Estudamos a disponibilidade de solubilidade de microducos como o selênio de zinco com diferentes formas químicas ou fontes, como chamamos, no contexto de mudança da composição alimentar. Em uma suíte de radionuclídeo, pese aproximadamente 0,2 gramas de amostras de ração de salmão do Atlântico moído, e misture-o com um radiotracer de zinco de atividade específica conhecida em um tubo de amostra de volume de cinco mililitros. Prepare seis outras alíquotas do tampão e adicione um dos aminoácidos mostrados aqui a cada um para alcançar uma concentração molar final de cinco milimiliar.
Adicione tampão luminal intestinal de água doce para alimentar a amostra. Em seguida, adicione o tampão luminal intestinal de água doce aos aliquots tampão contendo os aminoácidos. Feche os tubos e gire-os em um rotador rotativo a 25 RPM por 30 minutos.
Em seguida, centrífugas a 1.157 x g por 10 minutos, para separar as frações solúveis e não solúveis. Use um caixa gama para medir as contagens por minuto do radiotracer de zinco nas frações solúveis e não solúveis. Lave a linha de célula intestinal derivada da truta arco-íris duas vezes com um mililitro de solução EDTA, e sifão a solução após cada lavagem usando uma pipeta.
Trate as células lavadas com solução de trippsina de 0,25%. Gire suavemente o frasco em ângulos agudos por dois minutos. Em seguida, adicione 10 mililitros de meio L-15 contendo 5% de FBS para neutralizar a trippsina.
Usando uma pipeta estéril, decante a suspensão celular resultante em um tubo cônico de centrífuga inferior. Centrifugar a 130 x G por três minutos. Em seguida, usando um hemótmetro, determine a densidade das células colhidas por contagem manual.
Semear as células em 24 placas de poço a uma densidade celular de 50.000 células por mililitro, por poço, e incubar as placas a 19 graus Celsius sob uma atmosfera normal por 48 horas antes dos experimentos. Depois de alimentar o peixe por 11 dias e eutanásia-los, recolham uma amostra agrupada das fezes do peixe, retirando da barbatana ventral para o ânus e coloque-o em um prato. Use uma espátula para transferir as fezes da placa para um tubo cônico de 50 mililitros.
Armazene imediatamente as amostras a 20 graus Celsius. Neste estudo, a disponibilidade mineral da ração de peixe é avaliada por meio de uma série de métodos complementares. A análise representativa da ração de salmão atlântico através do método de espectrometria de massa de plasma indutivamente acoplado à cromatografia, fornece dados sobre as espécies químicas de zinco encontradas na fração solúvel.
Cinco picos contendo zinco podem ser vistos nesta fração, cada um com um peso molecular diferente. As espécies químicas de zinco encontradas na fração solúvel podem ter diferentes fontes, porque a ração utilizada contém ingredientes à base marinha e à base de plantas, e é suplementada. A faixa de peso molecular dessas espécies sugere que esses compostos podem ser metaloproteínas.
Enquanto a solubilidade do zinco suplementado 65 aumenta a presença de todos os aminoácidos testados, maior solubilidade é encontrada com histidina e lisina. A absorção de zinco apical em células Arteca GC é significativamente influenciada pela presença de L-Met ou DL-Met em duas concentrações milimiliar. Além disso, o impacto da methionina na captação de zinco é afetado negativamente pela presença de BCH.
A principal vantagem deste protocolo é que tentamos combinar diferentes abordagens em estudos visuais, analíticos e invivos, para comparar e elogiar uns aos outros quando se trata de estudar a disponibilidade mineral.
