Name: semi-automatic pd-l1 characterization and enumeration of circulating tumor cells from non-small cell lung cancer patients by immunofluorescence
Uploaded: 2019-08-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل بمنح بحثية من أسترازينيكا (لندن، المملكة المتحدة)، وشركة بوليديكس (سنغافورة)، ورابطة مكافحة السرطان (سون ولوار، فرنسا). ويشكر المؤلفان شركتي أسترازينيكا وبيوليليكس على دعمهما المالي.

وقد جُمعت العينات في المستقبل في إطار مجموعة "سيركان" (CIRCAN'CIRculating CANcer) المتمركزة في مستشفى جامعة ليون بعد موافقة خطية من المريض. تم دمج هذه الدراسة في مجموعة CIRCAN_ALL. تم الاعتراف بالدراسة CIRCAN_ALL على أنها غير تدخلية من قبل حزب الشعب الكمبودي جنوب شرق الرابع بتاريخ 04/11/2015 تحت المرجع L15-188. تم الاعتر...

<ol>
	<li>Gandhi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+plus+Chemotherapy+in+Metastatic+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab plus Chemotherapy in Metastatic Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (22), 2078-2092 (2018).</li><li>Paz-Ares, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+plus+Chemotherapy+for+Squamous+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab plus Chemotherapy for Squamous Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 379 (21), 2040-2051 (2018).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Hellmann, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Mutational+Burden+and+Efficacy+of+Nivolumab+Monotherapy+and+in+Combination+with+Ipilimumab+in+Small-Cell+Lung+Cancer.">Tumor Mutational Burden and Efficacy of Nivolumab Monotherapy and in Combination with Ipilimumab in Small-Cell Lung Cancer.</a> Cancer Cell. 33 (5), 853-861 (2018).</li><li>Chouaid, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+clinical+impact+of+re-biopsy+in+advanced+non+small-cell+lung+cancer:+a+prospective+multicenter+study+in+a+real-world+setting+(GFPC+study+12-01).">Feasibility and clinical impact of re-biopsy in advanced non small-cell lung cancer: a prospective multicenter study in a real-world setting (GFPC study 12-01).</a> Lung cancer. 86 (2), 170-173 (2014).</li><li>Nosaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-biopsy+status+among+non-small+cell+lung+cancer+patients+in+Japan:+A+retrospective+study.">Re-biopsy status among non-small cell lung cancer patients in Japan: A retrospective study.</a> Lung cancer. 101, 1-8 (2016).</li><li>Uozu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+tissue+re-biopsy+in+non-small+cell+lung+cancers+resistant+to+previous+epidermal+growth+factor+receptor+tyrosine+kinase+inhibitor+therapies.">Feasibility of tissue re-biopsy in non-small cell lung cancers resistant to previous epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor therapies.</a> BMC Pulmonary Medicine. 17 (1), 175 (2017).</li><li>Kim, T. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+re-biopsy+and+EGFR+mutation+analysis+in+patients+with+non-small+cell+lung+cancer.">Feasibility of re-biopsy and EGFR mutation analysis in patients with non-small cell lung cancer.</a> Thoracic Cancer. 9 (7), 856-864 (2018).</li><li>Nicolazzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+PD-L1+positive+circulating+tumor+cells+in+non-small+cell+lung+cancer+patients+treated+with+the+PD-1+inhibitor+Nivolumab.">Monitoring PD-L1 positive circulating tumor cells in non-small cell lung cancer patients treated with the PD-1 inhibitor Nivolumab.</a> Scientific Reports. 6, 31726 (2016).</li><li>Guibert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+circulating+tumor+cells+of+advanced+non-small+cell+lung+cancer+patients+treated+with+nivolumab.">PD-L1 expression in circulating tumor cells of advanced non-small cell lung cancer patients treated with nivolumab.</a> Lung cancer. 120, 108-112 (2018).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+Expression+in+Circulating+Tumor+Cells+Increases+during+Radio(chemo)therapy+and+Indicates+Poor+Prognosis+in+Non-small+Cell+Lung+Cancer.">PD-L1 Expression in Circulating Tumor Cells Increases during Radio(chemo)therapy and Indicates Poor Prognosis in Non-small Cell Lung Cancer.</a> Scientific Reports. 9 (1), 566 (2019).</li><li>Hao, S. -. J., Wan, Y., Xia, Y. -. Q., Zou, X., Zheng, S. -. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-based+separation+methods+of+circulating+tumor+cells.">Size-based separation methods of circulating tumor cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 125, 3-20 (2018).</li><li>Williams, A., Balic, M., Datar, R., Cote, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-based+enrichment+technologies+for+CTC+detection+and+characterization.+Recent+results+in+cancer+research.">Size-based enrichment technologies for CTC detection and characterization. Recent results in cancer research.</a> Fortschritte der Krebsforschung. Progres dans les recherches sur le cancer. 195, 87-95 (2012).</li><li>Garcia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+of+Circulating+Tumor+DNA+(ctDNA)+in+Plasma+of+non-small+cell+lung+cancer+(NSCLC)+patients,+Monitoring+of+EGFR+p.T790M+mutated+allelic+fraction+using+BEAMing+Companion+Assay+and+Evaluation+in+future+application+in+mimicking+Circulating+Tumors+Cells+(mCTC).">Profiling of Circulating Tumor DNA (ctDNA) in Plasma of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients, Monitoring of EGFR p.T790M mutated allelic fraction using BEAMing Companion Assay and Evaluation in future application in mimicking Circulating Tumors Cells (mCTC).</a> Cancer Medicine. , (2019).</li><li>Garcia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+pre-analytical+conditions+and+comparison+of+the+performance+of+several+digital+PCR+assays+for+the+detection+of+major+EGFR+mutations+in+circulating+DNA+from+non-small+cell+lung+cancers:+the+CIRCAN_0+study.">Evaluation of pre-analytical conditions and comparison of the performance of several digital PCR assays for the detection of major EGFR mutations in circulating DNA from non-small cell lung cancers: the CIRCAN_0 study.</a> Oncotarget. 8 (50), 87980-87996 (2017).</li><li>Lustberg, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+atypical+cell+populations+are+present+in+blood+of+metastatic+breast+cancer+patients.">Heterogeneous atypical cell populations are present in blood of metastatic breast cancer patients.</a> Breast Cancer Research. 16 (2), 23 (2014).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Sentinel"+circulating+tumor+cells+allow+early+diagnosis+of+lung+cancer+in+patients+with+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">"Sentinel" circulating tumor cells allow early diagnosis of lung cancer in patients with chronic obstructive pulmonary disease.</a> PLoS ONE. 9 (10), 111597 (2014).</li><li>Khoo, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+validation+of+an+ultra+high-throughput+spiral+microfluidics+for+the+detection+and+enrichment+of+viable+circulating+tumor+cells.">Clinical validation of an ultra high-throughput spiral microfluidics for the detection and enrichment of viable circulating tumor cells.</a> PLoS ONE. 9 (7), 99409 (2014).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Biswas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+for+assessing+programmed+death+ligand-1+expression+in+nonsmall+cell+lung+cancer.">Clinical performance of endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration for assessing programmed death ligand-1 expression in nonsmall cell lung cancer.</a> Diagnostic Cytopathology. 46 (5), 378-383 (2018).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li></ol>

وقد أثيرت نقطتان رئيسيتان في هذه الدراسة، الأولى فيما يتعلق بأداء سير العمل لنقله إلى التطبيقات السريرية، والثانية تتعلق بانخفاض الذاتية لتحليل صور الفلورة التي تم الحصول عليها.
تم تحديد سير عمل أداء ومحسن لتعداد CTC في البداية باستخدام فحص IF للتخصيص بعد إثراء الخلية عن طري...

تلعب الخلايا الليمفاوية T السامة للخلايا (CTLs) دورًا حاسمًا في الاستجابة للسرطانات من خلال عملية تعرف باسم "المراقبة المناعية" للسرطان. يتم تعزيز وظائفها المضادة للورم من قبل الأجسام المضادة حاجز نقطة التفتيش المناعية مثل مثبطات CTLA-4 ومثبطات PD-1/PD-L1. في سرطان الرئة الخلية غير الصغيرة (NSCLC)، العلاجات المضادة للPD-1/PD-L1 تؤدي إلى معدلات استجابة تتراوح بين 0٪ -17٪ في المرضى الذين يعانون من الأورام السلبية PD-L1 و 36٪ -100٪ في تلك التي تعبر PD-L1. تظهر الاستجابات القوية لحصار PD-1/PD-L1 الذي لوحظ في الورم الميلانيني وNSCLC من خلال الأدلة على تحسن معدل الاستجابة الإجمالي (RR)، والفوائد السريرية الدائمة، والبقاء على قيد الحياة الخالي من التقدم (PFS). حاليا، العلاجات المضادة للPD1 هي معيار الرعاية في الخط الثاني NSCLC العلاج مع nivolumab بغض النظر عن التعبير PD-L1 ومع pembrolizumab في المرضى الذين يعبرون PD-L1 ≥ 1٪. في علاج الخط الأول، ومعيار الرعاية هو pembrolizumab وحدها في المرضى الذين يعانون من NSCLC التعبير PD-L1 ≥ 50٪ ويمكن تعزيزها يحتمل أن تكون مع العلاج الكيميائي (platin ودواء دوبلت اعتمادا على النوع الفرعي الأنسجة)1،2.
ومع ذلك، فإن مثل هذا النهج لإدارة المريض قابل للنقاش3، حيث أن تعبير PD-L1 في الخلايا السرطانية عن طريق الكيمياء المناعية (IHC) ربما ليس العلامة الحيوية المصاحبة الأكثر مثالية. أخرى مثل عبء طفرة الورم4 (TMB)، عدم استقرار الأقمار الصناعية الدقيقة (MSI)، و / أو ميكروبيوتا ربما تكون مثيرة للاهتمام في هذا الإعداد إما وحدها أو في تركيبة. ومن المعروف NSCLC أن تكون الأورام غير متجانسة، إما مكانيا (من موقع الورم إلى آخر واحد) أو زمنيا (من التشخيص إلى التكرار). المرضى الذين يعانون من NSCLC عادة ما تكون هشة، والخزعات الأنسجة الغازية المتكررة قد تكون مشكلة. في الواقع، يتراوح معدل إعادة خزعة في التقدم الأول من 46٪ -84٪ اعتمادا على سلسلة، وإعادة خزعة ناجحة (وهذا يعني مع التحليل النسيجي والجزيئي الكامل) يتراوح بين 33٪-75٪. وهذا يعني أن 25٪ -67٪ من المرضى لا يمكن الحصول على تحليل شامل لإعادة خزعة خلال التقدم الأول5،6،7،8.
وبالتالي فإن ظهور "الخزعات السائلة" قد ولّد حماساً كبيراً في هذا السياق الخاص، حيث أنه يمكّن من إعادة تقييم حاسمة للتغيرات الجزيئية أثناء تطور المرض من خلال فحص تعميم الحمض النووي الحر (cfDNA) المستمد من تعميم الخلايا السرطانية (CTCs). يتم تحرير هذه الخلايا الحية من الورم في مجرى الدم، حيث أنها تدور بحرية. على الرغم من عدم استخدامها بشكل روتيني، يبدو أن تحليل CTCs واعد للغاية في حالة التوصيف الجزيئي والفينوتي، والتكهن، والأهمية التنبؤية في سرطان الرئة (عنطريق DNAseq، RNAseq، ميرنا وتحليل البروتين). في الواقع، من المرجح أن تحتوي الـ CTCs على خصائص فينوتيبيك للمرض النشط بدلاً من العلامات الأولية (التي تم اكتشافها عند التشخيص). وعلاوة على ذلك، تتجاوز CTCs مشكلة عدم التجانس المكاني للأنسجة السرطانية، والتي قد تكون مشكلة حاسمة في الخزعات الصغيرة. وبالتالي، فإن تعبير PD-L1 على CTCs قد يلقي الضوء على الاختلافات المستمدة من استخدامه كعلامة بيولوجية تنبؤية باستخدام أنسجة الورم.
في الآونة الأخيرة، تم اختبار تعبير PD-L1 في CTCs من NSCLC. تقريبا جميع المرضى اختبار9 كانت PD-L1 إيجابية، مما يعقد تفسير النتيجة واستخدامها السريري. وبشكل عام، تم الكشف عن CTCs إيجابية PD-L1 في 69.4٪ من العينات من متوسط 4.5 خلايا / مل10. بعد بدء العلاج الإشعاعي، زادت نسبة CTCs إيجابية PD-L1 بشكل كبير، مما يشير إلى رفع تنظيم التعبير PD-L1 استجابة للإشعاع11. وبالتالي، يمكن استخدام تحليل CTCs PD-L1 لرصد التغيرات الديناميكية للورم والاستجابة المناعية، والتي قد تعكس الاستجابة للعلاج الكيميائي، والإشعاع، والعلاج المناعي المحتمل (IT).
وحتى الآن، تعتمد عزلة CTCs وتوصيف PD-L1 على أساليب مختلفة مثل التقاط أجهزة مكافحة الحصى المغناطيسية المغلفة بالخرز، والاختبار القائم على التخصيب، والاختبار القائم على الحجم12و13 من مركبات مكافحة الإرهاب. ومع ذلك، تم الكشف عن CTCs فقط في 45٪ -65٪ من المرضى الذين يعانون من NSCLC النقيلي، مما يحد من قدرتهم على توفير أي معلومات لأكثر من نصف المرضى NSCLC النقيلي. وبالإضافة إلى ذلك، كان عدد الـ CTC منخفضاً في معظم هذه الدراسات باستخدام النهج القائم على الحجم10. وعلاوة على ذلك، أدت هذه الطريقة إلى اختلافات مثل الكشف عن خلايا CD45 (-)/DAPI(+) مع "أنماط الأورام الخبيثة" في مجرى الدم من المتبرعين الأصحاء. وتبرز هذه الشواغل الحاجة إلى طريقة حساسة للغاية لجمع رابع كلوريد الكربون المرتبطة بالنمط الظاهري المناعي لخلايا CD45 (-) غير النمطية من الدم الكامل السليم باستخدام علامات حيوية إضافية للسرطان (أي TTF1، فيمنتين، EpCAM، وCD44) في NSCLC.
وبالتالي، قمنا بتقييم جهاز microfluidic دوامة يستخدم القصور الذاتي ودين سحب القوات لفصل الخلايا على أساس الحجم واللدونة من خلال رقاقة microfluidic. تشكيل تدفقات دوامة عميد موجودة في رقاقة microfluidic النتائج في CTCs أكبر تقع على طول الجدار الداخلي والخلايا المناعية أصغر على طول الجدار الخارجي للرقاقة. وتكتمل عملية التخصيب عن طريق سرقة الخلايا الأكبر حجما ً إلى منفذ التجميع كجزء من رابع كلوريد الكربون المخصب. هذه الطريقة حساسة ومحددة بشكل خاص (الكشف عن حوالي 1 CTC/مل من الدم كله)14 ويمكن أن تكون مرتبطة مع تحليلات الفلورة المناعية المخصصة (IF). وستمكن هذه الأدوات من وضع عتبة إيجابية للتفسير السريري. وهكذا يتم وصف سير العمل الذي يمكّن علماء الأحياء من عزل وخصائص CTCs ذات النمط المناعي المناعي بمعدل عال من الانتعاش والخصوصية. يصف البروتوكول الاستخدام الأمثل للجهاز الميكروفلويديك اللولبي لجمع CTCs، والاختبارات IF الأمثل التي يمكن تخصيصها وفقا لنوع السرطان، واستخدام البرمجيات الحرة مفتوحة المصدر لقياس وتحليل صور الخلايا لأداء شبه تلقائي حساب الخلايا وفقا لتلطيخ الفلورسنت. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تنفيذ تعدد الإرسال المجهر اعتمادا على عدد من مرشحات الفلورسنت / علامات المتاحة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1004px;" width="1004">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">4&#39;,6-diamidino-2-ph&#233;nylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:148px;">Ozyme</td>
			<td style="width:105px;">BLE 422801</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:376px;">BD Facs Clean &#8211; 5L</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">340345</td>
			<td style="width:375px;">Bleach-based cleaning agent. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Bleach 1% Cleaning Solution 100 mL</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F016012</td>
			<td style="width:375px;">Bleach. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Bovine Serum Albumin (BSA) 7.5%</td>
			<td style="width:148px;">Sigma</td>
			<td style="width:105px;">A8412</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">CD45 monoclonal antibody (clone HI30) Alexa Fluor 647</td>
			<td style="width:148px;">BioLegend</td>
			<td style="width:105px;">BLE304020</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">CellProfiler Software</td>
			<td style="width:148px;">Broad Institute</td>
			<td style="width:105px;"></td>
			<td style="width:375px;">Image Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Centrifuge device</td>
			<td style="width:148px;">Hettich</td>
			<td style="width:105px;">4706</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Centrifuge tube 50 mL</td>
			<td style="width:148px;">Corning</td>
			<td style="width:105px;">430-829</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Centrifuge Tube 15 mL</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F001004-25</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">ClearCell FX-1 System</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F011002</td>
			<td style="width:375px;">Spiral microfluidic device. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:376px;">Coulter Clenz Cleaning Agent &#8211; 5L</td>
			<td style="width:148px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:105px;">8448222</td>
			<td style="width:375px;">All-purpose cleaning reagent. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">CTChip FR1S</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-FR001002</td>
			<td style="width:375px;">Microfluidic chip. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Cytospin 4</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">A78300003</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Diluent Additive Reagent &#8211; 20 mL</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F016009</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:376px;">EZ Cytofunnels</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">A78710003</td>
			<td style="width:375px;">Sample chamber with cotton. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">FcR blocking Agent</td>
			<td style="width:148px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:105px;">130-059-901</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Fetal Calf Serum (FCS)</td>
			<td style="width:148px;">Gibco</td>
			<td style="width:105px;">10270-106</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Fluoromount</td>
			<td style="width:148px;">Sigma</td>
			<td style="width:105px;">F4680</td>
			<td style="width:375px;">Mounting solution. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Fungizone - 50 mg</td>
			<td style="width:148px;">Bristol-Myers-Squibb</td>
			<td style="width:105px;">90129TB29</td>
			<td style="width:375px;">Anti-fungal reagent. Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">FX1 Input Straw with lock cap</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F013005</td>
			<td style="width:375px;">Straw. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">KovaSlide</td>
			<td style="width:148px;">Dutscher</td>
			<td style="width:105px;">50126</td>
			<td style="width:375px;">Chambered slide. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">PanCK monoclonal antibody (clone AE1/AE3) Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">53-9003-80</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Paraformaldehyde 16%</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">11490570</td>
			<td style="width:375px;">Fixation solution. Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">PD-L1 monoclonal antibody (clone 29E2A3) - Phycoerythrin</td>
			<td style="width:148px;">BioLegend</td>
			<td style="width:105px;">BLE329706</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Petri Dish</td>
			<td style="width:148px;">Dutscher</td>
			<td style="width:105px;">632180</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:148px;">Ozyme</td>
			<td style="width:105px;">BE17-512F</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Phosphate Buffered Saline Ultra Pure Grade 1X &#8211; 1L</td>
			<td style="width:148px;">1st Base Laboratory</td>
			<td style="width:105px;">BUF-2040-1X1L</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Pluronic F-68 10%</td>
			<td style="width:148px;">Gibco</td>
			<td style="width:105px;">24040-032</td>
			<td style="width:375px;">Anti-binding solution. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Polylysine slides</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">J2800AMNZ</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Polypropylene Conical Tube 50 mL</td>
			<td style="width:148px;">Falcon</td>
			<td style="width:105px;">352098</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">RBC Lysis Buffer &#8211; 100 mL</td>
			<td style="width:148px;">G Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">786-649</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">RBC Lysis Buffer &#8211; 250 mL</td>
			<td style="width:148px;">G Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">786-650</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Resuspension Buffer (RSB)</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F016003</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Shandon Cytopsin4 centrifuge</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">A78300003</td>
			<td style="width:375px;">Dedicated centrifuge. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Silicon Isolator</td>
			<td style="width:148px;">Grace bio-Labs</td>
			<td style="width:105px;">664270</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Sterile Deionized Water &#8211; 100 mL</td>
			<td style="width:148px;">1st Base Laboratory</td>
			<td style="width:105px;">CUS-4100-100ml</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Straight Fluorescent microscope Axio Imager D1</td>
			<td style="width:148px;">Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Surgical Sterile Bag</td>
			<td style="width:148px;">SPS Laboratoires</td>
			<td style="width:105px;">98ULT01240</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Syringe BD Discardit II 20 mL sterile</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">300296</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Syringe Filter 0.22 &#181;m 33 mm sterile</td>
			<td style="width:148px;">ClearLine</td>
			<td style="width:105px;">51732</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Zen lite 2.3 Lite Software</td>
			<td style="width:148px;">Zeiss</td>
			<td style="width:105px;"></td>
			<td style="width:375px;">Microscope associated software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

semi-automatic pd-l1 characterization and enumeration of circulating tumor cells from non-small cell lung cancer patients by immunofluorescence

يتم إلقاء الخلايا السرطانية المتداولة (CTCs) المستمدة من الورم الأساسي في مجرى الدم أو الجهاز اللمفاوي. هذه الخلايا النادرة (1-10 خلايا لكل مل من الدم) تبرر سوء التكهن وترتبط بالبقاء على قيد الحياة بشكل عام أقصر في العديد من السرطانات (مثل الثدي والبروستاتا والقولون والمستقيم). حاليا، ومكافحة EpCAM المغلفة المغناطيسي حبة القائم على نظام التقاط CTC هو اختبار معيار الذهب المعتمدة من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) لتعداد CTCs في مجرى الدم. ويستند هذا الاختبار على استخدام الخرز المغناطيسي المغلفة مع علامات المضادة للEpCAM، والتي تستهدف على وجه التحديد الخلايا السرطانية الظهارية. وقد أوضحت العديد من الدراسات أن EpCAM ليست العلامة المثلى للكشف عن رابع كلوريد الكربون. في الواقع، CTCs هي مجموعة فرعية غير متجانسة من الخلايا السرطانية وقادرة على الخضوع لانتقال الظهارية إلى mesenchymal (EMT) المرتبطة الانتشار النقيلي والغزو. هذه CTCs قادرة على الحد من التعبير عن سطح الخلية علامة الظهارية EpCAM، في حين زيادة علامات mesenchymal مثل vimentin. ولمعالجة هذه العقبة التقنية، تم تطوير أساليب عزل أخرى تستند إلى الخصائص الفيزيائية للمراكز. تتيح التقنيات الميكروفلويدية اتباع نهج خالٍ من الملصقات لإثراء رابع كلوريد الكربون من عينات الدم الكاملة. تستخدم التكنولوجيا المرنة الحلزونية قوى السحب بالقصور الذاتي ودين مع التدفق المستمر في القنوات المنحنية التي يتم إنشاؤها داخل رقاقة microfluidic حلزونية. يتم فصل الخلايا على أساس الاختلافات في الحجم واللدونة بين خلايا الدم الطبيعية والخلايا السرطانية. يفصّل هذا البروتوكول الخطوات المختلفة لتوصيف التعبير المبرمج لـ ctcs عن الـ CTCs، الذي يجمع بين جهاز سائل صغير حلزوني مع مجموعة علامات الفلورة المناعية القابلة للتخصيص (IF).

وكان الشرط المسبق الأول هو الحصول على مجموعات غير ملوثة (خالية من العوامل المعدية) من مركبات الكربون الكلورية فلورية لزراعة الأنسجة وتجنب الخلفية IF ولدت. ومكّن بروتوكول إزالة التلوث من تنظيف جميع الأنابيب والمضخات، وأدى إلى جمع ناقلات الأمراض الكهربائية والكهربائية بمعدل استرداد جيد دو?...

Watch this Scientific Journal Video about Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence at JoVE.com

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

وصف الخلايا السرطانية المتداولة (CTCs) هو موضوع شائع في البحوث المترجمة. يصف هذا البروتوكول فحصًا شبه تلقائي للفلورة المناعية (IF) لتوصيف PD-L1 وتعداد CTCs في عينات المرضى من سرطان الرئة غير الصغيرة (NSCLC).

شبه التلقائي PD-L1 توصيف وتعداد الخلايا السرطانية المتداولة من غير الصغيرة خلية سرطان الرئة المرضى عن طريق الفلورة المناعية

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

واستنادا إلى تكنولوجيا microfluidic، فإن عزل وتوصيف CTCs من خلايا الدم العادية لا تتطلب استخدام مؤشرات بيولوجية محددة CTC، ومتوافقة مع ثقافة الخلية. يسهل هذا البروتوكول معدلًا مرتفعًا من استخراج CTC ، ويوفر تحليلًا cytological واسع النطاق لـ CTCs ، من خلال تقييم الخصائص الخلوية الخبيثة. إن التعبير PD-L1 من قبل CTCs له قيمة تنبؤية في إدارة سرطان الرئة.تحسين الكشف عن استخدام هذا الاختبار يمكن أن تعزز إدارة أفضل للمرضى على المدى الطويل. ويشمل التطبيق الآخر لهذا البروتوكول الكشف عن الانحرافات الجينية باستخدام FISH، أو إجراء تحليل نسخي على CTCs، فضلا عن عزل الخلايا الجنينية الأصل لدى الأمهات. (إنّها ستُظهر الإجراء ستكون (جولي بالاندييه، تقنيّة من مختبرنالتخصيب الخلايا الورمية التي تسبق التحليل، قم أولاً بجمع 7.5 ملليلتر من الدم في أنبوب EDTA البوتاسيوم، والحفاظ على العينة تحت الانفعالات اللطيفة لتجنب ترسب الخلايا والتخثر. في غضون ست ساعات من جمع، واستخدام ماصة المصلية تحت خزانة سلامة الميكروبيولوجية، لنقل ما يصل إلى 7.5 ملليلتر من الدم كله إلى أنبوب جديد 50 ملليلتر الطرد المركزي، والطرد المركزي العينة لمدة 10 دقائق في 1600 مرة G، في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الطرد المركزي، استخدم ماصة نقل لجمع جزء البلازما دون إزعاج معطف بافي، وتمييع البلازما مع حجم مكافئ من برنامج تلفزيوني، تصل إلى 7.5 ملليلتر.بعد ذلك، قم بإضافة احتياطي خلايا الدم الحمراء إلى عينة الدم، إلى حجم نهائي من 30 ملليلتر، وعكس بلطف أنبوب جمع الدم ثلاث مرات، قبل وضع الأنبوب في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. في نهاية الحضانة، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي، وإزالة بعناية جميع ما عدا آخر أربعة إلى خمسة ملليلتر من افراط. استخدام ميكروبيبيت مصفاة لإزالة عظمى المتبقية، واستخدام p1000 micropette مع طرف مرشح لإضافة ملليلتر واحد من عازلة resuspension أسفل جدار الأنبوب.لتجنب إدخال الفقاعات، resuspend بيليه الخلية مع pipetting لطيف، حتى العينة متجانسة. عندما تم إعادة تعليق بيليه، إضافة ثلاثة ملليلتر إضافية من عازلة resuspension إلى جدار الأنبوب، دون إدخال فقاعات، وخلط بلطف الخلايا مرة أخرى. للجهاز اللولبي microfluidic تعميم تخصيب الخلايا السرطانية، أولا تحميل رقاقة جديدة حلزونية microfluidic على الجهاز، وتحميل واحد أنبوب جهاز طرد مركزي 50 ملليلتر فارغة في كل من منافذ المدخلات والمخرجات.انقر فوق رئيس الوزراء لرئيس الجهاز microfluidic دوامة لمدة ثلاث دقائق. إزالة أنابيب المدخلات والمخرجات في نهاية الدورة. تحميل عينة الدم resuspended في منفذ الإدخال، وتحميل أنبوب مخروطي 15 ملليلتر واضحة في منفذ الإخراج.ثم انقر فوق تشغيل، وحدد البرنامج الثالث لبدء برنامج تخصيب الخلايا الورمية 31 دقيقة تعميم. في نهاية الدورة نقل أنبوب الإخراج إلى جهاز الطرد المركزي، واستخدام ماصة المصلية ملليلتر خمسة لإزالة جميع ما عدا آخر ملليلترين من عظمى. ثم استخدام micropipette لإزالة جميع ما عدا آخر 100 ميكرولترات من سوبرنات.لتلوين الفلوروسين المناعي، عد الخلايا في مقياس الدم، وتمييع العينة المخصب إلى واحد مرة عشر إلى خمس خلايا لكل 100 ميكرولترات من 0.2٪ المضادة للربط تركيز الحل. بعد ذلك ، استخدم مسحة قطنية غارقة في 50 ميكرولترات من محلول مضاد للربط لترطيب كفاف غرفة العينة ، ووضع شريحة زجاجية من البوليليسين في غرفة العينة. إغلاق الغرفة، وماصة صعودا وهبوطا ثلاث مرات لمعطف تلميح micropipette مع الحل الملزم قبل resuspending العينة في آخر 100 ميكرولترات من عظمى.نقل حل الخلية إلى غرفة العينة وstospin العينة في جهاز طرد مركزي مخصص في 400 دوران في الدقيقة لمدة أربع دقائق، في تسارع منخفض. في نهاية الطرد المركزي، ضع معزل السيليكون حول منطقة الترسيب واترك الشريحة جافة تحت خزانة أمان ميكروبيولوجية لمدة دقيقتين، ثم قم بإصلاح عينة cytospun مع 100 ميكرولترات من 4٪ paraformaldehyde لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة، تليها ثلاثة غسيل دقيقتين مع 200 ميكرولتر من PBS لكل غسل، في درجة حرارة الغرفة. بعد الغسيل الأخير، كتلة أي ملزمة غير محددة مع حضانة 30 دقيقة في منع الكاشف في درجة حرارة الغرفة، تليها وضع العلامات مع 100 ميكرولترات من حل الأجسام المضادة من الفائدة.ضع الشريحة المسماة في طبق بتري 100 في 15 ملليلتر على قطعة من الورق الماص مبللة بمليلترين من الماء المعقم ، ووضع الطبق مغلقًا ، عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها ، محميًا من الضوء. في صباح اليوم التالي، وغسل العينة ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني كما هو موضح، وجبل العينة مع 10 ميكرولترات من حل تركيب مناسبة وزلة غطاء زجاجي. ثم ختم زلة الغطاء مع طلاء الأظافر واضحة.لتصوير عينات السيتوسبون، قم بتحميل الشريحة على مجهر فلوري مستقيم مع منصة مزودة بمحركات X Y، وحدد هدفًا 20x والقنوات المناسبة وفقًا للفلوروفوريس المستخدمة في وضع العلامات على الأجسام المضادة. قم بتشغيل مصباح الزئبق وتكيف المجهر والبرامج المرتبطة به مع تبادل إطلاق النار شبه التلقائي. عندما يكون المصباح جاهزًا، في قائمة الاستحواذ، حدد القنوات الأربع، وحدد وقت التعرض، وحدد البلاط لمسحه ضوئيًا.انقر فوق التجانبات، والتجربة المتقدمة، وحدد المنطقة التي تريد مسحها ضوئيًا. ثم اضبط التركيز على الشاشة، ثم انقر فوق بدء التجربة. في نهاية التجربة، قم بتصدير ملفات TIF لكل قناة، وبالتحديد قم بتسمية الملف لتضمين العينة وعدد المرات والصبغة وعدد المربعات الفرعية.لتحليل الصور، افتح برنامج تحليل الصور من موقع المعهد العريض، وانقر فوق ملف، خط أنابيب من ملف، وتحليل أربع قنوات CTC. إسقاط الملفات في قائمة الملفات، وتحديث البيانات الأولية لتجميع الملفات حسب الإطارات المتجانبة. ثم انقر فوق تحليل الصور لفتح ملف جدول البيانات المقابلة لمعلمات قياس كثافة.بدون بروتوكول إزالة التلوث الأمثل ، لوحظ تلوث بكتيري مرتفع في ثقافات الأنسجة من خطوط الخلايا A549 المخصب بعد 24 ساعة فقط ، مما تسبب في الموت والتغيرات في الخلايا الخلوية في الخلايا الكهنية. في المقابل، بعد بروتوكول التنظيف، يتم الحصول على الخلايا A549 الحية في الثقافات 2D بعد 10 ساعة من زراعة الأنسجة وإزالة المتوسطة، في ظل ظروف ثقافة 3D، وداخل عينات المريض. باستخدام مقول مناعي فلوروسنت تلطيخ المقايسة أو مقايسة تلوين مناعية على الشرائح المغلفة بوليليسين مع cytospin ، يمكن ملاحظة تمييز واضح في عدد النوى التي تم تعدادها بين المقايستين.دون خطوة cytospin ، من الصعب التمييز بين خلايا الدم البيضاء من الخلايا السرطانية ، وذلك بسبب الخطوط العريضة الضبابية في اخطط الخلايا غير السيتوسين. هنا يمكن ملاحظة نتائج تمثيلية مختلفة من عينات المرضى المختلفة ، مع تحديد العدد المتبقي من خلايا الدم البيضاء على وجه الخصوص على أنها متغيرة بقوة ، وتعتمد على عينة الدم بأكملها. ولوحظ أيضاً تباين كبير في الخلايا السرطانية المنتشرة دون الفئات السكانية التي تم الحصول عليها.يتم تحديد كل خلية على cytospin من قبل برنامج تحليل الصور، وتمكن من تتبع الخلية، يدويا لتأكيد النتائج حسب الضرورة. وفي الواقع، أظهر تحليل تجريبي وجود توافق بين التعداد اليدوي وتعداد برامجيات تحليل الصور. يعد إعداد طبق بيتري الرطب المصمم في المنزل لتهجين الأجسام المضادة للبروتين أمرًا بالغ الأهمية ، حيث لا يزال الجهاز رطبًا بما فيه الكفاية طوال وقت الحضانة بأكمله.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

الرئة ورم الخلية تجنيد الإنزيم

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

Capture and Release of Viable Circulating Tumor Cells from Blood

القبض على وإطلاق قابلة للحياة تعميم الخلايا السرطانية من الدم

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

عزل الخلايا السرطانية المتداولة في نموذج الفأر المثلي لسرطان القولون والمستقيم

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

الخلية الهدف الجينوم قبل التخصيب وكله التضخيم لتوصيف المصب خلية مفردة

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

إنشاء مقايسة الاستعمار الرئة لتعميم التصور خلية الورم في أنسجة الرئة

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

تحديد خصائص الخلايا السرطانية باستخدام سلك طبي لالتقاط تعميم الخلايا السرطانية: نهجاً ثلاثي الأبعاد استناداً إلى الفلورة والأسماك الحمض النووي

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

عزل وتوصيف الخلايا التي تبدأ الورم من الساركوما المستمدة من المرضى Xenografts

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

3 22 باستخدام الأجسام المضادة-PD-L1 تركز على خزعة وعينات عنق من مرضى سرطان الرئة من الخلايا غير الصغيرة

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

أورثوتوبيك زرع الخلايا غدية الرئة سينجينيك لدراسة التعبير PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...