Name: tissue collection of bats for -omics analyses and primary cell culture
Uploaded: 2019-10-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Collection of Bats for -Omics Analyses and Primary Cell Culture at JoVE.com

<p class="jove_content">हम सेंट्रो डे इकोलॉजी वाई बायोडाइडिसिडैड CEBIO, एरिका पैलिज़ा, मिलुस्का सांचेज़, जॉर्ज कैरेरा, एडगर रेंगिफो वीज़, हेरोल्ड पोरोकैरेरो ज़रिया, जॉर्ज रुज़ लेवेउ, जैमे पेचेको कैस्टिलो, कार्लोस टेलो, फैनी कोर्नेजो, और फैनी फर्नान्डेज को धन्यवाद देते हैं। पेरू में संग्रह संभव. हम भी डोमिनिकन गणराज्य में ऊतक संग्रह संभव बनाने के लिए Grupo Jaragua और Yolanda Len के सभी सदस्यों को धन्यवाद, साथ ही Bernal Rodriguez Hernandez, Bernal Matarrita, और कोस्टा रिका में ला सेल्वा जैविक अनुसंधान स्टेशन में हर कोई बनाने के लिए, नमूना संभव है. हम सेल संस्कृति पीढ़ी के लिए <em>Phyllostomus discolor</em> चमगादड़ से उपयोग और पंख घूंसे के नमूना संग्रह के लिए एला Lattenkamp और Lutz Wiegrebe धन्यवाद. <em>Phyllostomus discolor</em> चमगादड़ म्यूनिख में लुडविग-मैक्सिमिलियन्स विश्वविद्यालय के विभाग जीव विज्ञान द्वितीय में एक प्रजनन कॉलोनी से उत्पन्न. म्यूनिख जिला पशु चिकित्सा कार्यालय द्वारा चमगादड़ों को रखने और प्रजनन करने की स्वीकृति जारी की गई थी। LMD, SJR, KTJD, और LRY NSF-डीईबी 1442142 द्वारा वित्त पोषित किया गया. एलएमडी NSF-DEB 1838273 द्वारा वित्त पोषित किया गया था. एलआरवाई को एनएसएफ-पीआरएफबी 1812035 द्वारा वित्त पोषित किया गया था। SCV और पीडी एक मैक्स प्लैंक अनुसंधान समूह पुरस्कार, और एक मानव फ्रंटियर्स विज्ञान कार्यक्रम (HFSP) अनुसंधान अनुदान (RGP0058/2016) द्वारा वित्त पोषित किया गया. SJR, JHTP, और KTJD यूरोपीय अनुसंधान परिषद द्वारा वित्त पोषित किया गया (ईआरसी शुरू अनुदान 310482 [EVOGENO]) SJR को सम्मानित किया, ईसीटी यूरोपीय अनुसंधान परिषद अनुदान (ईआरसी-2012-StG311000) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।</p>

<p class="jove_content">यहाँ वर्णित सभी तरीकों को Stony Brook विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है (प्रोटोकॉल #2013-2034).</p>
<p class="jove_title">1. इच्छामृत्यु</p>
<ol><li>एक isoflurane संवेदनाहारी या किसी अन्य उपलब्ध स...

<p class="jove_content">इस पांडुलिपि में चर्चा किए गए प्रोटोकॉल में चमगादड़ों के विभिन्न उच्च-थ्रूपुट आण्विक विश्लेषणों के लिए सर्वोत्तम नमूना पद्धतियों का वर्णन किया गया है। सभी सफल -omics अध्ययन उच्च गुणवत्ता ऊतक की आवश्यकत?...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf Safelock tubes</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>10509691</td>
			<td>1.5 mL sterile tubes used during cell culture protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,554,002</td>
			<td>15 mL sterile tubes used during cell culture protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL cryovials</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1154P75</td>
			<td>cryogenic vials for tissues to be stored in liquid nitrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mm biopsy punch</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MIL3332</td>
			<td>wing biopsy punch for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>83,392</td>
			<td>Culture vessle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allprotect Tissue Reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76405</td>
			<td>for fecal samples; tissue stabilizing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slides for TC10/TC20 cell counter, dual chamber</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td>Chambers for the count cells using the automated cell counter TC20 by Bio-Rad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase IV</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7909</td>
			<td>For dissociation of primary cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650-5X5ML</td>
			<td>Prevents crystalization of water during freezing of the cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM&#8211;Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12491-015</td>
			<td>culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>14190169</td>
			<td>Balanced salt solution used for washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>10270106</td>
			<td>Serum-supplement for in vitro cell culture of eukaryotic cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G1264-250MG</td>
			<td>Antibiotic for culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Mr. Frosty</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>5100-0050</td>
			<td>Freezing container which provides 1&#176;C/min cooling rate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PARAFILM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7793</td>
			<td>Wrapping tubes etc for sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin (pen-strep), 100x</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140130</td>
			<td>Antibiotic for culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS) 10x, pH 7.4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td>salt buffer used for washes and storage of bone tissue; dilute to 10X using de-ionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AM7021</td>
			<td>RNA stabilizing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAse away</td>
			<td>Genetech</td>
			<td>83931-250mL</td>
			<td>breaks down enzymes that lead to RNA degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7631-86-9</td>
			<td>dessicant agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1450102</td>
			<td>Automated cell counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td>Cell stain used to assess cell viability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td>For dissociation of cells during splitting</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue collection of bats for -omics analyses and primary cell culture

<p class="jove_content">उच्च थ्रूपुट अनुक्रमण प्रौद्योगिकियों अग्रिम के रूप में, उच्च गुणवत्ता वाले ऊतक अधिग्रहण और संरक्षण के लिए मानकीकृत तरीकों गैर मॉडल जीवों के लिए इन तरीकों के विस्तार के लिए अनुमति देते हैं। चमगादड़ से ऊतक संग्रह का अनुकूलन करने के लिए प्रोटोकॉल की एक श्रृंखला उच्च थ्रूपुट अनुक्रमण दृष्टिकोण की एक श्रृंखला के लिए विकसित किया गया है। यहाँ रेखांकित चमगादड़, वांछित जनसांख्यिकी प्रत्येक बल्ले के लिए एकत्र किया जा करने के लिए, और अनुकूलित तरीकों ऊतक संग्रह के दौरान एक बल्ले पर तनाव को कम करने के लिए कब्जा करने के लिए प्रोटोकॉल हैं। विशेष रूप से रेखांकित ऊतक को प्राप्त करने के लिए (i) उच्च आणविक वजन जीनोमिक विश्लेषण के लिए डीएनए, (ii) ऊतक-विशिष्ट ट्रांसक्रिप्टम के लिए आरएनए, और (iii) प्रोटीओमिक स्तर के विश्लेषण के लिए प्रोटीन प्राप्त करने के लिए तरीके हैं। अंत में, यह भी रेखांकित विंग क्लिप से व्यवहार्य प्राथमिक सेल संस्कृतियों बनाने के द्वारा घातक नमूना से बचने के लिए एक तरीका है. इन तरीकों की एक केंद्रीय प्रेरणा प्रत्येक बल्ले के लिए संभावित आणविक और रूपात्मक डेटा की मात्रा को अधिकतम करने और ऊतकों को संरक्षित करने के लिए इष्टतम तरीके सुझाने के लिए है ताकि वे भविष्य में विकसित नए तरीकों के रूप में अपने मूल्य को बनाए रखें। यह मानकीकरण विशेष रूप से महत्वपूर्ण हो गया है क्योंकि क्रोमोसोम स्तर, दुनिया भर में प्रजातियों के त्रुटि-मुक्त जीनोम के अनुक्रम के लिए पहल उभरा है, जिसमें कई वैज्ञानिक दलों विभिन्न वर्गीकरण के अनुक्रमण का नेतृत्व कर रहे हैं समूहों. प्रोटोकॉल यहाँ उल्लिखित आदर्श ऊतक संग्रह और Bat1K के लिए ऊतक संरक्षण विधियों को परिभाषित, संघ है कि बल्ले की हर प्रजाति के जीनोम अनुक्रमण है.</p>

<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1"><strong>डीएनए</strong><br>मानक कम आणविक वजन (LMW) विश्लेषण के लिए, डीएनए तीन netropical चमगादड़ प्रजातियों से निकाला गया था. ऊतक नमूने डोमिनिकन गणराज्य और कोस्टा रिका से क्षेत्र में एकत्र किए गए थे, इस पत्र में वर...

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Tissue Collection of Bats for -Omics Analyses and Primary Cell Culture

<p class="jove_content">यह जीनोमिक, ट्रांसक्रिप्टोमिक, और चमगादड़ के प्रोटीओमिक विश्लेषण के लिए इष्टतम ऊतक तैयार करने के लिए एक प्रोटोकॉल है जो जंगली में पकड़ा गया है। यह बल्ले पर कब्जा और विच्छेदन, ऊतक संरक्षण, और बल्ले ऊतक के सेल culturing के लिए प्रोटोकॉल भी शामिल है.</p>

-Omics विश्लेषण और प्राथमिक सेल संस्कृति के लिए चमगादड़ के ऊतक संग्रह

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of ...

Research

JoVE Journal

Biology

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एफ actin के लिए बाइंडिंग प्रोटीन का विश्लेषण के लिए, actin सह अवसादन परख

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

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वयस्क चूहा हार्ट Myocytes के प्राथमिक संस्कृति

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Electrospinning Fibrous Polymer Scaffolds for Tissue Engineering and Cell Culture

ऊतक इंजीनियरिंग और सेल संस्कृति के लिए रेशेदार पॉलिमर scaffolds Electrospinning

As the field of tissue engineering evolves, there is a tremendous demand to produce more suitable materials and processing techniques in order to address ...

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प्रेरण और सेल संस्कृति में Hypoxia का परीक्षण

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

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माउस प्राथमिक अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

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Nanogold Labeling of the Yeast Endosomal System for Ultrastructural Analyses

Ultrastructural विश्लेषण के लिए खमीर endosomal प्रणाली की Nanogold लेबल

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A Video Protocol of Retroviral Infection in Primary Intestinal Organoid Culture

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Immunohistochemical और Immunofluorescent विश्लेषण के लिए आंतों के ऊतकों तैयारी के लिए स्विस रोलिंग तकनीक में सुधार

Understanding the role of factors that regulate intestinal epithelial homeostasis and response to injury and regeneration is important. The current ...