Name: a chronic immobilization stress protocol for inducing depression-like behavior in mice
Uploaded: 2019-05-15T14:45:00
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이 연구는 교육부(NRF-2015R1A5A5A2008833 및 NRF-2016R1D1D1D1A33934279)의 지원을 받아 국립과학연구재단(NRF)을 통해 지원되었다. 경상대학교 GNU-2016-02)

모든 실험 프로토콜과 동물 관리는 경상대학교 동물연구위원회(GLA-100917-M0093)의 지침에 따라 수행되었다.
1. 재료
<ol><li>마우스<ol>
<li>출생 후 주 7에서 22-24g의 무게C57BL/6 스트레인 배경의 남성을 사용하십시오. 실험 전 1주일 동안 번식실에서 습관화하십시오. 참고: 모든 마우스는 실험실 동물 회사에서 구입했습니다.</li>
		<li>집 마우스는 온도 제어 사육장 (22-24 °C) 12 시간 ...

MDD의 두뇌와 이질성의 복잡성은 조건을 완전히 재현하는 동물 모형을 만드는 것을 어렵게 만듭니다. 많은 연구자들은 안구토니아 (보람있는 자극에 대한 관심의 부족)와 절망이 동물 모델에서 진화적으로 보존되고 정량화 가능한 행동으로 간주되는 내시경 형 기반 접근법32를사용하여이 어려움을 극복했습니다. 이는 또한 우울증 환자에서 볼 수 있습니다33. 본...

주요 우울 장애 (MDD)는 전 세계적으로 정신 장애의 주요 원인이며, 예상보다 빠르게 증가하고 있는 발병률을 가지고 있습니다. 2001년에, 세계 보건 기구는 MDD가 2020년까지 세계에서 두 번째로 일반적인 질병이 될 것이라고 예측했습니다. 그러나, 그것은 이미 2013 1에서두 번째로 가장 일반적인 이었다 . 또한, 현재 항우울제는 지연효과성, 약물내성, 재발, 및 각종 부작용2,3등 많은 한계를 가지고 있다. 따라서 연구원은 더 효과적인 항우울제를 개발 해야 합니다. 그러나, MDD의 모호한 병리생리학은 새로운 항우울제의 발달에 장애물을 제시합니다.
장기적인 스트레스는 MDD의 주요 위험 요소입니다. 그것은 또한 MDD 병인학4,5와관련이 있는 시상 하부 뇌하수체 부신 (HPA) 축에 있는 역기능을 유도할 수 있습니다. 앞서 설명한 바와 같이, HPA 축은 코르티코스테론 수준을 6, 7,8,증가시킴으로써 우울증 및 불안 장애를 포함한 스트레스 유발 정신병리생리학에 중요한 역할을 한다. 9. 많은 동물 모델은 MDD4환자에서 관찰되는 HPA 축의 지속적인 활성화를 기반으로합니다. 더욱이, 만성 스트레스에 의해 유도된 높은 글루코코르티코이드 및 피하 주사된 글루코코르티코이드는 신경 세포 사멸, 신경 과정의 위축 및 설치류의 뇌에서 성인 신경 발생 감소와 함께 우울한 행동을 일으킵니다10 , 11. 우울증과 관련된 또 다른 중요한 뇌 영역은 내측 전두엽 피질 (mPFC)입니다. mPFC는 시상 하부 및 편도체와 같은 뇌 소전체를 제어하는 데 중요한 역할을하며,정서적 행동과 스트레스 반응을 제어하는 8,9. 예를 들어, 등쪽 mPFC내의 병변은 구속스트레스12,13으로인한 HPA 축 기능 장애 및 향상된 코르티코스테론 분비를 유도한다. 최근 연구는 또한 반복 억제 스트레스 증가 코르티코스테론 수준을 보여 주었다, 이는 mPFC에서 뉴런과 성상 세포 사이의 글루타민글루타민 주기를 통해 글루타민 보충에 의해 감소 될 수있다 9.
MDD의 병인학을 연구하는 데 사용되는 최초의 만성 스트레스 패러다임은 Katz14에의해 제안되었습니다. Willner 등은 카츠의 연구 결과에 기초하여 만성 경미한 스트레스(CMS) 모델을 제안했습니다. 그(것)들은 항우울제가 CMS 유도된 anhedonic 같이 행동15,16를복구한다는 것을 관찰해서 모형이 예측 타당성이 있었다는 것을 확인했습니다. 일반적으로 CMS 모델은 온화한 소음, 케이지 틸팅, 젖은 침구, 변경된 밝은 어두운 주기, 케이지 흔들림, 강제 수영 및 사회적 패배와 같은 다양한 경미한 응력의 조합으로 구성됩니다. CMS 모델은 연구원에 의해 널리 이용됩니다; 그러나 이 모델은 복제성이 좋지 않으며 시간 및 에너지 가 비효율적입니다. 따라서 우울증을 평가하기 위한 우울과 같은 행동과 생리학적 분석의 유도를 위한 표준화되고 단순화된 프로토콜에 대한 수요가 증가하고 있다. CMS 모델에 비해 만성 고정 응력(CIS; 만성 구속 응력이라고도 함) 모델은 더 간단하고 효율적입니다. 따라서 CIS 모델은 만성 스트레스 연구17, 18,19,20,21,22,23에서널리 사용될 수 있습니다. 24. 또한, CIS는 우울한 행동을 개발하기 위해 남성과 여성 마우스 모두에서 사용할 수 있습니다25,26. CIS 동안, 동물은 2 주 또는 4 주동안하루에 1-8 시간 동안 몸에 맞는 크기의 실린더에 배치됩니다 9,27,28. 이들 중, 2주 동안 하루 2시간 동안 구속 스트레스 상태는 마우스9,28에서최소한의 통증으로 우울한 행동을 일으키기에 충분하다. 구속 조건하에서 혈액 코르티코스테론 수준은9,28,29로급속히 증가했습니다. 여러 연구는 CIS 모델이 예측 타당성을 가지고 있음을 보여 주었다, CIS 유도 우울증과 같은 증상이 항우울제에 의해 복원되는 것을 확인19,20,30,31. 본 명세서에서, 우리는 마우스에서 CIS 후 일부 행동 및 생리학적 결과뿐만 아니라 CIS의 상세한 절차를 보고한다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 ml disposable syringes</td>
			<td>Sungshim Medical</td>
			<td>P000CFDO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>A&#38;D Company</td>
			<td>FX-2000i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ball nozzle</td>
			<td>Jeung Do B&#38;P</td>
			<td>JD-C-88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCTV camera</td>
			<td>KOCOM</td>
			<td>KCB-381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corticosterone ELISA kits</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital lux meter</td>
			<td>TES</td>
			<td>TES-1330A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethovision XT 7.1</td>
			<td>Noldus Information Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>HANA PHARM CO., LTD.</td>
			<td></td>
			<td>Ifran solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>Koatech</td>
			<td></td>
			<td>C57BL/6 strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restrainer</td>
			<td>Dae-jong Instrument Industry</td>
			<td>DJ-428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose (sucrose)</td>
			<td>DAEJUNG</td>
			<td>7501-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal isoflurane anaesthetic system</td>
			<td>Summit</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic bar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The apparatus was made in the lab for TST test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tail suspension box</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The apparatus was made in the lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Electronics Tomorrow</td>
			<td>TL-2530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bottle</td>
			<td>Jeung Do B&#38;P</td>
			<td>JD-C-79</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a chronic immobilization stress protocol for inducing depression-like behavior in mice

우울증은 아직 완전히 이해되지 는 않지만 다양한 원인 요인이 보고되었습니다. 최근에는 우울증의 유병률이 증가하고 있습니다. 그러나, 우울증에 대 한 치료 치료 또는 우울증에 대 한 연구는 부족. 따라서, 본 논문에서, 우리는 운동 제한에 의해 유도된 우울증의 마우스 모델을 제안한다. 만성 가벼운 스트레스 (CMS) 우울증 같은 행동을 유도 하는 잘 알려진 기술. 그러나, 그것은 다양 한 가벼운 스트레스의 조합으로 구성 된 복잡 한 절차를 필요. 대조적으로, 만성 고정 응력(CIS)은 일정 기간 동안 구속기를 사용하여 움직임을 제한함으로써 우울한 행동을 유도하는 구속 모델에서 수정된 쉽게 접근할 수 있는 만성 스트레스 모델이다. 우울증유사 거동을 평가하기 위해, 자당 선호도 시험(SPT), 꼬리 현탁액 시험(TST), 및 ELISA 분석기는 마커 코르티코스테론 수준을 측정하는 본 실험에서 결합된다. 기재된 프로토콜은 CIS의 유도 및 우울증의 유효성 검사를 위한 행동 및 생리적 요인의 변화에 대한 평가를 설명한다.

대표적인 실험에서, 모든 데이터는 그룹당 6-8마리의 마우스로부터 획득하였다. 대표물질과 마우스를 제자내로 자발적으로 삽입하는 방법은 도1에 도시되어 있다.
CIS 유도 후 행동 시험 및 혈액 샘플링을 수행하기 위해, 마우스는 도 2A에요약된 바와 같이 실험 절차를 실시하였다. 도 2 및 도</st...

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A Chronic Immobilization Stress Protocol for Inducing Depression-Like Behavior in Mice

이 문서는 억제기를 사용하여 만성 적으로 고정 된 마우스에서 우울과 같은 행동의 유도에 대한 단순화 되고 표준화 된 프로토콜을 제공합니다. 또한, 우울증의 유도를 확인하는 행동과 생리 적 기술이 설명된다.

마우스에서 우울증과 같은 행동을 유도하기위한 만성 고정 스트레스 프로토콜

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, ...

디지털 럭스 미터를 사용하여 200 럭스로 방을 설정하여 시작합니다. 테스트 하기 전에 적어도 일주일 동안 별도 케이지에 마우스를 집, 실험 전에 적어도 30 분 동안 테스트 룸에 마우스를 배치. 마우스 꼬리를 조심스럽게 잡고 마우스를 긴장시키는 것을 피한 다음 조심스럽게 거친 표면에 놓습니다.작은 흰색 수건으로 구속을 덮은 다음 마우스가 자발적으로 제지제에 들어갈 수 있도록 마우스를 조심스럽게 제지자의 개구부에 놓습니다. 다음으로, 꼬리, 발 및 고환과 같은 신체의 손상을 피하기 위해 주의하면서 가능한 한 단단히 쥐를 억제하기 위해 폐쇄를 배치합니다. 마지막으로, 억제제에 노출하는 동안 48 시간마다 체중과 음식 섭취를 측정하십시오.테스트 전에, 2개의 마시는 병의 존재에 마우스를 습관화, 하나는 0.1 어금반 자당및 48 시간 동안 일반 물을 포함하는 다른 것을 포함하는. 24시간 후에 두 병의 위치를 전환하여 측면 바이어스로 인한 혼동을 줄입니다. 셋째 날에는 24시간 동안 생쥐를 박탈합니다.그런 다음 실험 당일 6시간 동안 2개의 마시는 병에 마우스를 노출시한다. 3시간 후, 물병의 위치를 전환합니다. 자당 용액과 소비된 물의 밀리리터의 양을 기록한 다음 동물의 친화성을 계산하여 자당에 대한 선호도를 계산합니다.마지막으로, 시험 기간 동안 총 유체 소비에 대한 자당 소비량의 백분율로 자당 선호도를 계산합니다. 꼬리 서스펜션 테스트를 시작하기 전에 만성 구속 스트레스 유도 마우스를 시험실로 적어도 30 분 가져 오는 것으로 시작합니다. 50 럭스에서 어두운 조건에 객실 조명을 설정합니다.다음으로 마우스에서 약 40cm 떨어진 곳에 카메라를 배치합니다. 접착제 테이프를 사용하여 마우스를 수평 막대에서 단단히 일시 중단합니다. 마우스가 서스펜션 박스의 중간에 배치된 후 레코딩을 시작하고, 6분 동안 동작 변경을 지속적으로 관찰한다.마우스가 꼬리를 오르려고 하면 스틱을 사용하거나 스토퍼를 오르지 못하게 하십시오. 실험이 끝나면 마우스를 홈 케이지로 이동하고 꼬리에서 테이프를 조심스럽게 제거합니다. 마지막으로 비디오 추적 소프트웨어를 사용하여 이동 이내의 누적 시간을 분석합니다.결과는 CIS 단에 대한 체중감소와 4일째에 훨씬 적은 음식 섭취를 나타냅니다. 대조군에 비해 CIS 그룹에서 자당 선호도에 대한 감소가 나타났으며, 부동성 시간과 코르티코스테론이 크게 증가하였다. 또한, 글루타민 보충제는 체중, 음식 섭취량, 자당 선호도, 부동성 및 코르티코스테론에 표시된 것처럼 행동과 같은 우울을 개선합니다.

Research

JoVE Journal

Behavior

Using Chronic Social Stress to Model Postpartum Depression in Lactating Rodents

설치류 젖을의 모델 산후 우울증에 만성 사회적 스트레스를 사용하여

Exposure to chronic stress is a reliable predictor of depressive disorders, and social stress is a common ethologically relevant stressor in both animals ...

연구

행동분석학

Construction of Microdrive Arrays for Chronic Neural Recordings in Awake Behaving Mice

깨어있는 행동을 한 쥐의 만성 신경 녹음을위한 마이크로 드라이브 배열의 건설

State-of-the-art electrophysiological recordings from the brains of freely behaving animals allow researchers to simultaneously examine local field ...

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

풍부한 환경에서의 주택 마우스를위한 프로토콜

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

The Social Dimension of Stress: Experimental Manipulations of Social Support and Social Identity in the Trier Social Stress Test

스트레스의 사회적 차원 : 트리어 사회에서 사회적지지와 사회적 정체성의 실험 노는 시험 스트레스

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations ...

An Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Instigating Depressive Symptoms, Behavioral Changes and Negative Health Outcomes in Rodents

선동 우울 증상, 행동 변화 및 ​​설치류에 부정적인 건강 성과에 대한 예측할 수없는 만성 가벼운 스트레스 프로토콜

Chronic, unresolved stress is a major risk factor for the development of clinical depression. While many preclinical models of stress-induced depression ...

A Protocol of Manual Tests to Measure Sensation and Pain in Humans

수동 테스트의 프로토콜은 인간의 감각과 통증을 측정하는

Numerous qualitative and quantitative techniques can be used to test sensory nerves and pain in both research and clinical settings. The current study ...

A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats

쥐에서 우울증 같은 행동을 유도 하는 새로운 방법

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is ...

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

마우스에 Anhedonia 유도 대 한 예측할 수 없는 만성 가벼운 스트레스 프로토콜

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

소설 개체 인식 및 행동 예산에 쥐에 테스트 개체 위치

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

공간 분석 및 쥐 상자 테스트 매달려의 저가 프로토콜 적용 구속 만성 스트레스

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...