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•
11:34 min
July 18th, 2019
DOI :
10.3791/59866-v
Chapters
0:04
Title
1:01
Human Islet Dissociation
2:30
Single Cell Suspension Quality Control and Single Cell Partitioning
4:10
Single Cell cDNA Amplification
6:19
Library Sequencing
8:11
Read Alignment and Data Analysis
9:53
Results: Dissociation, Single-cell Emulsion, cDNA Library, and Cell Types
11:09
Conclusion
Transcript
该协议生成单个人类小岛细胞的高通量转录数据,可用于研究异质性、识别罕见细胞类型和疾病中的基因调控。该技术可生成较大规模的单细胞数据,易于使用,处理时间相当短。此方法可应用于来自其他物种的小岛,并用于剖面其他新鲜分离的组织。
然而,协议需要优化,以适应组织特定的分离程序。准备高质量的分离细胞至关重要。单细胞分治前的细胞悬浮液的QC是关键,就像小心和快速处理乳液一样。
一些质量检查点,如知道芯片是否堵塞,比阅读更好看。在获得人类小岛并孵育过夜后,使用P200移液器计数并
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Summary
在这里,我们提出了一个协议,利用基于液滴的微流体单细胞RNA测序技术,从分离的人类胰腺胰岛生成单个细胞的高质量、大规模转录组数据。
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