Name: shootward movement of cfda tracer loaded in the bottom sink tissues of arabidopsis
Uploaded: 2019-05-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Shootward Movement of CFDA Tracer Loaded in the Bottom Sink Tissues of Arabidopsis at JoVE.com

Bu çalışma Çin 'in Ulusal Doğal Bilim Vakfı (31671257) ve Hubei ortak yenilik Merkezi tahıl endüstrisi (LXT-16-18) tarafından finanse edilmiştir.

1. MS orta Arabidopsis dikey büyüme
<ol><li>Laminar akış kabininin iç kısmı, kullanımdan önce 30 dk UV ışık ve 15 dk hava akımı ile tedavi edilmelidir. UV ışığı açık olduğunda cam kapıyı kapattığınızdan emin olun. % 70 etanol ile tüm araçları ve plakaları dolap yerleştirmeden önce sprey.</li>
	<li>Murashige ve Skoog (MS) ortamını, bir laminar akış kabininin altında Standart 90 mm çap Petri tabağı ile hazırlayın. Not: MS orta aşağıdaki bileşenleri içerir: 20,6...

<ol>
	<li>Grignon, N., Touraine, B., Durand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=6(5)Carboxyfluorescein+as+a+tracer+of+phloem+sap+translocation.">6(5)Carboxyfluorescein as a tracer of phloem sap translocation.</a> American Journal of Botany. 76, 871-877 (1989).</li><li>Wright, K. M., Oparka, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescent+probe+HPTS+as+a+phloem-mobile,+symplastic+tracer:+an+evaluation+using+confocal+laser+scanning+microscopy.">The fluorescent probe HPTS as a phloem-mobile, symplastic tracer: an evaluation using confocal laser scanning microscopy.</a> Journal of Experimental Botany. 47 (3), 439-445 (1996).</li><li>Oparka, K. J., Prior, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+of+Lucifer+Yellow+CH+in+potato+tuber+storage+tissues:+A+comparison+of+symplastic+and+apoplastic+transport.">Movement of Lucifer Yellow CH in potato tuber storage tissues: A comparison of symplastic and apoplastic transport.</a> Planta. 176 (4), 533-540 (1988).</li><li>Knoblauch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+Phloem-Mobile+Probes:+Properties+and+Applications.">Multispectral Phloem-Mobile Probes: Properties and Applications.</a> Plant Physiology. 167 (4), 1211-1220 (2015).</li><li>Oparka, K. J., Duckett, C. M., Prior, D. A. M., Fisher, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+phloem+unloading+in+the+root+tip+of+Arabidopsis.">Real-time imaging of phloem unloading in the root tip of Arabidopsis.</a> The Plant Journal. 6 (5), 759-766 (1994).</li><li>Viola, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberization+in+Potato+Involves+a+Switch+from+Apoplastic+to+Symplastic+Phloem+Unloading.">Tuberization in Potato Involves a Switch from Apoplastic to Symplastic Phloem Unloading.</a> The Plant Cell. 13 (2), 385-398 (2001).</li><li>Roberts, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phloem+Unloading+in+Sink+Leaves+of+Nicotiana+benthamiana:+Comparison+of+a+Fluorescent+Solute+with+a+Fluorescent+Virus.">Phloem Unloading in Sink Leaves of Nicotiana benthamiana: Comparison of a Fluorescent Solute with a Fluorescent Virus.</a> The Plant Cell. 9 (8), 1381-1396 (1997).</li><li>P&#233;ron, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Insights+into+Phloem+Unloading+and+Expression+of+Sucrose+Transporters+in+Vegetative+Sinks+of+the+Parasitic+Plant+Phelipanche+ramosa+L+(Pomel).">New Insights into Phloem Unloading and Expression of Sucrose Transporters in Vegetative Sinks of the Parasitic Plant Phelipanche ramosa L (Pomel).</a> Frontiers in Plant Science. 7 (2048), (2017).</li><li>Spallek, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interspecies+hormonal+control+of+host+root+morphology+by+parasitic+plants.">Interspecies hormonal control of host root morphology by parasitic plants.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 114 (20), 5283-5288 (2017).</li><li>Complainville, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nodule+initiation+involves+the+creation+of+a+new+symplasmic+field+in+specific+root+cells+of+medicago+species.">Nodule initiation involves the creation of a new symplasmic field in specific root cells of medicago species.</a> The Plant Cell. 15 (12), 2778-2791 (2003).</li><li>Bederska, M., Borucki, W., Znojek, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+of+fluorescent+dyes+Lucifer+Yellow+(LYCH)+and+carboxyfluorescein+(CF)+in+Medicago+truncatula+Gaertn.+roots+and+root+nodules.">Movement of fluorescent dyes Lucifer Yellow (LYCH) and carboxyfluorescein (CF) in Medicago truncatula Gaertn. roots and root nodules.</a> Symbiosis. 58 (1-3), 183-190 (2012).</li><li>Robards, A. W., Lucas, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodesmata.">Plasmodesmata.</a> Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 41 (1), 369-419 (1990).</li><li>Roberts, A. G., Oparka, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodesmata+and+the+control+of+symplastic+transport.">Plasmodesmata and the control of symplastic transport.</a> Plant, Cell &amp; Environment. 26 (1), 103-124 (2003).</li><li>Duckett, C. M., Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Dolan, L., Roberts, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dye-coupling+in+the+root+epidermis+of+Arabidopsis+is+progressively+reduced+during+development.">Dye-coupling in the root epidermis of Arabidopsis is progressively reduced during development.</a> Development. 120 (11), 3247-3255 (1994).</li><li>Palevitz, B. A., Hepler, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+dye+coupling+of+stomatal+cells+of+Allium+and+Commelina+demonstrated+by+microinjection+of+Lucifer+yellow.">Changes in dye coupling of stomatal cells of Allium and Commelina demonstrated by microinjection of Lucifer yellow.</a> Planta. 164 (4), 473-479 (1985).</li><li>van Bel, A. J. E., Kempers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symplastic+isolation+of+the+sieve+element-companion+cell+complex+in+the+phloem+of+Ricinus+communis+and+Salix+alba+stems.">Symplastic isolation of the sieve element-companion cell complex in the phloem of Ricinus communis and Salix alba stems.</a> Planta. 183 (1), 69-76 (1991).</li><li>Erwee, M. G., Goodwin, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symplast+domains+in+extrastelar+tissues+of+Egeria+densa+Planch.">Symplast domains in extrastelar tissues of Egeria densa Planch.</a> Planta. 163 (1), 9-19 (1985).</li><li>Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Wright, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symplastic+communication+between+primary+and+developing+lateral+roots+of+Arabidopsis+thaliana.">Symplastic communication between primary and developing lateral roots of Arabidopsis thaliana.</a> Journal of Experimental Botany. 46 (2), 187-197 (1995).</li><li>Christensen, N. M., Faulkner, C., Oparka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Unidirectional+Flow+through+Plasmodesmata.">Evidence for Unidirectional Flow through Plasmodesmata.</a> Plant Physiology. 150 (1), 96-104 (2009).</li><li>Wr&#243;bel-Marek, J., Kurczy&#324;ska, E., P&#322;achno, B. J., Kozieradzka-Kiszkurno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+symplasmic+domains+in+the+embryo+and+seed+of+Sedum+acre+L.+(Crassulaceae).">Identification of symplasmic domains in the embryo and seed of Sedum acre L. (Crassulaceae).</a> Planta. 245 (3), 491-505 (2017).</li><li>Liang, D., White, R. G., Waterhouse, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+silencing+in+Arabidopsis+spreads+from+the+root+to+the+shoot,+through+a+gating+barrier,+by+template-dependent,+non-vascular,+cell+to+cell+movement.">Gene silencing in Arabidopsis spreads from the root to the shoot, through a gating barrier, by template-dependent, non-vascular, cell to cell movement.</a> Plant Physiology. 159 (3), 984-1000 (2012).</li><li>Radford, J. E., White, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tissue-preparation-induced+callose+synthesis+on+estimates+of+plasmodesma+size+exclusion+limits.">Effects of tissue-preparation-induced callose synthesis on estimates of plasmodesma size exclusion limits.</a> Protoplasma. 216 (1-2), 47-55 (2001).</li><li>Kollist, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Responses+to+Abiotic+Stress:+Priming+the+Landscape+for+the+Signal+Transduction+Network.">Rapid Responses to Abiotic Stress: Priming the Landscape for the Signal Transduction Network.</a> Trends in Plant Science. 24 (1), 25-37 (2019).</li><li>Haupt, S., Duncan, G. H., Holzberg, S., Oparka, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Symplastic+Phloem+Unloading+in+Sink+Leaves+of+Barley.">Evidence for Symplastic Phloem Unloading in Sink Leaves of Barley.</a> Plant Physiology. 125 (1), 209-218 (2001).</li><li>Botha, C. E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+xylem+sap+retrieval+pathway+in+rice+leaf+blades:+evidence+of+a+role+for+endocytosis?.">A xylem sap retrieval pathway in rice leaf blades: evidence of a role for endocytosis?.</a> Journal of Experimental Botany. 59 (11), 2945-2954 (2008).</li></ol>

Gelişmekte olan çalışmalar bitkiler hızla dış uyaranlara yanıt verebilir göstermiştir23, manipülasyon da dahil olmak üzere deneysel prosedürler tanıtıldı22. İlk deneyimizde, bu bilginin gözetimi genellikle boyama başarısızlığa yol açar. Bu derslerle, bu deneyi yaparken aşağıdaki önlemlerin akılda tutulması gerektiğini öneriyoruz: (1) hasat sonrası tohumlar düşük sıcaklık ve düşük nemi ayarlamak için bir depolama kabininde tutulmalı...

5 (6)-karboksflorcein (CF)1, 8-hidrokpliroidi-1, 3, 6-trisulphonik asit2, Lucifer sarı ch (lych)3, esculin ve cter4gibi spektral özellikleri bir dizi ile birçok floresan izleyiciler geliştirilmiştir ve symplastik hareketi ve floem aktivitesini izlemek için bitkiler uygulanır. Genellikle, bir symplastic boya hedef doku bir kesim içine yüklenir ve bitkinin diğer bölgelerine içine gazetecinin sıralı dağılım hücresel iletişim gösterecektir. Boya emilimi mekanizması tam olarak anlaşılmamış olsa da, canlı hücreler içinde temel CF hareketinin ilkesi yaygın olarak kabul edilmiştir. CF (CF diacetate, CFDA) ester formu floresan olmayan, ancak membran geçirgen. Bu özellik, boyanın hücrelere hızlı membran difüzyon sağlar. Canlı hücreler içinde bir kez, hücre içi esterleri 3 ' ve 6 ' CFDA pozisyonunda asetat grupları kaldırmak, floresan ve membran geçirmez CF serbest (Şekil 1, alternatif Wright ve al.2bakın); CF daha sonra plasmodesmata aracılığıyla bitkilerin diğer bölgelerine taşıyabilirsiniz.
CFDA ile iyi kurulan bir prosedür bu kaynak yaprakları içine yüklenebilir ve floem akışı ve birçok türün lavabo dokularında boşaltma floem izlemek için kullanılan olduğunu, örn, Arabidopsis root5CF boşaltma olarak, floem boşaltma patates tüberkülasyonu6sırasında, Nicotiana lavabo içinde floem boşaltma7yaprakları, ve benzeri. Benzer yükleme yaklaşımlarıyla, diğer çalışmalar bu boya ana bilgisayar ve parazit arasında symplastic bağlantı göstermek için benimsenen8,9, ya da simbiyotik ilişkiler ortaya çıkarmak için10,11.
Bu boyayı kullanımın başka bir yolu da, dağıtım düzenini belirlemek için belirli hücrelere veya tek hücreye mikroenjeksiyon yoluyla yüklenecektir. Bu tür sofistike teknikler, özellikle symplastic Domain12,13konseptinin geliştirilmesinde, plasmodesmata-aracılı hücresel iletişimin daha derin anlayışımızı büyük ölçüde kolaylaştırdı. Örneğin, Arabidopsis kotiledon hücrelerine CFDA Mikroenjeksiyonu, ikiyüzlülik epidermis ancak altta yatan hücrelerde veya kök epidermis içinde boya-bağlantı deseni sonuçlandı, bu nedenle iki yüzlü epidermis formları symplastic etki alanı14. Evcikli Guard hücreleri gibi benzer etki alanları15, elek element-Companion hücreleri16, kök saç hücreleri14 ve root Cap17,18 mikroenjeksiyon tekniği ile tespit edilmiştir. En şaşırtıcı şekilde, bazı etki alanları izleyici moleküllerinin belirli bir yönde hareket etmesine izin verir. Örneğin diken alan alın, destekleyici epidermal hücreye bir floresan prob mikroenjeksiyon diken etki içine izleyici akışına yol açar, ancak, ters enjeksiyon gerçek tutmaz19. Son raporda ayrıca Sedum embriyo20' nin symplastic alanlarında da benzer durumlar bulunmuştur. Bu nedenle, yukarıdaki tüm durumlarda yükleme sitelerinin takas symplastik iletişim içine yeni Öngörüler yol açabilir anlamına gelir. Önceki deney kök-to-Shoot mobil susturma rota incelemek amaçlayan bir roman symplastic etki alanı veya HEJ (ikiyüzsüz-epicotyl Junction) bölge, daha fazla kök yükleme (non-kurallı lavabo-yükleme) CFDA üzerinden doğrulanmıştır tespit Deneme21. Burada, biz daha basit bir yöntem kullanarak root-to-Shoot CF hareketi ayrıntılı ve yükleme sitelerini değiştirerek potansiyel bir symplastic etki alanı kurtarmak. Ayrıca bu prosedür, kökten ateş eden uzun mesafe taşımacılığını değiştiren genetik kökenleri ayırt etmek için uyarlanabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:705px;" width="705">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:223px;">KNO3&#160;&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td style="width:127px;">10017218</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4&#160;</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10017608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">MgSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10013018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">CaCl2&#183;2H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>20011160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">MnSO4&#183;H2O&#160;</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10013418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Na2MoO4&#183;2H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10019818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Boric Acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10004818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">ZnSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10024018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">CuSO4&#183;5H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10008218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">CoCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10007216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KI</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10017160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">FeSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10012118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA&#160;</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10009717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10019718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KOH</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10017018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sucrose</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10021418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Myo-inositol&#160;&#160;</td>
			<td>MACKLIN</td>
			<td>I811835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nicotinic Acid&#160;</td>
			<td>MACKLIN</td>
			<td>N814565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyridoxine HCl</td>
			<td>MACKLIN</td>
			<td>V820447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiamine HCl</td>
			<td>MACKLIN</td>
			<td>T818865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycine</td>
			<td>MACKLIN</td>
			<td>G800880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agar powder</td>
			<td>Novon</td>
			<td>ZZ14022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluorescence Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Zoom V16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting microscope</td>
			<td>SDPTOP</td>
			<td>SRE-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200&#956;l pipette</td>
			<td>Dragon Laboratory Instruments</td>
			<td colspan="2">713111110000-20-200ul</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2.5&#956;l pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine forceps&#160;</td>
			<td>TWEEZERS</td>
			<td>ST-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Parafilm</td>
			<td>PARAFILM</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stainless steel double-sided blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td colspan="2">Platinum-Plus Double-Edge Blade</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

shootward movement of cfda tracer loaded in the bottom sink tissues of arabidopsis

Symplastic Tracer 5 (6)-carboxyfluorcein diasetat (CFDA), hücresel bağlantı, floem taşımacılığı ve vasküler desenlerin ortaya koyduğu yaşam tesislerinde yaygın olarak uygulanmaktadır. Bu protokol, sırasıyla kök kesme ve ikiyüzlü pinching prosedürünü kullanarak Arabidopsis 'te Alta-to-top carboxyflorcein (CF) hareketini gösterir. Bu iki farklı prosedür, CF hareketinin farklı verimlilikleri ile sonuçlanır: yaklaşık% 91 ' i, iki yüzlü-pinching prosedürü ile çekimler içinde CF 'nin% 70 ' i, root-kesme prosedürü ile CF 'nin yaklaşık%% ' i. Bu simplastik boya mobil verimlilikte önemli değişiklikler sonuçlanan yükleme siteleri, basit değişiklik, CF hareketi en büyük olasılıkla kök-ikiyüzotil kavşak tarafından, symplastic yönetmeliğine tabi olabilir öneriyor.

Symplastic hareketi genellikle çevresel dalgalanmalara tabidir. Bitki büyüyen devlet Perturbation, ve hatta doku hazırlama süreci plasmodesmata boyutu dışlama sınırını etkileyecektir, böylece symplastic taşıma etkileyen22. Boyama verimliliğini artırmak için, biz sıcaklık ve nem sıkıca kontrol edilir büyüme odasında, bizim operasyon Confine, ve aynı zamanda mümkün olduğunca hızlı bir şekilde tüm prosedürü gerçekleştirmek (ideal i?...

Watch this Scientific Journal Video about Shootward Movement of CFDA Tracer Loaded in the Bottom Sink Tissues of Arabidopsis at JoVE.com

Shootward Movement of CFDA Tracer Loaded in the Bottom Sink Tissues of Arabidopsis

Bu protokol amacı nasıl Arabidopsisalt kısımlarında farklı sitelere CFDA yüklemek için göstermek için. Daha sonra çekim içinde CF ortaya çıkan dağıtım deseni sunuyoruz.

Arabidopsis 'In alt lavabo dokularında yüklü CFDA Tracer Shootward hareketi

The symplastic tracer 5(6)-carboxyfluorescein diacetate (CFDA) has been widely applied in living plants to demonstrate the intercellular connection, ...

Yaygın olarak kullanılan prob CFDA, ya da karboksifluorescein diasetat için kısa, non-floresan olduğunu. İki H3 grubu ve bu bileşiğin 3'6'pozisyonu membran-permeant hale getirir. Hücrelere girdikten sonra, iç hücresel asetatlar asetat gruplarını çıkaracak ve CFDA'nın yeni formunu serbest bırakacaktır.Bu bir karboksifluorescein, ya da CF, floresan. Ve bu yeni form daha az membran permeant olduğu için, ağırlık, tüm hücreler hücreler arası gözenekleri, ya da bitkilerde plazmodesmata ile hareket etmektir, bu deasetat phloem aktivitesinde hücre içi taşıma çalışma için ideal bir sonda yapıyor. Bugünkü videoda, CFD yüklemesini arabidopsis bitkilerinin köküne ve hipokotiline doğru yükleyeceğiz ve iki farklı işlemin bu floresan sondanın alttan üste hareketini nasıl etkileyeceğini göstereceğiz.Sürekli boyama sonuçları elde, biz dört santigrat derece hasat Arabidopsis tohumları saklamak, 40% nem kabine. Yedi günden fazla bu durumda saklanan yeni hasat edilen tohumlar ekim için kolayca kullanılır. Her bitki Petri çanak nispeten benzer bir alanda yetiştirilen sağlamak için, bir tohum bölge sınıf kartı kullanıyoruz.Şimdi, sterilize ucu ıslatma, sterilize tohumları daldırma, ve belirlenen pozisyonda tohumları birer birer ekin. Ekim bittikten sonra, parafilm ve yapışkan bir bant ile Petri çanak mühür, dikey büyümesini sağlamak için bir Petri çanak standı üzerine koyun. İşte bu deneyde kullanacağımız araçlar.Boyayı olabildiğince çabuk yüklememiz gerektiğini lütfen unutmayın. Normalde, 10 ila 15 dakika içinde tüm süreci bitirmek. CFDA yükleme deneyini gerçekleştirmeden önce her zaman taze CFDA çözümü hazırlıyoruz.Burada, hemen kullanmadan önce su ile beş mikromolar konsantrasyoniçine bir milimolar CFDA seyreltin. Parafilm üç milimetre boyutunda küçük parçalar halinde kesin. Petri kabının kapağında ve altında yoğuşma olduğundan, boyanın akmasını önlemek için onları kağıt havlu ile temizlememiz gerekir.Kökün altına küçük bir parafilm parçası konur. Bitkileri kaldırın ve kapağın üzerine koyun. Kökleri hipokotilin 5-10 milimetre altında kesin.Küçük parafilm parçalarının çekimlerini geri alın. Şimdi dikkatle kök kesme ucuüzerine bir mikrolitre CFDA uygulayın. Tüm proto-bitkilerkontamine önlemek için deneyin.Sonra kapağını kapatın ve iki saat boyunca büyüme odasında bırakın. Hipokodil pinching Yöntemi. Küçük parafilm parçası, daha önce hazırlandığı gibi, kök-hipokotil kavşak altına konur.Hipokotili kök dokusuna yakın bir şekilde çimdiklemek için bir forecep kullanıyoruz ve 0.1 mikrolitre CFDA'yı sıkıştırılmış tarafa dikkatlice uygulayıp bitkiyi iki saat bekletiyoruz. Bölge boyama tesislerinden 9 ila 12 gün sonra fotoğraflar. Hepsi hem cotyledons ve gerçek yapraklarıvasküler boyama desen göstermektedir.Sadece çok nadir bir durumda, cotyledon yaprağı yarım yaprak boyama deseni gösterdi. Yani temelde, iki yöntem CF boyama deseninde bir fark yaratmadı, ancak biz daha fazla bitki içine boya yükleme gerçekleştirmek, biz iki prosedür verimlilik önemli bir fark anlaşma vermek bulabilirsiniz. Kök kesme yöntemiyle, bitkilerin yaklaşık %70'i çekimde floresan sinyali gösterir.Ama hipokotil pinching yöntemi ile verimlilik% 91 artırılabilir. Biz de kök sıkıştırma yöntemi denedim, ama bu yöntem daha düşük verimlilik sonuç, yaklaşık% 30 Bu nedenle, boya yüklemek için yol boyama farkı için hesap yok gibi görünüyor. Fark büyük olasılıkla bir symplastic bariyer ile ayrılmış olabilir yükleme siteleri, yatıyor.CFDA'yı Arabidopsis köklerine ve hipokotillere nasıl yüklediğimizi gösterdik. Biz iki biraz farklı yordamlar kullanılan ve bu iki biraz farklı yordamlar üst prob hareketi bu alt önemli bir fark neden. Bu yöntemin, kökten türetilen ateş sinyalleri için potansiyel bir sempozyum bariyerini belirlememize yardımcı olabileceğini öneriyoruz.

Research

JoVE Journal

Environment

Shootward Movement of CFDA Tracer Loaded in the Bottom Sink Tissues of Arabidopsis

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Ağaç Dokuların içinde eklembacaklı ve Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi için Tekniği

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

Çevre

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Yerelleştirmek için Autometallography ve yarı ölçmek gümüş deniz doku kullanımı

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

An Induction System for Clustered Stomata by Sugar Solution Immersion Treatment in Arabidopsis thaliana Seedlings

An Induction System for Clustered Stomata by Sugar Solution Immersion Treatment in Arabidopsis thaliana Seedlings

Kümelenmiş stoma bantlı şeker çözüm daldırma tedavisinde Arabidopsis thaliana fidan tarafından için bir indüksiyon sistemi

Stomatal movement mediates plant gas exchange, which is essential for photosynthesis and transpiration. Stomatal opening and closing are accomplished by a ...

Fluorescently Labeled Bacteria as a Tracer to Reveal Novel Pathways of Organic Carbon Flow in Aquatic Ecosystems

Floresan Etiketli Bakteriler Sucul Ekosistemlerde Organik Karbon Akışının Yeni Yollarını Ortaya Çıkaracak Bir İzleyici Olarak

Elucidating trophic interactions, such as predation and its effects, is a frequent task for many researchers in ecology. The study of microbial ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&#8211;Environment Interactions

Bitki-Çevre Etkileşimlerinin Gerçek Zamanlı Fizyolojik Fenotimi için Telemetrik, Gravimetrik Platformu

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

Using Changes in Leaf Transmission to Investigate Chloroplast Movement in Arabidopsis thaliana

Using Changes in Leaf Transmission to Investigate Chloroplast Movement in Arabidopsis thaliana

Arabidopsis thaliana'daki Kloroplast Hareketini Araştırmak için Yaprak İletiminde Değişiklikleri Kullanma

Chloroplast movement in leaves has been shown to help minimize photoinhibition and increase growth under certain conditions. Much can be learned about ...

Elucidating the Metabolism of 2,4-Dibromophenol in Plants

Bitkilerde 2,4-Dibromofenol Metabolizmasının Aydınlatılması

Crops can be extensively exposed to organic pollutants, since soil is a major sink for pollutants discarded into the environment. This creates potential ...

Determination of the Absorption, Translocation, and Distribution of Imidacloprid in Wheat

Buğdayda Imidacloprid'in Emiliminin, Translokasyonunun ve Dağılımının Belirlenmesi

Neonicotinoids, a class of insecticides, are widely used because of their novel modes of action, high insecticidal activity, and strong root uptake. ...

<meta charset="utf8"></head><body>Bitkilerde Triazol Pestisitlerin İntegral Metabolit Sitotoksisitesinin Tahmin Edilmesi

Assessing Cytotoxicity of Metabolites of Typical Triazole Pesticides in Plants

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Bitkilerde Triazol Pestisitlerinin Kapsamlı Metabolit Sitotoksisite Değerlendirmesi İçin Yeni ve Etkili Bir Yöntem

Bitkilerde Tipik Triazol Pestisitlerin Metabolitlerinin Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesi

Various organic pollutants have been released into the environment because of anthropogenic activities. These pollutants can be taken up by crop plants, ...