Name: pre-clinical model of cardiac donation after circulatory death
Uploaded: 2019-08-02T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death at JoVE.com

इस काम के भाग Fondation मार्सेल एट रोलाण्ड Goselin और Fondation श्री Stefane Foumy द्वारा एक उदार योगदान द्वारा समर्थित थे. निकोलस Noiseux FRQ-एस के विद्वान है.
लेखक जोश झूओ ले हुआंग, गैब्रिएल Gascon, सोफिया Ghiassi, और कैथरीन Scalabrini डेटा संग्रह में उनके समर्थन के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं.

सभी पशु देखभाल और प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड के अनुरूप है और संस्थागत पशु देखभाल और केंद्र Hospitalier डे l'Universit] डे Montral अनुसंधान केंद्र के उपयोग समिति द्वारा अनुमो?...

<ol>
	<li>Gass, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Transplantation+in+the+New+Era.">Cardiac Transplantation in the New Era.</a> Cardiology in Review. 23 (4), 182-188 (2015).</li><li>von Dossow, V., Costa, J., D'Ovidio, F., Marczin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worldwide+trends+in+heart+and+lung+transplantation:+Guarding+the+most+precious+gift+ever.">Worldwide trends in heart and lung transplantation: Guarding the most precious gift ever.</a> Best Practice &amp; Research. Clinical Anaesthesiology. 31 (2), 141-152 (2017).</li><li>Hornby, K., Ross, H., Keshavjee, S., Rao, V., Shemie, S. 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यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल कार्डियक डीसीडी के एक सरल, सुविधाजनक और बहुमुखी मॉडल का परिचय, हृदय कार्यात्मक वसूली का आकलन करने का अवसर की पेशकश, ऊतक क्षति और दाता की वसूली में सुधार करने के लिए पोस्ट कंडीशन?...

सामान्य रूप से ठोस अंग प्रत्यारोपण और हृदय प्रत्यारोपण, विशेष रूप से, दुनिया भर में बढ़ रहे हैं1,2. मस्तिष्क मृत्यु (डीबीडी) के बाद अंग खरीद की मानक विधि दान है। DBD के सख्त समावेशन मानदंडों को देखते हुए,पेशकश किए गए दिलों के 40% से कम 3 स्वीकार किए जाते हैं, जिससे बढ़ती मांग के सामने प्रस्ताव को सीमित किया जाता है और अंग प्रतीक्षा सूची का विस्तार किया जाता है। इस मुद्दे को हल करने के लिए, संचार मृत्यु के बाद दान किए गए अंगों का उपयोग (डीसीडी) को एक संभावित समाधानमानाजाता है।
DCD दाताओं में, तथापि, देखभाल की वापसी और पुनर्जीवन से पहले असुरक्षित गर्म ischemia की अवधि के बाद एक प्रारंभिक चरण अनिवार्य5हैं. संचार मौत के बाद संभावित अंग चोट अंग रोग के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, नियमित रूप से डीसीडी हृदय प्रत्यारोपण अपनाने के लिए अनिच्छा समझा. यह बताया गया है कि केवल 4 केन्द्रों DCD दिल चिकित्सकीय उपयोग, कड़े मानदंडों के साथ कि बहुत कम गर्म ischemia बार और पुराने रोगों के बिना युवा दाताओं शामिल6,7. नैतिक और कानूनी कारणों से, सीमित या कोई कार्डियोप्रोटेक्टिव हस्तक्षेप संचार मृत्यु5,8,9से पहले दाताओं में लागू किया जा सकता है . इस प्रकार, इस्किमिया-रिफ्यूजन (आईआर) चोट को कम करने के लिए किसी भी शमन कार्डियोप्लेजिक समाधान के साथ जल्दी रिपरफ्यूजन के दौरान शुरू कार्डियोप्रोटेक्टिव उपचार तक सीमित है, और उचित कार्यात्मक मूल्यांकन के लिए अनुमति नहीं है। समर्पित प्लेटफार्मों का उपयोग कर डीसीडी दिल की मरम्मत और एक वैकल्पिक समाधान के रूप में प्रस्तावित किया गया है और विभिन्न विद्वानों द्वारा अध्ययन किया गया10,11,12,13 . EVHP कार्यात्मक वसूली में सुधार करने के लिए DCD दिल के लिए पोस्ट कंडीशनिंग एजेंटों देने के लिए एक अनूठा अवसर प्रदान करता है। हालांकि, कुशल नैदानिक अनुवाद के लिए, कई तकनीकी और व्यावहारिक मुद्दों को संबोधित किया जाना शेष है, और यह आगे perfusion और कार्यात्मक मानदंडों की एक सीमा पर आम सहमति की कमी से बढ़ रहा है प्रत्यारोपण ीयता निर्धारित करने के लिए6, 8.
इसमें हम एक reproduible पूर्व नैदानिक छोटे पशु DCD प्रोटोकॉल के विकास की रिपोर्ट एक पूर्व vivo दिल perfusion प्रणाली है कि खरीद के समय शुरू अंग पोस्ट कंडीशनिंग की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के साथ संयुक्त, प्रारंभिक reperfusion के दौरान, और / या EVHP भर में.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0,9% Sodium Chloride. 1L bag</td>
			<td>Baxter</td>
			<td></td>
			<td>Electrolyte solution for flushing in the modified Langendorff system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14G 2&#34; I.V catheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4098</td>
			<td>To act as endotracheal tube.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td>Vital coloration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G 1&#34; I.V catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>383532</td>
			<td>I.V catheter with extension tube that facilitates manipulation for carotid catheterization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Dressing Fcp, 4 3/4&#34;, Serr</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>50-3147</td>
			<td>Additional forceps for tissue manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alm Self-retaining retractor 4x4 Teeth Blunt 2-3/4&#34;</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>22-9027</td>
			<td>Tissue retractor used to maintain the chest open.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bridge amp</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td>FE221</td>
			<td>Bridge amp for intracarotid blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td>CaCl2 anhydrous, granular, &#8804;7.0 mm, &#8805;93.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td>D-Glucose &#8805;99.5% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIN(8) to Disposable BP Transducer</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td>MLAC06</td>
			<td>Adapter cable for link between bridge amp and pressure transducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable BP Transducer (stopcock)</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td>MLT0670</td>
			<td>Pressure transducer for intracarotid blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Electrolyte solution without calcium or magnesium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Dressing Fcp, Str, Serr, 4&#34;</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>66-2740</td>
			<td>Additional forceps for tissue manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Fixative solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Sunbean</td>
			<td>756-CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium 1000 UI/mL</td>
			<td>Sandoz</td>
			<td></td>
			<td>For systemic anticoagulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid 36,5 to 38,0%</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>A144-500</td>
			<td>Diluted 1:1 for pH correction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Bimeda</td>
			<td></td>
			<td>Anesthetic. 100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td></td>
			<td>Control software for the Powerlab polygraph, allowing off-line analyses. Version 7, with blood pressure and PV loop modules enabled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Left ventricle pressure balloon</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>170404</td>
			<td>In latex. Size 4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2% solution</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td></td>
			<td>Antiarrhythmic for the cardioplegic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride ACS</td>
			<td>ACP Chemicals</td>
			<td>M-0460</td>
			<td>MgCl2+6H2O &#8805;99.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro pressure sensor</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>159905</td>
			<td>Micro pressure sensor and amplifier connected to the intraventricular balloon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacemaker</td>
			<td>Biotronik</td>
			<td>Reliaty</td>
			<td>Set to generate a pulse each 200 ms for a heart rate of 300 bpm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH bench top meter</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>AE150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological monitor</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>Physiosuite</td>
			<td>For continuous monitoring of rodent temperature and saturation during the procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma-Lyte A</td>
			<td>Baxter</td>
			<td></td>
			<td>Electrolyte solution used as base to prepare cardioplegia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>P4504</td>
			<td>KCl &#8805;99.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride 2 meq/ml</td>
			<td>Hospira</td>
			<td></td>
			<td>Part of the cardioplegic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 8/30 Polygraph</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td></td>
			<td>Electronic polygraph</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk 2-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>A305H</td>
			<td>Suture material for Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk 5-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>A302H</td>
			<td>Suture material for carotid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia workstation</td>
			<td>Hallowell EMC</td>
			<td>000A2770</td>
			<td>Small animal ventilator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td>NaHCO3 &#8805;99,5% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td>NaCl &#8805;99.5% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>ACP chemicals</td>
			<td>S3700</td>
			<td>Diluted to 5N (10 g in 50 ml) for pH correction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>S0751</td>
			<td>NaH2PO4 &#8805;99.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens Tenotomy Sciss, Str, Delicate, SH/SH, 4 1/2&#34;</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>22-1240</td>
			<td>Small scisors for atria and cava vein opening</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue slicer blades</td>
			<td>Thomas scientific</td>
			<td>6727C18</td>
			<td>Straight carbon steel blades for tissue slicing at the end of the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tuberculin safety syringe with needle 25G 5/8&#34;</td>
			<td>CardinalHealth</td>
			<td>8881511235</td>
			<td>For heparin injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary General Surgery Set</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>98-1275</td>
			<td>Surgery instruments including disection scisors and mosquito clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary Micro Set</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>98-1311</td>
			<td>Surgery instruments with microscisors used for carotid artery opening</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Working Heart Rat/Guinea Pig/Rabbit system</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>120101BEZ</td>
			<td>Modular working heart system modified for the needs of the protocol. Includes all the necesary tubbing, water jacketed reservoirs and valves, including 2 and 3 way stop cock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td>Sedative. 20 mg/ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pre-clinical model of cardiac donation after circulatory death

कार्डिएक प्रत्यारोपण की मांग बढ़ रही है; फिर भी, उपयुक्त दाताओं की कमी के कारण अंग उपलब्धता सीमित है। संचार मृत्यु के बाद अंग दान (डीसीडी) इस सीमित उपलब्धता को संबोधित करने के लिए एक समाधान है, लेकिन लंबे समय तक गर्म इस्किमिया की अवधि और ऊतक की चोट के जोखिम के कारण, हृदय प्रत्यारोपण में इसका नियमित उपयोग शायद ही कभी देखा जाता है। इस पांडुलिपि में हम बारीकी से दिल समारोह की सतत निगरानी के साथ DCD के संदर्भ में वर्तमान नैदानिक प्रथाओं नकल एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, उपन्यास cardioprotective रणनीतियों और हस्तक्षेप को कम करने के मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है इस्किमिया-रिपरफ्यूजन चोट।
इस मॉडल में, DCD प्रोटोकॉल संचार मौत प्रेरित करने के लिए वेंटिलेशन रोक द्वारा एनेस्थेटाइज्ड लुईस चूहों में शुरू की है. जब सिस्टोलिक रक्तचाप 30 mmHg से नीचे चला जाता है, गर्म इस्कीमिक समय शुरू की है. एक पूर्व निर्धारित गर्म ischemic अवधि के बाद, दिल एक normothermic cardioplegic समाधान के साथ निकाल रहे हैं, खरीद, और एक Langendorff पूर्व vivo दिल perfusion प्रणाली पर घुड़सवार. प्रारंभिक reperfusion और स्थिरीकरण के 10 मिनट के बाद, कार्डियक reconditioning लगातार 60 मिनट के लिए मूल्यांकन किया है intraventricular दबाव की निगरानी का उपयोग कर. हृदय की चोट का आकलन कार्डियक ट्रोपोनिन टी को मापने के द्वारा किया जाता है और अफ़सर आकार हिस्टोलॉजिकल धुंधला द्वारा निर्धारित किया जाता है। गर्म इस्कीमिक समय संग्राहक और संरचनात्मक और कार्यात्मक क्षति की वांछित राशि विकसित करने के लिए सिलवाया जा सकता है। यह सरल प्रोटोकॉल विभिन्न cardioprotective कंडीशनिंग रणनीतियों के मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है cardiplegia के क्षण में शुरू की, प्रारंभिक रिफ्यूजन और / इस प्रोटोकॉल से प्राप्त निष्कर्षों बड़े मॉडल में पुनरुत्पादित किया जा सकता है, नैदानिक अनुवाद की सुविधा.

उत्तिकायन के बाद, रक्तचाप तेजी से एक पूर्वानुमेय पैटर्न में चला जाता है (चित्र 3)। मौत के लिए अपेक्षित समय कम से कम 5 मिनट है.
चित्र 4 0, 10 और 15 मिनट WIT के बाद पुन: कंडीशनिंग के प्?...

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Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

इस प्रोटोकॉल संचार मौत के बाद हृदय दान की व्यवहार्यता बढ़ाने के लिए नए कंडीशनिंग एजेंटों या रणनीतियों के मूल्यांकन के लिए एक सरल और लचीला दृष्टिकोण से पता चलता है.

सर्क्युलर मौत के बाद कार्डिएक डोनेशन के प्री-नैदानिक मॉडल

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...

यह प्रोटोकॉल संचार मृत्यु के बाद दान किए गए दिलों के उपयोग की अनुमति देने के लिए विभिन्न कार्डियोप्रोटेक्टिव कंडीशनिंग रणनीतियों के मूल्यांकन को सुविधाजनक बनाकर सीमित प्रत्यारोपण अंग आपूर्ति के मुद्दे को लक्षित करता है। जानवर को एक हीटिंग पैड पर मध्यम करने के लिए सेट रखें। एक एनेस्थेटाइज्ड वयस्क चूहे में अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, एक गुदा तापमान जांच डालें।एक ट्रांसडरमल पल्स ऑक्सीमीटर सेंसर को हिंद पंजा में संलग्न करें, और शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए चूहे को एक शोषक पैड के साथ कवर करें। गर्दन में तीन से चार सेंटीमीटर मिडलाइन त्वचा चीरा बनाएं, और सही स्टर्नोहॉयड मांसपेशियों को बेनकाब करने के लिए चमड़े के नीचे के ऊतकों को कुंद करने के लिए कुंद टिप घुमावदार कैंची का उपयोग करें। गैर-नाटकीय संदंश का उपयोग करके, मांसपेशियों को बाद में तब तक स्थानांतरित करें जब तक कि सही कैरोटिड धमनी, जुगुलर नस और वेगस तंत्रिका की पहचान न हो जाए।कैरोटिड धमनी से वागस तंत्रिका को ध्यान से अलग करने के लिए कैंची का उपयोग करें। 2, 000 अंतरराष्ट्रीय यूनिट प्रति किलोग्राम हेपरिन को सही जुगुलर नस में इंजेक्ट करें, रक्त रिसाव से बचने के लिए सुई रिऐक्शन के बाद इंजेक्शन साइट पर दबाव डालें। कैरोटिड धमनी के चारों ओर दो 5-0 रेशम टांके पारित करने के लिए घुमावदार संदंश का उपयोग करें।मजबूती से उजागर धमनी के बेहतर पहलू पर कैरोटिड धमनी को ऑक्सीलेड करने के लिए डिस्टल सीवन संलग्न करें, समीपस्थ सीवन को नष्ट रखें, और चूहे को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। फिर कैरोटिड धमनी की पूर्वकाल की दीवार पर ध्यान से एक मिलीमीटर चीरा बनाने के लिए माइक्रोसर्जरी कैंची का उपयोग करें, और महाधमनी आर्क की ओर एक 22 गेज, एक इंच बंद नसों में कैथेटर डालें। आवर्धन और माइक्रोडिसेक्शन टूल का उपयोग इन चरणों के लिए अत्यधिक सिफारिश करता है।रक्तस्राव से बचने के लिए समीपस्थ सीवन को तनाव देकर एक स्वच्छ क्षेत्र प्राप्त किया जा सकता है। पूर्व वीवो कार्डियोप्लेजिया तंत्र को इकट्ठा करने के लिए कार्डियक डोनेशन जरूरी है। डीसीडी प्रोटोकॉल शुरू करने के लिए, पहले जानवर को उत्तेजित करें, फिर पीड़ादायक चरण शुरू करते हुए श्वासनली को दबाने के लिए मच्छर संदंश का उपयोग करें।कार्यात्मक बुद्धि की गिनती शुरू करें जब चोटी सिस्टोलिक रक्तचाप 30 मिलीमीटर पारा या एसिस्टोल या वेंट्रिकुलर फिब्रिलेशन से नीचे गिरता है, जो भी पहले आता है। बुद्धि के अंत में, यदि आवश्यक हो तो एक अल्म रिट्रैक्टर के साथ छाती को खुला रखते हुए, एक मध्य रखना स्टर्नोटॉमी करें। हृदय गति को पूरा करने के लिए पल्मोनरी नसों और अन्य वक्ष संरचनाओं से दिल को अलग करें।तुरंत पूर्व वीवो प्रणाली के लिए एक तेजी से परिवहन के लिए बर्फ ठंड Krebs समाधान में दिल जलमग्न । लैंगेंडोर्फ उपकरण के लिए महाधमनी को कसकर ठीक करने के लिए 2-0 रेशम सीवन का उपयोग करें, और फिर स्टॉपकॉक खोलें। अब पूरी तरह से कैनुला के लिए प्रवाह खुला है, और प्रारंभिक रिफ्यूजन और स्थिरीकरण समय शुरू करते हैं।दिल को घुमाएं इसलिए अटरिया प्रेशर सेंसर का सामना कर रहा है, और यदि आवश्यक हो तो बाएं वेंट्रिकुलर एट्रियल ओपनिंग को चौड़ा करने के लिए फेफड़े की नसों को विच्छेदन करें। इसके बाद, एक दबाव सेंसर से जुड़े लेटेक्स गुब्बारे डालें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि गुब्बारा पूरी तरह से वेंट्रिकल के अंदर तैनात है। धीरे-धीरे गुब्बारे को खारा से तब तक भरें जब तक कि अंत डायस्टोलिक दबाव 15 मिलीमीटर पारा तक न पहुंच जाए।कोरोनरी जहाजों को पंचर किए बिना दिल के पूर्वकाल चेहरे में पेसिंग इलेक्ट्रोड डालें। एक बार सहज पिटाई मनाई जाती है, तो पेसिंग को प्रति मिनट 300 बीट्स सेट करें। स्थिरीकरण के 10 मिनट के बाद, रिकंडीशनिंग और मूल्यांकन चरण शुरू करने के लिए निरंतर इंट्रावेंट्रिकुलर दबाव माप रिकॉर्डिंग शुरू करें।एक घंटे के बाद, लैंगेंडोर्फ उपकरण से दिल को हटा दें और अटरिया को हटाने के लिए सीधे उच्च कार्बन वाले स्टील ब्लेड का उपयोग करें। नीचे का सामना करना पड़ सही वेंट्रिकल के साथ, एक से दो मिलीमीटर मोटी ट्रांसवर्स वेंट्रिकुलर स्लाइस काट लें। ऊतक के तीसरे टुकड़े से सही वेंट्रिकल उत्पादित करें, और स्नैप डाउनस्ट्रीम बायोकेमिकल विश्लेषण के लिए बाएं वेंट्रिकल को फ्रीज करें।37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए पीबीएस में ताजा तैयार 5% टीटीसी समाधान में शेष वर्गों को जलमग्न करें। अगली सुबह, ताजा पीबीएस में दो बार नमूनों को धोएं और इमेजिंग के लिए ताजा पीबीएस में नमूनों को जलमग्न करें। व्यवहार्य ऊतक रंग में ईंट-लाल दिखाई देंगे।एक्सटयूबेशन के बाद, रक्तचाप तेजी से एक उम्मीद के मुताबिक पैटर्न में गिरता है और मौत के लिए अपेक्षित समय पांच मिनट से भी कम है। यहां, शून्य, 10 और 15 मिनट की बुद्धि के बाद रिकंडीशनिंग की शुरुआत में औसत दबाव बनाम समय घटता दिखाया जाता है। अनुबंधीय कार्य समय के साथ सुधार होगा, बुद्धि की छोटी अवधि के उपयोग से संकुचन सामान्य हो जाएगा, और रूपात्मक क्षति का पता नहीं लगाया जा सकेगा।कार्डियोप्लेजिया के साथ और स्थिरीकरण चरण में जोड़े गए कंडीशनिंग एजेंट के उपयोग से पता चला है कि इस मॉडल में बुद्धि के 15 मिनट से उत्पन्न नुकसान कार्डियोप्रोटेक्टिव एजेंटों द्वारा मॉड्यूलेशन के लिए उत्तरदायी हैं। यह तकनीक सभी प्रासंगिक चर और औषधीय और गैर-घरेलू हस्तक्षेप परीक्षण के पूर्ण नियंत्रण की अनुमति देती है और नैदानिक अनुवाद को सुविधाजनक बनाते हुए बड़े मॉडलों में पुन: पेश की जा सकती है।

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Research

JoVE Journal

Medicine

Pre-clinical Evaluation of Tyrosine Kinase Inhibitors for Treatment of Acute Leukemia

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are attractive druggable therapeutic targets. Here we describe an efficient four-step strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in the treatment of acute leukemia. Initially, western blot analysis is used to confirm target inhibition in cultured leukemia cells. Functional activity is then evaluated using clonogenic assays in methylcellulose or soft agar cultures. Experimental compounds that demonstrate activity in cell culture assays are evaluated in vivo using NOD-SCID-gamma (NSG) mice transplanted orthotopically with human leukemia cell lines. Initial in vivo pharmacodynamic studies evaluate target inhibition in leukemic blasts isolated from the bone marrow. This approach is used to determine the dose and schedule of administration required for effective target inhibition. Subsequent studies evaluate the efficacy of the TKIs in vivo using luciferase expressing leukemia cells, thereby allowing for non-invasive bioluminescent monitoring of leukemia burden and assessment of therapeutic response using an in vivo bioluminescence imaging system. This strategy has been effective for evaluation of TKIs in vitro and in vivo and can be applied for identification of molecularly-targeted agents with therapeutic potential or for direct comparison and prioritization of multiple compounds.

Receptor tyrosine kinases are ectopically expressed in many cancers and have been identified as therapeutic targets in acute leukemia. This manuscript describes an efficient strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of acute leukemia.

एक्यूट ल्यूकेमिया के इलाज के लिए tyrosine kinase inhibitors के पूर्व नैदानिक ​​मूल्यांकन

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact. For this strategy to be successful, recent studies have shown that involvement of the host immune system is essential. Therefore, oncolytic virotherapy should be evaluated within the context of an immunocompetent model. Furthermore, the study of antitumor therapies in tolerized animal models may better recapitulate results seen in clinical trials. Cotton rats, commonly used to study respiratory viruses, are an attractive model to study oncolytic virotherapy as syngeneic models of mammary carcinoma and osteosarcoma are well established. However, there is a lack of published information on the proper handling procedure for these highly excitable rodents. The handling and capture approach outlined minimizes animal stress to facilitate experimentation. This technique hinges upon the ability of the researcher to keep calm during handling and perform procedures in a timely fashion. Finally, we describe how to prepare cotton rat mammary tumor cells for consistent subcutaneous tumor formation, and how to perform intratumoral and intraperitoneal injections. These methods can be applied to a wide range of studies furthering the development of the cotton rat as a relevant pre-clinical model to study antitumor therapy.

Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model.

Oncolytic वायरस के पूर्व नैदानिक ​​मूल्यांकन के लिए अध्ययन में कपास चूहा की हैंडलिंग

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact.  For this strategy to be ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

पूर्व नैदानिक ​​Orthotopic Murine मानव प्रोस्टेट कैंसर के मॉडल

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Use of a Low-flow Digital Anesthesia System for Mice and Rats

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers utilize a syringe pump to directly administer volatile anesthetics into a gas stream. Unlike a traditional vaporizer, it can be used at very low flow rates, making it ideal for use on mice and rats. 
The equipment's capability to use low flow rates could result in a substantial cost savings due to the reduced need for anesthetic agents, compressed gas, and charcoal scavenging filters1. A lower flow rate means less waste of anesthetic gas and likely reduces the risk of anesthetic exposure to laboratory personnel. Thus, the high levels of precision and safety associated with direct injection vaporizers, along with a reduced need for anesthetic agents, compressed gas, and charcoal filters are beneficial for research requiring small animal anesthesia. 
The goal of this protocol is to demonstrate the use of a syringe-driven direct injection vaporizer as part of a digital, low-flow anesthesia system. The direct injection vaporizer is capable of accurately delivering anesthesia at very low flow rates compared to a traditional vaporizer, making it a promising alternative for controlled gas anesthetic delivery to rodents.

Here, we present a protocol to more safely and efficiently administer anesthetic gas to mice using a digital, low flow anesthesia system utilizing a syringe-driven direct injection vaporizer.

एक कम प्रवाह चूहों और चूहों के लिए डिजिटल संज्ञाहरण प्रणाली का उपयोग

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

माउस के Isometric सिकुड़ना माप Mesenteric धमनी का उपयोग तार Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Implantation of hiPSC-derived Cardiac-muscle Patches after Myocardial Injury in a Guinea Pig Model

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss of relevant amounts of heart muscle mass can lead to the heart failure. Besides heart transplantation, there is no curative treatment option for the end-stage heart failure. In times of organ donor shortage, organ independent treatment modalities are needed. Left-ventricular assist devices are a promising therapy option, however, especially as destination therapy, limited by its side-effects like stroke, infections and bleedings. In recent years, several cardiac repair strategies including stem cell injection, cardiac progenitors or myocardial tissue engineering have been investigated. Recent improvements in cell biology allow for the differentiation of large amounts of cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells (iPSC). One of the cardiac repair strategies currently under evaluation is to transplant artificial heart tissue. Engineered heart tissue (EHT) is a three-dimensional in vitro created cardiomyocyte network, with functional properties of native heart tissue. We have created EHT-patches from hiPSC derived cardiomyocytes. Here we present a protocol for the induction of left ventricular myocardial cryoinjury in a guinea pig, followed by implantation of hiPSC derived EHT on the left ventricular wall.

Here we present a protocol for the induction of left ventricular cryoinjury followed by the implantation of a cardiac muscle patch, derived from human iPS-cell cardiomyocytes in a guinea pig model.

hiPSC के आरोपण-एक गिनी पिग मॉडल में मायोकार्डियल चोट के बाद हृदय-मांसपेशी पैच व्युत्पन्न

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

ऑर्थोटोपिक हार्ट ट्रांसप्लांटेशन का एक प्री-क्लिनिक पोर्सीन मॉडल

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. However, the evaluation of right ventricular pressure (RVP) and pulmonary artery pressure (PAP) remains technically challenging in mice. RVP and PAP are more difficult to measure than left ventricular pressure because of the anatomical differences between the left and right heart systems. In this paper, we describe a stable right heart hemodynamic measurement method and its validation using healthy and PAH mice. This method is based on open-chest surgery and mechanical ventilation support. It is a complicated procedure compared to closed chest procedures. While a well-trained surgeon is required for this surgery, the advantage of this procedure is that it can generate both RVP and PAP parameters at the same time, so it is a preferable procedure for the evaluation of PAH models.

Here, we present a protocol to perform an invasive hemodynamic assessment of the right ventricle and pulmonary artery in mice using an open-chest surgery approach.

चूहे में सही वेंट्रिकुलर सिस्टम और हाइपोक्सिया-प्रेरित पल्मोनरी धमनी उच्च रक्तचाप के लिए आक्रामक हेमोडायनामिक आकलन

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

पुनर्निर्माण माइक्रोसर्जरी में इस्केमिया-रिपेरेपमेंट इंजरी के अध्ययन के लिए एक प्री-क्लीनिकल चूहा मॉडल

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Use of an Integrated Low-Flow Anesthetic Vaporizer, Ventilator, and Physiological Monitoring System for Rodents

Low-flow digital vaporizers commonly utilize a syringe pump to directly administer volatile anesthetics into a stream of carrier gas. Per animal welfare recommendations, animals are warmed and monitored during procedures requiring anesthesia. Common anesthesia and physiological monitoring equipment include gas tanks, anesthetic vaporizers and stands, warming controllers and pads, mechanical ventilators, and pulse oximeters. A computer is also necessary for data collection and to run equipment software. In smaller spaces or when performing field work, it can be challenging to configure all this equipment in limited space.
The goal of this protocol is to demonstrate best practices for use of a low-flow digital vaporizer using both compressed oxygen and room air, along with an integrated mechanical ventilator, pulse oximeter, and far infrared warming as an all-inclusive anesthesia and physiological monitoring suite ideal for rodents.

Here, we present a protocol to safely and effectively administer anesthetic gas to mice using a digital, low flow anesthesia system with integrated ventilator and physiological monitoring modules.

कृंतक के लिए एक एकीकृत कम प्रवाह एनेस्थेटिक वाष्पीकरण, वेंटिलेटर और शारीरिक निगरानी प्रणाली का उपयोग

Low-flow digital vaporizers commonly utilize a syringe pump to directly administer volatile anesthetics into a stream of carrier gas. Per animal welfare ...