Name: in vivo forward genetic screen to identify novel neuroprotective genes in drosophila melanogaster
Uploaded: 2019-07-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster at JoVE.com

نحن ممتنون بشكل خاص للدكتور باري غانتزكي، في مختبر الذي تم إجراء الشاشة الوراثية، مما يسمح بتحديد وتوصيف brat كجين محصن. نشكر الدكتور ستيفن روبينو على التكرم بتوفير مجموعة من الذباب ENU-mutagenized المستخدمة في الشاشة الوراثية المعروضة في هذه المقالة. نشكر أعضاء مختبر غانيتزكي، والدكتورغريس بوخوف فالك وديفيد واسارمان على المناقشات المفيدة طوال مدة هذا المشروع، لينغ لينغ هو وبوب كريبر على المساعدة التقنية، والدكتور آكي إيكيدا على استخدام مرفقه الصغير في جامعة ويسكونسن والدكتور كيم لاكي ومرفق التحليل البصري في جامعة ألاباما.

1. إعداد وشيخوخة الذباب
<ol><li>الحصول على أو توليد6 مجموعة من المسوخ Drosophila التي سيتم استخدامها للشاشة الوراثية. هنا، يتم استخدام خطوط ENU-mutagenized التي تم تعيينها إلى الكروموسوم الثاني ومتوازنة على CyO.</li>
	<li>تضخيم خطوط النمط الجيني التجريبي في حاضنة تعيين في 25 درجة مئوية، 12...

<ol>
	<li>Frade, J. M., Ovejero-Benito, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+cell+cycle:+the+neuron+itself+and+its+circumstances.">Neuronal cell cycle: the neuron itself and its circumstances.</a> Cell Cycle. 14 (5), 712-720 (2015).</li><li>Aranda-Anzaldo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+post-mitotic+state+in+neurons+correlates+with+a+stable+nuclear+higher-order+structure.">The post-mitotic state in neurons correlates with a stable nuclear higher-order structure.</a> Communicative &amp; Integrative Biology. 5 (2), 134-139 (2012).</li><li>Haelterman, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+identification+of+chemically+induced+mutations+in+Drosophila+melanogaster.">Large-scale identification of chemically induced mutations in Drosophila melanogaster.</a> Genome Res. 24 (10), 1707-1718 (2014).</li><li>Moresco, E. M., Li, X., Beutler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Going+forward+with+genetics:+recent+technological+advances+and+forward+genetics+in+mice.">Going forward with genetics: recent technological advances and forward genetics in mice.</a> The American Journal of Pathology. 182 (5), 1462-1473 (2013).</li><li>St Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+and+design+of+genetic+screens:+Drosophila+melanogaster.">The art and design of genetic screens: Drosophila melanogaster.</a> Nature Reviews Genetics. 3 (3), 176-188 (2002).</li><li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics. , (2004).</li><li>Reiter, L. T., Potocki, L., Chien, S., Gribskov, M., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+analysis+of+human+disease-associated+gene+sequences+in+Drosophila+melanogaster.">A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster.</a> Genome Research. 11 (6), 1114-1125 (2001).</li><li>Rubin, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+genomics+of+the+eukaryotes.">Comparative genomics of the eukaryotes.</a> Science. 287 (5461), 2204-2215 (2000).</li><li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+assay+Drosophila+behavior.">Methods to assay Drosophila behavior.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), (2012).</li><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+locomotor,+learning,+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration.">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), (2011).</li><li>Karres, J. S., Hilgers, V., Carrera, I., Treisman, J., Cohen, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conserved+microRNA+miR-8+tunes+atrophin+levels+to+prevent+neurodegeneration+in+Drosophila.">The conserved microRNA miR-8 tunes atrophin levels to prevent neurodegeneration in Drosophila.</a> Cell. 131 (1), 136-145 (2007).</li><li>Helfrich, C., Engelmann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian-Rhythm+of+the+Locomotor-Activity+in+Drosophila-Melanogaster+and+Its+Mutants+Sine+Oculis+and+Small+Optic+Lobes.">Circadian-Rhythm of the Locomotor-Activity in Drosophila-Melanogaster and Its Mutants Sine Oculis and Small Optic Lobes.</a> Physiological Entomology. 8 (3), 257-272 (1983).</li><li>R Development Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A language and environment for statistical computing. , (2008).</li><li>Bokel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMS+screens+:+from+mutagenesis+to+screening+and+mapping.">EMS screens : from mutagenesis to screening and mapping.</a> Methods in Molecular Bioogyl. 420, 119-138 (2008).</li><li>Lindsley, D. L., Zimm, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Genome of Drosophila Melanogaster. , (1992).</li><li>Cook, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+generation+of+chromosomal+deletions+to+provide+extensive+coverage+and+subdivision+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">The generation of chromosomal deletions to provide extensive coverage and subdivision of the Drosophila melanogaster genome.</a> Genome Biology. 13 (3), R21 (2012).</li><li>Loewen, C., Boekhoff-Falk, G., Ganetzky, B., Chtarbanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Mutation+in+Brain+Tumor+Causes+Both+Neural+Over-Proliferation+and+Neurodegeneration+in+Adult+Drosophila.">A Novel Mutation in Brain Tumor Causes Both Neural Over-Proliferation and Neurodegeneration in Adult Drosophila.</a> Genes Genomes Genetics G3 (Bethesda). 8 (10), 3331-3346 (2018).</li><li>Gloor, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+repressors+of+P+element+mobility.">Type I repressors of P element mobility.</a> Genetics. 135 (1), 81-95 (1993).</li><li>Komori, H., Xiao, Q., McCartney, B. M., Lee, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+specifies+intermediate+progenitor+cell+identity+by+attenuating+beta-catenin/Armadillo+activity.">Brain tumor specifies intermediate progenitor cell identity by attenuating beta-catenin/Armadillo activity.</a> Development. 141 (1), 51-62 (2014).</li><li>Kretzschmar, D., Hasan, G., Sharma, S., Heisenberg, M., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+swiss+cheese+mutant+causes+glial+hyperwrapping+and+brain+degeneration+in+Drosophila.">The swiss cheese mutant causes glial hyperwrapping and brain degeneration in Drosophila.</a> The Journal of Neuroscience. 17 (19), 7425-7432 (1997).</li><li>Kang, K. H., Reichert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+neural+stem+cell+self-renewal+and+differentiation+in+Drosophila.">Control of neural stem cell self-renewal and differentiation in Drosophila.</a> Cell and Tissue Research. 359 (1), 33-45 (2015).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Gene-Expression+as+a+Means+of+Altering+Cell+Fates+and+Generating+Dominant+Phenotypes.">Targeted Gene-Expression as a Means of Altering Cell Fates and Generating Dominant Phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Loewen, C. A., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mito-Nuclear+Interactions+Affecting+Lifespan+and+Neurodegeneration+in+a+Drosophila+Model+of+Leigh+Syndrome.">Mito-Nuclear Interactions Affecting Lifespan and Neurodegeneration in a Drosophila Model of Leigh Syndrome.</a> Genetics. 208 (4), 1535-1552 (2018).</li><li>Cao, Y., Chtarbanova, S., Petersen, A. J., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dnr1+mutations+cause+neurodegeneration+in+Drosophila+by+activating+the+innate+immune+response+in+the+brain.">Dnr1 mutations cause neurodegeneration in Drosophila by activating the innate immune response in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (19), E1752-E1760 (2013).</li><li>Lessing, D., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+the+brain:+insight+into+human+neurodegeneration+from+Drosophila+melanogaster+mutants.">Maintaining the brain: insight into human neurodegeneration from Drosophila melanogaster mutants.</a> Nature Reviews Genetics. 10 (6), 359-370 (2009).</li><li>Peng, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+Polo+ameliorates+APP-induced+Alzheimer's+disease-like+symptoms+in+Drosophila.">Loss of Polo ameliorates APP-induced Alzheimer's disease-like symptoms in Drosophila.</a> Scientific Reports. 5, 16816 (2015).</li><li>Venken, K. J., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+mutagens,+transposons,+and+transgenes+to+interrogate+gene+function+in+Drosophila+melanogaster.">Chemical mutagens, transposons, and transgenes to interrogate gene function in Drosophila melanogaster.</a> Methods. 68 (1), 15-28 (2014).</li><li>Gonzalez, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Genome+Sequencing+and+a+New+Bioinformatics+Platform+Allow+for+Rapid+Gene+Identification+in+D.+melanogaster+EMS+Screens.">Whole Genome Sequencing and a New Bioinformatics Platform Allow for Rapid Gene Identification in D. melanogaster EMS Screens.</a> Biology (Basel). 1 (3), 766-777 (2012).</li><li>Palladino, M. J., Hadley, T. J., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-sensitive+paralytic+mutants+are+enriched+for+those+causing+neurodegeneration+in+drosophila.">Temperature-sensitive paralytic mutants are enriched for those causing neurodegeneration in drosophila.</a> Genetics. 161 (3), 1197-1208 (2002).</li></ol>

وكانت الشاشات الوراثية الأمامية في دروسوفيلا نهجا فعالا لتحديد الجينات المشاركة في العمليات البيولوجية المختلفة، بما في ذلك الحماية العصبية المعتمدة على العمر5،23،24، 25.باستخدام هذه الاستراتيجية، كنا ناجحين في ت?...

الخلايا العصبية هي في معظمها بعد mitotic وغير قادرة على تقسيم1،2. في معظم الحيوانات، توجد آليات محصنة للحفاظ على هذه الخلايا طوال عمر الكائن الحي، وخاصة في سن الشيخوخة عندما تكون الخلايا العصبية الأكثر عرضة للتلف. ويمكن تحديد الجينات الكامنة وراء هذه الآليات في المسوخ التي تظهر تنكس الأعصاب، وهو مؤشر فينوتيبيك لفقدان الحماية العصبية، وذلك باستخدام بروتوكول وراثي متقدم. الشاشات الوراثية الأمامية التي تستخدم الطفرات الكيميائية مثل إيثيل ميثانسولفونات (EMS) أو N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) مفيدة بشكل خاص بسبب الطفرات العشوائية التي تحفزها، مما يؤدي إلى نهج غير متحيز بطبيعته ألقى الضوء على العديد من الوظائف الجينية في الكائنات الحية نموذج eukaryotic3،4،5 (على النقيض من ذلك ، يخلق موت التناضح بالأشعة السينية فواصل الحمض النووي ويمكن أن يؤدي إلى إعادة ترتيب بدلا من الطفرات نقطة6).
ذبابة الفاكهة المشتركة Drosophila melanogaster هو موضوع مثالي لهذه الشاشات نظرا لجودته العالية، تسلسل الجينوم المشروح جيدا، تاريخها الطويل ككائن حي نموذجي مع أدوات وراثية متطورة للغاية، والأهم من ذلك، تقاسمها تاريخ تطوري مع البشر7,8. والعامل المحدد في انطباق هذا البروتوكول هو الفتك المبكر الناجم عن الجينات المتحولة، التيمن شأنها أن تمنع الاختبار في سن التاسعة من العمر . ومع ذلك، بالنسبة للطفرات غير المميتة، فإن اختبار التسلق، الذي يستفيد من التجواق الجغرافي ة السلبية، هو طريقة بسيطة، وإن كانت واسعة النطاق، لتحديد الأداء الحركي الضعيف10. لإظهار ما يكفي من التفاعل الحركي، يعتمد الذباب على الوظائف العصبية لتحديد الاتجاه، والشعور بموقفه، وتنسيق الحركة. عدم قدرة الذباب على الصعود بما فيه الكفاية استجابة للمحفزات يمكن أن تشير بالتالي إلى عيوب عصبية11. بمجرد تحديد النمط الظاهري التسلق المعيبة معينة، يمكن استخدام مزيد من الاختبارات باستخدام شاشة ثانوية مثل التحليل النسيجي لأنسجة الدماغ، لتحديد التنكّن العصبي في الذباب التسلق المعيبة. ويمكن بعد ذلك استخدام رسم خرائط الجينات اللاحقة للكشف عن المنطقة الجينية على الكروموسوم الذي يحمل الجين المعيب الذي يحمي الأعصاب. لتضييق المنطقة الكروموسومية ذات الأهمية، يمكن إجراء رسم الخرائط الميوتيكية باستخدام خطوط ذبابة متحولة تحمل جينات العلامات المهيمنة مع مواقع معروفة على الكروموسوم. تعمل جينات العلامة كنقطة مرجعية للطفرة حيث يوفر تردد إعادة التركيب بين موضعين مسافة قابلة للقياس يمكن استخدامها لرسم الموقع التقريبي للجين. وأخيرا، عبور خطوط متحولة مع خطوط تحمل أوجه القصور المتوازنة على منطقة الكروموسومات التي تم تعيينها بشكل مثيوتي يخلق اختبار تكملة التي يمكن التحقق من جين الفائدة إذا تم التعبير عن النمط الظاهري المعروف5. يمكن تقييم تسلسلات النيوكليوتيدات المتعددة الأشكال في الجين المحدد، مما قد يؤدي إلى تغيير تسلسل الأحماض الأمينية، من خلال تسلسل الجين ومقارنته بتسلسل جينوم دروسوفيلا. ويمكن أن يشمل التوصيف اللاحق لجين الاهتمام اختبار الأليلات اتوّه اتّصال اتّصال إضافيّة، وتجارب إنقاذ الطفرة، وفحص الأنماط الظاهرية الإضافية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:743px;" width="743">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:743px;">Major equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Fume hood for histology</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Light Microscope</td>
			<td style="width:195px;">Nikon</td>
			<td style="width:123px;">Eclipe E100</td>
			<td style="width:171px;">Preferred objective for imaging is X20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Imaging software</td>
			<td style="width:195px;">Nikon</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Microscope Camera</td>
			<td style="width:195px;">Nikon</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thermal cycler</td>
			<td style="width:195px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:743px;">Fly pushing and climbing assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">VWR&#174; Drosophila Vial, Narrow</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">75813-160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">VWR&#174; General-Purpose Laboratory Labeling Tape</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">89097-912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Standard mouse pad</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Stereoscope</td>
			<td style="width:195px;">Motic</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Model SMZ-168</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">CO2 anesthesia station (Blowgun, foot valve, Ultimate Flypad)</td>
			<td style="width:195px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:123px;">54-104, 59-121, 59-172</td>
			<td>Doesn&#8217;t iinclude CO2 tank</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Fine-Tip Brushes</td>
			<td style="width:195px;">SOLO HORTON BRUSHES, INC.</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Drosophila Incubator</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">89510-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:743px;">Gene mapping</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">CantonS</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">w1118</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>5905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">yw&#160;</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td align="right">6599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">Drosophila line used for recombination mapping</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td style="width:123px;">3227</td>
			<td style="width:171px;">Genotype: wg[Sp-1] J[1] L[2] Pin[1]/CyO, P{ry[+t7.2]=ftz/lacB}E3</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">CyO/sno[Sco]&#160;</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td style="width:123px;">2555</td>
			<td style="width:171px;">Drosophila balancer line used for recombination mapping</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Deficiency Kit for chromosome 2L</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td style="width:123px;">DK2L</td>
			<td>Cook et al., 2012</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Histology analysis</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Ethanol, (100%)</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fischer Scientific</td>
			<td style="width:123px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Chloroform</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fischer Scientific</td>
			<td style="width:123px;">C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Glacial Acetic Acid</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fischer Scientific</td>
			<td style="width:123px;">A38-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Fisherbrand&#8482;&#160;Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fischer Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Histochoice clearing agent 1X</td>
			<td style="width:195px;">VWR Life Sciences</td>
			<td style="width:123px;">97060-934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Harris Hematoxylin</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">95057-858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Eosin</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Thermo Scientific&#8482;&#160;Richard-Allan Scientific&#8482; Mounting Medium</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Scientific&#8482; 4112</td>
			<td style="width:123px;">22-110-610</td>
			<td>CyO/sna[Sco]</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">Unifrost Poly-L-Lysine microscope slides, 75x25x1mm, EverMark Select Plus</td>
			<td style="width:195px;">Azer Scientific</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Fisherbrand&#8482;&#160;Cover Glasses: Rectangles</td>
			<td style="width:195px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">12-545M</td>
			<td>Dimensions: 24x60 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Traceable timer</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Slide Warmer</td>
			<td style="width:195px;">Barnstead International</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>model no. 26025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Slide tray and racks</td>
			<td style="width:195px;">DWK Life Sciences</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Rack to hold 20 slides</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Fisherbrand&#8482;&#160;General-Purpose Extra-Long Forceps</td>
			<td style="width:195px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">10-316A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Kimwipes&#8482;</td>
			<td style="width:195px;">Kimberly-Clark&#8482; Professional&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">6 inch Puritan applicators</td>
			<td style="width:195px;">Hardwood Products Company, Guilford, Maine</td>
			<td style="width:123px;">807-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">VWR&#174; Razor Blades</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Tupperware or glass containers for histology liquids</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>16 + 1 for running water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">High Profile Coated Microtome Blades</td>
			<td style="width:195px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">95057-834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Corning&#8482;&#160;Round Ice Bucket with Lid, 4L</td>
			<td style="width:195px;">Corning&#8482;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Beaker</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Or other container for ice water and cassettes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Tissue Bath</td>
			<td style="width:195px;">Precision Scientific Company</td>
			<td style="width:123px;">66630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Microtome</td>
			<td style="width:195px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Molecular analysis</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Wizard&#174; SV Gel and PCR Clean-Up System</td>
			<td style="width:195px;">Promega</td>
			<td style="width:123px;">A9282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Ex Taq DNA polymerase</td>
			<td style="width:195px;">TaKaRa</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>5 U/&#956;l</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Invitrogen&#8482;&#160;SYBR&#8482; Safe&#8482; DNA Gel Stain&#160;</td>
			<td style="width:195px;">&#160;Invitrogen&#8482;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">UltraPure&#8482; Agarose</td>
			<td style="width:195px;">&#160;Invitrogen&#8482;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">1 Kb Plus DNA Ladder</td>
			<td style="width:195px;">&#160;Invitrogen&#8482;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">ApE-A plasmid Editor software</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;">Available for free download</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Statistical analysis</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">R software package</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Further analysis</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">y[1] w[*]; wg[Sp-1]/CyO; Dr[1]/TM3, Sb[1]</td>
			<td style="width:195px;">Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td style="width:123px;">59967</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo forward genetic screen to identify novel neuroprotective genes in drosophila melanogaster

هناك الكثير لفهم حول ظهور وتطور الأمراض العصبية، بما في ذلك الجينات الكامنة المسؤولة. الفحص الجيني الأمامي باستخدام الطفرات الكيميائية هو استراتيجية مفيدة لرسم خرائط الأنماط الظاهرية المتحولة للجينات بين دروسوفيلا والكائنات الحية النموذجية الأخرى التي تشترك في المسارات الخلوية المحفوظة مع البشر. إذا لم يكن الجين المتحول الذي يهمه الأمر قاتلاً في المراحل التنموية المبكرة للذباب، يمكن إجراء فحص للتسلق للكشف عن المؤشرات الفينوتية لانخفاض أداء الدماغ، مثل انخفاض معدلات التسلق. في وقت لاحق، يمكن إجراء التحليل النسيجي الثانوي لأنسجة الدماغ من أجل التحقق من وظيفة محصنة للجين عن طريق تسجيل الأنماط الظاهرية للتكوين العصبي. وتشمل استراتيجيات رسم خرائط الجينات رسم الخرائط المتجانسة والقصور التي تعتمد على هذه الاختبارات نفسها يمكن أن يتبعها تسلسل الحمض النووي لتحديد التغيرات النيوكليوتيدات المحتملة في جين الفائدة.

في هذا aerticle، ونحن نقدم الخطوات المستخدمة لتحديد ورم الدماغ الجينات (شقي) كما تلعب دورا في الحفاظ على سلامة الخلايا العصبية (على سبيل المثال، الحماية العصبية) في الذباب الكبار17; منهجية يمكن استخدامها لتحديد الجينات المشاركة في الحماية العصبية. استخ?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster at JoVE.com

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

في فيفو إلى الأمام الشاشة الوراثية لتحديد الجينات العصبية الجديدة في دروسوفيلا melanogaster

نقدم بروتوكول باستخدام نهج وراثي إلى الأمام لفحص المتحولين الذين يظهرون التنكب العصبي في دروسوفيلا melanogaster. وهو يتضمن اختبار التسلق، وتحليل الأنسجة، ورسم خرائط الجينات وتسلسل الحمض النووي لتحديد الجينات الجديدة المتعلقة بعملية الحماية العصبية في نهاية المطاف.

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic ...

الهدف الرئيسي لهذا البروتوكول هو استخدام قوة علم الوراثة إلى الأمام لتحديد الجينات التي عندما dysregulated يؤدي إلى تنكس عصبي. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر نهجاً غير متحيز ومباشر لتحديد الجينات العصبية التي قد يكون من الأصعب تنفيذها في نماذج الثدييات. يمكن استخدام هذه التقنية لتحديد الجينات الجديدة المتورطة في عملية التنكس العصبي الذي يرتبط بالعديد من حالات المرض مثل مرض الزهايمر ومرض باركنسون.بالإضافة إلى تحديد الجينات العصبية، يمكن استخدام النهج الوراثي الأمامي لاكتشاف الجينات المشاركة في العمليات البيولوجية الأخرى مثل وظيفة الخلايا العصبية وانتقالها. للبدء ، وجمع الذباب homozygous من خطوط تنتمي إلى مجموعة من المطفرة ENU من المسوخ Drosophila تعيين إلى الكروموسوم الثاني. اقلب الذباب الذي يتراوح عمره بين 10 و12 يومًا في غرفة الاختبار دون تخدير سطر واحد في كل مرة والسماح لهم بالتعافي لمدة خمس دقائق.مع علامة خط خمسة سنتيمتر أسفل، اضغط بالقوة على الغرفة ثلاث مرات على لوحة الماوس وضعت على سطح صلب بحيث يبدأ كل الذباب المقايسة في الجزء السفلي. مراقبة الحركة الطيران على مدى فترة 10 ثانية. تسجيل عدد الذباب التي تصل أو تمر خط خمسة سنتيمترات في هذا الوقت، فضلا عن العدد الإجمالي للذباب اختبارها.انتظر دقيقة واحدة قبل البدء في محاكمة ثانية. كرر إجراء نسخ متماثلة ثلاثة التجريبية كحد أدنى لكل سطر. بعد تخدير الذباب على وسادة ثاني أكسيد الكربون ، قطع رؤساء الذباب مع شفرة جراحية واستخدام فرشاة الطلاء لوضعها بلطف في ملليلتر واحد من تثبيت كارنوي في أنبوب microcentrifuge 1.5 ملليلتر.ثم تخزين الأنبوب في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، تأكد من غرقت رؤساء في الحل المثبت. تحت غطاء أبخرة، استخدم ماصة P1000 لاستبدال الحل المثبت بميليلتر واحد من 70٪ الإيثانول والحفاظ على العينات عند أربع درجات مئوية للتحليل في المستقبل.باستخدام ماصة باستور، قم بنقل الرؤوس الثابتة إلى أشرطة ميكروبيوبسي وإغلاق الكاسيتات. إرسال أشرطة الكاسيت إلى منشأة علم النسيج لمعالجتها أو وضعها في آلة معالجة الأنسجة الآلية إذا كانت متوفرة في الموقع. تشغيل البرنامج لتجفيف، واضحة والتسلل إلى رؤساء مع البارافين.ثم نقل الكاسيت في محطة التضمين البارافين مع البارافين ساخنة في 60 درجة مئوية ووضع قوالب قاعدة معدنية التي تناسب الكاسيت على محطة ساخنة. استخدام ملقط غرامة لتوجيه رؤساء بحيث يواجهون أعلى في القالب قاعدة. التوجه السليم للرأس أمر بالغ الأهمية لتحليل الأنسجة.بعد تصلب, تقليم كل كتلة البارافين لتقليل السطح الذي سيتم تقسيمه. قطع خمسة أقسام ميكرومتر من كل كتلة على microtome. بعد ذلك، ضع شرائط البارافين المقسمة في حمام مائي ساخن عند درجة حرارة 35 درجة مئوية لمدة أقصاها خمس دقائق.غمر شريحة مغلفة ببوليليسين في حمام الماء الساخن واستخدم قضيب خشب لوضع الأشرطة المقطعة على الشريحة. دع الشرائح تجفف الهواء طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. في اليوم التالي، استخدم شريحة أكثر دفئًا لتسخين الشرائح لمدة 15 دقيقة عند 63 درجة مئوية.تحت غطاء الدخان، ضع الشرائح على رف تلطيخ الشريحة ووضع الحامل في HistoChoice لمدة خمس دقائق مرتين متبوعة بعدة علاجات الإيثانول والاستحمام المائي المقطر وفقًا للمخطوطة. نقل الرف إلى حاوية مليئة هاريس هيماتيوكسيلين لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق لطخة. ثم أخرج الحامل من محلول الهماتيوكسيلين وضعه تحت مياه الصنبور الجارية لمدة 10 دقائق قبل الخطوات التالية.بعد تلطيخ، وذلك باستخدام ملقط، واتخاذ الشرائح من حل HistoChoice أو Xylene. بالتنقيط طبقة رقيقة من المتوسط دائم تصاعد على العينة ووضع بلطف غطاء على الجزء العلوي. تجنب تشكيل فقاعات.بعد أن يتم تصلب المتوسطة المتصاعدة، ضع الشريحة تحت مجهر خفيف للحصول على صور لأقسام الدماغ التمثيلية في منتصف الفقر تقريبًا. أولاً، إعداد غذاء يحتوي على قارورة لتوليد الذباب الإناث غير التيروزيجو. بعد التخدير ثاني أكسيد الكربون، واستخدام فرشاة لنقل خمسة ذكور من خط متحولة و 10 الإناث العذراء من الفص التشويش sternopleural ودبوس على خط O في القارورة لجعل الصليب.ضع القارورة عند 25 درجة مئوية. بعد 10 إلى 12 يوما، وجمع ما لا يقل عن 15 ذرية عذراء الإناث تحمل الكروموسوم المتحولة والكروموم علامة. عبورها إلى خمسة ذكور من خط متوازن يحمل علامة أخرى مُجْرِيةَ مُجْرِية على قِطْبِ أو ما يعادله.بعد 10 إلى 12 يوما، وجمع ذرية الذكور heterozygous تحمل إما scutoid أو مجعد O والكروسوم يحتمل أن يعاد دمجها من الصليب. تتزاوج بشكل فردي لهم الإناث العذراء من الأسهم تحمل الكروموسوم المتحول. عشرة إلى 12 أيام في وقت لاحق، وجمع ذرية من الصليب الماضي في الغذاء الجديد الذي يحتوي على قوارير وعمر الذباب في 29 درجة مئوية إلى 10 إلى 14 يوما.أداء الأنسجة على رؤوس ذبابة وتكرار لذرية كل عبر الفردية. مع هذه المعلومات، تنفيذ رسم خرائط نقص على منطقة ضيقة من الكروموسوم لصقل موقع الطفرة المتنحية. كل خط نقص لديه حذف منطقة مختلفة من الكروموسومات مما يسمح لهم لاستخدامها لاختبار التكملة.بعد ذلك، عبر خطوط من عدة عوز Drosophila للكروموسوم الثاني والبحث عن غير تكملة من النمط الظاهري للمصلحة. للحصول على مرجع لتحليل تسلسل الحمض النووي، قم بتنزيل ملف تنسيق FASTA الذي يحتوي على تسلسل التوافق الجينومي لجين BRAT من FlyBase أو استخدام ملف يحتوي على نتائج تسلسل BRAT لمراقبة الخلفية الجينية، على سبيل المثال خط Drosophila المُعَد في الأصل. فتح ملفات التسلسل في محرر بلازميد A.انتقل إلى تحرير وانقر فوق محاذاة التسلسلات. باستخدام ماوس الكمبيوتر، حدد كافة التسلسلات للمقارنة. في قائمة الإفلات، قم بالإشارة إلى التسلسل المرجعي لهذه المحاذاة.فحص المنطقة التي تم تسلسلها لإجراء تغييرات النيوكليوتيدات بالمقارنة مع التسلسل المرجعي. إذا رغبت في ذلك، حفظ المحاذاة على جهاز كمبيوتر في تنسيق RTF عن طريق النقر على النص ثم حفظ. تنفيذ تجربة الإنقاذ عن طريق جمع ذرية F1 من كل صليب.حدد بعناية بعيدا الموازنات ملحوظ. العمر الذباب على Drosophila الغذاء المتوسط في 29 درجة مئوية وإجراء تحليل الأنسجة على العقول للبحث عن التنكس العصبي كما كان سابقا. لإجراء تحليل العمر تعتمد على تنكس الأعصاب في 867 المسوخ، سن الذباب إلى خمسة، 15 و 25 يوما وإجراء تحليل الأنسجة اللاحقة.يقدم هذا البروتوكول نهجًا وراثيًا أماميًا للفحص من خلال مجموعة من الذباب المُمَاجَع كيميائيًا باستخدام مقايسة متسلقة. من بين 235 خطوط homozygous ، أظهر حوالي 37٪ من الخطوط المختبرة معدل تسلق أقل من 50٪ عند اختباره في سن 10 إلى 12 يومًا. كشفت الشاشة النسيجية اللاحقة على 51 من الخطوط التي تظهر أقل معدل تمرير تسلق أن 29 من هذه الخطوط أظهرت مظهرًا مرئيًا لثقوب في ورم الأعصاب في الدماغ تتراوح بين معتدل إلى شديد يدل على التنكس العصبي.النمط الظاهري للانعجاب العصبي في 867 الذباب هو المتنحية لأن أدمغة الذباب heterozygous 867 التي تم تجاوزها إلى سلالة من نوع البرية كانت مماثلة لتلك التي من الضوابط. خط نقص Df24116 لا يكمل النمط الظاهري 867 متحولة على أساس التسلق المقايسة. التحقق النسيجي يظهر خط نقص Df24116 لا يكمل 867 العصبية فيينوسيشن النمط الظاهري في حين Df9296 لا.فحص النمط الظاهري الدماغ من 867 المسوخ عبرت إلى خطوط نقص إضافية أكد أن الطفرة الواردة في منطقة الجينوم الذي يتضمن الجينات BRAT. من المهم أن نتذكر خلال هذا الإجراء للعمل بدقة ودقة قدر الإمكان لأن هذا البروتوكول يجمع بين عدة خطوات والتي إذا نفذت بشكل غير صحيح يمكن أن تؤثر على تحديد المسوخ مع التنكس العصبي في الجينات المرشحة. اعتمادا على الجينات التي تم تحديدها، يمكن أن يشمل التحليل اللاحق اختبار بويضات إضافية من جين الفائدة أو التفاعلات مع الجينات التي تلعب دورا في مسارات معروفة من التنكس العصبي.أثناء إجراء الأنسجة، تذكر التعامل مع حل الإصلاح في Carnoy بحذر لأنه يحتوي على الكلوروفورم. ارتداء القفازات واستخدامها مع التهوية الكافية بشكل مثالي تحت غطاء محرك الدخان. وبالمثل، تنفيذ كل التلطيخ الأنسجة تحت غطاء محرك الدخان.

Research

JoVE Journal

Genetics

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

التلاعب الجيني للمسببات الأمراض النباتية<em&gt; السوادية الذروية</em&gt; لدراسة علم الأحياء الفطرية النباتية وميكروب التفاعلات

Gene deletion plays an important role in the analysis of gene function. One of the most efficient methods to disrupt genes in a targeted manner is the ...

Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts

إعداد rAAV9 إلى بإفراط أو ضربة قاضية الجينات في قلوب ماوس

Controlling the expression or activity of specific genes through the myocardial delivery of genetic materials in murine models permits the investigation ...

Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

المستهدفة<em&gt; في الموقع</em&gt; الطفرات من هيستون الجينات في مهدها الخميرة

We describe a PCR- and homologous recombination-based system for generating targeted mutations in histone genes in budding yeast cells. The resulting ...

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

قياس التصبغ البطن في<em&gt; ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر</em

Pigmentation is a morphologically simple but highly variable trait that often has adaptive significance. It has served extensively as a model for ...

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

تغذية حمية الدهون عالية وإنتاجية عالية بالانزيم ترياسيلجليسيريدي في Melanogaster المورفولوجية

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

نظم التأسيسي وإيندوسيبلي للتعديل الوراثي في فيفو من خلايا الكبد الماوس باستخدام حقن الوريد ذيل هيدرودينامية

In research models of liver cancer, regeneration, inflammation, and fibrosis, flexible systems for in vivo gene expression and silencing are highly ...

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

قياس "مستويات ممارسة" في المورفولوجية melanogaster تدوير ممارسة القياس الكمي النظام (ريكس) باستخدام

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

تريدوهيل: "بروتوكول التدريب" الفاصل الزمني "ممارسة فعل بلطف" في melanogaster المورفولوجية

The incidence of complex metabolic diseases has increased as a result of a widespread transition towards lifestyles of increased caloric intake and ...

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

في فيفو دراسة وظيفية من المتغيرات البشرية النادرة المرتبطة بالأمراض باستخدام دروسوفيلا

Advances in sequencing technology have made whole-genome and whole-exome datasets more accessible for both clinical diagnosis and cutting-edge human ...

Tomato Root Transformation Followed by Inoculation with Ralstonia Solanacearum for Straightforward Genetic Analysis of Bacterial Wilt Disease

Tomato Root Transformation Followed by Inoculation with Ralstonia Solanacearum for Straightforward Genetic Analysis of Bacterial Wilt Disease

تحويل جذر الطماطم متبوعاً بالتلقيح مع Ralstonia Solanacearum للتحليل الوراثي المباشر لمرض الذبول البكتيري

Ralstonia solanacearum is a devastating soil borne vascular pathogen that can infect a large range of plant species, causing an important threat to ...