Name: quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester
Uploaded: 2019-06-04T13:00:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt von: The Juvenile Diabetes Research Foundation [JDRF 5-CDA-2014-210-A-N] (S. M.). The National Health and Medical Research Council (NHMRC GNT123586) (S. M.), Diabetes Australia Research Trust Millennium Award (Y17M1-MANS) (S. M.), Operational Infrastructure Support Program of the Victorian Government (S. M., A. D., E. T., M. S.) und NHMRC Postgraduate Scholarship APP1094337 und JDRF PhD Top-up Scholarship (M. S.).

Alle Probanden gaben vor der Entnahme von peripherem Blut eine informierte Einwilligung. Die ethische Zulassung für Experimente mit PBMC wurde von St. Vincent es Hosptial erteilt (HREC-A 135/08 und HREC-A 161/15).
1. Reagenz-Vorbereitung
<ol><li>
HumanE T-Zell-Medien
	<ol>
<li>Bereiten Sie RP-5-Medien für die Kultivierung von PBMC vor, das aus RPMI 1640, 1x nicht-essentiellen Aminosäuren, L-Alanyl-L-Glutamin-Dipeptid (2 mM), Penicillin (100 U/mL)/Streptomycin (0,1 mg/ml) ...

<ol>
	<li>Duque, A., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+effects+of+BrdU+and+3H-Thymidine+incorporation+into+DNA+on+cell+proliferation,+position+and+fate.">Different effects of BrdU and 3H-Thymidine incorporation into DNA on cell proliferation, position and fate.</a> Journal of Neuroscience. 31, 15205-15217 (2011).</li><li>Mannering, S. I., Zhong, J. I. E., Cheers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+activation,+proliferation+and+apoptosis+in+primary+Listeria+monocytogenes+infection.">T-cell activation, proliferation and apoptosis in primary Listeria monocytogenes infection.</a> Immunology. 106, 87-95 (2002).</li><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry.">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> Journal of Immunological Methods. 171, 131-137 (1994).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+method+for+detecting+proliferation+of+rare+autoantigen-specific+human+T+cells.">A sensitive method for detecting proliferation of rare autoantigen-specific human T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 283, 173-183 (2003).</li><li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Carboxyfluorescein+Diacetate+Succinimidyl+Ester+(CFSE)+to+Monitor+Lymphocyte+Proliferation.">The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation.</a> Journal of Visualized Experiments. , 4-7 (2010).</li><li>Ten Brinke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+T-cell+responses+in+translational+studies:+Optimization+of+dye-based+proliferation+assay+for+evaluation+of+antigen-specific+responses.">Monitoring T-cell responses in translational studies: Optimization of dye-based proliferation assay for evaluation of antigen-specific responses.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1-15 (2017).</li><li>Gillespie, G. M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strong+TCR+Conservation+and+Altered+T+Cell+Cross-Reactivity+Characterize+a+B*57-Restricted+Immune+Response+in+HIV-1+Infection.">Strong TCR Conservation and Altered T Cell Cross-Reactivity Characterize a B*57-Restricted Immune Response in HIV-1 Infection.</a> Journal of Immunolgy. 177, 3893-3902 (2006).</li><li>Tynan, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Resolution+Structures+of+Highly+Bulged+Viral+Epitopes+Bound+to+Major+Histocompatibility+Complex+Class+I:+Implications+for+t-cell+receptor+engagement+and+t-cell+immunodominance.">High Resolution Structures of Highly Bulged Viral Epitopes Bound to Major Histocompatibility Complex Class I: Implications for t-cell receptor engagement and t-cell immunodominance.</a> Journal of Biological Chemistry. 280, 23900-23909 (2005).</li><li>Blanchard, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+aminopeptidase+associated+with+antigen+processing+defines+the+composition+and+structure+of+MHC+class+I+peptide+repertoire+in+normal+and+virus-infected+cells.">Endoplasmic reticulum aminopeptidase associated with antigen processing defines the composition and structure of MHC class I peptide repertoire in normal and virus-infected cells.</a> Journal of Immunology. 184, 3033-3042 (2010).</li><li>Glanville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+specificity+groups+in+the+T+cell+receptor+repertoire+repertoire.">Identifying specificity groups in the T cell receptor repertoire repertoire.</a> Nature. 547, 94-98 (2017).</li><li>Wooldridge, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricks+with+tetramers:+how+to+get+the+most+from+multimeric+peptide+MHC.">Tricks with tetramers: how to get the most from multimeric peptide MHC.</a> Immunology. 126, 147-164 (2009).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+cloning+human+autoantigen-specific+T+cells.">An efficient method for cloning human autoantigen-specific T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 298, 83-92 (2005).</li><li>So, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinsulin+C-peptide+is+an+autoantigen+in+people+with+type+1+diabetes.">Proinsulin C-peptide is an autoantigen in people with type 1 diabetes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115, (2018).</li><li>Hui-Yuen, J., Mcallister, S., Koganti, S., Hill, E., Bhaduri-Mcintosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Epstein-Barr+Virus+Growth-transformed+Lymphoblastoid+Cell+Lines.">Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. , 2-7 (2011).</li><li>Alexander-Miller, M. A., Leggatt, G. R., Berzofsky, J. A., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expansion+of+high+or+low+avidity+cytotoxic+T+lymphocytes+and+efficacy+for+adoptive+immunotherapy.">Selective expansion of high or low avidity cytotoxic T lymphocytes and efficacy for adoptive immunotherapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 4102-4107 (1996).</li></ol>

CFSE-basierte Proliferation ist eine einfache und robuste Methode zum Erkennen und Aufzählen von antigenspezifischen menschlichen CD4+ T-Zellen. Es wurde bereits gezeigt, dass die optimale Konzentration von CFSE für optimale Ergebnisse unerlässlich ist4. Zu viel CFSE hebt die Proliferation auf, während zu wenig nicht zulässt, dass geteilte und ungeteilte Zellen unterschieden werden. Im Gegensatz dazu werden relativ hohe CfSE-Konzentrationen (5,0 m) zur Kennzeichnung gereinigter mur...

Die Fähigkeit, antigenspezifische T-Zellen zu erkennen und zu untersuchen, ist in Studien zur zellvermittelten Immunität wichtig. Dies ist jedoch besonders anspruchsvoll für autoantigenspezifische CD4+ T-Zell-Antworten, die sehr schwach und schwer zu erkennen sind. Eine gängige Methode zum Nachweis der antigenspezifischen Lymphozytenproliferation ist [3H]-Thymidin, ein radioaktiv markiertes Nukleotid, das in die DNA von proliferierenden Zellen integriert ist. Obwohl der [3H]-Thymidin-Assay die DNA-Synthese erkennen kann, ist diese Methode ein indirektes Maß für die Zellteilung, da die DNA-Synthese unabhängig von Mitose initiieren kann (d. h. bei Genduplizierung und Apoptose1). Dieses Problem wird durch die Tatsache verschlimmert, dass antigenspezifische Proliferation von Zellen zu einer erheblichen Apoptose führen kann2, was zu einer potenziellen Überschätzung der antigenspezifischen Proliferation führt. Darüber hinaus liefert die [3H]-Thymidin-Methode keine phänotypischen Informationen für vermehrende Lymphozyten, wie CD4+ oder CD8+ Lineage Proliferation in PBMCs, die mit antigenen Peptiden stimuliert werden.
Im Jahr 2003 veröffentlichten wir den ersten Farbstoffverdünnungstest mit CFSE, dem CFSE-basierten Proliferationstest3,4. CFSE ist ein fluoreszierender Farbstoff, der stabil an intrazelluläre Proteine bindet, indem er eine kovalente Bindung an intrazelluläre Lysinrückstände bildet. Da CFSE-markierte Proteine gleichmäßig auf Tochterzellen3aufgeteilt sind, können Zellen, die sich geteilt haben, von ungeteilten Zellen durch Durchflusszytometrie unterschieden werden, was auch die quantitative Phänotypisierung von Lymphozytenpopulationen ermöglicht. Tatsächlich kann die Anzahl der Divisionen, die eine Zelle seit der Zeit der CFSE-Färbung durchgemacht hat, bis zu einem gewissen Gradgemessenwerden 5 . In jüngerer Zeit wurden viele ähnliche Farbstoffe wie CellTrace Violet Proliferationsfarbstoff (VPD) und CytoTrack Farbstoff entwickelt, die in ähnlicher Weise arbeiten6. Dieses Protokoll konzentriert sich auf CFSE, aber die Prinzipien gelten gleichermaßen für andere verwandte Farbstoffe.
Peptid-MHC-Tetramerfärbung ist eine weit verbreitete Methode zum Erkennen und Klonen von antigenspezifischen CD8+ T-Zellen. Dies ist eine etablierte Methode7,8,9,10; Das Klonen auf Tetramerbasis erfordert jedoch vorhandene Kenntnisse der Epitop-/MHC-Beschränkung und jedes Epitop erfordert sein eigenes Tetramer11, das den Umfang der Entdeckung und des Klonens neuartiger Epitop-spezifischer T-Zellen begrenzt. Die CFSE-basierte Proliferation kann mit Peptiden, Proteinen oder Zelllysaten verwendet werden. Das hier beschriebene Protokoll ist einfach und robust, und die antwortenden CD4+ T-Zellen können für den Einsatz in nachgelagerten funktionellen und biochemischen Charakterisierungstests12,13sortiert werden.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-human CD4-AlexaFluor647</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317422</td>
			<td>RRID:AB_2716180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque Plus</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>71-7167-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Influenza A H1N1 (PR8) Matrix protein 1</td>
			<td>Sino Biological</td>
			<td>40010-V07E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential amino acids (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/ Streptomycin (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled human serum</td>
			<td>Australian Red Cross</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proinsulin C-peptide PI33-63</td>
			<td>Purar Chemicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made synthetic peptide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetanus Toxoid protein</td>
			<td>Statens Serum Intitut</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester

Beschrieben wird eine einfache, in vitro, auf Farbstoffen basierende Methode zur Messung der antigenspezifischen CD4+ T-Zellproliferation in mononukleären menschlichen Blutzellen (PBMCs). Die Entwicklung stabiler, ungiftiger Fluoreszenzfarbstoffe wie Carboxyfluorescein succinimidylester (CFSE) ermöglicht es, seltene, antigenspezifische T-Zellen von Umstehenden durch Verminderung der fluoreszierenden Färbung zu unterscheiden, wie sie durch Durchflusszytometrie nachgewiesen werden. Diese Methode hat gegenüber alternativen Ansätzen folgende Vorteile: (i) Sie ist sehr empfindlich gegenüber niederfrequenten T-Zellen, (ii) es ist keine Kenntnis des Antigens oder Epitops erforderlich, (iii) der Phänotyp der reagierenden Zellen kann analysiert werden, und (iv) lebensfähig, Zellen können sortiert und für weitere Analysen verwendet werden, z. B. t Zellklonen.

In-vitro-Stimulation menschlicher PBMCs mit Tetanus-Toxoid-Protein: PBMCs wurden mit CFSE gefärbt und 7 Tage lang in Gegenwart von Tetanus-Toxoid stimuliert. Fast alle Spender zeigten eine starke T-Zell-Reaktion auf Tetanus-Toxoid, weil sie geimpft worden waren, was Tetanus-Toxoid zu einem nützlichen Positiv-Kontroll-Antigen macht. Abbildung 2 zeigt in dreifacher Ausfertigung, dass die CFSE-Proliferation von CD4+ T-Zellen aus nicht stimulierten P...

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Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Quantifizierung von proliferierenden humanen Antigen-spezifischen CD4+ T-Zellen mit Carboxyfluorescein Succinimidylester

Hier wird ein Protokoll zur Messung von vermehrenden CD4+ T-Zellen als Reaktion auf antigene Proteine oder Peptide mittels Farbstoffverdünnung vorgestellt. Dieser Assay ist besonders empfindlich gegenüber seltenen antigenspezifischen T-Zellen und kann modifiziert werden, um das Klonen von antigenspezifischen Zellen zu erleichtern.

Described is a simple, in vitro, dye dilution-based method for measuring antigen-specific CD4+ T cell proliferation in human peripheral blood mononuclear ...

Dieses Protokoll bietet eine Plattform zum Studium von CD4T-Zellreaktionen, die oft schwach und schwer zu erkennen sind. Diese Technik ermöglicht die Detektion, Aufzählung und Isolierung von CD4T-Zellen ohne Vorkenntnisse in Bezug auf die Antigendarstellung. Der Hauptvorteil ist die Analyse von CD4T-Zellen, die oft seltene Populationen sind, die mit Autoimmunerkrankungen wie Typ-1-Diabetes in Verbindung gebracht werden.Nach Erhalt der peripheren Blutprobe von einem gesunden Spender, verdünnen Sie das Blut in PBS in mindestens ein bis zwei Verhältnis vor schichtieren 35 Milliliter Blut über 15 Milliliter Dichte Gradient medium in einem 50 Milliliter Rohr. Trennen Sie die Zellen durch Dichtegradientenzentrifugation und entfernen Sie etwa 20 Milliliter der resultierenden oberen Plasmaschicht. Dann sammeln Sie die weiße Blutkörperchen Schicht unter Vorsicht, um die rote Blutkörperchen Pellet zu vermeiden und waschen Sie die Zellen dreimal in frischen PBS.Nach dem Zählen verdünnen Sie die Zellen auf ein mal 10 bis zur sechsten peripheren mononukleären Blutzelle oder PBMC pro Milliliter PBS-Konzentration. Fügen Sie 300 Mikroliter Zellen für jede Steuerung in einzelne 10 Milliliter-Röhren ein. Nach dem Topping jeder Röhre mit PBS, Sedimentieren Sie die Zellen durch Zentrifugation und resuspendieren Sie die Zellen mit einem mal 10 bis die sechste Zelle pro Milliliter der RP5 mittlere Konzentration.Dann Platte 100 Mikroliter Zellen pro Kontrolle zu jedem von drei Brunnen einer 96 Brunnenplatte mit 100 Mikroliter RP5 Medium pro Brunnen. Legen Sie die Platte sieben Tage lang in den Zellkultur-Inkubator. Als nächstes übertragen Sie die verbleibenden PBMCs in eine neue 50-Milliliter-Röhre und fügen Sie einen Mikroliter CFSE-Arbeitsstofflösung pro Milliliter Zellsuspension an die Seite des Rohres.Um die Röhre mehrmals schnell umzukehren, um die Zellen für fünf Minuten in einen Zellkultur-Inkubator zu mischen und zu platzieren. Am Ende der Inkubation, halten Sie die Reaktion mit fünf Milliliter RP5 Medium und sammeln die Zellen durch Zentrifugation. Setzen Sie das Pellet einmal 10 bis sechs PBMCs pro Milliliter frisches RP5-Medium aus und fügen Sie einem zu prüfenden 10 Milliliter-Röhrchen pro zu prüfendem Antigen einen Milliliter Zellen hinzu.Dann fügen Sie 100 Mikroliter Zellen pro Antigen zu jedem von drei Brunnen einer 96 Well Platte gut enthält 100 Mikroliter RP5 Medium mit dem verdünnten Antigen von Interesse pro Brunnen ergänzt. Legen Sie die Platte sieben Tage lang in den Zellkultur-Inkubator. Um die CD4+T-Zellpopulationen für die strömungszytometrische Analyse zu färben, übertragen Sie am Ende der Kultur das gesamte Volumen der Zellen von jedem Brunnen in einzelne fluoreszenzaktivierte Zellsortierung oder FACS-Röhren.Waschen Sie jede Probe mit einem Milliliter PBS, ergänzt mit 0,1% fetalem Kalbsserum oder FCS. Setzen Sie die Pellets in einem geeigneten antihumanen CD4-Antikörper in 100 Mikroliter PBS plus FCS pro Tube aus. Inkubieren Sie die Zellen bei vier Grad Celsius für 20 Minuten vor Licht geschützt.Am Ende der Inkubation die Proben in einem Milliliter frischer PBS plus FCS pro Tube waschen und die Pellets in 100 Mikroliter frischer PBS plus FCS wieder aufhängen. Unmittelbar vor der Analyse, fügen Sie einen Mikroliter Propidiumiodid zu jeder Röhre, um den Ausschluss von abgestorbenen Zellen zu ermöglichen. Gate die Lymphozyten nach ihren vorderen und seitlichen Streubereichen.Um die apoptotischen Zellen auszuschließen, richten Sie den vorderen Streubereich im Vergleich zu Propidiumjodid-negativen Zellen und verwenden die nicht befleckten Zellen, um eine Spannungsbasislinie für die nicht fluoreszierenden Zellen festzulegen. Stellen Sie die Spannungen für den CD4-Antikörper Fluorophor und das CFSE-Signal so ein, dass das Fluoreszenzsignal für jeden unter 1000 liegt. Verwenden Sie die einzelnen Farbsteuerungs-CFSE- und CD4-Samples, um ein positives Fluoreszenzsignal für jede Farbe mithilfe der mit den unbefleckten Zellen eingestellten Spannungen zu bestätigen.Da CFSE und Propidiumjodid einige spektrale Überlappung haben, passen Sie die Kompensation an, um die Propidiumiodidfluoreszenz von der CFSE-Fluoreszenz zu subtrahieren, bis die einzige CFSE-Probe kein Signal im Propidium-Iodid-Kanal liefert. Wenn alle Proben analysiert wurden, berechnen Sie den Zellteilungsindex, indem Sie die Anzahl der geteilten Zellen durch 5000 ungeteilte Zellen aus der antigen stimulierten Gruppe durch die mittlere Anzahl geteilter Zellen pro 5000 ungeteilte Zellen aus den Zellen dividieren, die ohne Antigen kultiviert werden. Fast alle Spender zeigen eine starke T-Zell-Reaktion auf Tetanus-Toxoid nach In-vitro-Stimulation, da die Spender geimpft wurden, was Tetanus Toxoid zu einem nützlichen Positivkontrollantigen macht.Die Proliferation von CD4+T-Zellen aus nicht stimulierten PBMCs ist jedoch minimal. Nach sieben Tagen Stimulation mit humanem Proinsulin C-Peptid können Pro-Insulin C-Peptid-spezifische CD4+T-Zellen im peripheren Blut eines Patienten mit Typ-1-Diabetes nachgewiesen werden. PBMC stimuliert mit Influenza-A-Virusmatrix-Protein zeigt ebenfalls eine Proliferation.Zusammengenommen zeigen diese Daten, dass der Test mit Vollwertproteinen sowie kurzen synthetischen Peptiden durchgeführt werden kann. Die FACS-Komponente dieser Methode kann mit einem Zellsortierdurchflusszytometer durchgeführt werden. Mit einem Zellsortierer können die antigenspezifischen T-Zellen auf Einzelzellebene für die nachgeschaltete Analyse isoliert werden.Diese Methode hat die Entdeckung von CD4T-Zellreaktionen bei Personen mit frühem Typ-1-Diabetes ermöglicht. Die Analyse dieser seltenen T-Zellpopulationen unter Verwendung anderer Methoden stellt verschiedene technische Herausforderungen dar.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen-spezifische In Vivo Killing-Assay mit CFSE markierten Zielzellen

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

Forschung

Immunologie und Infektion

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester CFSE to Monitor Lymphocyte Proliferation

Die Verwendung von Carboxyfluoresceindiacetat Succinimidylester (CFSE) auf Lymphozyten-Proliferation-Monitor

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) is an effective and popular means to monitor lymphocyte division1-3.  CFSE covalently labels long-lived ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  &#947;&#948; T Cells using Zoledronate

Expansion von humanen peripheren Blut γδ T-Zellen mit Zoledronat

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Adenovirale Transduktion von Naive CD4 T-Zellen zu Treg Differenzierung Studieren

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of Na&#239;ve CD4 T Lymphocytes

Isolierung und Differenzierung von Th17 Naive CD4-T-Lymphozyten

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Beurteilung der Innate Sensing von HIV-1-infizierten CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zellen durch Plasmazytoide Dendritische Zellen unter Verwendung eines<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Co-Kultursystem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Künstliche Antigen-präsentierenden Zellen (KaAPC) für effiziente<em&gt; In-vitro-</em&gt; Depletion von humanen Antigen-spezifischen T-Zellen

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generieren<em&gt; De Novo</em&gt; Antigen-spezifische Zellrezeptoren humanen T von Retrovirale Transduktion von Centric Hemichain

T cell receptors (TCRs) are used clinically to direct the specificity of T cells to target tumors as a promising modality of immunotherapy. Therefore, ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

Entwicklung von Stammzellen abgeleiteten Antigen-spezifische regulatorische T-Zellen gegen Autoimmunität

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In vitro Differenzierung von humanen CD4 + FOXP3 + Induced regulatorischer T - Zellen (iTregs) von Naïve CD4 + T - Zellen unter Verwendung eines TGF-β-enthaltende Protokoll