Name: analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis
Uploaded: 2019-03-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis at JoVE.com

Отсутствие конфликта интересов объявляются.

1. мир-143 и мир-506 Трансфекция
Предупреждение: Используйте латексные перчатки, защитные очки и пальто лаборатории при выполнении описанных экспериментов. При необходимости, используйте биобезопасности кабинет с корпусной Вентилятор, без блокирования дыхательных путей ил?...

<ol>
	<li>Schafer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+cycle:+a+review.">The cell cycle: a review.</a> Veternary Pathology. 35 (6), 461-478 (1998).</li><li>Barnum, K. J., O'Connell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+regulation+by+checkpoints.">Cell cycle regulation by checkpoints.</a> Methods in Molecular Biology. 1170, 29-40 (2014).</li><li>Malumbres, M., Barbacid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle,+CDKs+and+cancer:+a+changing+paradigm.">Cell cycle, CDKs and cancer: a changing paradigm.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (3), 153-166 (2009).</li><li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+CDK+inhibitor+dinaciclib+suppresses+neuroblastoma+growth+via+inhibiting+CDK2+and+CDK9+activity.">Multiple CDK inhibitor dinaciclib suppresses neuroblastoma growth via inhibiting CDK2 and CDK9 activity.</a> Science Repository. 6, 29090 (2016).</li><li>Brown, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDK1+structures+reveal+conserved+and+unique+features+of+the+essential+cell+cycle+CDK.">CDK1 structures reveal conserved and unique features of the essential cell cycle CDK.</a> Nature Communications. 6, 6769 (2015).</li><li>Sanchez-Martinez, C., Gelbert, L. M., Lallena, M. J., de Dios, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+dependent+kinase+(CDK)+inhibitors+as+anticancer+drugs.">Cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors as anticancer drugs.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 25 (17), 3420-3435 (2015).</li><li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval:+Ribociclib+for+the+Treatment+of+Postmenopausal+Women+with+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Advanced+or+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval: Ribociclib for the Treatment of Postmenopausal Women with Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Advanced or Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li><li>Asghar, U., Witkiewicz, A. K., Turner, N. C., Knudsen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+history+and+future+of+targeting+cyclin-dependent+kinases+in+cancer+therapy.">The history and future of targeting cyclin-dependent kinases in cancer therapy.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (2), 130-146 (2015).</li><li>Mullard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+Novartis's+CDK4/6+inhibitor.">FDA approves Novartis's CDK4/6 inhibitor.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (4), 229 (2017).</li><li>Walker, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Palbociclib+in+Combination+with+Fulvestrant+for+the+Treatment+of+Hormone+Receptor-Positive,+HER2-Negative+Metastatic+Breast+Cancer.">FDA Approval of Palbociclib in Combination with Fulvestrant for the Treatment of Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. 22 (20), 4968-4972 (2016).</li><li>Hossian, A., Sajib, M. S., Tullar, P. E., Mikelis, C. M., Mattheolabakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipronged+activity+of+combinatorial+miR-143+and+miR-506+inhibits+Lung+Cancer+cell+cycle+progression+and+angiogenesis+in+vitro.">Multipronged activity of combinatorial miR-143 and miR-506 inhibits Lung Cancer cell cycle progression and angiogenesis in vitro.</a> Science Repository. 8 (1), 10495 (2018).</li><li>Inamura, K., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+In+Lung+Cancer:+Novel+Biomarkers+and+Potential+Tools+for+Treatment.">MicroRNA In Lung Cancer: Novel Biomarkers and Potential Tools for Treatment.</a> Journal of Clinical Medicine. 5 (3), (2016).</li><li>Mizuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microRNA+expression+signature+of+small+cell+lung+cancer:+tumor+suppressors+of+miR-27a-5p+and+miR-34b-3p+and+their+targeted+oncogenes.">The microRNA expression signature of small cell lung cancer: tumor suppressors of miR-27a-5p and miR-34b-3p and their targeted oncogenes.</a> Journal of Human Genetics. 62 (7), 671-678 (2017).</li><li>Zhang, B., Pan, X., Cobb, G. P., Anderson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNAs+as+oncogenes+and+tumor+suppressors.">microRNAs as oncogenes and tumor suppressors.</a> Developmental Biology. 302 (1), 1-12 (2007).</li><li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+MicroRNAs+in+human+cancer.">The role of MicroRNAs in human cancer.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 1, 15004 (2016).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+recurrence+in+early+stage+non-small+cell+lung+cancer+using+computer+extracted+nuclear+features+from+digital+H&amp;E+images.">Prediction of recurrence in early stage non-small cell lung cancer using computer extracted nuclear features from digital H&amp;E images.</a> Science Repository. 7 (1), 13543 (2017).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).</li><li>Saxon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p52+expression+enhances+lung+cancer+progression.">p52 expression enhances lung cancer progression.</a> Science Repository. 8 (1), 6078 (2018).</li><li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+Analyzer+for+ImageJ.">Angiogenesis Analyzer for ImageJ.</a> ImageJ User and Developer Conference. , (2012).</li><li>Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=edgeR:+a+Bioconductor+package+for+differential+expression+analysis+of+digital+gene+expression+data.">edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data.</a> Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).</li><li>Robinson, M. D., Oshlack, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+scaling+normalization+method+for+differential+expression+analysis+of+RNA-seq+data.">A scaling normalization method for differential expression analysis of RNA-seq data.</a> Genome Biology. 11 (3), R25 (2010).</li><li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis.">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312 (2014).</li><li>Kong, D. H., Kim, M. R., Jang, J. H., Na, H. J., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Review+of+Anti-Angiogenic+Targets+for+Monoclonal+Antibody+Cancer+Therapy.">A Review of Anti-Angiogenic Targets for Monoclonal Antibody Cancer Therapy.</a> International Journal of Molecular Science. 18 (8), (2017).</li><li>Wong, P. P., Bodrug, N., Hodivala-Dilke, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+Novel+Methods+for+Modulating+Tumor+Blood+Vessels+in+Cancer+Treatment.">Exploring Novel Methods for Modulating Tumor Blood Vessels in Cancer Treatment.</a> Current Biology. 26 (21), R1161-R1166 (2016).</li><li>Evan, G. I., Brown, L., Whyte, M., Harrington, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+and+the+cell+cycle.">Apoptosis and the cell cycle.</a> Current Opinion in Cell Biology. 7 (6), 825-834 (1995).</li><li>Haab, B. B., Dunham, M. J., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+for+highly+parallel+detection+and+quantitation+of+specific+proteins+and+antibodies+in+complex+solutions.">Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions.</a> Genome Biology. 2 (2), RESEARCH0004 (2001).</li><li>Sutandy, F. X., Qian, J., Chen, C. S., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+protein+microarrays.">Overview of protein microarrays.</a> Currrent Protocols in Protein Science. 27, 21 (2013).</li><li>St-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+sequencing+of+neonatal+thymic+epithelial+cells.">Transcriptome sequencing of neonatal thymic epithelial cells.</a> Science Repository. 3, 1860 (2013).</li></ol>

интерферирующим могут действовать в качестве целевой терапии для лечения рака, признавая dysregulation уровни выражения в больной против нормальных тканей. Это исследование стремились определить адаптивной, что потенциально остановить прогрессирование клеточного цикла в течение нескольк...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.
One of the authors&#39; names was corrected from:
George Matthaiolampakis
to:
George Mattheolabakis

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.

Erratum: Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

Клеточный цикл представляет собой сочетание нескольких регулирования событий, которые позволяют дублирования ДНК и клеток распространения через mitotic процессов1. Циклин зависимых киназ (CDKs) регулирования и содействия клеточного цикла2. Среди них митотическая CDK (CDK1) и межфазных CDKs (CDK2, CDK4 и CDK6) имеют ключевую роль в клеточный цикл прогрессия3. Белка ретинобластомы (Rb) фосфорилированных, комплекс CDK4/CDK6 разрешить клеточного цикла прогрессии4, и CDK1 активация необходима для успешного клеточного деления5. Многочисленные CDK ингибиторы были разработаны и оценены в клинических испытаниях за последние несколько десятилетий, что свидетельствует о возможности таргетинга CDKs в лечении рака. В самом деле, три CDK ингибиторы были одобрены для лечения рака молочной железы недавно6,,78,9,10. Таким образом, CDKs, и в частности, CDK1 и CDK4/6, представляют большой интерес в регулировании прогрессии рака клеток.
небольшие, некодирующих РНК и post-transcriptional регуляторы экспрессии генов, регулирующих примерно 30% всех человеческих генов11интерферирующим (Мирс). Их деятельность основана на поступательной репрессий или деградации messenger РНК (мРНК)12. Характеризует их биологическое значение, были определены более чем 5000 адаптивной и один Мирна молекула может регулировать несколько генов11,13. Что еще более важно Мирна выражение был связан с различными заболеваниями и статусов болезней, включая рак13. В самом деле, адаптивной характеризовались как онкогенных или супрессоров, способного содействовать или подавлять опухоли и развитие14,15. Относительное выражение интерферирующим в пораженной ткани можно регулировать прогрессирования заболевания; Таким образом экзогенных доставки интерферирующим имеет терапевтический потенциал.
Рак легких является ведущая причина рак родственных смертей и более чем 60% всех злокачественных опухолей легких немелкоклеточного клетки легких Рак16,17, с 5-летняя выживаемость менее чем 20%18. Использование мир-143-3 p и мир-506-3 p недавно была проведена оценка для ориентации клетки циклов в легких рак клеток11. Мир-143 и мир-506, последовательности, взаимодополняемости, CDK1 и CDK4/CDK6, и были проанализированы последствия этих двух Мирс на A549 клетки. Экспериментальные данные представляются и обсуждаются в настоящем документе. Экспрессии генов, клеточный цикл прогрессии и апоптоз были оценены с использованием различных экспериментальных образцов и после transfection timepoints. Мы использовали реального времени количественные методы PCR (RT-ПЦР) наряду с microarray анализ для оценки экспрессии определенных генов, и следующего поколения РНК последовательности был использован для определения глобальных гена dysregulation11. Последний метод определяет относительное обилие транскрипт каждого гена с высокой чувствительностью и воспроизводимости результатов, в то время как тысячи генов могут быть проанализированы из одного экспериментального анализа. Кроме того анализ apoptotic вследствие обращения Мирна была выполнена и описан здесь. Биоинформатика дополнены путь анализа. Здесь представлены протоколы используются для анализа терапевтический потенциал комбинаторной мир-143 и мир-506.
Основная цель настоящего Протокола заключается в идентификации эффекты интерферирующим в клетках, с акцентом на клеточный цикл. Разнообразие методов представлены здесь диапазон из анализа выражения гена предварительный перевод (с помощью ПЦР) для разработки и новые методы для анализа гена на уровне белков, таких как microarray анализ. Остается надеяться, что этот доклад является полезным для исследователей, заинтересованных в работе с адаптивной. Кроме того представлена методология анализа потока гранулярных клеточного цикла и апоптоз клеток.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2067px;" width="2066">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">-80 &#176;C Freezer</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">VWR40086A</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96 well plate</td>
			<td style="width:210px;">CELLTREAT Scientific&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">50-607-511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">96-well Microwell Plates&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">12-556-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">A549 Non Small Cell Lung Cancer Cells</td>
			<td style="width:210px;">ATCC</td>
			<td style="width:1167px;">ATCC&#160;CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agarose</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">0710-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td style="width:210px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:1167px;">G2938c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ambion Silencer Negative Control No. 1 siRNA</td>
			<td style="width:210px;">Ambion</td>
			<td>AM4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibiotic-Antimycotic Solution (100x)</td>
			<td style="width:210px;">Gibco</td>
			<td style="width:1167px;">15240-062&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Antibody Array Assay Kit, 2 Reactions</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">KAS02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Microscoptics&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">IV-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Bright field microscope&#160;&#160;</td>
			<td style="width:210px;">New Star Environment LLC</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Cycle Antibody Array, 2 Slides</td>
			<td style="width:210px;">Full Moon Bio</td>
			<td style="width:1167px;">ACC058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cell Logic+ Biosafety Cabinate</td>
			<td style="width:210px;">Labconco</td>
			<td style="width:1167px;">342391100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cellquest Pro</td>
			<td style="width:210px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:1167px;">Steps 5.14; 6.13: Used for calculating the population distrubution according to the cell cycle&#160; phase and for&#160; calculating the population distribution for the analysis of apoptosis&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CFX96 Real Time System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">CFX96 Optics Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td style="width:210px;">BioRad</td>
			<td style="width:1167px;">Chemidoc Touch Imaging System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">CO2 Incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">HERAcell 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td style="width:210px;">Trevigen</td>
			<td style="width:1167px;">3433-010-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">FMA050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM 4.5 g/L Glucose, w/out Sodium Pyruvate, w/ L-Glutamine</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>VWRL0100-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">DNAse I</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>E1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Endothelial Cell Growth Supplement (ECGS)</td>
			<td style="width:210px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:1167px;">356006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Eppendorf Pipette Pick-A-Pack Sets</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">05-403-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethanol, Absolute (200 Proof), Molecular Biology Grade,&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Fisher BioReagents</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ethidium bromide</td>
			<td style="width:210px;">Alfa acar</td>
			<td style="width:1167px;">L07462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">F-12K Nutrient Mixture (Kaighn&#39;s Mod.) with L-glutamine, Corning</td>
			<td style="width:210px;">Corning</td>
			<td>45000-354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">FACS Calibur Flowcytometer</td>
			<td style="width:210px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum - Premium</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fisherbrand Basix Microcentrifuge Tubes with Standard Snap Caps</td>
			<td style="width:210px;">Fisherbrand Basix</td>
			<td style="width:1167px;">02-682-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Forma Series II water Jacket CO2 incubator</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Heparin Solution (5000 U/mL)</td>
			<td style="width:210px;">Hospira</td>
			<td style="width:1167px;">NDC#63739-920-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Horixontal Electrophoresis system</td>
			<td style="width:210px;">Benchtop lab system</td>
			<td style="width:1167px;">BT102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-143-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH01315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">hsa-miR-506-3p miRNA Mimic</td>
			<td style="width:210px;">ABM</td>
			<td>MCH02824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PHC9394&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:210px;">Individual donors</td>
			<td style="width:1167px;">IRB# A15-3891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">HyClone Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:210px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">SH30256FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ingenuity Pathway Analysis</td>
			<td style="width:210px;">Qiagen</td>
			<td style="width:1167px;">Results: Used for bioinformatics pathway analysis</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Invitrogen UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td>10-977-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Lipofectamine 2000&#160;</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">11-668-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Loading dye 10X</td>
			<td style="width:210px;">ward&#39;s science+</td>
			<td style="width:1167px;">470024-814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Medium M199 (with Earle&#8242;s salts, L-glutamine and sodium bicarbonate)</td>
			<td style="width:210px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:1167px;">M4530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Microscope Digital Camera</td>
			<td style="width:210px;">AmScope&#160;</td>
			<td style="width:1167px;">MU130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Modfit LT</td>
			<td style="width:210px;">Verity Software</td>
			<td style="width:1167px;">Step 5.15: Alternative software for analysis of cell cycle population distributions</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Nanodrop</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">NanoDrop one C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM</td>
			<td style="width:210px;">Gibco by life technologies</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin-streptomycin 10/10</td>
			<td>Antlanta Biologicals</td>
			<td>B21210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Power UP sybr green master mix</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td>A25780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Propidium Iodide</td>
			<td style="width:210px;">MP Biochemicals LLC</td>
			<td>IC19545825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Proscanarray HT Microarray scanner</td>
			<td style="width:210px;">Perkin elmer</td>
			<td style="width:1167px;">ASCNPHRG. We used excitation laser wavelength at 543 nm.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">q PCR optical adhesive cover</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;">4360954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Quick-RNA Kits</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R1055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ribonuclease A from Bovine pancreas</td>
			<td style="width:210px;">Sigma</td>
			<td>R6513-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">ScanArray Express</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td style="width:1167px;">Step 7.33: Microarray analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Shaker</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">2314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SimpliAmp Thermal Cycler</td>
			<td style="width:210px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 15ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470224-998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">SpectraTube Centrifuge Tubes 50ml</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;">470225-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TBS Buffer, 20x liquid</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td>10791-796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled&#160; centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Temperature controlled micro centrifuge matchine</td>
			<td style="width:210px;">Eppendrof</td>
			<td style="width:1167px;">5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific BioLite Cell Culture Treated Flasks</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12-556-009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Thermo Scientific Pierce BCA Protein Assay</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">PI23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Pierce RIPA Buffer</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>PI89900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Thermo-Fast 96-Well Full-Skirted Plates</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:1167px;">AB0800WL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Verso cDNA synthesis Kit (100 runs)</td>
			<td style="width:210px;">Thermo Scientific</td>
			<td>AB1453B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">Ultra Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:210px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:1167px;">10597012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:519px;">VWR standard solid door laboratory refrigerator</td>
			<td style="width:210px;">VWR</td>
			<td style="width:1167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of combinatorial mirna treatments to regulate cell cycle and angiogenesis

Рак легких (LC) является ведущая причина рак родственных смертей во всем мире. Другие раковые клетки, фундаментальной характеристикой LC клеток является Нерегулируемое распространение и деление клеток. Было показано, что ингибирование распространения путем прекращения клеточного цикла прогрессии быть перспективным подходом для лечения рака, в том числе LC.
Мирна терапии появились как важный post-transcriptional генов регуляторов и все чаще в настоящее время изучаются для использования в лечении рака. В недавней работе мы использовали два адаптивной, мир-143 и мир-506, регулировать клеточный цикл прогрессии. A549 легких немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) клетки были transfected, были проанализированы изменения выражения гена, и наконец была проанализирована apoptotic активности из-за лечения. Даунрегуляция циклин зависимых киназ (CDKs) были обнаружены (то есть, CDK1, CDK4 и CDK6), и клеточного цикла в G1 (Ы) и G2/М фазовых переходов. Путь анализ свидетельствует о потенциальной деятельности антиангиогенных лечения, который наделяет подход с многогранной деятельности. Описанные здесь методологии, используемые для идентификации Мирна деятельности относительно ингибированием клеточного цикла, индукции апоптоза и эффекты лечения на эндотелиальных клеток торможение ангиогенеза. Предполагается, что представленные здесь методы будут поддерживать будущие исследования Мирна терапии и соответствующей деятельности и что репрезентативных данных будет руководствоваться другие исследователи в ходе экспериментальных анализов.

Анализ выражения гена с помощью RT-ПЦР и гель-электрофорез
Дифференциальный гена анализ выражения с помощью RT-ПЦР продемонстрировал значительные Даунрегуляция целевых генов, CDK1, CDK4 и CDK6. CDK1 и CDK4/6 было показано для G2/M и переходы ...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis at JoVE.com

Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

Мирна терапии имеют значительный потенциал в регулировании прогрессии рака. Продемонстрировали здесь аналитические подходы используются для идентификации деятельности комбинаторной Мирна лечения в прекращение клеточного цикла и ангиогенеза.

Анализ комбинаторной Мирна процедуры регулируют клеточный цикл и ангиогенез

Lung cancer (LC) is the leading cause of cancer-related deaths worldwide. Similar to other cancer cells, a fundamental characteristic of LC cells is ...

Этот метод поможет понять и выполнить лабораторные методы, необходимые для выявления активности двух микроРНК в раковых клетках легких in vitro. Рак легких является основной причиной смерти, связанной с раком во всем мире. Здесь мы представляем методы, охватывающие от базовых лабораторных методологий до более сложных протоколов, таких как анализ экспрессии генов и микроРНК белка антител, специально используемые для определения влияния действий микроРНК.Следующие методы помогут нам ответить на ключевые вопросы, касающиеся влияния двух микроРНК, микроРНК 143 и микроРНК 506, на регулирование клеточного цикла в раковых клетках легких. Мы представляем различные лабораторные методы, такие как трансфекция клеток, экстракция РНК, количественный анализ ПЦР в реальном времени и микроРНК. Мы надеемся, что наша презентация будет способствовать успешного завершения этих анализов.Во-первых, место культурных клеток в соответствующей колбе достаточно для извлечения РНК и белка, для выполнения экспрессии генов с помощью qPCR или микро-array анализа. Затем инкубировать на ночь со средствами массовой информации дополняется 10 процентов FBS и 1 процент пенициллина стрептомицин. На следующий день подготовь образец микроРНК для трансфекции путем разбавления микроРНК 143 и микроРНК 506 в средствах массовой информации в концентрации 100 наномолярных каждый.Вынюхив колбу из инкубатора и удалите средства массовой информации. Вымойте с 1x PBS. Все необработанные элементы управления будут содержать только неполные средства массовой информации с ячейками.Инкубировать клетки с трансфекции средств массовой информации в течение шести часов в инкубаторе. Через шесть часов удалите мультимедиа и замените четыре миллилитров свежих, полных средств массовой информации. Урожай клеток после 24 часов и 48 часов путем трипсинизации.Далее, мыть дважды с 1x PBS в каждой трубке и удалить супернатант. Для того, чтобы выполнить экстракции РНК в более позднее время, заморозить клетки при температуре минус 80 градусов по Цельсию. Добыча РНК была выполнена с использованием РНК-комплекта, следуя инструкциям производителя.Во-первых, удалите трубки от минус 80 градусов по Цельсию и дайте оттаять. Добавьте 300 микролитров буфера лиза и пипетки вверх и вниз, чтобы сломать клеточную мембрану. Добавьте равный объем 100-процентного ультра-чистого этанола.Затем хорошо перемешать и поместить в разделенную колонку. Центрифуга и удалить поток через. Добавьте 400 микролитров стирки и буфера и центрифуги, чтобы удалить буфер.Добавьте 5 микролитров DNAse 1 с буфером пищеварения 75 микролитров VNA в каждом образце и инкубировать в течение 15 минут. Затем мыть образец с 400 микролитер РНК подготовительный буфер. Далее, мыть дважды с РНК мыть буфер.Теперь добавьте воду без нуклеазы в колонку, центрифугу, а затем соберите РНК. Измерьте концентрацию РНК. На этом этапе два микрограмма образца РНК могут быть отправлены для секвенирования РНК.Подготовь cDNA в соответствии с протоколом, описанным в текстовом разделе, с помощью термоциклера. Подготовка вперед и обратной грунтовка решений с DNAse RNAse свободной воды в концентрации 10 микромоляров. Подготовь мастер-микс для каждого гена, который будет обнаружен в зависимости от количества образцов.Для каждого образца cDNA количество реакции в соответствии с таблицей, описанной в тексте. Поместите каждый образец в соответствующие скважины. Для qPCR, это всегда хорошо, чтобы подготовить документ Excel с 96 хорошо макет пластины, для того, чтобы отслеживать образцы.Для каждого образца и проанализированного гена, выполнять их реакцию в три раза, или по крайней мере дубликаты. Печать пластиковой пластины с прозрачным, оптически прозрачным пластиковым уплотнитель. Избегайте прикосновения к тонкому пластиковому слою пальцами, так как это может привести к ложному сигналу.Быстро спина пластины смешать все реагенты на дно своих скважин. Затем запустите выборку пластины с помощью количественной, в режиме реального времени ПЦР машины. Получите значения КТ, генерируемые машиной qPCR, и проанализируйте для относительной экспрессии генов.Transfect клетки, как описано в предыдущем разделе этого видео. Урожай клеток из каждого образца в отдельных, 15 миллилитров стерильных труб для трипсинизации. Затем, мыть клетки дважды с 1x PBS, путем центрифугации на 751G в течение пяти минут, а затем удалить супернатант.Повторно приостановить и разорвать палитру, добавив 200 микролитер ледяной 1x PBS через пипетки. Добавьте два миллилитров 70-процентного ледяного этанола, по капле в трубку, при этом аккуратно вихревая трубка, чтобы исправить клетки. Инкубировать трубки в течение 30 минут при комнатной температуре и поместить их в четыре градуса по Цельсию в течение одного часа.Удалите трубки с четырех градусов по Цельсию и центрифугу. Добавьте 2 мл ледяного PBS и вихря, а затем удалите супернатант центрифугой. Добавьте 500 микролитров 1x PBS, содержащих йодидный и рибонуклеазу А с концентрацией 50 и 200 микрограммов на миллилитр, соответственно, в каждом образце и инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре.Перенесите образцы в соответствующие трубки, защищая от света, и бегите по потоку цитометра. Этот эксперимент заключается в выявлении всех белков клеточного цикла пути изменены микроРНК лечения. Сбор образцов белка в соответствии с процедурой, описанной в разделе трансфекции, и количественно с анализом BCA.Удалите горки с минус четырех градусов по Цельсию за час до эксперимента, чтобы довести до комнатной температуры и удалить влагу. Возьмите 70 микрограмм образцов белка и подготовьте образцы слайдов в соответствии с инструкциями производителя, которые также описаны шаг за шагом в текстовом разделе. Здесь следует отметить, что правильное мытье горок с ультра-чистой деионизированной водой является еще одним важным шагом, так как это поможет уменьшить фон слайдов.Кроме того, очень важно в этом эксперименте не высыхать слайды образца до последнего шага. Наконец, сканируйте слайд с помощью микро-машины и анализируйте данные. Для определения экспрессии генов CDK1, CDK4 и CDK6 был проведен анализ микроРНК-обработанных образцов.Эти гены регулируют клеточный цикл нормальных и раковых клеток, и были направлены в качестве средства для ингибирования прогрессирования опухоли. Данные продемонстрировали downregulatory влияние этих генов из-за лечения микроРНК 143 и 506. Данные о распределении клеточного цикла из цитометрии потока продемонстрировали увеличение популяции в фазе G0 и G1, а также уменьшение популяции в фазе S из-за эффекта комбинаторного лечения микроРНК 143 и 506.Специфический микро-array анализ цикла клетки обнаружил изменения выражения протеина приблизительно 60 генов. Представленная тепловая карта указывает на низкорегуляцию на уровне белка нескольких генов, необходимых для прогрессирования клеточного цикла и пролиферации, таких как CDK2, Helen 1 и 3, RE2F1. В отличие от этого, белки, широко признанные их выросли ингибирующее действие были upregulated.Несмотря на то, что результаты являются полуколичеводческих и требуется дальнейший анализ, анализ микро массива обеспечивает краткий обзор деятельности пути. Мы считаем, что после просмотра этого видео, вы сможете выполнить фундаментальные, а также сложные, лабораторные эксперименты, которые помогут вам в выявлении активности микроРНК в клетках.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

МикроРНК основе жидкого биопсия: Опыт плазмы Мирна подпись классификатора (MSC) для скрининга рака легких

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

Подготовка первичных острый лимфобластный лейкоз клеток в разных клеточного цикла этапов, центробежные сцеживания

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Простой и быстрый метод для получения высокого качества опухоли ДНК от клинических патологических образцов с помощью касания отпечаток цитологии

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Поколение и изоляции арестован клеточного цикла клетки с сложных получен

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Phospho Flow Cytometry with Fluorescent Cell Barcoding for Single Cell Signaling Analysis and Biomarker Discovery

Фосфоресцентный проточной цитометрии с люминесцентные клеток штриховое кодирование для сигнализации биомаркер обнаружение и анализ отдельной ячейки

Aberrant cell signaling plays a central role in cancer development and progression. Most novel targeted therapies are indeed directed at proteins and ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Поток Цитометрический анализ митохондриальных реактивных видов кислорода в Мурин гематопоитических стволовых и прародителей клеток и MLL-AF9 Driven лейкемии

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Optimization, Design and Avoiding Pitfalls in Manual Multiplex Fluorescent Immunohistochemistry

Оптимизация, дизайн и предотвращение ловушек в ручном мультиплексфлюсцентной иммуногистохимии

Microenvironment evaluation of intact tissue for analysis of cell infiltration and spatial organization are essential in understanding the complexity of ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

Специфический цикл клеток Измерение З2АКС и Апоптоза после генотоксического стресса с помощью цитометрии потока

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Анализ боковой популяции в линиях солидных опухолевых клеток

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Оценка гибели клеток с использованием бесклеточного супернатанта пробиотиков в трехмерных сфероидных культурах колоректальных раковых клеток

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...