Name: a chronic immobilization stress protocol for inducing depression-like behavior in mice
Uploaded: 2019-05-15T14:45:00
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Esta pesquisa foi apoiada pelo programa de pesquisa de ciência básica através da Fundação Nacional de pesquisa da Coréia (NRF) financiado pelo Ministério da educação (NRF-2015R1A5A2008833 e NRF-2016R1D1A3B03934279) e a concessão do Instituto de Ciências da saúde (IHS GNU-2016-02) na Universidade Nacional de Gyeongsang.

Todos os protocolos experimentais e cuidados com animais foram conduzidos de acordo com as diretrizes do Comitê de cuidados com animais universitários para pesquisa animal da Universidade Nacional de Gyeongsang (GLA-100917-M0093).
1. materiais
<ol><li>Ratos<ol>
<li>Use machos do fundo da tensão de C57Bl/6 que pesa 22 – 24 g na semana pós-natal 7. Habituar-se na sala de reprodução para 1 semana antes dos experimentos. Nota: todos os ratos foram comprados de uma empresa de animais d...

A complexidade do cérebro e a heterogeneidade do MDD fazem com que seja desafiador criar modelos animais que reproduzam completamente a condição. Muitos pesquisadores têm superado essa dificuldade usando uma abordagem baseada em endofenótipo32, em que anedonia (falta de interesse em estímulos recompensadores) e desespero são considerados comportamentos evolutivamente conservados e quantificáveis em modelos animais, que também são observados em pacientes com depressão33...

O transtorno depressivo maior (MDD) é a principal causa de incapacidade mental em todo o mundo, com uma incidência que está aumentando mais rapidamente do que o previsto. Em 2001, a Organização Mundial de saúde previu que o MDD seria a segunda doença mais comum no mundo por 2020. No entanto, já era o segundo mais comum em 20131. Além disso, os antidepressivos atuais têm muitas limitações, incluindo efetividade tardia, resistência a drogas, recidiva e vários efeitos colaterais2,3. Os pesquisadores devem, portanto, desenvolver antidepressivos mais eficazes. No entanto, a fisiopatologia ambígua da MDD apresenta um obstáculo ao desenvolvimento de novos antidepressivos.
O estresse a longo prazo é o principal fator de risco para MDD. Pode induzir disfunção no eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (hPa), que também está relacionada à etiologia do MDD4,5. Como descrito anteriormente, o eixo HPA desempenha um papel crítico na fisiopatologia psiquiátrica induzida por estresse,incluindo transtornos de depressão e ansiedade, aumentando os níveis de corticosterona6,7,8, 9. muitos modelos animais têm sido baseados na ativação sustentada do eixo HPA, que é observado em pacientes com MDD4. Além disso, os glicocorticóides elevados induzidos pelo esforço crônico e por glicocorticóides por via subcutânea injetados causam comportamentos depressivos junto com a morte da pilha neural, a atrofia de processos neuronal, e a neurogênese adulta reduzida no cérebro dos roedores10 , 11. outra área cerebral importante associada à depressão é o córtex pré-frontal medial (mpfc). O mpfc desempenha um papel crucial no controle das sub-regiões cerebrais, como o hipotálamo e a amígdala, que controlam o comportamento emocional e as respostas de estresse8,9. Por exemplo, lesões no mpfc dorsal induziram disfunção do eixo HPA e secreção de corticosterona aumentada devido ao estresse de contenção12,13. Um estudo recente mostrou também que o stress repetido da limitação aumentou níveis do corticosterona, que poderia ser diminuído pela suplementação do glutamina através do ciclo do glutamate-glutamina entre neurônios e astrocyte no mpfc9.
O primeiro paradigma de estresse crônico utilizado para estudar a etiologia da MDD foi sugerido por Katz14. Willner et al. então propuseram um modelo crônico de estresse leve (CMS) baseado nos achados de Katz. Confirmaram que o modelo teve a validez preditiva observando que os antidepressivos restauraram o comportamento anhedonic-like CMS-induzido15,16. Tipicamente, o modelo do CMS consiste em uma combinação de várias tensões suaves, tais como o ruído suave, a inclinação da gaiola, o fundamento molhado, ciclos luz-escuros alterados, agitação da gaiola, natação forçada, e derrota social. O modelo CMS é amplamente utilizado por pesquisadores; no entanto, esse modelo é de baixa replicabilidade e ineficiência de tempo e energia. Portanto, há uma demanda crescente por um protocolo padronizado e simplificado para indução de comportamento depressivo e análise fisiológica para avaliar a depressão. Comparado ao modelo CMS, o estresse crônico de imobilização (CIS; também conhecido como estresse crônico de contenção) é mais simples e eficiente; Portanto, o modelo cis pode ser amplamente utilizado nos estudos de estressecrônico17,18,19,20,21,22,23, 24. Além disso, os CIS podem ser usados em camundongos machos e fêmeas para desenvolver comportamentos depressivos25,26. Durante CIS, os animais são coloc em um cilindro feito medida corpo-cabido por 1-8 horas por o dia por 2 ou 4 semanas9,27,28. Destes, a condição de tensão de contenção por 2 horas por dia durante 2 semanas é suficiente para causar comportamentos depressivos com dor mínima em camundongos9,28. Em condições de contenção, os níveis de corticosterona no sangue aumentaram rapidamente9,28,29. Vários estudos mostraram que o modelo cis tem validade preditiva, confirmando que os sintomas depressivos-like induzida por cis são restaurados por antidepressivos19,20,30,31. Nisto, nós relatamos os procedimentos detalhados do CIS, assim como alguns resultados comportáveis e fisiológicos após CIS nos ratos.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 ml disposable syringes</td>
			<td>Sungshim Medical</td>
			<td>P000CFDO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>A&#38;D Company</td>
			<td>FX-2000i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ball nozzle</td>
			<td>Jeung Do B&#38;P</td>
			<td>JD-C-88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCTV camera</td>
			<td>KOCOM</td>
			<td>KCB-381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corticosterone ELISA kits</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital lux meter</td>
			<td>TES</td>
			<td>TES-1330A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethovision XT 7.1</td>
			<td>Noldus Information Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>HANA PHARM CO., LTD.</td>
			<td></td>
			<td>Ifran solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>Koatech</td>
			<td></td>
			<td>C57BL/6 strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restrainer</td>
			<td>Dae-jong Instrument Industry</td>
			<td>DJ-428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose (sucrose)</td>
			<td>DAEJUNG</td>
			<td>7501-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal isoflurane anaesthetic system</td>
			<td>Summit</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic bar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The apparatus was made in the lab for TST test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tail suspension box</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The apparatus was made in the lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Electronics Tomorrow</td>
			<td>TL-2530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bottle</td>
			<td>Jeung Do B&#38;P</td>
			<td>JD-C-79</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a chronic immobilization stress protocol for inducing depression-like behavior in mice

A depressão ainda não está totalmente compreendida, mas vários fatores causais foram relatados. Recentemente, a prevalência de depressão aumentou. Entretanto, os tratamentos terapêuticos para a depressão ou a pesquisa na depressão são escassos. Assim, no presente trabalho, propomos um modelo de depressão induzida pela restrição do movimento. O estresse leve crônico (CMS) é uma técnica bem conhecida para induzir o comportamento depressivo. No entanto, ele necessita de um procedimento complexo que consiste em uma combinação de várias tensões leves. Em contrapartida, o estresse crônico de imobilização (CIS) é um modelo de estresse crônico prontamente acessível, modificado a partir de um modelo de contenção que induz o comportamento depressivo restringindo o movimento usando um retentor por um determinado período. Para avaliar os comportamentos depressivos, o teste de preferência de sacarose (SPT), o teste de suspensão de cauda (TST) e o ensaio ELISA para medir os níveis de corticosterona do marcador de tensão são combinados no presente experimento. Os protocolos descritos ilustram a indução da CIS e a avaliação das alterações no comportamento e fatores fisiológicos para a validação da depressão.

No experimento representativo, todos os dados foram adquiridos de 6-8 camundongos por grupo. Os materiais representativos e o método para inserir o mouse voluntariamente na restrição são mostrados na Figura 1.
Para realizar o teste comportamental e a amostragem de sangue após a indução da CIS, os camundongos foram submetidos ao procedimento experimental, conforme resumido na Figura 2a. Como mostrado na Figu...

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A Chronic Immobilization Stress Protocol for Inducing Depression-Like Behavior in Mice

Este artigo fornece um protocolo simplificado e estandardizado para a indução do comportamento depressivo-como em ratos cronicamente imobilizados usando um restringidor. Além disso, explicam-se comportamentos e técnicas fisiológicas para verificar a indução da depressão.

Um protocolo de estresse de imobilização crônica para induzir o comportamento semelhante à depressão em camundongos

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, ...

Comece definindo a sala para acender em 200 lux usando um medidor lux digital. Coloque o mouse em uma gaiola separada pelo menos uma semana antes do teste, e coloque o mouse na sala de testes por pelo menos 30 minutos antes do experimento. Segure suavemente a cauda do mouse para evitar escorrante o mouse e, em seguida, coloque-o cuidadosamente em uma superfície áspera.Cubra o conter com uma pequena toalha branca e, em seguida, coloque suavemente o mouse na abertura do conterrante, de modo que o mouse entre no conterrinosamente. Em seguida, coloque o fecho para conter o mouse o mais apertado possível, tomando cuidado para evitar danos ao corpo, como cauda, pés e testículos. Por fim, durante a exposição ao contidor, meça o peso corporal e a ingestão de alimentos a cada 48 horas.Antes do teste, habituar os camundongos à presença de duas garrafas de bebida, uma contendo sacarose molar 0,1 e outra contendo água pura por 48 horas. Troque as posições das duas garrafas após 24 horas para reduzir qualquer confusão produzida por um viés lateral. No terceiro dia privar os ratos de água por 24 horas.Então, no dia do experimento, exponha os ratos a duas garrafas de bebida por seis horas. Depois de três horas, troque a posição das garrafas de água. Registo o volume em mililitros de solução de sacarose e água consumida, e então calcule a afinidade do animal com a sacarose.Por fim, calcule a preferência de sacarose como porcentagem do volume de consumo de sacarose sobre o consumo total de líquidos durante o teste. Comece trazendo o estresse de contenção crônica induzido camundongos para a sala de testes pelo menos 30 minutos antes de iniciar o teste de suspensão da cauda. Coloque a luz do quarto em condições fracas em 50 lux.Em seguida, coloque a câmera a cerca de 40 centímetros do mouse. Suspenda o mouse firmemente da barra horizontal usando fita adesiva. Depois que o mouse estiver posicionado no meio da caixa de suspensão comece a gravar e observe as alterações comportamentais continuamente por seis minutos.Se o mouse tentar subir sua cauda use uma vara ou rolha de escalada para evitar que ele faça isso. No final do experimento, mova o mouse para sua gaiola doméstica e remova cuidadosamente a fita de sua cauda. Finalmente, use o software de rastreamento de vídeo para analisar o tempo acumulado de períodos imóveis.Os resultados indicam diminuição do peso corporal para o grupo CIS e significativamente menos ingestão de alimentos no quarto dia. Em comparação com os controles, mostrou-se uma diminuição para a preferência de sacarose no grupo CIS, enquanto houve um aumento significativo no tempo de imobilidade e corticosterona. Além disso, uma dieta suplementada de glutamina ameniza comportamentos depressivos como comportamentos, como mostrado para peso corporal, ingestão de alimentos, preferência de sacarose, imobilidade e corticosterona.

Research

JoVE Journal

Behavior

Using Chronic Social Stress to Model Postpartum Depression in Lactating Rodents

Usando Social Stress Crônico ao Modelo depressão pós-parto em lactação Roedores

Exposure to chronic stress is a reliable predictor of depressive disorders, and social stress is a common ethologically relevant stressor in both animals ...

Comportamento

Construction of Microdrive Arrays for Chronic Neural Recordings in Awake Behaving Mice

Construção de Matrizes Microdrive para gravações Neurais crônica na Awake Mice comportam

State-of-the-art electrophysiological recordings from the brains of freely behaving animals allow researchers to simultaneously examine local field ...

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

Um protocolo para alojar ratos em um ambiente enriquecido

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

The Social Dimension of Stress: Experimental Manipulations of Social Support and Social Identity in the Trier Social Stress Test

A Dimensão Social do Stress: Manipulações experimentais de apoio social e de identidade social no Trier Social Stress Teste

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations ...

An Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Instigating Depressive Symptoms, Behavioral Changes and Negative Health Outcomes in Rodents

Uma crônica Protocolo de estresse leve Imprevisível para sintomas depressivos Instigando, mudanças de comportamento e resultados negativos de saúde em Roedores

Chronic, unresolved stress is a major risk factor for the development of clinical depression. While many preclinical models of stress-induced depression ...

A Protocol of Manual Tests to Measure Sensation and Pain in Humans

Um protocolo de testes manuais para medir Sensation e a dor em humanos

Numerous qualitative and quantitative techniques can be used to test sensory nerves and pain in both research and clinical settings. The current study ...

A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats

Um novo método para induzir um comportamento parecido com depressão em ratos

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is ...

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

O protocolo de estresse suave crônico imprevisível para induzir Anhedonia em ratos

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

Reconhecimento de objetos novos e localização de objeto comportamental testes em ratos em um orçamento

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

Protocolo de baixo custo de análise da pegada e caixa de teste de suspensão para ratos aplicada o retenção crônica de estresse

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...