Name: an in vitro batch-culture model to estimate the effects of interventional regimens on human fecal microbiota
Uploaded: 2019-07-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota at JoVE.com

著者らは、糖尿病、肥満と代謝のためのセンターと臨床翻訳科学センター、ウェイクフォレスト医学部、国防総省の資金援助(助成番号:W81XWH-18-1-0118)からの資金援助を感謝します。カーミットグレンフィリップスII心臓血管医学の椅子;国立衛生研究所は、クロードD.ペッパー古いアメリカ人センター(P30AG12232によって資金提供)に資金を提供しました。R01AG18915;R01DK114224および臨床翻訳科学センター(臨床研究ユニット、UL1TR001420によって資金提供)はまた、ありがたいことに認められている。また、この実験中に、ボランティアの方々と他のラボメンバーの技術支援に感謝します。

注意:適切な材料安全データシートを参照し、適切なバイオセーフティレベル2(BSL-2)トレーニングの指示とガイドラインに従ってください。標準的なバイオセーフティルールに従ってすべての培養手順に従い、無菌条件を使用してBSL-2キャビネットを使用します。さらに、異なるモデルおよびヒト被験者からのfecalサンプルは、微生物媒介性疾患を広める潜在的なリスクを持つ可能性があります...

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	<li>Shreiner, A. B., Kao, J. Y., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiome+in+health+and+in+disease.">The gut microbiome in health and in disease.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 31 (1), 69-75 (2015).</li><li>Xu, Z., Knight, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+effects+on+human+gut+microbiome+diversity.">Dietary effects on human gut microbiome diversity.</a> British Journal of Nutrition. 113, 1-5 (2015).</li><li>Jiang, C., Li, G., Huang, P., Liu, Z., Zhao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+and+Alzheimer&#8217;s+disease.">The gut microbiota and Alzheimer&#8217;s disease.</a> Journal of Alzheimers Disease. 58 (1), 1-15 (2017).</li><li>Clemente, J. C., Ursell, L. K., Parfrey, L. W., Knight, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+gut+microbiota+on+human+health:+an+integrative+view.">The impact of the gut microbiota on human health: an integrative view.</a> The Journal Cell. 148 (6), 1258-1270 (2012).</li><li>Yadav, H., Jain, S., Marotta, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+mediated+modulation+of+gut+flora+might+be+biotherapeutical+approach+obesity+and+type+2+diabetes.">Probiotics mediated modulation of gut flora might be biotherapeutical approach obesity and type 2 diabetes.</a> Metabolomics : Open Access. 1 (3), 1-3 (2011).</li><li>Ahmadi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+Polysaccharides+in+the+Amelioration+of+Gut+Microbiome+Dysbiosis+and+Metabolic+Diseases.">Dietary Polysaccharides in the Amelioration of Gut Microbiome Dysbiosis and Metabolic Diseases.</a> Obesity and Control Theries: Open Access. 4 (3), (2017).</li><li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity-Linked+Gut+Microbiome+Dysbiosis+Associated+with+Derangements+in+Gut+Permeability+and+Intestinal+Cellular+Homeostasis+Independent+of+Diet.">Obesity-Linked Gut Microbiome Dysbiosis Associated with Derangements in Gut Permeability and Intestinal Cellular Homeostasis Independent of Diet.</a> Journal of Diabetes Research. , 1-9 (2018).</li><li>Paul, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+of+diet+and+the+gut+microbiome+on+epigenetic+modulation+in+cancer+and+other+diseases.">Influences of diet and the gut microbiome on epigenetic modulation in cancer and other diseases.</a> Journal of Clinical Epigenetics. 7 (1), 112 (2015).</li><li>O&#8217;mahony, S., Clarke, G., Borre, Y., Dinan, T., Cryan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+tryptophan+metabolism+and+the+brain-gut-microbiome+axis.">Serotonin tryptophan metabolism and the brain-gut-microbiome axis.</a> Journal of Behavioural Brain Research. 277, 32-48 (2015).</li><li>Sharon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specialized+metabolites+from+the+microbiome+in+health+and+disease.">Specialized metabolites from the microbiome in health and disease.</a> Journal of Cell Metabolism. 20 (5), 719-730 (2014).</li><li>Faber, T. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vegetable+fiber+fermentation+by+human+fecal+bacteria:+cell+wall+polysaccharide+disappearance+and+short-chain+fatty+acid+production+during+in+vitro+fermentation+and+water-holding+capacity+of+unfermented+residues.">Vegetable fiber fermentation by human fecal bacteria: cell wall polysaccharide disappearance and short-chain fatty acid production during in vitro fermentation and water-holding capacity of unfermented residues.</a> Journal of Nutrition. 123 (5), 860-869 (1993).</li><li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-origin+probiotic+cocktail+increases+short-chain+fatty+acid+production+via+modulation+of+mice+and+human+gut+microbiome.">Human-origin probiotic cocktail increases short-chain fatty acid production via modulation of mice and human gut microbiome.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12649 (2018).</li><li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+microbiome+signatures+and+short-chain+fatty+acids+in+mouse,+rat,+non-human+primate+and+human+feces.">Comparative microbiome signatures and short-chain fatty acids in mouse, rat, non-human primate and human feces.</a> Frontiers in Microbiology. 9, 2897 (2018).</li><li>Thangamani, S., Guinan, J., Wang, S., Yadav, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic-induced+decreases+in+the+levels+of+microbial-derived+short-chain+fatty+acids+promote+gastrointestinal+colonization+of+Candida+albicans.">Antibiotic-induced decreases in the levels of microbial-derived short-chain fatty acids promote gastrointestinal colonization of Candida albicans.</a> bioRxiv. , 428474 (2018).</li><li>Ahmadi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prebiotics+from+acorn+and+sago+prevent+high-fat+diet-induced+insulin+resistance+via+microbiome-gut-brain+axis+modulation.">Prebiotics from acorn and sago prevent high-fat diet-induced insulin resistance via microbiome-gut-brain axis modulation.</a> The Journal of Nutritional Biochemistry. , (2019).</li><li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+Microbiome+Composition+in+Non-human+Primates+Consuming+a+Western+or+Mediterranean+Diet.">Gut Microbiome Composition in Non-human Primates Consuming a Western or Mediterranean Diet.</a> Frontiers in Nutrition. 5, 28 (2018).</li><li>Caporaso, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high-throughput+microbial+community+analysis+on+the+Illumina+HiSeq+and+MiSeq+platforms.">Ultra-high-throughput microbial community analysis on the Illumina HiSeq and MiSeq platforms.</a> ISME Journal. 6 (8), 1621-1624 (2012).</li><li>Caporaso, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=QIIME+allows+analysis+of+high-throughput+community+sequencing+data.">QIIME allows analysis of high-throughput community sequencing data.</a> Nature Methods. 7 (5), 335-336 (2010).</li><li>Garcia-Villalba, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+method+for+gas+chromatography-mass+spectrometry+analysis+of+short-chain+fatty+acids+in+faecal+samples.">Alternative method for gas chromatography-mass spectrometry analysis of short-chain fatty acids in faecal samples.</a> Journal of Seperation Science. 35 (15), 1906-1913 (2012).</li><li>Lee, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frozen+vs+Fresh+Fecal+Microbiota+Transplantation+and+Clinical+Resolution+of+Diarrhea+in+Patients+With+Recurrent+Clostridium+difficile+Infection:+A+Randomized+Clinical+Trial.">Frozen vs Fresh Fecal Microbiota Transplantation and Clinical Resolution of Diarrhea in Patients With Recurrent Clostridium difficile Infection: A Randomized Clinical Trial.</a> JAMA. 315 (2), 142-149 (2016).</li><li>Chen, M. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+fermentation+of+xylooligosaccharides+produced+from+Miscanthus&#215;+giganteus+by+human+fecal+microbiota.">In vitro fermentation of xylooligosaccharides produced from Miscanthus&#215; giganteus by human fecal microbiota.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (1), 262-267 (2015).</li><li>Cook, S., Sellin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+chain+fatty+acids+in+health+and+disease.">Short chain fatty acids in health and disease.</a> Alimentary Pharmacology &amp; Therapeutics. 12 (6), 499-507 (1998).</li><li>Rastelli, M., Knauf, C., Cani, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbes+and+health:+a+focus+on+the+mechanisms+linking+microbes,+obesity,+and+related+disorders.">Gut microbes and health: a focus on the mechanisms linking microbes, obesity, and related disorders.</a> Obesity. 26 (5), 792-800 (2018).</li><li>Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiber-mediated+nourishment+of+gut+microbiota+protects+against+diet-induced+obesity+by+restoring+IL-22-mediated+colonic+health.">Fiber-mediated nourishment of gut microbiota protects against diet-induced obesity by restoring IL-22-mediated colonic health.</a> Cell Host &amp; Microbe. 23 (1), 41-53 (2018).</li><li>Dinan, T. G., Cryan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut&#8211;brain+axis+in+2016:+Brain&#8211;gut&#8211;microbiota+axis&#8212;mood,+metabolism+and+behaviour.">Gut&#8211;brain axis in 2016: Brain&#8211;gut&#8211;microbiota axis&#8212;mood, metabolism and behaviour.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 14 (2), 69 (2017).</li></ol>

ここで提示されるインビトロフェカルスラリー発酵モデルは、ヒトの大腿骨微生物叢の組成に対する異なる基質および微生物株(例えば、プレバイオティクスおよびプロバイオティクス)の影響を近似する単純な単一バッチモデルである。fecal pH および SCFA レベルの面で代謝活動.本明細に提示された結果は、イヌリンの接種がfecal pHを減少させ、非処理されたフェカル微生物叢培養と比較して?...

ヒト微生物叢は、細菌、古細菌、ウイルスおよび真核生物微生物1からなる複雑なコミュニティであり、人体の内部および外部に生息する。最近の証拠は、肥満、糖尿病を含む様々なヒト疾患における腸内微生物叢および腸内微生物叢(ヒト消化管に見られる微生物とその遺伝子の全コレクション)の基本的な役割を確立している。心血管疾患、および癌1、2、3.さらに、腸内に生息する微生物は、私たちの健康に大きな影響を与える代謝産物の広いスペクトルを生成し、また、いくつかの疾患の病態生理学だけでなく、様々な代謝機能4に貢献することができます4、5.この腸内微生物集団の組成および機能における異常な変化(摂動)は、一般に「腸ジスビオシス」と呼ばれる。ジスビオシスは、通常、宿主の不健康な状態に関連付けられているので、宿主の健全な制御状態に関連する正常な(恒常性)微生物群相と区別することができる。腸内微生物叢ジスビオシスの特定のパターンは、多くの場合、様々な異なる疾患1、2、3、6、7に見出される。
腸内微生物叢による未消化食品、特に発酵性炭水化物/繊維の発酵は、エネルギーを生み出すだけでなく、短鎖脂肪酸(SCFA)、乳酸塩、受刑者、二酸化炭素を含む発散代謝産物を産生し、メタン、水素、エタノール6.さらに、腸内微生物叢はまた、葉酸、ビオチン、トリメチルアミン-N-酸化物、セロトニン、トリプトファン、γ-アミノブチル酸、ドーパミン、ノルエピネフリン、アセチルコリン、ヒスタミン、などの他の生理活性物質の数を生成します。デオキシコール酸、および4-エチルフェニル硫酸塩。これは主に、いくつかの身体プロセス、代謝機能およびエピジェネティック変化1、8、9に寄与する宿主微生物ニッチ内の固有の代謝フラックスの利用によって起こる。 10.しかし、このような微生物製品に対する様々な介入の影響は、簡単で効率的かつ再現可能なプロトコルの欠如のために、未だ不明のままである。ヒト腸内微生物叢組成物は非常に複雑で多様な生態系であり、したがって、人間の健康と疾患病理学におけるその役割に関する多くの疑問は未だに未解決のままである。腸内微生物叢の組成および代謝機能に対する多くの一般的な腸内微生物叢(例えば、プロバイオティクス、プレバイオティクス、抗生物質、女性移植および感染症)の影響は、大部分が解明されていない。さらに、生体内でのこれらの効果の検査と検証は、特に腸内微生物叢によって産生される栄養素や代謝産物のほとんどが腸内で同時かつ迅速に吸収または処分されるため、困難である。したがって、生体内でこれらの代謝産物(例えば、SCFA)の産生、量および処理を測定することは、依然として実用的な課題である。実際、動物やヒト被験者などの生理学的モデルは、腸内微生物叢の役割と宿主の健康に対する変調を決定するために重要であるが、これらは、異なるタイプのマイクロバイオーム調節剤の大規模なスクリーニングには適していないかもしれない。倫理的、金銭的、または時間的制約。この目的のために、インビトロおよび/またはex vivoモデルでは、インビトロで腸内微生物叢を培養し、異なる微生物叢に介入することで、時間とお金を節約する機会を提供することができ、したがって、予備的または大規模なスクリーニングを可能にすることができます。様々な成分(プロバイオティクス、プレバイオティクス、および他の介入化合物など)は、女性の微生物叢の多様性、組成および代謝プロファイルに及ぼす影響を調べたり予測する。腸内微生物叢のこのようなインビトロおよびex vivo系を用いる研究は、宿主の健康と疾患に寄与する宿主-マイクロバイオーム相互作用のさらなる理解を促進し、また、マイクロバイオームを標的とする新しい治療法を見つけることにもつながる可能性がある。宿主の健康を改善し、様々な疾患を予防し、治療する1.
インビトロ腸内微生物叢培養システムは実際の腸の状態を本当に複製することはできませんが、いくつかの研究室はそのようなモデルの開発に努めており、そのうちのいくつかはある程度実用的に発見され、成功裏に使用されています。異なる目的。最近の腸のモデルの1つは、胃、小腸、結腸の異なる領域を含む人間の消化管全体を模倣するヒト腸微生物生態系のシミュレータである。しかし、このような技術的に複雑なモデルは、世界中の他の研究施設からアクセスできない場合があります。したがって、マイクロバイオームモジュレーターを研究する研究室にとって、比較的シンプルで手頃な価格で実用的な新しい代替モデルの開発と、腸内微生物叢および宿主の健康への影響に対する重要なニーズが依然として存在する。したがって、インビトロ(またはex vivo)フェカル微生物叢培養システムの使用は、そのような介入の効果を研究するのに有用であろう11,12.具体的には、腸内微生物叢の多様性と組成物の周期的変化の観点から、異なるプレバイオティクスが微生物叢発酵能力に及ぼす影響、およびFECAL pH、およびSCFAおよび乳酸塩を含む微生物代謝産物のレベルを研究することができる。13.本明細書において、微生物叢調節剤の一例としてイヌリン(最も広く研究されたプレバイオティック成分の1つ)を用いて、この単純な生体生微生物叢バッチ培養系のステップバイステッププロトコルは、その使用を実証するために記載されている。微生物叢への介入後の女性微生物叢および微生物代謝産物の変化。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Bicarbonate (NH4HCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>217255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Sulfate (NH4)2SO4 </td>
			<td>TGI</td>
			<td>C2388</td>
			<td>Toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Dihydrate (CaCl2&#8226;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C3306</td>
			<td>Irritating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobaltous Chloride Hexahydrate (CoCl2&#8226;6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>255599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cupric Chloride Dihydrate (CuCl2&#8226;2H2O)</td>
			<td>Acros organics</td>
			<td>2063450000</td>
			<td>Toxic, Irritating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cysteine-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C121800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-biotin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B4501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Pantothenic acid</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A16609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium Ethylenediaminetetraacetate Dihydrate (Na2EDTA)</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>1610729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-&#945;-methylbutyrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W271918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferrous Sulfate Heptahydrate (FeSO4&#8226;7H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8263</td>
			<td>Toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic acid</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J62937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A14777</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutyrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>L04038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovalerate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A18642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride Hexahydrate (MgCl2&#8226;6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Chloride Tetrahydrate (MnCl2&#8226;4H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacin (Nicotinic acid)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel(Ii) Chloride Hexahydrate (NiCl2&#8226;6H2O)</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A14366</td>
			<td>Toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-valerate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>240370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-aminobenzoic acid</td>
			<td>MP China</td>
			<td>102569</td>
			<td>Toxic, Irritating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric Acid (H3PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Hydrogen Phosphate (K2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1551128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxine</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resazurin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R7017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A11764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium carbonate (Na2CO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1613757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>S320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Molybdate Dihydrate (Na2MoO4&#8226;2H2O)</td>
			<td>Acros organics</td>
			<td>206375000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine Hydrochloride (Thiamin-HCl)</td>
			<td>Acros organics</td>
			<td>148991000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>211921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin B12</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V2876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>70161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Sulfate Heptahydrate (ZnSO4&#8226;7H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m membrane filter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMPure magnetic purification beads</td>
			<td>Agencourt</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaerobic chamber with incubatore</td>
			<td>Forma anaerobic system, Thermo Scientific, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle filter</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cheesecloth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumina MiSeq sequencer</td>
			<td>Miseq reagent kit v3</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qiagen PowerFecal kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantitative Insights into Microbial Ecology (QIIME) software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit-3 fluorimeter</td>
			<td>InVitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waters-2695 Alliance HPLC system</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro batch-culture model to estimate the effects of interventional regimens on human fecal microbiota

いくつかのヒト疾患における腸内微生物叢の新たな役割は、新しいツール、技術、技術のブレークスルーを必要とします。このような改善は、人間の健康上の利点のためのマイクロバイオームモジュレータの利用を解読するために必要とされます。しかし、マイクロバイオーム変調を検証し、関連する健康上の利点を予測するための変調器の大規模なスクリーニングと最適化は、多数の動物および/またはヒト被験者が必要とするため、実質的に困難な場合があります。この目的のために、インビトロまたはex vivoモデルは、マイクロバイオームモジュレーターの予備スクリーニングを容易にすることができる。本明細物では、プロバイオティクス、プレバイオティクスおよび他の食品成分を含む腸内微生物叢の様々な介入の効果を調べることができるex vivo fecalマイクロビオタ培養システムを最適化し、実証する。栄養補助食品および薬物、ヒト腸内微生物叢の多様性および組成物に関する。最も広く研究されているプレバイオティクス化合物およびマイクロバイオームモジュレーターの1つであるイヌリンは、健康なフェカル微生物叢組成物およびその代謝活性(フェカルpHおよび有機酸のフェカルレベルなど)への影響を調べるために、ここで例として使用される。乳酸および短鎖脂肪酸(SCFA)を含む。このプロトコルは、フェカル微生物叢プロファイルに対するモジュレーターの異なる介入の影響を推定し、その健康への影響を予測することを目的とした研究に役立つ可能性がある。

このプロトコルは、特定のプレバイオティクス(すなわち、微生物叢組成および代謝活性に対するイヌリンの効果を、胎児pHの変化および健康なヒト被験者の胎児における乳酸およびSCFAの濃度の観点から実証するために用いられる。イヌリンによる治療後の異なるタイムポイント)。fecal pHとは、乳酸およびSCFAのフェスカルレベル(図1)、および微?...

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An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota

このプロトコルは、ヒトのフェカル微生物叢のインビトロバッチ培養発酵システムを説明し、イヌリン(よく知られているプレバイオティクスと最も広く研究された微生物モジュレーターの1つ)を使用して、特定の効果を推定する上でこのシステムの使用を実証する。fecal微生物叢組成および代謝活動に対する介入。

ヒトの胎児微生物叢に対する介入レジメンの影響を推定するインビトロバッチ培養モデル

The emerging role of the gut microbiome in several human diseases demands a breakthrough of new tools, techniques and technologies. Such improvements are ...

様々なヒト疾患における腸内微生物叢の新たな役割を考えると、プロバイオティクス、プレバイオティクス、ダイエットおよび薬物のようないくつかの腸内微生物叢調節剤は、腸内微生物叢関連の健康病気を改善するのに役立ちます。しかし、このような腸内微生物叢変調器の影響を予測するための迅速かつ手頃な価格のスクリーニングシステムはありませんが、このシステムは、特定の介入が最終的にホストの健康に影響を与える可能性のある腸内微生物叢にどのような影響を与えるかを予測するのに十分簡単です。このプロトコルは、腸内微生物叢変調器と微生物叢および宿主の健康への影響を調査する実験室にとって、シンプルで手頃な価格で実用的です。無菌および嫌気性条件の維持は、この実験のために重要である。また、便標本は、すぐに収集時に、新たに使用する必要があります。それ以外の場合、実験が後で計画されている場合、サンプルは、周囲温度や空気に暴露することなく、収集時にすぐにマイナス80で保存する必要があります。アリコートの準備とピペッティングの際の取り扱い精度は、精度と再現性を維持するためにも重要です。昼間は12時間未満かかります。彼らが24時間でサンプルを必要とするならば、私たちは一晩で文化を構築することができます。次いで、短鎖脂肪酸とマイクロバイオーム定量を続ける。このプロセスは、私の研究室の2人の偉大なユニ学生、ショコウ・アフマディとラビナ・マイナによって実証されます。ヒュームフードの下で発酵培地を調製するために、磁石混合物上の試薬ボトルに、混合溶液A、溶液B、微量ミネラル溶液、水溶性ビタミン溶液、葉酸ビオチン溶液、リボフラビン溶液、ヘミン溶液、短鎖脂肪酸混合、およびレサズリンを混合する。その後、ボトル酵母エキス、炭酸ナトリウム、システイン塩酸塩一水和物、トリプチケースに添加する。蒸留水を296.1ミリリットル加え、通常の塩酸塩または水酸化ナトリウムでpHを調整して7.0前後になるようにします。ビーカーを無菌ワークステーションに移し、0.22マイクロメートルの孔径の真空フィルターを使用して、滅菌のために培地を濾過します。1リットルの嫌気性希釈液を調製するには、5グラムの塩化ナトリウム、2グラムのグルコース、および0.3グラムのシステイン塩酸塩水和物をイオン化水中で溶解する。121.1°Cのキャップで試薬ボトルを15分間オートクレーブし、嫌気性チャンバーの中に保管します。発酵実験を開始する前に、発酵実験に必要なすべての材料、溶液、およびツールを嫌気室内に少なくとも48時間保管し、酸素を除去します。発酵実験の少なくとも24時間前に、イヌリンの300ミリグラムの重量を量り、それを50ミリリットルのチューブに移し、嫌気室の中に入れる。26ミリリットルの殺菌発酵培地をチューブに加え、渦を混ぜます。約24時間の繊維の水和を可能にする。発酵実験の当日、便接種を調製する。まず、50ミリリットル円錐形チューブに5グラムの新鮮な胎児サンプルを量る。嫌気性希釈液をチューブに加えて、最終体積50ミリリットルに達します。ボルテックスは15分間、または完全に均質化されるまでである。接種チューブを嫌気室内で摂氏37度に保ち、1時間に1回穏やかに反転して繊維と接種を再中断します。3時間、6時間、9時間、または24時間後に、適切な量の発酵培地を取り出し、摂氏4度で10分間14,000倍gのサンプルを遠心分離する。直ちに上清とペレットを液体窒素に凍結し、スナップ凍結後、短鎖脂肪酸分析用の上清とマイクロバイオーム分析用のペレットをマイナス80°Cで保存します。このプロトコルは、特定のプレバイオティクスの効果を実証するために使用されます。健康なヒト被験者の便は、イヌリンによる治療後、9時間の間比較的安定したpHを示したが、24時間後に劇的に低下した。イヌリンの接種は、イヌリン処理した便標本における短鎖脂肪酸および乳酸のレベルを有意に増加させ、非処理された便の微生物叢培養と比較する。主な座標分析は、イヌリン処理サンプルと未処理サンプル間のベータ多様性の加重および非加重UniFrac尺度に対する異なる微生物叢組成を示す。アルファ多様性とPD全体の樹木を通じた系統学的多様性の指標、種の豊かさ、運用分類単位、種の均一性、ならびに主要なフィラおよび属の相対的な豊富さは、すべてイヌリン処理および未治療サンプルの間に異なる腸内微生物叢シグネチャを提示する。分類学的クラドグラムは、16S配列の線形判別効果サイズ分析から導出され、異なるサンプル群間の異なる豊富な分類を表す。すべての手順を慎重に実行します。最も重要なことは、厳格な無菌および嫌気性条件を維持することです。上清および実験から繊維の発酵の結果として短鎖脂肪酸のレベル変化を治療するために使用することができる。さらに、ペレット中の腸内微生物叢組成物の変化を分析するために使用することができる。培養培地の製造に使用される化学物質の中には、潜在的に危険な化学物質があります。MSDSシートを使用し、それに応じて注意してください。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

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不定冠詞<em&gt;インビトロ</emヒトマクロファージの分化と偏光の不均一性を研究するために&gt;モデル

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

免疫・感染学

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

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Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

使用肺炎球菌植民に対するプロバイオティクスの影響を調査<em&gt;体外</em&gt;接着アッセイ

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

アン<em&gt;インビトロ</em&gt; HIV重感染のコンテキストでのマラリアに対する免疫応答を測定するためのモデル

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

アン<em&gt;インビトロ</em&gt;インピーダンス分光法を用いた血液脳関門のモデル：T細胞 - 内皮細胞の相互作用に焦点を当て

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

チェンカバーガラスモデルを用いたバイオフィルム開発に関する痰の効果を可視化

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

使用してリンパ球血管外漏出の分析<em&gt;インビトロ</em&gt;ヒト血液脳関門のモデル

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

ヒトの過剰発現と精製<em&gt;シス</em&gt; - プレニルトランスフェラーゼ<em&gt;大腸菌</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

シグナリング蛋白質の廃止、炎症性腸病気のマウスモデルで腸の炎症に味の効果

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

インビトロバス発酵システムを用いて内生生物とヒト腸内細菌叢との相互作用の解析

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...