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•
10:31 min
May 10th, 2019
DOI :
10.3791/59681-v
Chapters
0:04
Title
1:14
Tissue Harvesting and UV Crosslinking
2:37
Beads Preparation
3:20
Tissue Lysis and Partial RNA Digestion
4:30
Immunoprecipitation
5:09
RNA Adapter Ligation to RNA 3’ Ends
6:48
SDS-PAGE and Membrane Transfer
8:24
Results: Analysis of the eCLIP Method
10:08
Conclusion
Transcript
RNA結合タンパク質は細胞生理学に不可欠です。重要なことに、RBPは精子形成を通じて高発現しており、生殖細胞のすべての段階で重要な転写後調節因子として十分に文書化されている。結合ターゲットの同定は、RBPの機械的役割を解明するために重要である。
このプロトコルは、内因性直接RNA標的を捕捉するためのeCLIP法の適応的な適用を表し、哺乳動物の精巣におけるeCLIPの適用可能な基礎を確立する。この方法の主な利点は、非放射性で、時間の負担が少なく、サイズに一致する入力が本物のターゲ
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Summary
ここでは、精巣での RBP 候補の主要な RNA 標的を決定するための eCLIP プロトコルを紹介する。
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