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JoVE Journal

Biochemistry

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원형 RNA를 분석하기 위해 미니유전자를 포함하는 Alu 요소 사용

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13:10 min

March 10th, 2020

March 10th, 2020

7,203 Views

0:05

Introduction

1:09

Design of the Constructs

2:14

Select the Sequence to be Cloned in an Expression Vector

3:35

Design Primers for Cloning

4:59

Cloning of Constructs

7:05

Transfection of the Reporter Genes into Eukaryotic Cells

10:21

Results: Analysis of Circular RNAs

11:09

Conclusion

Transcript

이 프로토콜은 사용자가 대체 접합을 겪을 수 있는 게놈 발현 시스템을 생성할 수 있고 이 경우 자신의 기능 및 질병 협회를 위해 테스트할 수 있는 원형 RNA를 형성할 수 있기 때문에 중요합니다. 이 기술의 주요 장점은 다른 사람들이 순환 RNA 형성 및 기능에 대체 접합을 연구 할 때 분자 생물학 및 복제에서이 프로토콜을 사용하는 길을 열 것입니다. 처음으로이 기술을 시도하는 사람에게 내 조언은 PCR 조건을 최적화하는 것입니다.

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우리는 원형 RNA를 생성하는 리포터 유전자를 복제하고 분석합니다. 이러한 리포터 유전자는 선형 접합을 분석하고 Alu 요소를 포함하는 구성물보다 큽합니다. 원형 RNA를 조사하기 위하여는, 구조물은 세포로 형질 감염되고 결과 RNA는 선형 RNA의 제거 후에 RT-PCR를 사용하여 분석됩니다.

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