Name: tissue collection of bats for -omics analyses and primary cell culture
Uploaded: 2019-10-23T13:00:00
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セントロ・デ・エコロディア・イ・バイオディバーシダード・セビオ、エリカ・パリザ、ミルスカ・サンチェス、ホルヘ・カレラ、エドガー・レンギフォ・バスケス、ハロルド・ポロカレロ・ザリア、ホルヘ・ルイス・レヴォー、ジェイミー・ペチェコ・カスティージョ、カルロス・テロ、ファニー・コルネホ、ファニー・ファニー・ファニ・ファニ・ファニェ可能なペルーでの収集。また、グルポ・ジャラグアとヨランダ・レオンのメンバー全員に対し、ドミニカ共和国での組織採取を可能にし、ベルナル・ロドリゲス・ヘルナンデス、ベルナル・マタリタ、コスタリカのラ・セルバ生物研究ステーションの皆さんに感謝します。サンプリングが可能です。我々は、細胞培養生成のためのフィロストムス変色コウモリからの翼パンチのアクセスとサンプルコレクションのためのエラ・ラッテンカンプ&ルッツ・ヴィーグレベに感謝します。フィロストムス変色コウモリは、ミュンヘンのルートヴィヒ・マクシミリアン大学の生物学II科の繁殖コロニーに由来する。コウモリを維持し、繁殖するための承認は、ミュンヘン地区獣医局によって発行されました。LMD、SJR、KTJD、およびLRYはNSF-DEB 1442142によって資金提供されました。LMDはNSF-DEB 1838273によって資金提供されました。LRYはNSF-PRFB 1812035によって資金提供されました。SCVとPDは、マックス・プランク・リサーチ・グループ賞とヒューマン・フロンティア・サイエンス・プログラム(HFSP)研究助成金(RGP0058/2016)によって資金提供されました。SJR、JHTP、およびKTJDは、SJRに授与された欧州研究評議会(ERC開始助成金310482[EVOGENO])によって資金提供され、ECTは欧州研究評議会の助成金(ERC-2012-StG311000)によって資金提供されました。

ここに記載されているすべての方法は、ストーニーブルック大学の機関動物管理および使用委員会(IACUC)によって承認されています(プロトコル#2013-2034)。
1. 安楽死
<ol><li>イゾルラン麻酔薬または別の利用可能な麻酔薬で綿のボールを湿らせます。</li>
	<li>綿のボールを再密封可能な気密性のビニール袋に入れます。袋は、布のバットバッグに快適にバッグを保持するのに...

この原稿で議論されるプロトコルは、コウモリの様々なハイスループット分子解析のための最良のサンプリングプラクティスを説明する。すべての成功した-omics研究は、高品質の組織を必要としますが、コウモリ組織だけでなく、他の非モデル生物は、多くの場合、制御された実験室の設定と同じ基準に設定することができないフィールド条件で発生します。サンプリングは、多くの場合、?...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf Safelock tubes</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>10509691</td>
			<td>1.5 mL sterile tubes used during cell culture protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,554,002</td>
			<td>15 mL sterile tubes used during cell culture protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL cryovials</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1154P75</td>
			<td>cryogenic vials for tissues to be stored in liquid nitrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mm biopsy punch</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MIL3332</td>
			<td>wing biopsy punch for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>83,392</td>
			<td>Culture vessle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allprotect Tissue Reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76405</td>
			<td>for fecal samples; tissue stabilizing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slides for TC10/TC20 cell counter, dual chamber</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>145-0011</td>
			<td>Chambers for the count cells using the automated cell counter TC20 by Bio-Rad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase IV</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7909</td>
			<td>For dissociation of primary cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650-5X5ML</td>
			<td>Prevents crystalization of water during freezing of the cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM&#8211;Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12491-015</td>
			<td>culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>14190169</td>
			<td>Balanced salt solution used for washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>10270106</td>
			<td>Serum-supplement for in vitro cell culture of eukaryotic cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G1264-250MG</td>
			<td>Antibiotic for culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Mr. Frosty</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>5100-0050</td>
			<td>Freezing container which provides 1&#176;C/min cooling rate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PARAFILM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7793</td>
			<td>Wrapping tubes etc for sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin (pen-strep), 100x</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140130</td>
			<td>Antibiotic for culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS) 10x, pH 7.4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td>salt buffer used for washes and storage of bone tissue; dilute to 10X using de-ionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AM7021</td>
			<td>RNA stabilizing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAse away</td>
			<td>Genetech</td>
			<td>83931-250mL</td>
			<td>breaks down enzymes that lead to RNA degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7631-86-9</td>
			<td>dessicant agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1450102</td>
			<td>Automated cell counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>145-0013</td>
			<td>Cell stain used to assess cell viability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td>For dissociation of cells during splitting</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue collection of bats for -omics analyses and primary cell culture

ハイスループットシーケンシング技術が進歩するにつれて、高品質の組織の取得と保存のための標準化された方法は、非モデル生物へのこれらの方法の拡張を可能にします。コウモリからの組織収集を最適化する一連のプロトコルは、一連のハイスループットシーケンシングアプローチのために開発されました。ここでは、コウモリの捕獲のためのプロトコル、各コウモリに対して収集する必要な人口統計、および組織収集中のコウモリへのストレスを最小限に抑えるために最適化された方法を示します。具体的には、(i)高分子ゲノム解析用の(i)DNA、組織特異的転写物用のRNA、および(iii)プロテオミクスレベル分析用のタンパク質を得るための組織を収集および処理する方法を概説する。最後に、ウィングクリップから生存可能な一次細胞培養物を作成することによって致命的なサンプリングを回避する方法も概説する。これらの方法の中心的な動機は、各コウモリの潜在的な分子および形態学的データの量を最大化し、組織を保存する最適な方法を提案し、将来的に新しい方法が開発されるにつれてその価値を維持することです。この標準化は、染色体レベルのエラーのない種のゲノムを世界中で配列するイニシアチブが出現し、複数の科学当事者が異なる分類のシーケンシングを先導しているので、特に重要になっています。グループ。ここに概説されるプロトコルは、Bat1Kの理想的な組織収集および組織保存方法を定義し、コウモリのあらゆる種のゲノムを配列するコンソーシアムである。

Dna 標準的な低分子量(LMW)分析のために、DNAは3つの新熱帯コウモリ種から抽出された。組織サンプルは、この論文に記載されたプロトコルに従って、ドミニカ共和国とコスタリカから現場で収集されました。解剖後、混合組織(脳、肝臓、腸)の小片(<0.5cm)をRNA安定化溶液に入れ、フラッシュ凍結し、-80°Cで保存した。抽出は、RNase処理43?...

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Tissue Collection of Bats for -Omics Analyses and Primary Cell Culture

これは、野生で捕獲されたコウモリのゲノム、トランスクリプトーミクス、およびプロテオミクス分析のための最適な組織調製のためのプロトコルです。これは、コウモリの捕獲および解剖、組織保存、およびコウモリ組織の細胞培養のためのプロトコルを含む。

-オミクス分析と原発細胞培養のためのコウモリの組織採取

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of ...

このビデオでは、集団への影響を最小限に抑え、科学的価値を最大化することを目的として、人道的な方法でコウモリを収集するためのステップバイステップガイドを提供します。私たちのアプローチの利点は、各コウモリの潜在的な分子および形態データの量を最大化し、組織を保存して将来の価値を維持し、野生の個体の収穫を最小限に抑えるということです。解剖プロトコルは口頭で実証することは困難です。私たちがここで提示する組織製剤技術の多くは、異なる臓器がどのように識別され、適切に解剖され、保存されているかを視覚化することで最もよく伝えられます。遅延を避けるために、すべての切り分けを開始する前にすべてのバイアルを準備します。RNAの場合は、各標本に必要なバイアルの数を確保します。各チューブに、収集される組織タイプと、標準的な検体識別情報をラベル付けします。RNA安定化溶液のバイアルを50%満たし、摂氏4度まで冷やします。液体窒素に入れるとチューブが爆発する可能性があるため、バイアルをRNA安定化溶液で完全に満たさないように注意してください。安楽死の直後に、テキストプロトコルに記載されているようにコウモリの標本の切断を行う。鼻の皮膚を含む髪、筋膜、頭蓋骨の筋肉から頭蓋骨を皮膚にする。鼻の前端を壊さないで注意してください。視神経を切り離すのに十分な強い力を使って、鉗子で目を取り除きます。RNA安定化溶液の2ミリリットルバイアルに目を入れます。はさみを使用して、頭から始まる頭蓋骨の後部に矢状の切り傷を作り、脳に損傷を与えないように注意してください。次に、鉗子を使用して頭蓋骨の両側を静かに引き戻し、脳を露出させるために開いて割れるまで使用します。鉗子が簡単に脳を削り取ることができるように、頭蓋末端の頭蓋骨が取り除かれていることを確認します。脳を鉗子で優しくこすります。脳は非常に柔らかくなります。嗅球は頭蓋骨の内部の腹側部分に座って目に見えるようになります。嗅球を取り付け続けるようにしてください。可能であれば、脳の形状をそのままにし、すぐにドライアイスの上に置くか、RNA安定化溶液の5ミリリットルバイアルに入れます。頭蓋骨の尾端で、コクレイは頭の両側に横に見えるはずです。鉗子を使ってコクレイをそっと引っ張ります。次いで、RNA安定化溶液の2ミリリットルバイアル1つに入れます。上顎と下顎が結合する2つの切開を行い、下顎を取り除きます。クリブリフォームプレートが明らかになります。これは研究者を重視し続ける重要な骨です。それは頭蓋骨の最も前部領域として識別することができ、複数の前置を有し、嗅球が置かれる2つの溝を有する。下顎骨を取り除いたら、頭蓋骨の残りの部分からロストラムを取り除きます。顎にクリブリフォームプレートが含まれていることを確認します。RNA安定化溶液に鼻を入れ、一晩摂氏4度で保存します。下顎から舌をハサミで切り、RNA安定化溶液の2ミリリットルバイアルに入れる。RNA安定化溶液に一晩浸した後、液体窒素に鼻バイアルを入れます。氷に浸かるか、冷蔵庫に24時間浸した後、液体窒素にサンプルを入れます。メスを使って腹腔を貫通し、肋骨まで縦切開を行います。これは骨格フレームを没収します。皮膚を剥がして胸筋を明らかにし、筋肉の少なくとも2つのサンプルを採取する。RNAとDNAの両方の組織は、これらの切片の間に収集されます。高分子量DNAの組織を乾燥した凍結に入れ、液体窒素中でフラッシュフリーズします。RNA安定化溶液にRNAの組織を配置します。胸骨を切り裂き、肋骨を引き離します。さて、肺と心臓を取り出します。心臓を肺から分離するためにメスと鉗子を使用してください。メスを使って肺を分解し、RNA安定化溶液に入れます。全体を取ることができるが、RNA安定化溶液が徹底的に浸るように、半分に分割する必要がある心臓を収集します。さて、肝臓からサンプルを取る。肝臓の少なくとも2つのサンプルを取る.1つのサンプルをバイアルに入れ、高分子量DNAのために凍結したままにし、もう一方のサンプルをRNA安定化溶液に入れる。肝管に従って膵臓と胆嚢を見つけます。胆嚢をRNA安定化溶液のバイアルに移す。胃を見つけ、そのベースに羽のような脾臓は、紫色の異なる色合いとして表示されます。膵臓はまた、重量構造としてここで見る必要があります。RNA安定化溶液のバイアルに、胃、脾臓、膵臓をそれぞれ集める。小腸と大腸の小さなサンプルを収集します。RNA安定化溶液のバイアルをそれぞれ入れる。腎臓の1つを取り、膀胱に彼らのダクトに従って、RNA安定化溶液のそれぞれのバイアルに置きます。他の腎臓をガイドとして使用して、男性の場合は精巣を見つけ、女性の場合は子宮と卵巣を見つけてください。可能であれば、一方または両方の生殖腺を収集します。また、翼の皮膚の様々な部分のサンプルを採取し、別々のバイアルに保管してください。私たちのアプローチの主な利点は、ゲノム研究だけでなく、機能的な分子研究のための十分な材料を生成しながら、非致死的な方法で動物をサンプリングすることができるということです。私達の議定書は翼のティッシュからの一次線維芽細胞の準備を可能にする。細胞は、貴重な再生可能な遺伝物質の供給源であり、コウモリの機能的および分子探査のモデルを表しています。書かれたプロトコルのセクション6に従って成長媒体に保存されている翼クリップは、組織培養施設に移すべきである。チューブの内容物を15ミリリットルの円錐型遠心分離管に移します。このデモンストレーションには、翼膜生検が用いられます。慎重に成長培地を取り除きます.500マイクロリットルの無菌PBSで生検を2回静かに洗います。チューブに1ミリグラム1ミリグラムの500マイクロリットルを4ミリリットル加えます。これは、個々の細胞に組織の消化を引き起こす.攪拌することなく摂氏37度で一晩インキュベートします。2日目には、新鮮な成長培地を作り、摂氏37度に予熱します。使用するプレートの各ウェルに新鮮な前温化成長培地を2ミリリットル加えることによって、6つのウェル組織培養プレートを準備します。必要になるまで、このプレートを摂氏37度と5%の二酸化炭素インキュベーターに保管してください。培養器から細胞を含む15ミリリットルのチューブを取り出し、新鮮な成長培地を1ミリリットル加えて消化反応を焼き付ける。P1000ピペットチップで溶液を慎重にトリチュールして細胞を再懸濁し、単一の細胞懸濁液を達成する。卓上遠心分離機の細胞を300倍のGで3分間そっと回転させ、P1000ピペットで80~90%の液体をそっと取り除いて上澄み物を捨てます。ペレットを500マイクロリットルの前温成長培地で再懸濁する。ペレットが見えなくなり、細胞が十分に懸濁されるように懸濁液を穏やかに三分し、壁にまだ見える小さな組織を避けるようにします。細胞懸濁液の全容を、前に調製した6つのウェルプレートの単一のウェルに穏やかにピペットし、プリウォーム成長培地を含む。プレートを左右に左右にゆっくりと揺らし、2~3回前後に揺れ、細胞が単一の層のウェルサーフェス上に分散するのを助けます。顕微鏡下でめっきされた細胞を確認してください。彼らはボールアップして浮かんでいるように見える単一の細胞であるべきですが、非常に密度が高いです。プレートを37°Cと5%の二酸化炭素にプリセットインキュベーターに慎重に置きます。約24時間後、顕微鏡下で細胞を観察し、培養の健康を判断する。これで、セルがプレートサーフェスにアタッチされ、平坦に表示されます。加湿インキュベーターで細胞を37°Cと5%の二酸化炭素にプリセットします。細胞は、定期的に顕微鏡下で観察して、メディアのリフレッシュまたは分割の必要性を判断する必要があります。必要に応じて、培地の約50%をウェルから慎重に吸引し、細胞を乱さないように、温めの側面に1ミリリットルの前温化成長培地を加えて穏やかに加える。細胞を通過させる必要がある場合には、約90%の増殖培地を慎重に吸引する。細胞を邪魔しないように、ウェルの壁に1ミリリットルの無菌PBSを加えることによって、細胞を非常に穏やかに洗います。プレートを前後にゆっくりと揺らし、左右に2~3回揺らします。慎重に再び細胞を洗浄する前にプレートからPBSのすべてを吸引します。トリプシンEDTAを井戸に加え、プレートを優しく揺らし、トリプシンEDTAでウェルの全面を覆い、室温で1分半インキュベートします。新鮮なプリウォーム成長培地を1ミリリットル添加して反応を焼き付けた。ピペットはプレートの表面から細胞を洗浄するために約5回上下し、細胞が懸濁していることを確認した。細胞懸濁液を15ミリリットルチューブに入れ、セルを卓上遠心分離機の中で3分間G.300倍にして回転させ、P1000ピペットで液体の80~90%を静かに取り除いて上清を捨てます。ペレットを生育前培地の1ミリリットルに再懸濁し、懸濁液を穏やかにトリチュレートする。ペレットまたは大きなペレットの断片が見えなくなり、細胞が単一細胞懸濁液に含まれるようにします。自動化された細胞カウンターを使用して細胞を数えるために、浮遊細胞の10マイクロリットルアリコートをトリパンブルーと1対1で混合して生存細胞を検出する。1分間インキュベートし、溶液のピペット10マイクロリットルを計数スライドに入れ替えます。自動セル カウンターに計数スライドを挿入し、適切な設定を使用してセルをカウントします。DMSOと成長培地を組み合わせて凍結培地を調製し、10%DMSOの最終濃度を得る。ペレットは、6つのウェルプレートの80〜90%コンフルエントウェルから調製する必要があります。凍結培地の1.5ミリリットルにペレットを再懸濁します。2つの別々のクライオビアルのそれぞれに約750マイクロリットルの細胞懸濁液を入れる。バイアルを極低温凍結容器に入れ、細胞の活力を維持するためにゆっくりと凍結するようにします。すぐにマイナス80度に置きます。凍結細胞を解凍するには、使用される各ウェルに2ミリリットルの前温化成長培地を含む6つのウェルプレートを調製する。必要になるまで、37°Cと5%の二酸化炭素インキュベーターでプレートを維持します。液体窒素から細胞のバイアルを1本取り出し、温かい水浴に入れて細胞を急速に解凍します。これには2~3分かかります。バイアル内の溶液が解凍されるとすぐに、ピペットを上下に軽くして溶液を均質化し、すぐに溶液全体を6つのウェルプレートの1つのウェルに入れます。プレートを左右に左右にゆっくりと揺らし、2~3回前後に揺れ、細胞が単一の層のウェルサーフェス上に分散するのを助けます。細胞をインキュベーターに摂氏37度、炭酸ガス5%を24~48時間置きます。デモンストレーションのようにセルを監視し、通過させます。DNA抽出の代表的な結果は、3つのコウモリ種からの標準的なDNA分析のために示されている。単一の大きなバンドは、最小の断片化を示し、それぞれの抽出からDNAの同様のサイズの断片を示します。RNA抽出の成功の一般的な指標は、RNA完全性数(RIN)であり、8を超える値はタクトRNAの高品質を表します。ここに示されているのは、4つの異なる局所でサンプリングされた13種類の新熱帯コウモリ種からのRNA抽出のRIN値である。アンデス、コスタリカ、ドミニカ共和国の種からサンプリングされた組織は、RNA安定化溶液に一晩で4°Cで浸漬した後、液体窒素に直接入れました。アマゾンの種から採取した組織は、RNA安定化溶液を入れてから約1週間後に液体窒素に入れ、摂氏4度で連続的に保った。そのような場合でも、RIN値は、RNA安定化溶液に直ちに入れられたものと比較し、液体窒素に直接入れられました。組織培養後、コウモリ細胞培養はプレート表面の80〜90%を覆い、元の形態を維持する必要があります。これは、分割に最適なステージを表します。6回以上の経過の後、細胞は形態を大きく、より長く変化させ、細胞は老化に入ります。明るいボールアップセルは死んだ細胞を表します。培養中の細胞は、DNA、RNA、タンパク質などの再生可能な材料源を表します。これらの細胞株は凍結することができ、従って研究の多くの年にわたって使用することができる資源を提供する。これは、ゲノム、転写、および主要組織を使用して挑戦される機能研究を可能にします。例えば、細胞は、細胞の型に対する影響を観察するために、遺伝子や化学的に改変することができる。

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

アクチン共沈降アッセイ、F -アクチンへの結合タンパク質の解析のための

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

成体ラットの心筋細胞の初代培養

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Electrospinning Fibrous Polymer Scaffolds for Tissue Engineering and Cell Culture

組織工学と細胞培養のための繊維状重合体の足場をエレクトロ

As the field of tissue engineering evolves, there is a tremendous demand to produce more suitable materials and processing techniques in order to address ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

細胞培養で誘導し、低酸素のテスト

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

ラット肝細胞の単離及び初代培養

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

マウスプライマリ膵臓腺房細胞の単離と培養

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Nanogold Labeling of the Yeast Endosomal System for Ultrastructural Analyses

超微細構造解析のための酵母エンドソーム系のナノゴールドラベル付け

Endosomes are one of the major membrane sorting checkpoints in eukaryotic cells and they regulate recycling or destruction of proteins mostly from the ...

A Video Protocol of Retroviral Infection in Primary Intestinal Organoid Culture

初代腸オルガノイド培養におけるレトロウイルス感染のビデオプロトコル

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses

免疫組織化学および免疫蛍光分析のための腸組織の調製のための改良されたスイス・ローリングテクニック

Understanding the role of factors that regulate intestinal epithelial homeostasis and response to injury and regeneration is important. The current ...