Name: pre-clinical model of cardiac donation after circulatory death
Uploaded: 2019-08-02T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death at JoVE.com

この作品の一部は、フォンダシオン・マルセル・エ・ローランデ・ゴセリンとフォンダシオン氏ステファン・フーミーの寛大な貢献によって支えられました。ニコラス・ノイズはFRQ-Sの学者です。
著者らは、ジョシュ・ジュオ・ル・フアン、ガブリエル・ガスコン、ソフィア・ギアッシ、キャサリン・スカラブリニのデータ収集支援に感謝したいと考えています。

すべての動物のケアと実験プロトコルは、実験動物のケアと使用のためのガイドに準拠し、センターホスピタリティ・ド・ル・ユニバーシテ・ド・モントリオール研究センターの施設動物ケアと使用委員会によって承認されました。
1. 予備準備
<ol><li>水浴をオンにして、心プレア送達システム(図1A)とランジェンドルフex生体灌流システム(<strong cla...

<ol>
	<li>Gass, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Transplantation+in+the+New+Era.">Cardiac Transplantation in the New Era.</a> Cardiology in Review. 23 (4), 182-188 (2015).</li><li>von Dossow, V., Costa, J., D'Ovidio, F., Marczin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worldwide+trends+in+heart+and+lung+transplantation:+Guarding+the+most+precious+gift+ever.">Worldwide trends in heart and lung transplantation: Guarding the most precious gift ever.</a> Best Practice &amp; Research. Clinical Anaesthesiology. 31 (2), 141-152 (2017).</li><li>Hornby, K., Ross, H., Keshavjee, S., Rao, V., Shemie, S. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+heart+transplantation+with+distant+procurement+and+ex-vivo+preservation+of+donor+hearts+after+circulatory+death:+a+case+series.">Adult heart transplantation with distant procurement and ex-vivo preservation of donor hearts after circulatory death: a case series.</a> Lancet (London, England). 385 (9987), 2585-2591 (2015).</li><li>Messer, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+assessment+and+transplantation+of+the+donor+heart+after+circulatory+death.">Functional assessment and transplantation of the donor heart after circulatory death.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 35 (12), 1443-1452 (2016).</li><li>White, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+donor+heart+viability+during+ex+vivo+heart+perfusion.">Assessment of donor heart viability during ex vivo heart perfusion.</a> Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 93 (10), 893-901 (2015).</li><li>Mayr, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+troponin+T+and+creatine+kinase+predict+mid-term+infarct+size+and+left+ventricular+function+after+acute+myocardial+infarction:+a+cardiac+MR+study.">Cardiac troponin T and creatine kinase predict mid-term infarct size and left ventricular function after acute myocardial infarction: a cardiac MR study.</a> Journal of Magnetic Resonance Imaging. 33 (4), 847-854 (2011).</li><li>Remppis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+compartmentation+of+troponin+T:+release+kinetics+after+global+ischemia+and+calcium+paradox+in+the+isolated+perfused+rat+heart.">Intracellular compartmentation of troponin T: release kinetics after global ischemia and calcium paradox in the isolated perfused rat heart.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 27 (2), 793-803 (1995).</li><li>Rossello, X., Hall, A. R., Bell, R. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+Langendorff+Perfused+Isolated+Mouse+Heart+Model+of+Global+Ischemia-Reperfusion+Injury:+Impact+of+Ischemia+and+Reperfusion+Length+on+Infarct+Size+and+LDH+Release.">Characterization of the Langendorff Perfused Isolated Mouse Heart Model of Global Ischemia-Reperfusion Injury: Impact of Ischemia and Reperfusion Length on Infarct Size and LDH Release.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 21 (3), 286-295 (2016).</li><li>Dornbierer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+reperfusion+hemodynamics+predict+recovery+in+rat+hearts:+a+potential+approach+towards+evaluating+cardiac+grafts+from+non-heart-beating+donors.">Early reperfusion hemodynamics predict recovery in rat hearts: a potential approach towards evaluating cardiac grafts from non-heart-beating donors.</a> PloS One. 7 (8), e43642 (2012).</li><li>Henry, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+staircase+effect+in+the+rat+heart.">Positive staircase effect in the rat heart.</a> The American Journal of Physiology. 228 (2), 360-364 (1975).</li><li>Markert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+method+to+correct+the+contractility+index+LVdP/dt(max)+for+changes+in+heart+rate.">Evaluation of a method to correct the contractility index LVdP/dt(max) for changes in heart rate.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 66 (2), 98-105 (2012).</li><li>Azar, T., Sharp, J., Lawson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rates+of+male+and+female+Sprague-Dawley+and+spontaneously+hypertensive+rats+housed+singly+or+in+groups.">Heart rates of male and female Sprague-Dawley and spontaneously hypertensive rats housed singly or in groups.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (2), 175-184 (2011).</li><li>Bonney, S., Hughes, K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic+cardioprotection:+the+role+of+adenosine.">Anesthetic cardioprotection: the role of adenosine.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (36), 5690-5695 (2014).</li><li>Ali, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+veno-arterial+extracorporeal+membrane+oxygenation.">Rat model of veno-arterial extracorporeal membrane oxygenation.</a> Journal of Translational Medicine. 12, 37 (2014).</li></ol>

ここで提示されるプロトコルは、心臓DCDのシンプルで便利で汎用性の高いモデルを導入し、心臓機能回復、組織損傷、およびドナーの回復を改善するためのポストコンディショニング心保護剤の使用を評価する機会を提供します。そうでなければ移植のために廃棄される心臓。Ex vivo心臓灌流システム(EVHP)システムは、心臓機能を評価するためのプラットフォームを提供し、ポストコンディシ...

固体臓器移植全般および心臓移植は、特に、世界的に増加している1,2.臓器調達の標準的な方法は、脳死後の寄付(DBD)です。DBDの厳格な包含基準を考えると、提供された心臓の40%未満が3を受け入れられ、それによって需要の増加に直面して提供を制限し、臓器待ちリストを拡張する。この問題に対処するために、循環死後に寄付された臓器の使用(DCD)は、潜在的な解決策と考えられる4.
しかし、DCDドナーでは、ケアの撤退後の経度相と蘇生前の無防備な温暖虚血の期間は避けられない5.循環死後の潜在的な臓器損傷は臓器機能障害を引き起こす可能性がある。DCD心臓を臨床的に使用しているのは4つのセンターのみで、非常に短い温暖な虚血時間と慢性病理を持たない若いドナーを含む厳しい基準を有する6、7が報告されている。倫理的および法的な理由から、循環死5、8、9の前にドナーに限定された、または全く心保護介入を適用することができる。したがって、虚血再灌流(IR)損傷を緩和するための緩和策は、心置行溶液による早期再灌流中に開始される心保護療法に限定され、適切な機能評価を可能にしない。専用プラットフォームを用いてDCD心臓のエクスビボ心臓灌流(EVHP)とリコンディショニングが代替ソリューションとして提案され、様々な学者によって研究されている10、11、12、13.EVHPは、機能回復を改善するためにDCD心臓にポストコンディショニング剤を提供するユニークな機会を提供しています。しかし、効率的な臨床翻訳のためには、多くの技術的および実用的な問題が解決されるべきであり、これは移植性を決定するための灌流および機能基準の範囲に関するコンセンサスの欠如によってさらに悪化する6、 8.
ここでは、調達時に開始された臓器ポストコンディショニングを調査するために使用できるex vivo心臓灌流システムと組み合わせた再現可能な前臨床小型動物DCDプロトコルの開発を報告し、初期再灌流中に、/またはEVHP全体で。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0,9% Sodium Chloride. 1L bag</td>
			<td>Baxter</td>
			<td></td>
			<td>Electrolyte solution for flushing in the modified Langendorff system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14G 2&#34; I.V catheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4098</td>
			<td>To act as endotracheal tube.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td>Vital coloration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G 1&#34; I.V catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>383532</td>
			<td>I.V catheter with extension tube that facilitates manipulation for carotid catheterization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Dressing Fcp, 4 3/4&#34;, Serr</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>50-3147</td>
			<td>Additional forceps for tissue manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alm Self-retaining retractor 4x4 Teeth Blunt 2-3/4&#34;</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>22-9027</td>
			<td>Tissue retractor used to maintain the chest open.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bridge amp</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td>FE221</td>
			<td>Bridge amp for intracarotid blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td>CaCl2 anhydrous, granular, &#8804;7.0 mm, &#8805;93.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td>D-Glucose &#8805;99.5% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIN(8) to Disposable BP Transducer</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td>MLAC06</td>
			<td>Adapter cable for link between bridge amp and pressure transducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable BP Transducer (stopcock)</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td>MLT0670</td>
			<td>Pressure transducer for intracarotid blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Electrolyte solution without calcium or magnesium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Dressing Fcp, Str, Serr, 4&#34;</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>66-2740</td>
			<td>Additional forceps for tissue manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Fixative solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Sunbean</td>
			<td>756-CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium 1000 UI/mL</td>
			<td>Sandoz</td>
			<td></td>
			<td>For systemic anticoagulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid 36,5 to 38,0%</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>A144-500</td>
			<td>Diluted 1:1 for pH correction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Bimeda</td>
			<td></td>
			<td>Anesthetic. 100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td></td>
			<td>Control software for the Powerlab polygraph, allowing off-line analyses. Version 7, with blood pressure and PV loop modules enabled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Left ventricle pressure balloon</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>170404</td>
			<td>In latex. Size 4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2% solution</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td></td>
			<td>Antiarrhythmic for the cardioplegic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride ACS</td>
			<td>ACP Chemicals</td>
			<td>M-0460</td>
			<td>MgCl2+6H2O &#8805;99.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro pressure sensor</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>159905</td>
			<td>Micro pressure sensor and amplifier connected to the intraventricular balloon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacemaker</td>
			<td>Biotronik</td>
			<td>Reliaty</td>
			<td>Set to generate a pulse each 200 ms for a heart rate of 300 bpm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH bench top meter</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>AE150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological monitor</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>Physiosuite</td>
			<td>For continuous monitoring of rodent temperature and saturation during the procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma-Lyte A</td>
			<td>Baxter</td>
			<td></td>
			<td>Electrolyte solution used as base to prepare cardioplegia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>P4504</td>
			<td>KCl &#8805;99.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride 2 meq/ml</td>
			<td>Hospira</td>
			<td></td>
			<td>Part of the cardioplegic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 8/30 Polygraph</td>
			<td>ADinstruments</td>
			<td></td>
			<td>Electronic polygraph</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk 2-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>A305H</td>
			<td>Suture material for Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk 5-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>A302H</td>
			<td>Suture material for carotid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia workstation</td>
			<td>Hallowell EMC</td>
			<td>000A2770</td>
			<td>Small animal ventilator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td>NaHCO3 &#8805;99,5% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td>NaCl &#8805;99.5% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>ACP chemicals</td>
			<td>S3700</td>
			<td>Diluted to 5N (10 g in 50 ml) for pH correction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Milipore-Sigma</td>
			<td>S0751</td>
			<td>NaH2PO4 &#8805;99.0% Part of the Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens Tenotomy Sciss, Str, Delicate, SH/SH, 4 1/2&#34;</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>22-1240</td>
			<td>Small scisors for atria and cava vein opening</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue slicer blades</td>
			<td>Thomas scientific</td>
			<td>6727C18</td>
			<td>Straight carbon steel blades for tissue slicing at the end of the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tuberculin safety syringe with needle 25G 5/8&#34;</td>
			<td>CardinalHealth</td>
			<td>8881511235</td>
			<td>For heparin injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary General Surgery Set</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>98-1275</td>
			<td>Surgery instruments including disection scisors and mosquito clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary Micro Set</td>
			<td>Skalar</td>
			<td>98-1311</td>
			<td>Surgery instruments with microscisors used for carotid artery opening</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Working Heart Rat/Guinea Pig/Rabbit system</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>120101BEZ</td>
			<td>Modular working heart system modified for the needs of the protocol. Includes all the necesary tubbing, water jacketed reservoirs and valves, including 2 and 3 way stop cock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td>Sedative. 20 mg/ml</td>
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pre-clinical model of cardiac donation after circulatory death

心臓移植需要は増加しています。それにもかかわらず、臓器の入手可能性は、適切なドナーの貧弱さのために制限されています。循環死後の臓器提供(DCD)は、この限られた利用可能性に対処するための解決策であるが、長期にわたる温暖虚血症の期間と組織損傷のリスクのために、心臓移植におけるその日常的な使用はめったに見られない。この原稿では、心臓機能の継続的なモニタリングを伴うDCDの文脈における現在の臨床慣行を厳密に模倣した詳細なプロトコルを提供し、新しい心保護戦略の評価と介入を減少させることを可能にする。虚血再灌流損傷。
このモデルでは、DCDプロトコルは、循環死を誘発するために換気を停止することによって麻酔されたルイスラットで開始される。収縮期血圧が30mmHgを下回ると、暖かい虚血時間が開始される。あらかじめ設定された暖かい虚血期の後、心臓はノルマザー性心筋溶液で洗い流され、調達され、Langendorff ex vivo心臓灌流システムに取り付けられる。初期再灌流および安定化の10分後、心室内圧力モニタリングを用いて60分間、心臓の再調整を連続的に評価する。心臓のトロポニンTを測定することによって心臓損傷を評価し、梗塞の大きさは組織染色によって定量される。暖かい虚血時間は、構造的および機能的損傷の所望の量を開発するために変調し、調整することができる。この簡単なプロトコルは、心脾痛、初期再灌流および/または排生灌流中に導入された異なる心保護調節戦略の評価を可能にします。このプロトコルから得られた知見は、臨床翻訳を容易にする、大規模なモデルで再現することができる。

挿管後、血圧は予測可能なパターンで急速に低下する(図3)。予想死亡時間は5分未満です。
図 4は、WIT の 0、10、および 15 分に続くリコンディショニング開始時の平均圧力/時間曲線を示しています。収縮機能は時間の経過とともに改善されます。WITの短期間の使用は、収縮性が正常に戻ることを可能にし、形態学的損傷は検出?...

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Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

このプロトコルは、循環死後の心臓寄付の実現可能性を高めるための新しいコンディショニング剤または戦略の評価のためのシンプルで柔軟なアプローチを示す。

循環死後の心臓寄付の前臨床モデル

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...

このプロトコルは、循環死後に寄贈された心臓の使用を可能にする異なる心臓保護コンディショニング戦略の評価を促進することによって、限られた移植臓器供給問題を対象とする。中程度に設定された加熱パッドの上に動物を置きます。麻酔をした成体ラットのつまみつまみへの応答の欠如を確認した後、直腸温度プローブを挿入する。経皮パルスオキシメータセンサーを後足に取り付け、ラットを吸収パッドで覆い、体温を維持します。首に3〜4センチメートルの中線皮膚切開を行い、鈍い先端湾曲したはさみを使用して皮下組織を鈍く解剖し、右のステルノイド筋肉を露出させます。非外傷性鉗子を使用して、右頸動脈、頸静脈、および迷走神経が同定されるまで筋肉を横に動かす。はさみを使用して、頸動脈から迷走神経を慎重に分離します。右頸静脈にヘパリン1キログラムあたり2,000の国際単位を注入し、針の引き込み後に注射部位に圧力をかけ、血液漏れを避ける。頸動脈の周りに2つの5-0シルク縫合糸を渡すために湾曲した鉗子を使用してください。遠位縫合糸をしっかりと取り付けて、露出した動脈の優れた局面で頸動脈を閉塞させ、近位縫合糸を外に保ち、ラットをステレオ顕微鏡の下に置く。その後、マイクロサージャリーハサミを使用して、頸動脈の前壁に1ミリメートルの切開を慎重に行い、大動脈弓に向かって22ゲージの1インチ閉じた静脈内カテーテルを挿入します。これらの手順では、拡大およびマイクロ解剖ツールの使用を強くお勧めします。きれいな分野は、出血を避けるために近位縫合糸を引き張ることによって達成することができる。心臓の寄付は、ex vivo心臓プレジア装置を組み立てる必要があります。DCDプロトコルを開始するには、まず動物を挿管し、蚊の鉗子を使って気管を締め付け、痛ましい段階を開始する。ピーク収縮期血圧が水銀または収縮期または心室細動の30ミリメートルを下回ったときに機能的なWITを数え始める、のいずれか最初に来る。WITの最後に、必要に応じてAlmレトラクターで胸部を開いたままにして、内側の裂管を行います。心臓を肺静脈および他の胸部構造から分離して、心臓切除術を完了する。すぐにエキビボシステムへの迅速な輸送のための氷冷クレブス溶液で心臓を水没させる。2-0シルク縫合糸を使用して大オルタをランゲンドルフ装置にしっかりと固定し、ストップコックを開きます。今完全にカニューレへの流れを開き、最初の再灌流と安定化時間を開始します。心房が圧力センサーに向くように心臓を回転させ、必要に応じて左心室心房の開口部を広げるために肺静脈を解剖する。次に、圧力センサーに接続されたラテックスバルーンを挿入し、バルーンが心室の内側に完全に配置されていることを確認します。末方面圧力が水銀の15ミリメートルに達するまでゆっくりと生理音でバルーンを満たします。冠状血管を穿刺することなく、心臓の前面にペーシング電極を挿入します。自発的な拍動が観察されたら、ペーシングを毎分300拍に設定します。10分間の安定化の後、連続的な心室内圧測定記録を開始し、再調整および評価段階を開始する。1時間後、ランゲンドルフ装置から心臓を取り出し、まっすぐな高炭素鋼のブレードを使用して心房を取り外します。右心室を下に向けた後、厚さ1~2ミリメートルの横心室スライスを切ります。組織の3番目のスライスから右心室を切り出し、下流の生化学的分析のために左心室を凍結します。残りのセクションをPBSで作りたての5%TTC溶液に37°Cで10分間水没させます。翌朝、サンプルを新鮮なPBSで2回洗浄し、イメージングのために新鮮なPBSにサンプルを沈めます。実行可能な組織は、色でレンガの赤で表示されます。排泄後、血圧は予測可能なパターンで急速に低下し、予想される死亡時間は5分未満である。ここでは、WIT の 0、10、および 15 分後の再調整開始時の平均圧力対時間曲線を示します。収縮関数は時間の経過とともに改善され、WITの短期間の使用は契約が正常に戻ることを可能にし、形態学的損傷は検出できない。心プレギアと安定化段階で加えられたコンディショニング剤の使用は、このモデルにおけるWITの15分によって発生する損傷が、心保護剤による変調に適していることを示した。この技術は、すべての関連する変数の完全な制御を可能にし、薬理学的および非薬理学的介入試験を可能にし、臨床翻訳を促進する、より大きなモデルで再生することができる。

Research

JoVE Journal

Medicine

The Use of Pharmacological-challenge fMRI in Pre-clinical Research: Application to the 5-HT System

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急性白血病の治療のためのチロシンキナーゼ阻害剤の前臨床評価

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腫瘍溶解性ウイルスの前臨床評価のための研究のコットンラットの取扱い

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Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

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Implantation of hiPSC-derived Cardiac-muscle Patches after Myocardial Injury in a Guinea Pig Model

モルモット モデルにおける心筋傷害の後 - 心筋パッチのこと由来の注入

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

オルソトピック心臓移植の前臨床ブタモデル

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

再建微小外科における虚血再灌流損傷の研究のための前臨床ラットモデル

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Use of an Integrated Low-Flow Anesthetic Vaporizer, Ventilator, and Physiological Monitoring System for Rodents

げっ歯類のための統合された低流量麻酔気化器、換気装置および生理学的モニタリングシステムの使用

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