Vi studerede tilgængeligheden af opløselighed af mikrometaller som zink selen med forskellige kemiske former eller kilder, som vi kalder det, i forbindelse med ændring af fodersammensætning. I en radionukleid suite, vejer ca 0,2 gram jorden atlantiske laks foder prøver, og bland det med en zink radiotracer af kendte specifikke aktivitet i en fem milliliter volumen prøve rør. Forbered seks andre aliquots af bufferen og tilsæt en af de aminosyrer, der vises her til hver for at nå en endelig molarkoncentration på fem millimolar.
Tilsæt ferskvands intestinal luminal buffer til at fodre prøven. Derefter tilsættes ferskvands intestinal luminal buffer til buffer aliquots indeholdende aminosyrer. Luk rørene og drej dem på en roterende spinner ved 25 RPM i 30 minutter.
Derefter centrifuge ved 1, 157 x g i 10 minutter, for at adskille de opløselige og ikke opløselige fraktioner. Brug en gammatæller til at måle antallet pr. minut af zinkradiotraceren i de opløselige og ikke-opløselige fraktioner. Vask regnbueørred afledte tarmcellelinje to gange med en milliliter EDTA-opløsning, og sifoner opløsningen ud efter hver vask ved hjælp af en pipette.
Behandl de vaskede celler med 0,25% trypsinopløsning. Drej forsigtigt kolben i spidse vinkler i to minutter. Derefter tilsættes 10 milliliter L-15 medium, der indeholder 5% FBS at neutralisere trypsin.
Ved hjælp af en steril pipette dekanteres den resulterende celleaffjedring i et konisk bundcentrifugerør. Centrifuge ved 130 x G i tre minutter. Derefter ved hjælp af et hæmocytometer bestemmes tætheden af de høstede celler ved manuel optælling.
Frø cellerne på 24 brøndplader ved en celletæthed på 50.000 celler pr. milliliter pr. brønd, og inkuber pladerne ved 19 grader Celsius under en normal atmosfære i 48 timer før forsøgene. Efter fodring af fisken i 11 dage og aflivning af dem, indsamle en samlet prøve af fiskens afføring ved stripning fra ventral fin til anus og placere den på en plade. Brug en spatel til at overføre afføringen fra pladen til et 50 milliliter konisk rør.
Opbevar straks prøverne ved 20 grader Celsius. I denne undersøgelse vurderes mineraltilgængeligheden af fiskefoder ved hjælp af en række gratis metoder. Repræsentativ analyse af atlanterhavslaksfoder via kromatografimetoden med oprindelseseksitivt koblet plasmamassespektrometri giver data om de kemiske zinkarter, der findes i den opløselige fraktion.
Fem zinkholdige toppe kan ses i denne fraktion, hver med en anden molekylvægt. De zinkkemikalier, der findes i den opløselige fraktion, kan have forskellige kilder, fordi det anvendte foder indeholder både marine og plantebaserede ingredienser og suppleres. Den molekylære vægtområde af disse arter tyder på, at disse forbindelser kan være metalloproteiner.
Mens opløseligheden af suppleret zink 65 øger tilstedeværelsen af alle de testede aminosyrer, højere opløselighed findes med histidin og lysin. Apisk zinkoptagelse i Arteca GC-celler påvirkes betydeligt af tilstedeværelsen af L-Met eller DL-Met ved to millimolarkoncentrationer. Desuden påvirkes methioninens indvirkning på zinkoptagelsen negativt af tilstedeværelsen af BCH.
Den største fordel ved denne protokol er, at vi forsøgte at kombinere forskellige tilgange i visuelle, analytiske og invivo-undersøgelser for at sammenligne og komplimentere hinanden, når det kommer til at studere mineraltilgængelighed.