يسمح التسمية الراديوية الكربون-11 بالمركبات الصغيرة لاستخدامها في التصوير المقطعي للانبعاثات البوزيترونية أو PET دون تغيير الجزيء. وهذا أمر ضروري للتحقيق في مستويات التعبير مستقبلات. ميزة الكربون-11 radiolabeling هو أننا يمكن أن تستخدم PET لتقييم مباشرة حركية ربط SNAP نحو مستقبلات هرمون الميلانين التركيز في الوقت الحقيقي.
SNAP كما الميلانين تركز هرمون مستقبلات الخصم سوف تسهم في فهم أفضل لهذا المستقبلات وارتباطها مع الظروف الأيضية مثل السمنة والسكري. يمكن أن يعوق نقل Efflux التي تم التعبير عنها في حاجز الدم في الدماغ بشكل كبير استخدام المستحضرات الصيدلانية الإشعاعية لتصوير التعبير عن المستقبلات المركزية. ولذلك فمن المهم لتقييم آثار في المختبر.
إن التركيب الإشعاعي الآلي لـ SNAP ينطبق بشكل عام على مركبات الوزن الجزيئي المنخفض ذات الوسط الإشعاعي مع مجموعة ميثيل يمكن تقييمها بسهولة. مرة واحدة تأسيس هذا الإجراء يمكن تكييفها لمركبات أخرى. وسيساعد في المظاهرة طلاب دكتوراه كبار سارة بفاف وتيريزا بالبر.
لبدء الكربون-11 SNAP التوليف إعداد نظيفة الكربون 11 وحدة التوليف الآلي مع الكواشف والمواد المناسبة. بدء عملية تركيب SNAP على الكمبيوتر الوحدة النمطية التي ستبدأ مع نظام الشيكات وتكييف. حوالي 30 إلى 40 دقيقة قبل أن تكون الوحدة جاهزة لتسليم C-11، حدد هدف ثاني أكسيد الكربون C-11 على السيكلوترون وبدء الحزمة في 65 ميكرومبيرات.
مرة واحدة وحدة جاهزة للتسليم إغلاق النافذة الداخلية والباب الخارجي. تأكد من أن مصيدة ثاني أكسيد الكربون قد هدأت إلى 40 درجة مئوية على الأقل وأن مصيدة الميثان بدأت في التبريد. مرة واحدة أنتجت السيكلوترون حوالي 120 gigabecquerels من C- 11 CO2 انقر فوق موافق في برنامج الوحدة لفتح المسار من الهدف من خلال فخ CO2.
في الكمبيوتر السيكلوترون بدء تسليم C-11 CO2 إلى الوحدة النمطية. مراقبة نقل النشاط في وحدة الكمبيوتر والتأكد من أن ينتقل إلى الحد من ثاني أكسيد الكربون إلى الميثان بعد ثلاث دقائق. مراقبة العملية كما يتم مسح الميثان الناتج إلى فخ الميثان وتحويلها إلى يوديد الميثيل عن طريق التداول من خلال فرن اليود.
في نهاية التحويل تسلسل الانتظار كما يتم مسح المنتجات الثانوية من مصيدة يوديد الميثيل إلى العادم ومن ثم تأكيد أن المفاعل جاهز لاستقبال النشاط عن طريق النقر OK. مراقبة النظام كما يتم تحرير يوديد الميثيل من الفخ، مسح من خلال فرن ثلاثية الميثيل ومحاصرين في المفاعل. عندما يؤكد النشاط في هضاب المفاعل أن المحاصرة كاملة. الانتظار في حين يتفاعل خليط التفاعل في 75 درجة مئوية لمدة ثلاث دقائق.
ثم مراقبة النظام كما يتم تبريد خليط التفاعل إلى أقل من 35 درجة مئوية وإخمادها مع 1.5 ملليلتر من الماء. مراقبة النظام كما يتم تحميل خليط التفاعل في حلقة حقن HPLC ويتم حقنها في العمود HPLC شبه التحضيرية. شاهد آثار كاشف الأشعة فوق البنفسجية وغاما مع استمرار التصوير اللوني.
عندما يبدأ ذروة المنتج لتظهر يدويا بدء جمع المنتج في جولة أسفل قارورة في وحدة. يدوياً إنهاء تجميع عندما إشارة غاما يقع أقل من حوالي 400 العد في الثانية. شاهد مستوى السوائل في قارورة القاع المستديرة حيث يتم تحميل المنتج على خرطوشة استخراج المرحلة الصلبة تحت ضغط الهيليوم.
بمجرد أن تكون القارورة فارغة ويمر السائل من خلال خرطوشة SPE، انقر فوق موافق لبدء غسل المنتجات المحاصرة على الكارتريدج. ثم مراقبة النشاط في قارورة جمع المنتجات كما هو أول مشط المنتج من خرطوشة في القارورة ثم المخفف مع 0.9٪ محلول ملحي. شاهد كما يتم نقل حل المنتج إلى قارورة المنتج من خلال مرشح معقمة تحت ضغط الهيليوم.
عندما يتم نقل كامل إغلاق صمام إخراج المنتج. عندما يصل جهاز الراديو في قياس قارورة المنتج على العائد المشع المطلق. ثم استخدام حقنة الرصاص محمية لنقل 100 ميكرولترات من التتبع إلى قارورة صغيرة لمراقبة الجودة.
جلب عينة مراقبة الجودة إلى منطقة عمل مراقبة الجودة المحمية. ارسم 40 ميكرولترات من عينة مراقبة الجودة في حقنة ضيقة بالغاز، ثم قم بتحميلها في جهاز HPLC معدّ مزود بعمود تحليلي وحقن المنتج. إجراء قياسات أخرى لمراقبة الجودة أثناء تشغيل HPLC.
بمجرد الانتهاء من تشغيل HPLC دمج جميع القمم في الكروماتوغرام من كاشف النشاط الإشعاعي لتحديد ما إذا كان نقاء المواد الكيميائية اللاسلكية SNAP أكبر من 95٪ دمج القمم في الكروموماتوغرام للأشعة فوق البنفسجية لتحديد النقاء الكيميائي للمنتج. استخدم المنطقة الواقعة تحت ذروة منتج الأشعة فوق البنفسجية لحساب النشاط المحدد. مرة واحدة وقد تم تأكيد المنتج لتلبية متطلبات الاستخدام الإفراج عن جهاز تتبع الراديو إلى مختبر التجربة الحركية في الوقت الحقيقي.
قبل 30 دقيقة على الأقل من التجربة غسل النوع البري المعد أو الخلايا المصابة مع DPBS وإضافة ملليلترين من متوسط النمو الخالي من المصل. لمنع الخلايا المصابة إضافة 0.98 ميكرولترات من محلول 20.4 ملليمولر من هيدروكلوريد فيراباميل في ثنائي الدم سلفوكسيد. احتضان الخلايا على متن طائرة مائلة لمدة 30 دقيقة.
ثم قم بتشغيل أداة الفحص في الوقت الحقيقي والكمبيوتر المرتبط بها. افتح برنامج التحكم واختر هدفًا واحدًا. تعيين عدد المواضع إلى اثنين، وقت الكشف عن ثلاث ثوان، وقت تأخير الكشف إلى ثانيتين، واسم المرحلة الأولى إلى الأساس.
أدخل طبق ثقافة الخلية في دعم يميل من الجهاز مع عمود الخلية على الجانب السفلي. تأكد من أن يتم تغطية عمود الخلية في خلية ثقافة المتوسطة. بدء قياس خلفية 10 دقيقة وتعيين اسم الملف والمسار.
تعيين مقياس الوقت إلى دقائق وجمع النويدات إلى الكربون-11. تكوين الرسم البياني لإظهار الخلفية والهدف والخلفية طرح البيانات الهدف. مرة واحدة وقد تم تسليم جهاز تتبع الراديو والموافقة عليها للاستخدام، واتخاذ عينة صغيرة للمقايسة.
حساب حجم المطلوب من حل التتبع الراديو وإعداد ماصة. في برنامج الصك وقفة تشغيل وانتظر دوران الطبق لوقف. فتح غطاء الجهاز، وتحويل الدعم 90 درجة إلى اليسار، إضافة التتبع الراديو مع ماصة المعدة والعودة الجهاز إلى وضعه الأولي.
أغلق غطاء الجهاز ثم استأنف التجربة على الفور. السماح للتجربة تشغيل لمدة 20 دقيقة قبل الانتهاء منه. معالجة وتحليل البيانات لتقييم امتصاص SNAP في الخلايا.
الآن يمكن تكرار الإجراء لDMSO تعامل مع خلية طبق ثقافة البرية نوع الخلية خط. تم إجراء مقايسات حركية في الوقت الحقيقي مع خلايا من النوع البري غير PGP ، والخلايا المعبرة عن PGP المحظورة مسبقًا مع فيراباميل كمثبط PGP ، وخلايا PGP غير المحظورة. ولم يلاحظ أي فرق كبير بين الخلايا غير المعالجة والخلايا المعالجة بالمركبات.
الكربون-11 SNAP تراكمت بسرعة في خلايا نوع البرية في حين لم يلاحظ تراكم في الخلايا PGP التعبير. أدى ما قبل حظر الناقل إفلوكس PGP مع فيراباميل في تراكم SNAP في خلايا PGP مماثلة لتلك التي من خلايا النوع البرية. في تركيبة مع القياسات الحركية في الوقت الحقيقي هذا الإعداد تمكن من فهم واسع للمستحضرات الدوائية من المركبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض، وبالتالي هو مهم للغاية لتطوير ما قبل السريرية من المستحضرات الصيدلانية الإشعاعية.
التوقيت والتنظيم هما المكونات الرئيسية لاقتناص الكربون 11 بنجاح مع التجارب الحركية اللاحقة في الوقت الحقيقي حيث أن نصف عمر الكربون -11 هو 20 دقيقة فقط. واجبة قصيرة نصف عمر من كربون-11 يتم تنفيذ أجزاء كثيرة من هذا الإجراء في وقت واحد. ومن المهم أن يفهم كل من يشارك في هذا الدور نطاق هذا الدور وتوقيته.
سلامة المنتج وحماية الإشعاع هما المفتاح لإعداد المستحضرات الصيدلانية الإشعاعية. يجب أن تتبع جميع التجارب ما هو منخفض بقدر ما يمكن تحقيقه بشكل معقول أو مبدأ ALARA للحد من تعرض المشغل للإشعاع.
