack Sets</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">05-403-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethanol, Absolute (200 Proof), Molecular Biology Grade,&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Fisher BioReagents</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ethidium bromide</td>
			<td style="width:210px;">Alfa acar</td>
			<td style="width:1167px;">L07462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">F-12K Nutrient Mixture (Kaighn&#39;s Mod.) with L-glutamine, Corning</td>
			<td style="width:210px;">Corning</td>
			<td>45000-354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">FACS Calibur Flowcytometer</td>
			<td style="width:210px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum - Premium</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fisherbrand Basix Microcentrifuge Tubes with Standard Snap Caps</td>
			<td style="width:210px;">Fisherbrand Basix</td>
			<td style="width:1167px;">02-682-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Forma Series II water Jacket CO2 incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Heparin Solution (5000 U/mL)</td>
			<td style="width:210px;">Hospira</td>
			<td style="width:1167px;">NDC#63739-920-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Horixontal Electrophoresis system</td>
			<td style="width:210px;">Benchtop lab system</td>
			<td style="width:1167px;">BT102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-143-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH01315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-506-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH02824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PHC9394&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:210px;">Individual donors</td>
			<td style="width:1167px;">IRB# A15-3891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">HyClone Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">SH30256FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ingenuity Pathway Analysis</td>
			<td style="width:210px;">Qiagen</td>
			<td style="width:1167px;">Results: Used for bioinformatics pathway analysis</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Invitrogen UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td>10-977-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Lipofectamine 2000&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">11-668-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Loading dye 10X</td>
			<td style="width:210px;">ward&#39;s science+</td>
			<td style="width:1167px;">470024-814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Medium M199 (with Earle&#8242;s salts, L-glutamine and sodium bicarbonate)</td>
			<td style="width:210px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:1167px;">M4530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Microscope Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">MU130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Modfit LT</td>
			<td style="width:210px;">Verity Software</td>
			<td style="width:1167px;">Step 5.15: Alternative software for analysis of cell cycle population distributions</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Nanodrop</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">NanoDrop one C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM</td>
			<td style="width:210px;">Gibco by life technologies</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin-streptomycin 10/10</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>B21210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Power UP sybr green master mix</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td>A25780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Propidium Iodide</td>
			<td style="width:210px;">MP Biochemicals LLC</td>
			<td>IC19545825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Proscanarray HT Microarray scanner</td>
			<td style="width:210px;">Perkin elmer</td>
			<td style="width:1167px;">ASCNPHRG. We used excitation laser wavelength at 543 nm.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">q PCR optical adhesive cover</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;">4360954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Quick-RNA Kits</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R1055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ribonuclease A from Bovine pancreas</td>
			<td style="width:210px;">Sigma</td>
			<td>R6513-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">ScanArray Express</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td style="width:1167px;">Step 7.33: Microarray analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Shaker</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">2314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SimpliAmp Thermal Cycler</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 15ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470224-998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 50ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470225-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TBS Buffer, 20x liquid</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>10791-796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled&#160; centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled micro centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific BioLite Cell Culture Treated Flasks</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12-556-009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Thermo Scientific Pierce BCA Protein Assay</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PI23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Pierce RIPA Buffer</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>PI89900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Thermo-Fast 96-Well Full-Skirted Plates</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">AB0800WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Verso cDNA synthesis Kit (100 runs)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>AB1453B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ultra Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">10597012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">VWR standard solid door laboratory refrigerator</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis

Lungenkrebs (LC) ist die führende Ursache von Krebs-in Verbindung stehenden Todesfälle weltweit. Ähnlich wie bei anderen Krebszellen, ist ein wesentliches Merkmal des LC Zellen unkontrollierte Proliferation und Zellteilung. Hemmung der Proliferation von Zellzyklus Fortschreiten zu stoppen hat gezeigt, ein vielversprechender Ansatz zur Behandlung von Krebs, einschließlich LC.
MiRNA Therapeutika sind als wichtige posttranskriptionelle gen Regulatoren entstanden und werden zunehmend für den Einsatz in der Krebstherapie untersucht. In den letzten Arbeiten haben wir zwei MiRNAs, MiR-143 und MiR-506, zur Regulierung des Zellzyklus Progression verwendet. A549 nicht-kleinzelligem Lungenkrebs (NSCLC) Krebszellen wurden transfiziert gen Ausdruck Änderungen wurden analysiert und apoptotische Aktivität aufgrund der Behandlung war schließlich analysiert. Herabregulation von cyclin-abhängigen Kinasen (CDKs) erkannt wurden (d. h. CDK1, CDK4 und CDK6), und den Zellzyklus gestoppt an den Phasenübergängen G1/S und G2/M. Pathway Analyse zeigte mögliche Anti-angiogenetische Tätigkeitsbereich die Behandlung, die das Konzept mit vielfältigen Aktivitäten verleiht. Hier beschrieben, sind die Methoden zur Identifikation von MiRNA Tätigkeit betreffend Zellzyklus Hemmung, Induktion der Apoptose und Auswirkungen der Behandlung auf Endothelzellen durch Hemmung der Angiogenese. Es ist zu hoffen, dass die hier vorgestellten Methoden Zukunftsforschung auf MiRNA Therapeutika und entsprechende Aktivität unterstützen und die repräsentativen Daten andere Forscher während experimentelle Analysen leiten werden.

Ausdruck der Genanalyse mit RT-qPCR und Gel-Elektrophorese
Differentielle Ausdruck Genanalyse mit RT-qPCR zeigte signifikante Herabregulation der gezielt Gene CDK1, CDK4 und CDK6. Cdk1 und CDK4/6 erwiesen sich maßgeblich für die G2/M und G1/S Übergänge, beziehungsweise. Die durchgeführten Analysen erlaubt direkten Vergleich zwischen einzelnen MiRs und kombinatorische MiR Aktivität. Der Einsatz von SiRNA Ge...

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Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

MiRNA-Therapeutika haben erhebliches Potenzial bei der Regulierung der Tumorprogression. Hier demonstriert werden analytische Ansätze zur Identifikation der Aktivität einer kombinatorischen MiRNA-Behandlung in der Eindämmung des Zellzyklus und Angiogenese verwendet.

Analyse der kombinatorischen MiRNA Behandlungen zur Regulierung des Zellzyklus und Angiogenese

Lung cancer (LC) is the leading cause of cancer-related deaths worldwide. Similar to other cancer cells, a fundamental characteristic of LC cells is ...

Diese Methode wird helfen, Labortechniken zu verstehen und durchzuführen, die notwendig sind, um die Aktivität von zwei microRNA in Lungenkrebszellen in vitro zu identifizieren. Lungenkrebs ist weltweit die häufigste Ursache für krebsbedingte Todesfälle. Hier stellen wir Techniken vor, die von grundlegenden Labormethoden bis hin zu komplexeren Protokollen reichen, wie Genexpressionsanalyse und Antikörperprotein microRNA, die speziell zur Identifizierung der Wirkung von microRNA-Aktionen eingesetzt werden.Die folgenden Methoden helfen uns, wichtige Fragen bezüglich der Wirkung von zwei microRNAs, microRNA 143 und microRNA 506, auf die Regulierung des Zellzyklus in Lungenkrebszellen zu beantworten. Wir präsentieren verschiedene Labortechniken, wie Zelltransfektion, RNA-Extraktion, quantitative Echtzeit-PCR und microRNA-Analyse. Wir hoffen, dass unsere Präsentation dazu beitragen wird, diese Analysen erfolgreich abzuschließen.Setzen Sie zunächst die kultivierten Zellen in einen geeigneten Kolben, der für die RNA- und Proteinextraktion ausreicht, um die Genexpression mittels qPCR- oder Mikro-Array-Analyse durchzuführen. Dann inkubieren über Nacht mit Medien ergänzt mit 10 Prozent FBS und 1 Prozent Penicillin Streptomycin. Am nächsten Tag bereiten Sie die microRNA-Probe für die Transfektion vor, indem Sie microRNA 143 und microRNA 506 in Medien mit einer Konzentration von jeweils 100 Nanomolaren verdünnen.Nehmen Sie den Kolben aus dem Inkubator und entfernen Sie die Medien. Mit 1x PBS waschen. Alle unbehandelten Steuerelemente enthalten nur unvollständige Medien mit Zellen.Inkubieren Sie die Zellen mit Transfektionsmedien sechs Stunden lang in einem Inkubator. Entfernen Sie nach sechs Stunden die Medien und ersetzen Sie sie durch vier Milliliter frische, vollständige Medien. Ernten Sie die Zellen nach 24 Stunden und 48 Stunden durch Trypsinisierung.Als nächstes zweimal mit 1x PBS in jedem Rohr waschen und überstand entfernen. Um die RNA-Extraktion zu einem späteren Zeitpunkt durchzuführen, frieren Sie die Zellen bei minus 80 Grad Celsius ein. Die RNA-Extraktion wurde mit einem RNA-Kit nach den Anweisungen des Herstellers durchgeführt.Zuerst entfernen Sie die Rohre von minus 80 Grad Celsius und lassen Sie auftauen. Fügen Sie 300 Mikroliter Lysepuffer und Pipette nach oben und unten, um Zellmembran zu brechen. Fügen Sie gleiches Volumen von 100 Prozent ultrareinem Ethanol hinzu.Dann gut mischen und in getrennten Spalte platzieren. Zentrifugieren und entfernen Sie den Durchfluss. Fügen Sie 400 Mikroliter Waschen und Puffer und Zentrifuge hinzu, um den Puffer zu entfernen.Fügen Sie 5 Mikroliter DNAse 1 mit 75 Mikroliter NA-Verdauungspuffer in jeder Probe hinzu und inkubieren Sie 15 Minuten. Dann waschen Sie die Probe mit 400 Mikroliter RNA-Vorbereitungspuffer. Als nächstes zweimal mit RNA-Waschpuffer waschen.Fügen Sie nun nukleasefreies Wasser in die Spalte, Zentrifuge und dann sammeln Sie die RNA. Messen Sie die RNA-Konzentration. In diesem Stadium können zwei Mikrogramm RNA-Probe für die RNA-Sequenzierung gesendet werden.Bereiten Sie die cDNA gemäß dem im Textabschnitt beschriebenen Protokoll mit Thermocycler vor. Bereiten Sie Vorwärts- und Reverse-Primer-Lösungen mit DNAse RNAse-freiem Wasser auf eine Konzentration von 10 Mikromolaren vor. Bereiten Sie einen Master-Mix für jedes Gen vor, das entsprechend der Anzahl der Proben nachgewiesen werden soll.Für jede cDNA-Probe entspricht die Reaktionsmenge der im Text beschriebenen Tabelle. Platzieren Sie jede Probe in ihren jeweiligen Brunnen. Für qPCR ist es immer gut, ein Excel-Dokument mit 96 Well-Platten-Layout vorzubereiten, um den Überblick über die Proben zu behalten.Führen Sie für jede Probe und das analysierte Gen ihre Reaktion in Triplicaten oder zumindest Duplikaten durch. Versiegeln Sie die Kunststoffplatte mit einem transparenten, optisch klaren Kunststoffversiegeler. Vermeiden Sie es, die dünne Kunststoffschicht mit den Fingern zu berühren, da dies falschesignale erzeugen kann.Drehen Sie die Platte schnell, um alle Reagenzien auf den Boden ihrer Brunnen zu mischen. Führen Sie als Nächstes die Probenplatte mit einer quantitativen Echtzeit-PCR-Maschine aus. Abrufen der von der qPCR-Maschine generierten CT-Werte und Analyse der relativen Genexpression.Transfetiere die Zellen, wie im vorherigen Abschnitt dieses Videos beschrieben. Ernten Sie Zellen aus jeder Probe in separaten, 15 Milliliter sterilen Rohren für die Trypsinisierung. Als nächstes waschen Sie die Zellen zweimal mit 1x PBS, durch Zentrifugation bei 751G für fünf Minuten, und entfernen Sie dann den Überstand.Setzen Sie die Palette wieder auf und brechen Sie sie, indem Sie 200 Mikroliter eiskalte 1x PBS durch eine Pipette hinzufügen. Fügen Sie zwei Milliliter 70 Prozent eiskaltes Ethanol, tropfenweise in die Röhre, während wirbeln die Röhre sanft, um die Zellen zu fixieren. Röhren 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren und eine Stunde lang in vier Grad Celsius aufstellen.Entfernen Sie die Rohre von vier Grad Celsius und Zentrifuge. Fügen Sie 2ml eiskalte PBS und Wirbel, und dann entfernen Sie den Überstand durch Zentrifugation. Fügen Sie 500 Mikroliter 1x PBS mit Propidiumjodid und Ribonuklease A mit einer Konzentration von 50 bzw. 200 Mikrogramm pro Milliliter in jeder Probe hinzu und brüten 30 Minuten bei Raumtemperatur.Übertragen Sie Proben in geeignete Rohre, schützen Sie vor Licht, und laufen Sie auf Durchflusszytometer. Dieses Experiment soll die expression der Proteine des Zellzykluswegs identifizieren, die durch die microRNA-Behandlung verändert wurden. Sammeln Sie Proteinproben gemäß dem im Transfektionsabschnitt beschriebenen Verfahren und quantifizieren Sie sie mit BCA-Assay.Entfernen Sie die Dias von minus vier Grad Celsius eine Stunde vor dem Experiment, um Raumtemperatur zu bringen und Feuchtigkeit zu entfernen. Nehmen Sie 70 Mikrogramm Proteinproben und bereiten Sie Probenschlitten gemäß den Anweisungen des Herstellers vor, die auch Schritt für Schritt im Textabschnitt beschrieben werden. Hier zu beachten, richtige sanieren von Rutschen mit ultra-reinem entionisiertem Wasser ist ein weiterer wichtiger Schritt, da dies helfen wird, den Hintergrund der Dias zu reduzieren.Darüber hinaus ist es in diesem Experiment sehr wichtig, die Probenrutschen bis zum letzten Schritt nicht auszutrocknen. Scannen Sie schließlich die Folie mit der Micro-Array-Maschine und analysieren Sie die Daten. Die qPCR-Analyse der mit microRNA behandelten Proben erfolgte, um die Genexpression von CDK1, CDK4 und CDK6 zu bestimmen.Diese Gene regulieren den Zellzyklus von normalen und Krebszellen und wurden als Mittel zur Hemmung der Tumorprogression ins Visier genommen. Die Daten zeigten die downregulatorische Wirkung dieser Gene aufgrund der Behandlung mit microRNA 143 und 506. Zellzyklusverteilungsdaten aus der Durchflusszytometrie zeigten einen Bevölkerungszuwachs in der G0- und G1-Phase und einen Bevölkerungsrückgang in der S-Phase aufgrund der Wirkung der kombinatorischen Behandlung von microRNA 143 und 506.Die spezifische Mikro-Array-Analyse des Zellzyklus erkannte Proteinexpressionsänderungen von etwa 60 Genen. Die dargestellte Heatmap zeigte eine Downregulation auf dem Proteinniveau mehrerer Gene an, die für das Fortschreiten des Zellzyklus und die Proliferation erforderlich sind, wie CDK2, Helen 1 und 3, RE2F1. Im Gegensatz dazu wurden Proteine, die allgemein durch ihre gewachsene hemmende Wirkung erkannt wurden, hochreguliert.Obwohl die Ergebnisse semiquantitativ sind und weitere Analysen erforderlich sind, bietet die Mikro-Array-Analyse einen schnellen Überblick über die Aktivität des Pfades. Wir glauben, dass Sie nach dem Anschauen dieses Videos in der Lage sein werden, grundlegende, sowie komplexe Laborexperimente durchzuführen, die Ihnen bei der Identifizierung von microRNA-Aktivitäten in Zellen helfen werden.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Flüssigbiopsie: Die Erfahrung der Plasma MiRNA Signatur Klassifikator (MSC) für Lung Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Forschung

Krebsforschung

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

Vorbereitung der primäre akute lymphoblastische Leukämie-Zellen in verschiedenen Zellzyklus Phasen durch zentrifugale Sammelnetzwerk

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Einfache und schnelle Methode, um qualitativ hochwertige Tumor DNA von klinischen pathologischen Proben mit Touch Impressum Zytologie zu erhalten

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Generation und Isolierung des Zellzyklus verhaftet Zellen mit komplexen Karyotyp

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Phospho Flow Cytometry with Fluorescent Cell Barcoding for Single Cell Signaling Analysis and Biomarker Discovery

Phospho-Durchflusszytometrie mit fluoreszierenden Zelle Barcoding für einzelne Zelle Signalisierung Analyse und Entdeckung von Biomarkern

Aberrant cell signaling plays a central role in cancer development and progression. Most novel targeted therapies are indeed directed at proteins and ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Optimization, Design and Avoiding Pitfalls in Manual Multiplex Fluorescent Immunohistochemistry

Optimierung, Design und Vermeidung von Fallstricken in der manuellen Multiplex-Fluoreszenz-Immunhistochemie

Microenvironment evaluation of intact tissue for analysis of cell infiltration and spatial organization are essential in understanding the complexity of ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

Zellzyklusspezifische Messung von H2AX und Apoptose nach genotoxischem Stress durch Durchflusszytometrie

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Analyse der Seitenpopulation in soliden Tumorzelllinien

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Evaluierung des Zelltods mit zellfreiem Überstand von Probiotika in dreidimensionalen sphäroiden Kulturen von Darmkrebszellen

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...