Name: ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Dette arbeidet ble støttet av interne IU-midler. SIDEN unnfanget studien. XC og AGO var involvert i utformingen av de beskrevne eksperimentene.  FL og AGO analysert og tolket dataene. KLL, arbeid, FL utførte alle ex vivo -eksperimenter. FL skrev MATLAB skriptet. KLL, JOB, og AGO skrev manuskriptet.  Alle forfattere leser og godkjente den endelige versjonen av manuskriptet.

Alle prosedyrer med dyr har blitt godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komité ved Indiana University School of Medicine (Indianapolis, IN). 2-5 måned gamle F2-129S-C57BL/6 seksuelt-modne kvinnelige mus ble brukt i studien.
Forsiktig: Sørg for sikkerhet ved å bære en Laboratoriefrakk, maske og hansker når du arbeider med dyr og biologisk farlige materialer.
1. klargjøring av løsning
<ol><li>Klargjør Krebs-bufferen, som inneholde...

<ol>
	<li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+peristalsis+and+fertility:+current+knowledge+and+future+perspectives:+a+review+and+meta-analysis.">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li><li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls.">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li><li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea:+A+clinical+trial+study.">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3 (2018).</li><li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus.">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li><li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysmenorrhea+and+related+disorders.">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645 (2017).</li><li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea.">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751 (2015).</li><li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea.">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91 (2018).</li><li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion.">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li><li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane.">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li><li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images.">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538 (2012).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , (2009).</li><li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus.">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylephrine,+a+common+cold+remedy+active+ingredient,+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling.">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666 (2018).</li><li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus.">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452 (2017).</li><li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat:+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy.">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li></ol>

Her beskrev vi en metode for å vurdere spontane contractility av hele gnagere reproduktive tarmkanalen, som inkluderer eggstokkene, oviducts, livmor horn, og vagina. Vi brukte en lignende metode for å demonstrere den avslappende effekten av fenylefrin på spontane livmor motilitet13, men i det siste var vi ikke i stand til å gi kvantitativ analyse av dataene. I dette arbeidet, utviklet vi en algoritme for kvantitativ motilitet dataanalyse ved hjelp av MATLAB Motion Tracking modul. Dette er en n...

Som et stort kvinnelig organ, er livmoren avgjørende for reproduksjon og avgjørende for næring av fosteret1. Livmoren består av tre lag: perimetrium, myometriet og endometrium. Den myometriet er den store kontraktile lag av livmoren og spiller en nøkkelrolle i fosteret levering. Endometrium er det innerste laget som fôr livmorhulen og er essensielt for implantation. I ikke-gravide kvinner i reproduktiv alder, er livmor laget skur månedlig i begynnelsen av menstruasjonssyklusen. Den myometriet hjelpemidler i denne shedding prosessen ved å opprettholde den spontane myometrielle sammentrekninger som trengs for å fjerne den nekrotisk livmor vev fra livmoren1.
Dessverre, økt myometrielle contractility kan føre til negative bivirkninger som dysmenoré, eller smertefulle menstrual kramper. Dette er spesielt sett hos unge kvinner og nulliparous kvinner2. Imidlertid er dysmenoré forskjellig for hver kvinne og avhenger av styrken av deres myometrielle sammentrekninger; sterkere sammentrekninger er ofte forbundet med følelsen av alvorlige kramper3. Myometrielle contractility kan visualisere ved hjelp av livmor ultralyd og er ofte anerkjent som livmor bølger. Forbedret frigjøring av prostaglandiner under menstruasjon4 i en livmor gjennomgår livmor sloughing antas å bidra til økt myometrielle hypercontractility, resulterer i iskemi og hypoksi av livmor muskelen og dermed økt smerte3.
Alvorlig dysmenoré kan hindre den daglige aktiviteten til noen kvinner og 3 til 33% av kvinner har svært sterke smerter, noe som kan føre til en kvinne som skal sengeliggende for 1 til 3 dager hver menstruasjonssyklus5. Dysmenoré er den ledende årsak til gynekologisk sykelighet hos kvinner i reproduktiv alder uavhengig av alder, nasjonalitet og økonomisk status5. Den estimerte utbredelsen av dysmenoré er både høy og variabel, alt fra 45% til 93% hos kvinner i reproduktiv alder5.  Dysmenoré-assosiert smerte har en effekt på det daglige livet til kvinner og kan resultere i dårlig faglig ytelse hos ungdom, lavere kvalitet på søvn, begrensning av daglige aktiviteter, og humørsvingninger5.
Mange kvinner som opplever alvorlig dysmenoré ty til over-the-counter medisiner for å lindre deres smerte. Slike over-the-counter medisiner inneholder cyclooxygenase (COX) hemmere som hindrer dannelse av prostaglandiner6. Imidlertid er COX-hemmere forbundet med ugunstige kardiovaskulære hendelser, og om lag 18% av kvinner med dysmenoré er ikke svarer til disse hemmere7. Derfor er det behov for nye medisiner for å redusere menstrual kramper. Siden over contractility av livmoren bidrar til patogenesen av dysmenoré, en mulig strategi kan være bruk av livmor lempelse.
Det er fordelaktig å kvantifisere effekten av potensielle avslappende legemidler i en modell av naturlig forekommende spontane myometrielle sammentrekninger. Men hittil har ingen effektiv ex vivo metode for testing av muskel-avslappende stoffer i intakt livmor blitt beskrevet. For øyeblikket brukes isometrisk spennings målinger for å evaluere avslappende legemiddel effekter. Under slike målinger, en livmor muskel stripe opprettholdes ved en konstant lengde under forhåndsinnlasting i et vev bad mens kraften av livmor muskelsammentrekninger er registrert før og etter oxytocin stimulering i nærvær eller fravær av en avslappende narkotika. Selv om denne tilnærmingen er svært nyttig, krever det dyrt utstyr. Videre isometrisk sammentrekninger ikke ligne den spontane myometrielle bølge-lignende sammentrekninger som naturlig forekommer i intakt livmor. Unikt, livmor myometrielle bølger i gnagere kan bli visualisere som livmor horn motilitet når hele reproduktive tarmkanalen (eggstokkene, oviducts, livmor, og vagina) opprettholdes i en buffer løsning. Her presenterer vi en ex vivo metode for overvåking av spontan motilitet av intakt mus livmoren plassert i en Petri parabolen inneholder oksygenert Krebs buffer. Vi beskriver også en motilitet kvantifisering algoritme utnytte MATLAB bevegelse tracker. Denne romanen tilnærmingen gir en enkel og rimeligere alternativ til å teste avslappende potensialet i naturlig forekommende rettsmidler og syntetiske forbindelser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Epinephrine hydrochloride</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">&#160;E4642&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">17-512Q</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Ethanol 200 PROOF</td>
			<td style="width:161px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:75px;">2701</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S7653</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:208px;">Glucose</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">G7528</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:208px;">KCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">P9333</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">C5080</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:208px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S0751</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">MgCl2&#160; &#183; 6H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">M9272</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S6297</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:161px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:75px;">07-893-2374</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Dissecting Extra-Fine-Pointed Precision Splinter Forceps</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific</td>
			<td style="width:75px;">13-812-42</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:208px;">Curved Hardened Fine Iris Scissors</td>
			<td style="width:161px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:75px;">14091-09</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:208px;">Dissection High-performance Modular Stereomicroscope</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">MZ6&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Digital 5 Megapixel Color Microscope Camera with active cooling system</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">&#160;DFC425 C</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Sources</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">12-562-21</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Weigh Boat</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">WB30304</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">Convertors Astound Standard Surgical Gown&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Cardinal Health&#160;</td>
			<td style="width:75px;">9515</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium or Large</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Gloves</td>
			<td style="width:161px;">McKesson Corporation</td>
			<td style="width:75px;">20-1080</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium, or Large; powder-free sterile latex or nitrile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td style="width:227px;">100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td style="width:75px;">353001</td>
			<td style="width:227px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">95% O2- 5% CO2 gas mixture</td>
			<td>Praxair</td>
			<td style="width:75px;">&#160;MM OXCD5-K</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ear-loop Masks</td>
			<td>Valumax International</td>
			<td style="width:75px;">5430E-PP</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DSLR 24.2 MP Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td style="width:75px;">EOS Rebel T6i</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">MATLAB</td>
			<td style="width:161px;">MathWorks</td>
			<td style="width:75px;">N/A</td>
			<td style="width:227px;">version 2019 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis

Dysmenoré, eller smertefull kramper, er det vanligste symptomet forbundet med mensen i kvinner og dens alvorlighetsgrad kan hindre kvinners hverdag. Her presenterer vi en enkel og rimelig metode som ville være instrumental for å teste nye legemidler synkende livmor contractility. Denne metoden utnytter den unike evnen til hele musen reproduktive tarmkanalen å vise spontan motilitet når opprettholdt ex vivo i en Petri parabolen inneholder oksygenert Krebs buffer. Denne spontane motilitet ligner bølge-lignende myometrielle aktivitet av den menneskelige livmor, referert til som livmor bølger. For å demonstrere effektiviteten av metoden, har vi ansatt en velkjent livmor avslappende narkotika, adrenalin. Vi viser at den spontane motilitet av hele musen reproduktive tarmkanalen kan raskt og reverserbart hemmet av 1 μM adrenalin i denne Petri parabolen modellen. Dokumentere endringer av livmor motilitet kan enkelt gjøres ved hjelp av en vanlig smarttelefon eller en sofistikert digitalkamera. Vi utviklet en MATLAB-basert algoritme slik at Motion Tracking for å kvantifisere spontane livmor motilitet endringer ved å måle frekvensen av livmor horn bevegelser. En stor fordel med denne ex vivo-tilnærmingen er at reproduksjons kanalen forblir intakt gjennom hele eksperimentet, og bevarer alle iboende intrauterin cellulære interaksjoner. Den store begrensningen av denne tilnærmingen er at opp til 10-20% av uteri kan vise ingen spontan motilitet. Hittil er dette den første kvantitative ex vivo metode for å vurdere spontane livmor motilitet i en Petri parabol modell.

Figur 1 viser representative bilder tatt under hele reproduksjons kanalen isolasjons prosedyre som er beskrevet i denne protokollen. For å unngå forurensende buffer med pels, noe som ville redusere video kvalitet, fuktet vi musen kroppen med 70% etanol. Den store standarden for disseksjon delen av protokollen er å finne urin blæren. Livmoren og vagina vil bli plassert dårligere enn urin blæren.
For å teste protokollen, behandlet vi hele reproduktive tarmkan...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Livmor sammentrekninger er viktige for kvinners velvære. Patologisk økt contractility kan imidlertid føre til dysmenoré, spesielt hos yngre kvinner. Her beskriver vi en enkel ex vivo forberedelse slik at rask vurdering av effekten av glatt muskelavslappende som kan brukes til behandling av dysmenoré.

Ex vivo metode for vurdering av musen reproduktive tarmkanalen spontan motilitet og en MATLAB-baserte livmor Motion Tracking algoritme for data analyse

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Vår protokoll er betydelig fordi den gir den første kvantitative ex vivo-metoden for å vurdere spontan motilitet av en intakt livmor. Denne nye tilnærmingen gir et enkelt og billigere alternativ for å teste det avslappende potensialet til naturlig forekommende rettsmidler i syntetiske forbindelser. En stor fordel med denne teknikken er at alle intra-livmor cellulære interaksjoner forblir intakt gjennom hele eksperimentet.Over kontraktilitet i livmoren er forbundet med dysmenoré, som livmoravslappende midler kan være nyttige for behandling. Denne metoden gir en enkel måte å teste nye avslappende midler på. Etter å ha bekreftet estrous syklus scenen, plasser musen i liggende stilling, og spre ekstremiteter for å avsløre abdominal bekkenområdet.Våt magen med 70% etanol, og bruk tang for å forsiktig løfte huden overlegen klitoris. Lag små tverrgående snitt på de laterale aspektene av nedre bukområde opp til øvre ekstremiteter for å avsløre bukhinnen. Skjær forsiktig gjennom bukhinnen for å utsette mage-tarmkanalen uten å skade livmorhornene, og bruk tang for å fjerne fascia og fettvev som dekker mage-tarmkanalen.Fjern tolvfingertarmen, jejunum, ileum, cecum, og stigende og tverrgående kolon. Finn urinblæren for å finne skjeden som finnes rett under urinblæren. Finn kjønnssympysen ved samløpet av kjønnsben, caudal til blæren, og bruk saks for å nøye gjøre et snitt på sidesiden av kjønnssympyse gjennom det interpubiske fibrocartilaginous vevet for å få tilgang og for å gi en rute for vaginal ekstraksjon.Skjær gjennom perineum ligger mellom anus og nedre del av vulva, og bruk tang for å løfte skjeden for å tillate en langsom eksisjon av endetarmen. Identifiser de to livmorhornene som bifurcate inn i en gaffel rostrally til skjeden og finn en innviklet oviduct og eggstokk på slutten av hvert horn. Korrekt identifisering av livmorhornene er avgjørende for prosedyren for å sikre at vevet ikke er skadet.Bruk små dissekering saks for å fjerne eventuelle leddbånd som kobles til og støtter horn, oviducts og eggstokkene i bukhulen, og fjerne vagina, livmor, oviducts og eggstokkene. Overfør hele isolerte reproduksjonskanaler til en 100 millimeter petriskål som inneholder 10 milliliter dulbeccos PBS. Bruk tang og kirurgisk saks for å fjerne bindevev og fettvev rundt livmorhornene og skjeden, samt eventuell pels i kjønnsområdet som kan hindre bildekvaliteten.Fjern det brede ligamentet for å tillate motilitet av livmorhornene og vask vevet to ganger med fersk Dulbeccos PBS per vask før du overfører den isolerte reproduktive kanalen til en 35 millimeter petriskål som inneholder tre milliliter oksygenert Krebs-løsning. For spontan motilitetsavbildning, legg petriskålen på en svart overflate ved romtemperatur, og la det begynne å begynne med 15 til 30 minutter for spontane sammentrekninger. Når bevegelse kan observeres, ta opp spontan livmormotilitet i 10 minutter fra et aksialplan ved hjelp av alle typer digitalt videoutstyr.Deretter overfører du preparatet til en petriskål som inneholder oksygenerte Krebs-buffer supplert med testforbindelsen og registrerer spontan livmormotilitet i ytterligere 10 minutter på samme måte. På slutten av innspillingsperioden vasker du hele reproduktive kanalen i 10 milliliter av Dulbeccos PBS i en 100 millimeter petriskål, og overfør prøven til en ny petriskål med nysygensyreholdig Krebs-buffer for å vurdere reversibilitetet av behandlingen. Ta opp spontan livmormotilitet i ca 10 minutter på samme måte, som for de to siste opptakene.Deretter overføre preparatet til en annen 35 millimeter Petri skål fylt med oksygenert Krebs buffer supplert med kjøretøyet for testforbindelsen for å sikre at det ikke er mekanisk indusert endringer i spontan livmor motilitet. Det reproduktive preparatet viste høy motilitet i panel A og C i fravær av adrenalin. Men denne fenotypen er sovende i panel B med tilstedeværelse av en mikro muller adrenalin.Her vises en prøvedataanalyse av adrenalinadministrasjon og spontan motilitetsgjenoppretting, som illustrerer hvordan effekten av hormonet på reproduktive kanaler spontan motilitet kan kvantifiseres fra opptakene av vevet tatt før, under og etter testforbindelsesbehandling. Det er viktig å unngå å komprimere eller overstretching livmor horn ellers ingen spontan kontraktilitet vil bli observert. Vår metode kan også brukes til å teste forbindelser som kan øke livmorens kontraktilitet.Denne prosedyren kan brukes på gravid mus uteri i de tidligere stadiene av svangerskapet. Dette eksperimentet har potensial til å bli oppgradert til en seks brønn plate format for gjennomstrømning narkotika screening.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

A Novel Bayesian Change-point Algorithm for Genome-wide Analysis of Diverse ChIPseq Data Types

A Novel Bayesiansk Change-point algoritme for Genome-wide analyse av Diverse ChIPseq Datatyper

ChIPseq is a widely used technique for investigating protein-DNA interactions. Read density profiles are generated by using next-sequencing of ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo metode for High Resolution Imaging av Cilia Motility i Gnagere Airway epithelia

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Metode for den embryonale mus Hjerte

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

I Vivo Mikroinjeksjon og Electroporation mus Testis

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Kartlegging av Motilitet i<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Forberedelser av tarmen

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Måle Stivhet<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mus Aorta Bruke Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Et grafisk brukergrensesnitt for programvareassistert sporing av proteinkonsentrasjon i dynamiske cellulære protrusjoner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...