Name: isolation of lamina propria mononuclear cells from murine colon using collagenase e
Uploaded: 2019-09-26T13:30:00
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この研究は、助成金#1K08HL088260と#1R01HL133462-01A1(A.B.P.、H.N.、S.J.)、および小児研究のためのバチェラー財団(D.M.、H.N.、S.J.、A.A.H.、A.B.P.)によって支援されました。本研究で使用したC57BL/6およびBALB/cマウスは、当施設で飼育されるか、ジャクソン・ラボまたはタコニックによって提供された。

すべての研究は、米国協会によって設定された獣医基準を満たすマイアミミラー大学医学部の機関動物ケアおよび使用委員会(IACUC)によって検討され、承認されたげっ歯類の研究プロトコルの下で行われました。実験動物科学(AALAS)用。
1. ソリューションの準備
<ol><li>
表1に説明するように、コロンバッファー、シリカ系密度分離媒体100%、シリカ系密度分離媒体66%?...

<ol>
	<li>Schneeman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+physiology+and+functions.">Gastrointestinal physiology and functions.</a> British Journal of Nutrition. 88, S159-S163 (2002).</li><li>Arranz, E., Pena, A. S., Bernardo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediators+of+inflammation+and+immune+responses+in+the+human+gastrointestinal+tract.">Mediators of inflammation and immune responses in the human gastrointestinal tract.</a> Mediators of inflammation. 2013, 1-3 (2013).</li><li>Blumberg, R. 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(132), e57281 (2018).</li><li>Weigmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+subsequent+analysis+of+murine+lamina+propria+mononuclear+cells+from+colonic+tissue.">Isolation and subsequent analysis of murine lamina propria mononuclear cells from colonic tissue.</a> Nature Protocols. 2, 2307-2311 (2007).</li><li>Bull, D. M., Bookman, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+functional+characterization+of+human+intestinal+mucosal+lymphoid+cells.">Isolation and functional characterization of human intestinal mucosal lymphoid cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 59 (5), 966-974 (1977).</li><li>Davies, M. D., Parrott, D. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+collagenases+-+A+review.">Bacterial collagenases - A review.</a> Critical Reviews in Microbiology. 42 (1), 106-126 (2014).</li><li>Autengruber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Enzymatic+Tissue+Disintegration+on+the+Level+of+Surface+Molecule+Expression+and+Immune+Cell+Function.">Impact of Enzymatic Tissue Disintegration on the Level of Surface Molecule Expression and Immune Cell Function.</a> European Journal of Microbiology and Immunology. 2 (2), 112-120 (2012).</li><li>Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+Murine+Small+Intestine+Leukocyte+Isolation+for+Global+Immune+Phenotype+Analysis.">Optimization of Murine Small Intestine Leukocyte Isolation for Global Immune Phenotype Analysis.</a> Journal of Immunological Methods. 405, 97-108 (2014).</li><li>van der Heijden, P. j., Stok, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Procedure+for+the+Isolation+of+Functionally+Active+Lymphoid+Cells+from+the+Murine+Intestine.">Improved Procedure for the Isolation of Functionally Active Lymphoid Cells from the Murine Intestine.</a> Journal of Immunological Methods. 3 (2), 161-167 (1987).</li></ol>

この視覚プロトコルは、ラミナプロプリアリンパ球(LPL)を含む大腸単核細胞の単核細胞の単離のための十分に許容される方法を説明する。このプロトコルは、炎症性サイトカインおよび組織損傷が回収されたMNCの生存率の低下に自分自身を貸し出す重度の移植後マウス大腸炎モデルの評価に最適化されたことを考えると、これらの方法は他の方法に翻訳できると予想される結腸MNCのフェオテ?...

消化管(GI)管は主に食物からの栄養素の処理と再吸収に専念していますが、GI管はまた、血管、リンパ系、神経系および他の多くの器官の完全性において中心的な役割を維持しています。その粘膜および粘膜下免疫システム1.GI免疫システムは、食品、共生細菌、または侵入病原体1、2からの外来抗原への絶え間ない暴露による消化管および全身の健康の両方に影響力のある役割を有する。したがって、GI免疫系は、病原性抗原1、2に適切に応答しながら非病原性抗原に許容する微妙なバランスを維持しなければならない。耐性と防御のバランスが崩れると、局所的または全身性免疫不自由および炎症が起こり得る1、2、3の無数の疾患をもたらす。
腸は、体内のすべてのリンパ球の少なくとも70%を収容する4.ほとんどの一次免疫相互作用は、腸内の3つの免疫局の少なくとも1つを含む:1)ペイヤーのパッチ、2)上皮内リンパ球(IEL)および3)ラミナプロプリアリンパ球(LPL)。これらの各々は、腸内の正常な免疫課題に迅速に応答する免疫細胞の複雑な相互接続されたネットワークで構成されています5.筋粘膜上の間質に制限され、緩やかに構造化されたラミナプロプリアは腸粘膜の結合組織であり、絨毛、血管系、リンパ液の排液、粘膜神経系、ならびに多くの自然の足場を含む。および適応免疫サブセット6,7,8,9.LPLは、CD4+およびCD8+T細胞を2:1の近似比で構成し、血漿細胞および骨髄系統細胞、樹状細胞、マスト細胞、好酸球およびマクロファージ6を含む。
様々な疾患状態に関連する腸の免疫不調と炎症を理解することに対する関心が高まっています。クローン病および潰瘍性大腸炎のような状態はすべて、大腸炎症10、11、12の様々なレベルを現す。さらに、同種骨髄移植(allo-BMT)を受ける骨髄または免疫系の悪性または非悪性障害を有する患者は、1)コンディショニングレジメンからの直接的な毒性を含む様々な形態の大腸炎を発症する可能性がある。BMTの前に、2)BMTおよび3)BMT後の免疫抑制によって引き起こされる感染症および3)BMT13、14、15の後に組織内のドナー・アロ抗原に反応するドナー型T細胞によって駆動される移植片対宿主病(GVHD)。これらすべてのポストBMT合併症は、腸16、17、18の免疫環境に有意な変化をもたらす。提案された方法は、マウス結腸における免疫細胞蓄積の信頼できる評価を可能にし、BMT後のマウスレシピエントに適用すると、移植耐性に関与するドナーおよびレシピエント免疫細胞の両方の効率的なアッセイを容易にする19 、20.腸の炎症の追加の原因は、悪性腫瘍、食物アレルギー、または腸内微生物叢の破壊が含まれます。このプロトコルは、結腸からの腸単核細胞のアクセスを可能にし、修飾して、これらの前臨床マウスモデルのいずれかで小腸の白血球にアクセスする。
検索語「腸と免疫細胞と分離」を用いたPubMed検索は、免疫細胞を抽出するための小腸消化の方法を記述する200以上の出版物を明らかにする。しかし、コロンの同様の文献検索では、結腸からの免疫細胞の単離を指定する十分に記述されたプロトコルは得られなかった。これは、結腸がより筋肉と間質の層を持っているので、小腸よりも完全に消化するのが難しいからかもしれません。既存のプロトコルとは異なり、このプロトコルは、特に他の細菌性コラゲナーゼ(コラゲナーゼD/コラゲナーゼI)なしでクロストリジウム内素体からコラゲナーゼEを使用します。我々は、このプロトコルを用いて、ナトリウムversenate(EDTA)、ディスパーゼIIなどの抗束試薬を添加することなく、単核免疫細胞(MNC)の単核免疫細胞の品質を維持しながら、大腸組織の消化を達成できることを実証する。デオキシリボヌクレアーゼI(DNAse I)21、22、23.このプロトコルは、さらなる指示された研究のためにマウス結腸から生存可能なMNCの再現可能な堅牢な抽出を可能にするために最適化され、コロンの免疫学の研究または(修飾を伴う)小腸24、25.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>60 mm Petri DIsh</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Lonza BioWhittaker</td>
			<td>BW17-517Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Disposable Serological Pipette</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15mL Non-Sterile Conical Tubes</td>
			<td>TruLine</td>
			<td>TR2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18- gauge Blunt Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL Disposable Serological Pipette</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 micrometer pore size Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Falcon Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21008-951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation Buffer</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>420801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli Collagenase E from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C2139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA, 0.5M Sterile Solution</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>E177-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo /Fisher Scientific -HyCLone</td>
			<td>SV30014.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>GE Healthcare-HyClone</td>
			<td>SH30237.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare-Life Sciences</td>
			<td>1708901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>17-105-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>VWR Life Science Amresco</td>
			<td>97064-646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Lonza BioWhittaker</td>
			<td>17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lamina propria mononuclear cells from murine colon using collagenase e

腸は、体内の免疫細胞の最大数に家です。小規模および大規模な腸内免疫系は、外因性抗原への暴露を警察し、強力な微生物由来の免疫刺激に対する応答を調節する。このため、腸は、クローン病や潰瘍性大腸炎、骨後の移植片対宿主病(GVHD)などの炎症性腸疾患に限定されない多くの疾患における免疫調節および炎症の主要な標的部位である。骨髄移植(BMT)、および多くのアレルギーおよび感染性状態。消化管炎症および大腸炎のマウスモデルは、GI合併症を研究し、予防と治療のための前臨床最適化戦略に多く使用されています。これらのモデルから収集されたデータは、腸からの免疫細胞の単離および発型分析を介して収集され、消化管および全身性炎症性疾患を改善するために適用することができるさらなる免疫理解に不可欠である。本報告では、混合シリカベースの密度勾配界を用いて結腸から単核細胞(MNC)を単核細胞(MNC)を単離するための非常に有効なプロトコルについて述べている。この方法は、汚染された破片を最小限に抑えながら、かなりの数の生存性白血病を再現可能に分離し、その後の血流サイトメトリーまたは他の方法による免疫表現型を可能にする。

マウス結腸疾患モデルを使用する場合、結腸のMNCの中で、炎症過程に関与する複数の免疫細胞サブセットを定量化および定性的に評価することができるのが有用である。このプロトコルの適用を介して得られたMNCの単一細胞懸濁液は、堅牢で再現可能な方法でそのような型近性特性を容易にする。多様な実験設定下でこの単離法を適用するための原理の証明として、?...

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Isolation of Lamina Propria Mononuclear Cells from Murine Colon Using Collagenase E

このプロトコルの目的は、コラゲナーゼを用いて組織の酵素消化によって結腸のラミナプロプリに存在する単核細胞を単離させることである。このプロトコルは、単核細胞の効率的な単核分離を可能にし、その結果、単一細胞懸濁液を生成し、堅牢な免疫表現型に使用することができます。

コラゲナーゼEを用いてマウスコロンからのラミナプロプリア単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞

The intestine is the home to the largest number of immune cells in the body. The small and large intestinal immune systems police exposure to exogenous ...

このプロトコルを用いた腸からの免疫細胞の表述法解析における単離は、GIおよび全身性炎症性疾患の理解に適用可能であることが証明されている。この方法は、フルールの原子数または他の方法によってその後の免疫表現を可能にする汚染破片を最小限に抑えることによって、かなりの数の生存可能な単核細胞を分離する。腸は多くの疾患における炎症の主要な標的部位であるため、このプロトコルは、癌、アレルギー、移植、および自己免疫のマウスモデルにおける腸内免疫集団の研究に有用であり得る。このプロトコルの歩留まりと効率を最適化するために、重要なソリューションと材料を事前に準備しておくことをお勧めします。マウスを安楽死させ、垂直中線切開を行った後、腹骨を開くために細かい解剖はさみを使用してください。鉗子を使用して、小腸を片側に移動し、下降結腸を露出させる。コロンの直腸部分を最大限に露出させるために、下降結腸をわずかに上向きに引っ張ります。次に、骨盤の奥深くに遠位直腸を切断し、遠位直腸からセカールキャップまでの1つの単位として結腸全体を解剖する。まず、湿らせたペーパータオルの上にコロンを置き、はさみまたは鉗子の鈍い端を使用して、腸壁に軽度の圧力を加え、固形便を抽出します。次に、ペトリ皿にコロンを入れ、18ゲージの鈍い充填針で10ミリリットルの注射器を使用して、10ミリリットルの冷たい結腸バッファーで腸を洗い流します。5~10ミリリットルの冷たい結腸バッファーを充填したシャーレにコロンを入れ、残りの大腸内容物を洗浄するために手動で攪拌します。この洗浄を2~3回繰り返し、洗浄ごとに新鮮なバッファーを含む新しいシャーレを使用します。この後、新鮮な冷やした結腸バッファーを含む新しいシャーレにコロンを移します。結腸を縦方向に切断し、そのより筋肉質の直腸端から近位結腸まで、単一の矩形の開いた結腸片を生成する。皿の中の中央値を捨て、きれいな冷やした結腸バッファーに置き換えます。長方形の結腸組織をコロンバッファーで湿らせたペーパータオルの上に置き、水平にスライスしてから小さな断片にスライスして切ります。20ミリリットルのチルドコロンバッファーを含む50ミリリットルのポリプロピレンコンピカルチューブに結腸断片を集めるために、細かい鉗子を使用してください。その後、チューブを30秒間激しく旋回して断片を洗浄します。洗浄後、上清を消す前に組織断片をチューブの底に落ち着かせ、組織断片を失うことを避けるために、洗浄ごとに新鮮な結腸バッファーを使用してこの洗浄プロセス全体を3回繰り返します。まず、洗浄された結腸フラグメントを含むチューブに20ミリリットルのコラゲターゼ消化バッファーを加える。チューブを密封し、60分間2倍のGの回転速度で摂氏37度で軌道シェーカーに置きます。組織断片が撹拌中に一定の動きをしていることを確認します。まず、66%シリカベースの密度分離培地を3つの別個の15ミリリットルのポリプロピレンチューブのそれぞれに5ミリリットル注ぎます。次に、25ミリリットルの血清ピペットを使用して、コラゲナーゼ消化器1から上清のみを収集する。40マイクロリットルのろ過不良生地セルストレーナーを通して上清をフィルターし、清潔な50ミリリットルのポリプロピレンコニカルチューブに入れ。冷却された結腸バッファーでチューブを完全に充填し、コラゲラーゼ消化バッファーをクエンチします。次に細胞を回転させ、上清を吸引し、ペレットを氷の上に置いておきます。テキストプロトコルで概説されているようにコラゲラーゼ消化2を実行し続けます。コラゲナーゼ消化2が完了した後、18ゲージの鈍い端の針を通して、チューブと10ミリリットルのシリンジの間で組織断片を激しく往復させる。このフラッシュを少なくとも7〜8個の通路に対して繰り返し、総組織断片または破片が見えないまで続ける。次に、40マイクロメートルのろ過不良の生地セルストレーナーを通して組織分解懸濁液を、清潔な50ミリリットルのポリプロピレンチューブに入れる。チューブを冷やした結腸バッファーでリムに充填し、消化と遠心分離機を摂氏4度で5分間クエンチします。真空吸引を介して上清を捨て、コラゲナーゼ消化器1から対応するチューブに再懸濁ペレットを引き出します。この後、各ペレットを24ミリリットルの44%シリカベースの密度分離培地に再び中断します。10ミリリットルの血清学的ピペットを使用して、この培地の8ミリリットルを66%シリカベースの密度分離媒体を含む3つのチューブのそれぞれにゆっくりと重ね合わせて使用してください。計量スケールまたはバランスを使用して遠心分離バケツ内のチューブのバランスを慎重に調整します。859倍のGで20°Cで20分間、休憩なしで遠心分離機。ロッドは、勾配のインターフェースで細胞を破壊しないように注意して、チューブを取り外す前に完全な休息に来るようにします。まず、通常1〜2ミリリットルの厚い白いバンドが存在する5ミリリットルマーク付近の勾配界面を視覚化する。真空吸気し、インターフェイスへの簡単なピペットアクセスを可能にするために勾配の上7ミリリットルを捨てます。連続的な手動吸引および安定した回転の手首の動きを使用して、細胞のインターフェイス層を集める。2つの勾配の間の界面が明確かつ屈折するまで収集し、新しい50ミリリットルのポリプロピレンコニカルチューブにインターフェイスを転送します。次に、全懸濁液が50ミリリットルに達するまで、この浴槽にFACSバッファを追加します。摂氏4度で5分間800倍Gで遠心分離機。次いで、真空吸引を介して上清を吸引し、ペレットをFACSバッファーの1ミリリットルで再懸濁させた。このビデオで説明する手順は、結腸から、または、変更を加えて、小腸から単核細胞を単一核細胞を分離するために使用することができる。さらに、細胞測定およびデータ分析は、コラゲナーゼEまたはDのいずれかを単離に使用する場合のアポトーシスリンパ球および壊死/死死リンパ球の分画を比較するために行われ、DNAse 1治療なし。アネキシン5および各単一の単一細胞懸濁液上の固定可能な生死死性染料染色に続いて、ドナーゼを含まないコラゲナーゼEは、ドナーゼを含まないコラゲナーゼDと比較して、単離後の生細胞の割合が有意に高いことを示した。ドナーゼを使用していずれかのコラゲナーゼと比較しても.また、コラゲナーゼE群の壊死細胞を41.0%、コラゲナーゼD群で90.0%の中央値割合で同定しました。コラゲラーゼE DNAse群では75.9%、コラゲナーゼD DNAse群では80.3%。その後、BMTまたは同種異系または同系のBMTモデルを受けた後、7日目にCD45.2バルブCレシピエントマウスから分離されたMNCにマルチペリメトリックフローサイトメトリーが適用されます。BMTレシピエントの結腸から抽出されたドナーCD4陽性およびCD8陽性T細胞の平均絶対数を計算し、比較する。したがって、このようなマウスモデルで希少な免疫細胞集団を同定および/または定量することが重要です。希少なサブセットは、ドナー由来FOX-P3陽性T調節細胞を含む、同系および同種異系のBMTモデルの両方で評価される。この方法を用いて、ドナー由来のコロニーT調節性レシピエントマウスの結腸など、BMT後の稀なサブセットであっても、分析することができる。コラゲターゼEは摂氏37度で活動していることに留意すべきである。したがって、すべてのコラゲターゼ溶液は、適切なコラゲターゼ活性のために事前に温め、活動を終了するために徹底的に消し止める必要があります。このプロトコルは、フルールサイトメトリー、分子生物学技術、顕微鏡、培養、および部位などによって、その後の特性評価に使用できる多数の単核細胞を可能にする。このプロトコルは、骨髄移植モデルにおける実験的対制御マウスの結腸における炎症の信頼できる評価を提供した。このように移植耐性の新しい調節免疫機構の発見を促進する。クロストリジウム・イストリチカムのコラゲナーゼは、ラボの安全技術で取り扱うべき試薬です。吸入すると健康に有害であり、皮膚や眼の刺激を引き起こす可能性があります。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

パーコール勾配を用いて脳と脊髄単核細胞の単離

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

細胞運命を以下に<em&gt; E大腸菌の</emラムダファージによる感染後&gt;

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

マウス歯肉細胞の単離、処理と解析

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

ヒト胸腺からの骨髄樹状細胞と上皮細胞の単離

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

単離、同定、およびマウス胸腺上皮細胞の精製

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

ネズミリンパ節間質細胞の単離

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

母体·胎児界面におけるマウス組織からの白血球の分離

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes

ラット精巣からのセルトリ細胞と尿細管周囲細胞の単離

The testis, and in particular the male gamete, challenges the immune system in a unique way because differentiated sperm first appear at the time of ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

神経膠腫浸潤末梢血単核細胞の単離およびフローサイトメトリー分析

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...