Name: physiologic patient derived 3d spheroids for anti-neoplastic drug screening to target cancer stem cells
Uploaded: 2019-07-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells at JoVE.com

Bu çalışma öncelikle DOD OCRP erken kariyer araştırmacı Ödülü W81XWH-13-1-0134 (GM), DOD pilot Ödülü W81XWH-16-1-0426 (GM), DOD araştırmacı başlattı Ödülü W81XWH-17-OCRP-ıIRA (GM), Rivkin merkezi Ovarian kanser ve Michigan Ovarian kanser için desteklenmektedir Ittifak. Bu yayında rapor edilen araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından ödül numarası P30CA046592 altında destekleniyordu. CMN, 1256260 No 'lu Grant altında Ulusal Bilim Vakfı lisansüstü araştırma bursu tarafından desteklenmektedir. MEB, Ulusal Ihtiyaç (GAANN) bursu alanlarında eğitim bölümü lisansüstü yardımı tarafından desteklenmektedir.

Tüm hasta örnekleri, tümör debulking ve asit koleksiyonundan sonra numuneler de tanımlanmakta olan, onaylayan hastalarından onaylanmış bir ıRB Protokolü altında toplanır.
1.384 yılında küçük hücre numaralarından küreler üretimi-iyi asılı damla plakaları
<ol><li>Asılı damla plakasını steril deiyonize (dı) suyla dolu bir sonicator içine yerleştirin ve 20 dakika boyunca sonikat yapın.</li>
	<li>Eldivenli bir el ile, plakayı sonicator 'dan çıkarın ve dı suyu ...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> All cancers Source: Globocan. , (2018).</li><li>Prasad, V., Mailankody, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+and+Development+Spending+to+Bring+a+Single+Cancer+Drug+to+Market+and+Revenues+After+Approval.">Research and Development Spending to Bring a Single Cancer Drug to Market and Revenues After Approval.</a> JAMA Internal Medicine. 177, 1569-1575 (2017).</li><li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Personalized+Medicine+Based+Approach+to+Model+Patterns+of+Chemoresistance+and+Tumor+Recurrence+Using+Ovarian+Cancer+Stem+Cell+Spheroids.">Personalized Medicine Based Approach to Model Patterns of Chemoresistance and Tumor Recurrence Using Ovarian Cancer Stem Cell Spheroids.</a> Clinical Cancer Research. 23 (22), 6934-6945 (2017).</li><li>Jordan, C. T., Guzman, M. L., Noble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Stem+Cells.">Cancer Stem Cells.</a> New England Journal of Medicine. 355, 1253-1261 (2006).</li><li>Ishiguro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+Characterization+of+an+In+Vitro+Model+of+Ovarian+Cancer+Stem-like+Cells+with+an+Enhanced+Proliferative+Capacity.">Establishment and Characterization of an In Vitro Model of Ovarian Cancer Stem-like Cells with an Enhanced Proliferative Capacity.</a> Cancer Research. 76, 150-160 (2016).</li><li>P&#225;ez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Dormancy:+A+Model+of+Early+Dissemination+and+Late+Cancer+Recurrence.">Cancer Dormancy: A Model of Early Dissemination and Late Cancer Recurrence.</a> Clinical Cancer Research. 18, 645-653 (2012).</li><li>Ahmed, N., Stenvers, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+to+Know+Ovarian+Cancer+Ascites:+Opportunities+for+Targeted+Therapy-Based+Translational+Research.">Getting to Know Ovarian Cancer Ascites: Opportunities for Targeted Therapy-Based Translational Research.</a> Frontiers in Oncology. 3, (2013).</li><li>Pradhan, S., Clary, J. M., Seliktar, D., Lipke, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+three-dimensional+spheroidal+cancer+model+based+on+PEG-fibrinogen+hydrogel+microspheres.">A three-dimensional spheroidal cancer model based on PEG-fibrinogen hydrogel microspheres.</a> Biomaterials. 115, 141-154 (2017).</li><li>Varna, M., Bertheau, P., Legr&#232;s, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Microenvironment+in+Human+Tumor+Xenografted+Mouse+Models.">Tumor Microenvironment in Human Tumor Xenografted Mouse Models.</a> Journal of Analytical Oncology. 3, 159-166 (2014).</li><li>Huang, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+microfluidic+cell+culture+system+for+high-throughput+perfusion+three-dimensional+cell+culture-based+assays:+Effect+of+cell+culture+model+on+the+results+of+chemosensitivity+assays.">An integrated microfluidic cell culture system for high-throughput perfusion three-dimensional cell culture-based assays: Effect of cell culture model on the results of chemosensitivity assays.</a> Lab on a Chip. 13, 1133-1143 (2013).</li><li>Zang, R., Li, D., Tang, I. C., Wang, J., Yang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-Based+Assays+in+High-Throughput+Screening+for+Drug+Discovery.">Cell-Based Assays in High-Throughput Screening for Drug Discovery.</a> International Journal of Biotechnology for Wellness Industries. , (2012).</li><li>Murphy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+alternative+in+vivo+drug+screening+methodology:+a+single+mouse+analysis.">Evaluation of alternative in vivo drug screening methodology: a single mouse analysis.</a> Cancer Research. 76, 5798-5809 (2016).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+Xenograft+models:+An+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived Xenograft models: An emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4, 998-1013 (2014).</li><li>Damiati, S., Kompella, U. B., Damiati, S. A., Kodzius, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+drug+delivery+systems+and+drug+screening.">Microfluidic devices for drug delivery systems and drug screening.</a> Genes. 9, (2018).</li><li>Caliari, S. R., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Practical+Guide+to+Hydrogels+for+Cell+Culture.">A Practical Guide to Hydrogels for Cell Culture.</a> Nature Methods. 14, 69-81 (2016).</li><li>Mehta, G., Hsiao, A. Y., Ingram, M., Luker, G. D., Takayama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opportunities+and+challenges+for+use+of+tumor+spheroids+as+models+to+test+drug+delivery+and+efficacy.">Opportunities and challenges for use of tumor spheroids as models to test drug delivery and efficacy.</a> Journal of Control Release. , (2012).</li><li>Mehta, P., Novak, C., Raghavan, S., Ward, M., Mehta, G., Papaccio, G., Desiderio, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Renewal+and+CSCs+In+Vitro+Enrichment:+Growth+as+Floating+Spheres.">Self-Renewal and CSCs In Vitro Enrichment: Growth as Floating Spheres.</a> Cancer Stem Cells: Methods and Protocols. , 61-75 (2018).</li><li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+stable+small+cell+number+three-dimensional+ovarian+cancer+spheroids+using+hanging+drop+arrays+for+preclinical+drug+sensitivity+assays.">Formation of stable small cell number three-dimensional ovarian cancer spheroids using hanging drop arrays for preclinical drug sensitivity assays.</a> Gynecologic Oncology. 138, 181-189 (2015).</li><li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+tumor+spheroid+generation+techniques+for+differential+in+vitro+drug+toxicity.">Comparative analysis of tumor spheroid generation techniques for differential in vitro drug toxicity.</a> Oncotarget. 7, 16948-16961 (2016).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+Tumor+Evolution+via+Genomic+Profiling+of+Individual+Tumor+Spheroids+in+a+Malignant+Ascites.">Evaluating Tumor Evolution via Genomic Profiling of Individual Tumor Spheroids in a Malignant Ascites.</a> Scientific Reports. 8, 1-11 (2018).</li><li>Silva, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+in+combination+with+CD133+defines+angiogenic+ovarian+cancer+stem+cells+that+portend+poor+patient+survival.">Aldehyde dehydrogenase in combination with CD133 defines angiogenic ovarian cancer stem cells that portend poor patient survival.</a> Cancer Research. 71, 3991-4001 (2011).</li><li>Pulaski, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+alemtuzumab+as+an+anti-myeloid+cell+antiangiogenic+therapy+for+the+treatment+of+ovarian+cancer.">Identifying alemtuzumab as an anti-myeloid cell antiangiogenic therapy for the treatment of ovarian cancer.</a> Journal of Translational Medicine. 7, 49 (2009).</li><li>Jager, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+enzymatic+and+mechanical+methods+of+dissociation+on+neural+progenitor+cells+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Effect of enzymatic and mechanical methods of dissociation on neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells.</a> Advances in Medical Sciences. 61, 78-84 (2016).</li><li>Ivanov, D. P., Grabowska, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid+arrays+for+high-throughput+single-cell+analysis+of+spatial+patterns+and+biomarker+expression+in+3D.">Spheroid arrays for high-throughput single-cell analysis of spatial patterns and biomarker expression in 3D.</a> Scientific Reports. 7, 41160 (2017).</li></ol>

3D küroid oluşumu için 384-iyi asılı damla plaka platformu herhangi bir hücre biyoloji veya kanser biyoloji Labs için kolayca uygulanan bir araçtır. Bu fizyolojik platform, fiziksel olarak ilgili 3D kültürler içinde hücre hatları, yanı sıra, primer hasta örnekleri çalışma sağlar yüksek verim ilaç taraması için izin verirken. Platform ayrıca kültür koşullarının son derece ayarlanabilir olmasını sağlar, kaplama yoğunlukları üzerinde sıkı kontrol sağlayan, hücre Co-kültür oranları...

Dünya çapındaki kanserle ilgili mortalite, 20181' de 9.800.000 ölümlere ulaştı ve gelişmiş terapinin gelişmesine ihtiyacı vurgulandı. Ne yazık ki, kanser ilaçların geliştirilmesi maliyeti artmaktadır, tek bir ilacın gelişimi ile yaklaşık 650.000.000 USD2 yeni anti-kanser ilaçları geliştirmek için gelişmiş stratejiler ihtiyacını gösteren. Kanser kök hücreleri (CSCs), artan kemoresistans ile karakterize edilir3, kendini yenilemek için kapasite, ve yeni tümörler tohum yeteneği4 tümör nüks sorumlu olduğu düşünülmektedir4, metasür5, ve kemoterapi4,6, tüm tümör malign kapasitesine katkıda ve böylece yüksek ölüm ücreti. Yumurtalı kanserde, bu hücreler periton boşlukta malign asit sıvısında zenginleştirilmiş olarak bulunur, kötü klinik sonuçlar ile ilişkili bir durumdur1. CSCs 'nin malign yetenekleri sonucunda, geleneksel kemoterapiler ile birlikte kullanılmak üzere yeni CSC hedefleme ilaçları geliştirmek için bir itme olmuştur. CSC hedefleyen ilaçların gelişimine eşlik eden çeşitli zorluklar vardır: 1) CSCs in vitro genişletilmesi ve bakımını yapma zorluk; 2) hasta örneklerinin kıtlık; 3) kültür platformunun fizyolojik alaka; ve 4) hastalar arasında ilaç hassasiyetinde heterojenlik. Bu protokol, bu zorlukların her birinin üstesinden gelebilmek için yüksek verimlilik sağlayan 3D kültür platformunun uygulanmasını özetliyor. Özellikle, bu sistem hasta türeyen ovaryalı CSCs az sayıda kullanarak hızlı ilaç taraması için izin verir, ve son derece aşağı akış analizi teknikleri için imkan sağlar. Yumurtalı kanserleri ve CSCs 'leri incelemek için ideal olan platformumuz, karmaşık 3D ortamlarda diğer kanserleri ve farklılaşmış hücre tiplerini incelemek için de değerlidir.
Kompleks 3 boyutlu (3D) modeller, kanser hücrelerinden oluşan bir 3D niş olan tümör mikroortamının (TME), kanser olmayan destek hücrelerinden ve hücre dışı matriks (ECM) proteinleri4' ün incelenmesi açısından önemlidir. Bu 3D ortam, benzersiz hücre morfolojisi, hücre hücresi ve hücre matris etkileşimleri, hücre farklılaşma, hücre göçü, hücre yoğunluğu ve difüzyon degradelerinin geleneksel 2D hücre kültürüne göre in vitro4' e kıyasla sonuçlanır. Tüm bu faktörlerin 3D kültürler içinde diferansiyel ilaç tepkisi sonuçlanan, artan ilaç direnci ve fizyolojik alaka sergiler7,8. 3D TME 'nin CSC farklılaşma ve kemoresistleşme rolü nedeniyle, fizyolojik mikroortamlarda CSC hedefleyen ilaçlar için ekran için hayati önem taşımaktadır. CSC ilaç tarama platformlarının fizyolojik alaka iyileştirilmesi hastanın spesifik ilaç taraması, ilaç gelişimi, tedavi stratejileri formülasyonu ve sonuçta klinik sonuçlar geliştirmek için potansiyele sahiptir. İlaç taraması için kullanılan platformun yüksek verim ve maliyet, zaman ve umut verici ilaçların klinik çeviri süresini en aza indirmek için aşağı akış analizi yöntemleri ile uyumlu olması aynı derecede önemlidir9.
Şu anda kompleks TME, fizin syngeneic tümör modelleri, hücre hattı tarafından türetilen xenograflar ve hasta tarafından türetilen xenograft (PDX) modelleri12gibi in vivo modellerde ilaç tarama uygulamaları için en iyi şekilde korunur, fizyolojik Koşul -ları. Ancak, bu modellerin düşük verim doğası, yanı sıra, maliyet, zaman, ve teknik beceri setleri hızlı, yüksek verimlilik ilaç tarama uygulamaları13onların yardımcı sınırları gerektirir. Bu in vivo modellerde alternatifler olarak, Hidrojeller8kullanan birçok in vitro 3D modelleri, mikroakışkan cihazlar içinde kültür veya ' organ-on-a-Chip ' cihazlar10,14ve olmayan-yapışmaz kültürler3,8 Ayrıca, maliyet, zaman ve gerekli skillset açısından giriş için düşük bariyer nedeniyle, geliştirilmiştir.
Hidrojel kültür platformları, matris bileşimi, mekanik özellikler ve matris yapısı15' te sağlanan ince kontrolde avantajlıdır; Ancak, yüksek yoğunluklu hücre kültürü inhibe edebilir14. Ayrıca, hidrojellerin gelen hasat hücreleri aşağı analiz karmaşıklığa neden olabilir, hasat yöntemlerinin potansiyel zararlı etkileri nedeniyle15. Mikrofluidik cihazlar, diğer taraftan, aynı cihaz içinde ve hücre kültürü için en az reaktif tüketimi ile fizyolojik olarak ilgili ölçeklerde çıkış algılaması için izin mikroölçekli cihazlar, azalma reaksiyon süresi, minimize atık ve hızlı difüzyon14. Bu özellikleri onları uyuşturucu toksisitesi, etkinliği ve farmakokinetiği araştırmak için umut verici platformlar olun. Ancak, verimli, ölçülebilir, reproducible ve Kullanıcı Dostu 3D hücre kültürünün zorlukları, hem de, hantal ve pahalı pompalama sistemleri yüksek verimlilik araştırma10mikrofluidik uygulamalar kısıtlı vardır. Verimli algılama kurulumları ve alanlarda potansiyel olarak zor uygulama da mikrofluidik sistemlerin yaygın benimsenmesini engelledi10.
Aksine, dönen mikserler (nutators), ultra-düşük ataşman plakaları ve asılı damlacıklar içinde olmayan-yapışmaz koşullarda oluşturulan küreler Kullanıcı tanımlı matris bileşenleri içermez. Bu metodolojiler özellikle yumurtalı kanserleri incelemek için ilgilidir, çünkü non-yapışkanlık koşullar, kürlerin periton kavite içinde büyümesini sağlayan koşulların temsilcisidir5. Bu olmayan-yapışmaz kültür yöntemleri içinde, nutator ve asılı damla küreler yüksek sıkıştırma sergiler gösterilmiştir, remodeling, ve kemoterapi Ultra düşük ataşman plakaları oluşturulan küreler karşılaştırıldığında, artan fizyolojik düşündürmektedir alaka16,17,18,19. Daha küçük iyi boyutlarda ve minimum gerekli hücre numaralarından yüksek verim taraması için artan kapasite nedeniyle, asılı damla plaklarda küroid üretimi ilaç taraması için ideal bir platformdur. Burada, 384 içinde ayarlanabilir bir 3D fizyolojik platform sunuyoruz-iyi asılı damla plakaları, bu uygulama kolay ve yüksek akış analizi için yüksek verim, yumurtalı kanser ve yumurtalı CSCs üst verimlilik ilaç taraması için ideal hale.
3D fizyolojik platformumuz, fizyolojik hücre-hücre kontakları, difüzyon degradeleri, hücre yoğunlukları ve doğal olarak üretilen ECM proteinleri dahil olmak üzere 3D kültürünün tüm avantajlarını sağlar ve bu da gerçekçi ilaç yanıtlarını16' ya katkıda bulunabilir, 17,18,19. Buna ek olarak, hasta türevi CSCs ile bu küreler oluşturarak, hasta tümör içinde bulunan heterojenlik üstesinden gelmek için, aynı anda birçok teknik çoğaltır ile ilaçlar1 hasta özel tepkiler belirlemek edebiliyoruz örnekleri20. Ayrıca, 3D kültür CSC nüfusu3,16 bakımını artırmak için gösterilmiştir ve böylece asit7zenginleştirilmiş CSC nüfus temsilcisi. Bu kolay akış analizi ile birlikte, canlılığı ve CSC oranlarında akış sitometri analizi de dahil olmak üzere CSC en iyi değerlendirme için ilaç etkinliğini hedefleme sağlar. Son olarak, bu fizyolojik platform, deney sırasında birden çok zaman noktasında görüntüleme, hücre ölümü ve proliferasyon, hücre organizasyonu ve immünhistokimya ile morfolojinin değerlendirilmesi, ELıSA ile çözünür sinyalizasyon ile uyumludur Orta, akış sitometri ile hücre fenotipleri, ve gen ifadesi aşağıdaki PCR.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>ILT25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipet</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10,000 cSt Si oil</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>63148-62-9</td>
			<td>Used to coat spheroid array mold to facilitate removal of tissue processing gels, like Histogel, from the mold.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm tissue culture dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>130182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>FL4021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X DMEM for Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X F12 for Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>ILT10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Innovative Cell Technologies Inc.</td>
			<td>1449</td>
			<td>A gentle cell detachment enzyme composed of proteolytic and collagenolytic enzymes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alamarBlue</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>DAL1025</td>
			<td>Resazurin dye used to measure viability and proliferation of cells based on their ability to reduce resazurin to resorufin, which is highly fluorescent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALDEFLUOR assay kit</td>
			<td>Stem Cell Tech</td>
			<td>1700</td>
			<td>Kit to identify stem and progenitor cells that express high levels of aldehyde dehydrogenase , an indicator of cancer stem cells. The kit is composed of ALDEFLUOR Reagent, DEAB, Hydrochloric Acid, Dimethylsulphoxide, and ALDEFLUOR Assay Buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALDEFLUOR Diethylaminobenzaldehyde (DEAB)</td>
			<td>Stem Cell Tech</td>
			<td>1705</td>
			<td>Diethylaminobenzaldehyde (DEAB) is an inhibitor of ALDH isozymes, used to determine non-specific ALDH staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Andor iXon x3 CCD Camera</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics and Antimycotics</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-isotype IgG2b</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-092-217</td>
			<td>Isotype control to quantify non-specific staining of IgG2b antibodies.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>basic Fibroblast Growth Factor</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>78003.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Lo-Dose U-100 Insulin Syringes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-79</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioTek Synergy HT Microplate Reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>7091000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133-APC</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-113-184</td>
			<td>Fluorescent antibody targeting CD133, a cancer stem cell marker.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cellSens Dimension Software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4394</td>
			<td>Platinum based chemotherapy agent that functions as an alkylating agent that disrupts DNA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal Growth Factor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>PHG0311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS XL Core Cell Imaging System</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>AME3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum - premium (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll 400</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Hausser Scientific</td>
			<td>1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>Tissue processing gel that can penetrate and hold the specimen within the gel while preventing discoloration around the specimen upon staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>PT-5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Microvascular Endothelial Cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC2543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>51500-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead viability kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3224</td>
			<td>Kit for the fluorescence based detection of live (calcein-AM) and dead cells (Ethidium Homodimer-1).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential Amino Acids</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph 7.8 Software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX81 Inverted Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX83 Research Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>7315D35</td>
			<td>Thermoplastic polymer strips that serve to limit droplet evaporation in hanging drop plates while still allowing for gas exchange.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfecta 3D 384 Well Hanging Drop Plates</td>
			<td>3D Biomatrix</td>
			<td>HDP1384-8</td>
			<td>Available through Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phalloidin AlexaFluor488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Phalloidin is a peptide to fluorescently label F-actin in fixed cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProJet 3500 HD Max</td>
			<td>3D Systems</td>
			<td>-</td>
			<td>3D printer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile DI water</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250061</td>
			<td>Azo dye used to differentiate between live and dead cells based on its ability to pass through the damaged membrane of dead cells, but not the intact membrane of live cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VisiJet M3 Crystal</td>
			<td>3D Systems</td>
			<td>-</td>
			<td>A biocompatible polymer material for 3D printing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yokogawa CSU-X1 Confocal Scanner Unit</td>
			<td>Yokogawa</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

physiologic patient derived 3d spheroids for anti-neoplastic drug screening to target cancer stem cells

Bu protokolde, biz 384 içinde tümör küreler nesil için prosedür anahat-iyi bir fizyolojik temsili mikroortamda anti-kanser terapileri yüksek verimlilik taraması için izin damlacıkları asılı. Biz hasta türetilmiş kanser kök hücre kürleri oluşumunu, yanı sıra, ilaç tedavisi sonrasında ayrıntılı analiz için bu kürlerin manipülasyon özetlemektedir. Özellikle, biz küroid morfoloji, proliferasyon, viability, ilaç toksisitesi, hücre fenotipi ve hücre yerelleştirme veri koleksiyonunu tarif. Bu protokol, 384-iyi asılı bırakma platformu kullanılarak kolayca uygulanan analiz tekniklerine odaklanarak yüksek verimlilik sağlayan ilaç taraması için idealdir. Biz yumurtalık kanser çalışmaları ve kanser kök hücre araştırma bu modelin önemini vurgulamak iken, 384-Well platformu diğer kanser türleri ve hastalık modelleri araştırma için, birçok alana platformun yarar uzanan imkan sağlar. Kişisel ilaç taramasının hızını ve kolayca uygulanan fizyolojik temsili 3D kültürlerle tarama sonuçlarının kalitesini geliştirerek, bu platform yeni terapötik ve hasta spesifik gelişimine yardımcı olmak için tahmin edilmektedir tedavi stratejileri ve böylece geniş kapsamlı klinik etkiye sahiptir.

Hücre hatları veya hasta türevi CSCs ile oluşturulan küreler, asılı damlacıklar içinde bir dizi küçük hücre numarası ile oluşturulabilir (Şekil 2a). Küreler, nadir görülen hasta örneklerinin korunması için izin veren en az 10 hücre ile güvenilir bir şekilde oluşturur. Bu kürlerin içindeki hücreler, fizyolojik hücre hücresi kontakları ve difüzyon oranlarına izin vererek 3 boyutta diğer hücrelerle çevrilidir. Kürlerin içindeki tümör hücreleri, kürleri...

Watch this Scientific Journal Video about Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells at JoVE.com

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

Fizyolojik hasta, kanser kök hücrelerini hedef alan anti-neoplastik Ilaç taraması için 3B kürler türetilmiştir

Bu protokol, ilacın belirlenmesi için, hastanın türetildiği kürlerin oluşumunu, proliferasyonun ölçülmesi, sitotoksisite testi, akış sitometri, immünofluoresesans boyama ve konfoksel görüntüleme gibi aşağı akış analizini açıklar. anti-neoplastik terapötik olarak adayların potansiyeli. Bu protokol her hasta ve hastalığın aşaması için spesifik ilaçların tanımlanması ile hassas ilacı destekler.

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Protokolümüz 3D hücre kültürü için basit bir yöntem sağlar ve downstream analizi için son derece münasiptir. Bu, heterojen hasta örneklerinin ve bunların spesifik ilaç yanıtlarının değerlendirilmesini kolaylaştırır. Bu tekniğin avantajı, küresel lerin küçük hücre sayılarından oluşabilmesi, hem az sayıda birincil numunenin korunmasına hem de hastaya özgü ilaç yanıtları için yüksek iş elde taramasına olanak sağlamasıdır.Asılı damla modeli 3D ilaç difüzyonu ile fizyolojik bir ortam oluşturur ve tümör aşamasına karşılık gelen yanıtlar yapar. Bu hedeflenen tedaviler ve hastaya özel tedavilerin geliştirilmesine olanak sağlar. Bu yöntem yumurtalık kanseri, heterojenlik ve kemo direnci gelişimi için idealdir.Ancak, aynı zamanda diğer kanserler ve ilaca dirençli hücre popülasyonları incelemek için kullanılabilir. Spheroidleri kaplamayaparken, pipet hassas hacimleri önemlidir. Bu küresel ler arasında tutarlılık sağlar.Spheroids ve ilgili damlacıkları doğal olarak kırılgan ve kolayca uygun kullanım olmadan kaybolur, bu nedenle nasıl uygun plaka, korumak ve asılı bir damla plaka analiz gösterecektir. Bu prosedürü gösteren Michael Bregenzer, bizim laboratuvardan bir lisansüstü öğrenci olacaktır. Otoklav deiyonize su dört ila beş mililitre ile altı kuyu plaka her kuyu doldurarak ve kapak ve plaka nın alt arasında asılı damla plaka sandviç ile başlayın.Nemli bir ortam sağlamak ve buharlaşmayı en aza indirmek için asılı bırakma plakasının kenarına 800 ila 1000 mikrolitre su ekleyin. Daha sonra, tripsin ile ayırarak 2D yetiştirilen hücreleri toplamak ve daha sonra FBS içeren orta altı veya sekiz mililitre ekleyerek. Hücreleri 10 mililitre serolojik pipetle aspire edin ve 15 mililitrelik konik bir tüpe yatırın.Hücreleri saymak için bir hemositometre kullanın. El yazması talimatlara göre hücre süspansiyonu hazırlayın ve homojen dağılımı sağlamak için pipetle hafifçe karıştırın. Pipetin ucunu kuyudaki 45 derecelik bir açıyla ve pipet20 mikrolitre süspansiyonu her bir askı damlasına yerleştirin.Altı kuyulu plakanın kapağını tekrar üzerine yerleştirin ve kenarları kapatmak için esnek bir termoplastik şerit kullanın. Standart bir karbondioksit nemlendirilmiş kuvöz de kuluçka ve her küresel içeren kuyu hücre kültürü orta iki ila üç mikrolitre ekleyerek her iki ila üç günde bir asılı damla beslemek. Hücrelerin çoğalmasını ve canlılığını ölçmek için, prolifes analizi için belirlenen kuyulara iki mikrolitre filtrelenmiş resazurin bazlı çözelti ekleyin ve el yazması yönüne göre kuluçkaya yatırın.Kuluçka döneminden sonra, bir biyogüvenlik kabininde asılı damla sandviç açın ve plaka okuyucu hala yerinde kapağı ile 384 iyi plaka getirmek. Plaka okuyucu yerleştirin ve plaka okuyun. Denemeyi açılır pencereye kaydedin ve verileri elektronik tabloya aktarın.Tabağı altı kuyulu üsse geri getirin ve kuvöze yerleştirin. Gün boyunca tüm zaman puanları okunduktan sonra, kuluçkadan önce plakayı yeniden kapatın. Akış sitometri analizi için sferoidler hazırlamak için, her kuyudan toplamak ve ayrıştırma için 15 mililitrelik konik tüp içine yatırmak için 1000 mikrolitrelik pipet kullanın.Aliquot hücre süspansiyon beş mikro santrifüj tüpler ilerler, böylece her tüp en az 50,000 hücre içerir. Tüpleri 400 kez G'de mikrosantrifüjde beş dakika süreyle santrifüj edin, sonra süpernatantı aspire edin ve 100 mikrolitre Aldefluor tamponunda peletleri yeniden askıya alın. Tüpleri el yazması talimatlara göre etiketle.APC ISO tüpüne 0,5 mikrolitre APC isotip antikor ve ALDH CD133 tüpüne bir mikrolitre CD133 antikor ekleyin. Daha sonra DEAB tüpüne beş mikrolitre DEAB reaktifi ve 0,5 mikrolitre ALDH ve ALDH CD133 tüpüne bir mikrolitre ALDH ekleyin. Girdap birkaç saniye için tüm tüpler ve 45 dakika boyunca 37 santigrat derece onları kuluçka.Kuluçkadan sonra, girdap tüm tüpleri tekrar ve santrifüj 400 kez G beş dakika için. Etiket FACS tüpler el yazması talimatlara göre ve buz ile yalıtımlı köpük konteyner doldurun. Mikrosantrifüj tüplerinden süpernatant aspire.Daha sonra 400 mikrolitre FACS tamponundaki lekesiz kontrolü ve 400 mikrolitre FACS DAPI tamponundaki hücrelerin geri kalanını yeniden askıya alın. Tüpleri bir akış sitometreüzerinde analiz edilene kadar buzun üzerine yerleştirin. Akış sitometresinden gelen verileri analiz etmek için FlowJo'yu kullanın.Lekelenmemiş dosyayı çift tıklatın ve Y eksenini yan dağılım yüksekliğine veya SSCH'e ve X eksenini ileri dağılım yüksekliğine veya FSCH'ye ayarlayın. Ölçeği ayarlamak ve farklı hücre popülasyonları arasındaki ayrımı en üst düzeye çıkarmak için her eksenin yanındaki T düğmesini tıklatın. Ardından, Çokgen Gating düğmesine tıklayın, hücre popülasyonu etrafında çokgen kapı çizin ve popülasyon Hücreleri etiketleyin.Çalışma alanında hücrenin popülasyonuna çift tıklayın ve ardından FSC eksenini FSC genişliğine, SSC eksenini de FSC yüksekliğine değiştirin. Yalnızca tüm Y eksenini kapsayan en yoğun hücre popülasyonunun etrafına dikdörtgen çizmek için dikdörtgen kapısını seçin. Bu kapıyı tek hücreolarak etiketle.Ardından, iç içe geçmiş Tek Hücreler kapısındabu Hücreleri sağ tıklatın ve kopyalayın ve çalışma alanındaki her örneğin altına yapıştırın. Bu örnek tüpten tek hücre popülasyonu görüntülemek için DAPI örneğinin altında iç içe olan Tek Hücreler kapısını çift tıklatın. FSC eksen kanalını DAPI alan kanalına değiştirin ve SSC eksen kanalını histogramla değiştirin.DAPI ekseninin yanındaki T düğmesine tıklayın ve ölçeği ayarlamak ve DAPI pozitif ve DAPI negatif zirveleri arasındaki ayrımı en üst düzeye çıkarmak için Ekseni Özelleştir'i tıklatın. Açılan pencerede Uygula'yı tıklatın ve Aralık Kapısı düğmesini seçin. DAPI negatif tepe üzerine yayın ve bu kapı Live Cells etiket.Canlı Hücreler kapısını kopyalayın ve her tüpteki canlı hücrelerin aynı kısmını seçmek için APC ISO DEAB ve ALDH CD133 tüpleri altında Tek Hücreler kapısının altına yapıştırın. Ardından, APC ISO örnek dosyasının altında yuvalanmış Canlı Hücreler popülasyonuna çift tıklayın ve X eksenini ALDH alanına, Y eksenini de APC alanına geçin. Çeyreğin kapağını uygulayın ve nüfusun yaklaşık %0,5'inin çizim penceresinin sol üst kısmında olması gibi kapının kesişimini ayarlayın.Daha sonra kadranda istedikleri gibi isim ver, sonra deab dosyasının altında yuvalanmış canlı hücre popülasyonuna çeyrek kapıları kopyalayıp yapıştırın ve hücre popülasyonunun yaklaşık %0,15'inin ALDH pozitif kadranda yaşaması için dikey çizgiyi ayarlayın. Son olarak, kopyalayın ve ALDH CD133 dosyaları Live Cells nüfus ve değerlendirme kanser kök hücre oranları ALDH ve CD133 oranlarına dayalı çeyrek kapıları yapıştırın. Bu protokol, hasta kaynaklı kanser kök hücrelerinin yüksek iş analizi için kullanılabilir.Her biri 10 kadar az hücre güvenilir küreseloidler oluşturabilir ve hücreler çoğaldınkça, küresellerin boyutları genişler. Proliferasyon kapasitesi resazurin bazlı floresan tetkik ile kolayca ölçülebilir. İlaçların küresel morfoloji üzerindeki etkisi faz kontrastgörüntüleme ile görüntülenebilir ve tedavi edilmeyen ve tedavi edilmeyen hücrelerde resazurin floresanskarşılaştırılarak ölçülebilir.Hücre ölümü Calcein-AM ve ethidium homodimer I'in küresel olarak eklenmesiyle doğrulanabilir ve ardından konfokal mikroskopta görüntüleme yapılabilir. Son olarak, sferoidler hasat edilebilir ve akış sitometrisi ile analiz için tek bir hücre süspansiyon içine dağıtılabilir, hangi mümkün belirli hücre popülasyonları üzerinde farklı ilaç tedavileri etkinliğini ayırt etmek için yapar. Damlacık kaybını, orta buharlaşmayı ve küresel boyuttaki değişimi önlemek için plakalarınızı dikkatli bir şekilde, pipetle hassas bir şekilde işlemek ve asılı bırakma plakalarınızı tamamen mühürlemek önemlidir.Gen ekspresyonundaki değişiklikleri ve ilaç tedavisine bağlı çözünür sinyalizasyondaki değişiklikleri değerlendirmek için, tek hücreli RNA dizilimi ve enzime bağlı immünosorbent tahlilleri, terapötik lerin gelişimini kolaylaştırmak için kullanılabilir. Bu teknik, küçük biyopsilerin yüksek iş yapma ilaç taraması yoluyla kemoterapi direncinin yanı sıra hastalar arası heterojenliği de araştırmak için onkoloji, hassas tıp ve ilaç geliştirme araştırmalarına olanak sağlar. Bu protokolü gerçekleştirirken, tüm standart kişisel koruyucu ekipmanları taktığından emin olun.Eldivenler, güvenlik gözlükleri, laboratuvar önlükleri, pantolonlar ve yakın ayakkabılar dahil.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Yüksek işlem hacmi üç boyutlu tümör pulcuklarının nesil uyuşturucu taraması

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Kanser Araştırmaları

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Li-Fraumeni sendromu hasta kaynaklı indüklenmiş Pluripotent kök hücreler kullanılarak osteosarkom modelleme

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Zebrabalığında Primer Hasta Kaynaklı Tümör Xenograftların İlaç Taraması

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

Hasta Kaynaklı Tümör, Hastalarda İlaç Direncini Tahmin Etmek İçin "Canlı" Preklinik Bir Platform Olarak Eksplantlar

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Hasta Kaynaklı Glioma Kök Hücreleri Kullanarak GBM için Potansiyel Kombinasyon Tedavisini Belirlemek için Hızlı Tarama İş Akışı

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

Exploring Mitochondrial Energy Metabolism of Single 3D Microtissue Spheroids Using Extracellular Flux Analysis

Hücre Dışı Akı Analizi Kullanarak Tek 3D Mikrodoku Sferoidlerinin Mitokondriyal Enerji Metabolizmasını Keşfetmek

Three-dimensional (3D) cellular aggregates, termed spheroids, have become the forefront of in vitro cell culture in recent years. In contrast to culturing ...

Pooled shRNA Library Screening to Identify Factors that Modulate a Drug Resistance Phenotype

Bir İlaç Direnci Fenotipini Modüle Eden Faktörleri Tanımlamak için Havuzlanmış shRNA Kütüphanesi Taraması

Understanding clinically relevant driver mechanisms of acquired chemo-resistance is crucial for elucidating ways to circumvent resistance and improve ...

Establishing 3-Dimensional Spheroids from Patient-Derived Tumor Samples and Evaluating their Sensitivity to Drugs

Hasta Kaynaklı Tümör Örneklerinden 3 Boyutlu Sferoidlerin Oluşturulması ve İlaçlara Duyarlılıklarının Değerlendirilmesi

Despite remarkable advances in understanding tumor biology, the vast majority of oncology drug candidates entering clinical trials fail, often due to a ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Farelerde Hasta Kaynaklı Kanser Hücrelerinin Ortotopik İmplantasyonu, İleri Kolorektal Kanseri Özetliyor

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...

Generation of 3D Tumor Spheroids for Drug Evaluation Studies

İlaç Değerlendirme Çalışmaları için 3D Tümör Sferoidlerinin Üretimi

In recent decades, in addition to monolayer-cultured cells, three-dimensional tumor spheroids have been developed as a potentially powerful tool for the ...