Name: semi-automatic pd-l1 characterization and enumeration of circulating tumor cells from non-small cell lung cancer patients by immunofluorescence
Uploaded: 2019-08-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence at JoVE.com

Bu çalışma AstraZeneca (Londra, Birleşik Krallık), Biolidics (Singapur) ve Ligue Contre le Cancer (Saone et Loire, Fransa) araştırma hibeleri ile desteklenmiştir. Yazarlar AstraZeneca ve Biolidics şirketlerine mali desteklerinden ötürü teşekkür ediyorlar.

Numuneler, lyon Üniversitesi Hastanesi'nde bulunan Circan ("CIRculating CANcer") kohortu çerçevesinde, hastanın yazılı onayı ile prospektif olarak toplanmıştır. Bu çalışma CIRCAN_ALL kohortuna entegre edilmiştir. CIRCAN_ALL çalışması, 04/11/2015 tarihli L15-188 referansı altında CPP Güney-Doğu IV tarafından girişimsel olmayan olarak kabul edilmiştir. Değiştirilen sürüm 20/09/2016 tarihinde L16-160 referansı altında girişimsel olmayan olarak kabul edilmiştir. CIRCAN_ALL çalışması 01/12...

<ol>
	<li>Gandhi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+plus+Chemotherapy+in+Metastatic+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab plus Chemotherapy in Metastatic Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (22), 2078-2092 (2018).</li><li>Paz-Ares, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+plus+Chemotherapy+for+Squamous+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab plus Chemotherapy for Squamous Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 379 (21), 2040-2051 (2018).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Hellmann, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Mutational+Burden+and+Efficacy+of+Nivolumab+Monotherapy+and+in+Combination+with+Ipilimumab+in+Small-Cell+Lung+Cancer.">Tumor Mutational Burden and Efficacy of Nivolumab Monotherapy and in Combination with Ipilimumab in Small-Cell Lung Cancer.</a> Cancer Cell. 33 (5), 853-861 (2018).</li><li>Chouaid, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+clinical+impact+of+re-biopsy+in+advanced+non+small-cell+lung+cancer:+a+prospective+multicenter+study+in+a+real-world+setting+(GFPC+study+12-01).">Feasibility and clinical impact of re-biopsy in advanced non small-cell lung cancer: a prospective multicenter study in a real-world setting (GFPC study 12-01).</a> Lung cancer. 86 (2), 170-173 (2014).</li><li>Nosaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-biopsy+status+among+non-small+cell+lung+cancer+patients+in+Japan:+A+retrospective+study.">Re-biopsy status among non-small cell lung cancer patients in Japan: A retrospective study.</a> Lung cancer. 101, 1-8 (2016).</li><li>Uozu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+tissue+re-biopsy+in+non-small+cell+lung+cancers+resistant+to+previous+epidermal+growth+factor+receptor+tyrosine+kinase+inhibitor+therapies.">Feasibility of tissue re-biopsy in non-small cell lung cancers resistant to previous epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor therapies.</a> BMC Pulmonary Medicine. 17 (1), 175 (2017).</li><li>Kim, T. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+re-biopsy+and+EGFR+mutation+analysis+in+patients+with+non-small+cell+lung+cancer.">Feasibility of re-biopsy and EGFR mutation analysis in patients with non-small cell lung cancer.</a> Thoracic Cancer. 9 (7), 856-864 (2018).</li><li>Nicolazzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+PD-L1+positive+circulating+tumor+cells+in+non-small+cell+lung+cancer+patients+treated+with+the+PD-1+inhibitor+Nivolumab.">Monitoring PD-L1 positive circulating tumor cells in non-small cell lung cancer patients treated with the PD-1 inhibitor Nivolumab.</a> Scientific Reports. 6, 31726 (2016).</li><li>Guibert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+circulating+tumor+cells+of+advanced+non-small+cell+lung+cancer+patients+treated+with+nivolumab.">PD-L1 expression in circulating tumor cells of advanced non-small cell lung cancer patients treated with nivolumab.</a> Lung cancer. 120, 108-112 (2018).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+Expression+in+Circulating+Tumor+Cells+Increases+during+Radio(chemo)therapy+and+Indicates+Poor+Prognosis+in+Non-small+Cell+Lung+Cancer.">PD-L1 Expression in Circulating Tumor Cells Increases during Radio(chemo)therapy and Indicates Poor Prognosis in Non-small Cell Lung Cancer.</a> Scientific Reports. 9 (1), 566 (2019).</li><li>Hao, S. -. J., Wan, Y., Xia, Y. -. Q., Zou, X., Zheng, S. -. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-based+separation+methods+of+circulating+tumor+cells.">Size-based separation methods of circulating tumor cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 125, 3-20 (2018).</li><li>Williams, A., Balic, M., Datar, R., Cote, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-based+enrichment+technologies+for+CTC+detection+and+characterization.+Recent+results+in+cancer+research.">Size-based enrichment technologies for CTC detection and characterization. Recent results in cancer research.</a> Fortschritte der Krebsforschung. Progres dans les recherches sur le cancer. 195, 87-95 (2012).</li><li>Garcia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+of+Circulating+Tumor+DNA+(ctDNA)+in+Plasma+of+non-small+cell+lung+cancer+(NSCLC)+patients,+Monitoring+of+EGFR+p.T790M+mutated+allelic+fraction+using+BEAMing+Companion+Assay+and+Evaluation+in+future+application+in+mimicking+Circulating+Tumors+Cells+(mCTC).">Profiling of Circulating Tumor DNA (ctDNA) in Plasma of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients, Monitoring of EGFR p.T790M mutated allelic fraction using BEAMing Companion Assay and Evaluation in future application in mimicking Circulating Tumors Cells (mCTC).</a> Cancer Medicine. , (2019).</li><li>Garcia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+pre-analytical+conditions+and+comparison+of+the+performance+of+several+digital+PCR+assays+for+the+detection+of+major+EGFR+mutations+in+circulating+DNA+from+non-small+cell+lung+cancers:+the+CIRCAN_0+study.">Evaluation of pre-analytical conditions and comparison of the performance of several digital PCR assays for the detection of major EGFR mutations in circulating DNA from non-small cell lung cancers: the CIRCAN_0 study.</a> Oncotarget. 8 (50), 87980-87996 (2017).</li><li>Lustberg, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+atypical+cell+populations+are+present+in+blood+of+metastatic+breast+cancer+patients.">Heterogeneous atypical cell populations are present in blood of metastatic breast cancer patients.</a> Breast Cancer Research. 16 (2), 23 (2014).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Sentinel"+circulating+tumor+cells+allow+early+diagnosis+of+lung+cancer+in+patients+with+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">"Sentinel" circulating tumor cells allow early diagnosis of lung cancer in patients with chronic obstructive pulmonary disease.</a> PLoS ONE. 9 (10), 111597 (2014).</li><li>Khoo, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+validation+of+an+ultra+high-throughput+spiral+microfluidics+for+the+detection+and+enrichment+of+viable+circulating+tumor+cells.">Clinical validation of an ultra high-throughput spiral microfluidics for the detection and enrichment of viable circulating tumor cells.</a> PLoS ONE. 9 (7), 99409 (2014).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Biswas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+for+assessing+programmed+death+ligand-1+expression+in+nonsmall+cell+lung+cancer.">Clinical performance of endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration for assessing programmed death ligand-1 expression in nonsmall cell lung cancer.</a> Diagnostic Cytopathology. 46 (5), 378-383 (2018).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li></ol>

Bu çalışmada, ilki klinik uygulamalara aktarılması için iş akışının performansı, ikincisi ise elde edilen floresan görüntülerinin analizinde öznellik azalması ile ilgili iki önemli nokta ortaya konmuştür.
CTC numaralandırma için bir performant ve optimize edilmiş iş akışı başlangıçta ctc etiketsiz mikroakışkan sistem (spiral mikroakışkan cihaz) ile hücre zenginleştirme sonrası özelleştirilebilir IF tahlili kullanılarak belirlendi. Bu iş akışını kull...

Tümör antijene özgü sitotoksik T-lenfositler (CtLs) kanser "bağışıklık gözetimi" olarak bilinen bir süreç yoluyla kanserlere yanıt önemli bir rol oynamaktadır. Anti-tümör fonksiyonları, CTLA-4 inhibitörleri ve PD-1/PD-L1 inhibitörleri gibi immün kontrol noktası blokantikorları ile geliştirilmiştir. Küçük hücreli dışı akciğer kanserinde (NSCLC), anti-PD-1/PD-L1 tedavileri, PD-L1 negatif tümörlü hastalarda %0-17, PD-L1'i ifade eden hastalarda ise %36-100 arasında değişen yanıt oranlarıile sonuçlanır. Melanom ve NSCLC'de gözlenen PD-1/PD-L1 ablukasına verilen sağlam yanıtlar, genel yanıt oranının (RR), dayanıklı klinik faydalar ve progresyonsuz sağkalım (PFS) kanıtları ile gösterilmiştir. Şu anda, anti-PD1 tedavileri pd-L1 ekspresyonu ne olursa olsun nivolumab ile ikinci basamak NSCLC tedavisinde bakım standardı ve PD-L1 ≥1 ifade eden hastalarda pembrolizumab ile. Birinci basamak tedavide, pd-L1 ≥50' yi ifade eden NSCLC'li hastalarda tek başına pembrolizumab bakım standardıdır ve potansiyel olarak kemoterapi ile geliştirilebilir (histolojik alt tipe bağlı olarak platin ve doublet ilaç)1,2.
Ancak, hasta yönetimine böyle bir yaklaşım tartışmalıdır3, immünohistokimya ile tümör hücrelerinde PD-L1 ekspresyonu beri (IHC) muhtemelen en ideal eşlik biyomarker değildir. Tümör mutasyon yükü4 (TMB), mikrouydu instabilitesi (MSI) ve/veya mikrobiyota gibi diğerleri bu ortamda muhtemelen tek başına veya birlikte ilginçtir. NSCLC heterojen tümörler olduğu bilinmektedir, ya mekansal (bir tümör sitesinden diğerine) ya da zamansal (tanıdan nüksiçin). NSCLC'li hastalar genellikle kırılgandır ve yinelemeli invaziv doku biyopsileri sorun olabilir. Nitekim seriye bağlı olarak ilk progresyonda rebiyopsi oranı %46-84 arasında, başarılı re-biyopsi (histolojik ve tam moleküler analiz ile anlam) %33-75 arasında değişmektedir. Bu, hastaların %25-67'sinin ilk progresyon sırasında kapsamlı bir rebiyopsi analizi alamadığı anlamına gelir5,6,7,8.
"Sıvı biyopsiler"in ortaya çıkışı, bu ortamda önemli bir heyecan yaratmıştır, çünkü dolaşımdan elde edilen serbest DNA'yı (cfDNA) inceleyerek hastalığın ilerlemesi sırasında moleküler değişikliklerin önemli ölçüde yeniden değerlendirilmesini sağlar. tümör hücreleri (CtCs). Bu canlı hücreler tümörden kan dolaşımına salınır ve serbestçe dolaşır. Rutin olarak kullanılmamasına rağmen, akciğer kanserinde moleküler ve phenotipik karakterizasyon, prognoz ve tahmine dayalı önemi (DNAseq, RNAseq, miRNA ve protein analiziyoluyla) açısından KTK'ların analizi son derece umut verici görünmaktadır. Gerçekten de, KTK'lar büyük olasılıkla ilk belirteçler yerine aktif hastalığın hevit özellikleri barındırır (tanı da doku biyopsileri üzerinde saptanmıştır). Ayrıca, CtCs tümör dokusunun mekansal heterojenite sorunu atlamak, hangi küçük biyopsiler önemli bir sorun olabilir. Sonuç olarak, CTCs pd-L1 ekspresyonu potansiyel tümör dokusu kullanarak bir tahmine dayalı biyomarker olarak kullanımından kaynaklanan tutarsızlıklar ışık tutabilir.
Son zamanlarda, PD-L1 ekspresyonu NSCLC'nin CTC'lerinde test edilmiştir. Test edilen hastaların hemen hemen hepsi 9'u PD-L1 pozitifti, bu da sonucun yorumlanmasını ve klinik kullanımını karmaşık hale getiriyordu. Genel olarak, PD-L1-pozitif KTK'lar ortalama 4,5 hücre/mL10'danalınan örneklerin %69.4'ünde saptandı. Radyasyon tedavisinin başlamasından sonra, PD-L1-pozitif KTC'lerin oranı önemli ölçüde artarak, radyasyona yanıt olarak PD-L1 ekspresyonunun yükseltilmesine işaret eder11. Bu nedenle, PD-L1 CtCs analizi tümör ve bağışıklık yanıtı dinamik değişiklikleri izlemek için kullanılabilir, hangi kemoterapi yanıtı yansıtabilir, radyasyon, ve olası immünoterapi (BT) tedaviler.
Bugüne kadar, CTCs izolasyon ve PD-L1 karakterizasyonu anti-EpCAM kaplı manyetik boncuk tabanlı CTC yakalama, zenginleştirme-ücretsiz tabanlı tahlil ve boyut tabanlı12,13 CTC yakalama tahlilleri gibi çeşitli yöntemlere dayanır. Ancak metastatik NSCLC'li hastaların sadece %45-65'inde KTK saptandı ve böylece metastatik NSCLC hastalarının yarısından fazlası için herhangi bir bilgi verme yetenekleri sınırlandı. Buna ek olarak, ctc sayısı boyut tabanlı yaklaşım10kullanarak bu çalışmaların çoğunda düşüktü. Ayrıca bu yöntem sağlıklı donörlerin kan dolaşımında "malignitenin sitomorfolojik paternleri" ile CD45(-)/DAPI(+) hücrelerinin saptanması gibi tutarsızlıklara yol açmıştır. Bu endişeler, NSCLC'de ek kanser biyobelirteçleri (yani, TTF1, Vimentin, EpCAM ve CD44) kullanarak sağlıklı tam kandan atipik CD45(-) hücrelerinin immün-fenotipleme ile ilişkili CTC toplama son derece hassas bir yöntem için ihtiyaç vurgulamak.
Sonuç olarak, bir mikroakışkan çip aracılığıyla boyut ve plastisite dayalı hücreleri ayırmak için atalet ve Dean sürükleme kuvvetleri kullanan bir spiral mikroakışkan cihaz değerlendirildi. Dekan girdabının oluşumu mikroakışkan çipte bulunan akıntılar, iç duvar boyunca bulunan daha büyük CtC'ler ve çipin dış duvarı boyunca daha küçük bağışıklık hücreleri ile sonuçlanır. Zenginleştirme işlemi, büyük hücrelerin zenginleştirilmiş CTC fraksiyonu olarak toplama çıkışına emilmesiyle tamamlanır. Bu yöntem özellikle hassas ve spesifiktir (yaklaşık 1 CTC/mL tam kan saptanması)14 ve özelleştirilmiş immünoresans (IF) analizleri ile ilişkili olabilir. Bu araçlar klinik yorumlama için olumlu bir eşik kurulmasını sağlayacaktır. Bu nedenle biyologların yüksek iyileşme hızı ve özgüllük le immünfenotip BTC'leri izole etmelerini ve immünofopoftip BtC'leri izole etmelerini sağlayan bir iş akışı tanımlanmıştır. Protokol, spiral mikroakışkan cihazın CTC'leri toplamak için optimal kullanımını, kanser türüne göre özelleştirilebilen optimize edilmiş IF testlerini ve yarı otomatik bir performans sergilemek için hücre görüntülerini ölçmek ve analiz etmek için ücretsiz açık kaynak yazılım kullanımını tanımlar. floresan boyama göre hücrelerin numeration. Buna ek olarak, mikroskop çoklama mevcut floresan filtreler / belirteçleri sayısına bağlı olarak yapılabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1004px;" width="1004">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">4&#39;,6-diamidino-2-ph&#233;nylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:148px;">Ozyme</td>
			<td style="width:105px;">BLE 422801</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:376px;">BD Facs Clean &#8211; 5L</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">340345</td>
			<td style="width:375px;">Bleach-based cleaning agent. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Bleach 1% Cleaning Solution 100 mL</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F016012</td>
			<td style="width:375px;">Bleach. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Bovine Serum Albumin (BSA) 7.5%</td>
			<td style="width:148px;">Sigma</td>
			<td style="width:105px;">A8412</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">CD45 monoclonal antibody (clone HI30) Alexa Fluor 647</td>
			<td style="width:148px;">BioLegend</td>
			<td style="width:105px;">BLE304020</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">CellProfiler Software</td>
			<td style="width:148px;">Broad Institute</td>
			<td style="width:105px;"></td>
			<td style="width:375px;">Image Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Centrifuge device</td>
			<td style="width:148px;">Hettich</td>
			<td style="width:105px;">4706</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Centrifuge tube 50 mL</td>
			<td style="width:148px;">Corning</td>
			<td style="width:105px;">430-829</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Centrifuge Tube 15 mL</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F001004-25</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">ClearCell FX-1 System</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F011002</td>
			<td style="width:375px;">Spiral microfluidic device. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:376px;">Coulter Clenz Cleaning Agent &#8211; 5L</td>
			<td style="width:148px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:105px;">8448222</td>
			<td style="width:375px;">All-purpose cleaning reagent. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">CTChip FR1S</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-FR001002</td>
			<td style="width:375px;">Microfluidic chip. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Cytospin 4</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">A78300003</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Diluent Additive Reagent &#8211; 20 mL</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F016009</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:376px;">EZ Cytofunnels</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">A78710003</td>
			<td style="width:375px;">Sample chamber with cotton. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">FcR blocking Agent</td>
			<td style="width:148px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:105px;">130-059-901</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Fetal Calf Serum (FCS)</td>
			<td style="width:148px;">Gibco</td>
			<td style="width:105px;">10270-106</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Fluoromount</td>
			<td style="width:148px;">Sigma</td>
			<td style="width:105px;">F4680</td>
			<td style="width:375px;">Mounting solution. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Fungizone - 50 mg</td>
			<td style="width:148px;">Bristol-Myers-Squibb</td>
			<td style="width:105px;">90129TB29</td>
			<td style="width:375px;">Anti-fungal reagent. Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">FX1 Input Straw with lock cap</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F013005</td>
			<td style="width:375px;">Straw. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">KovaSlide</td>
			<td style="width:148px;">Dutscher</td>
			<td style="width:105px;">50126</td>
			<td style="width:375px;">Chambered slide. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">PanCK monoclonal antibody (clone AE1/AE3) Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">53-9003-80</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Paraformaldehyde 16%</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">11490570</td>
			<td style="width:375px;">Fixation solution. Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">PD-L1 monoclonal antibody (clone 29E2A3) - Phycoerythrin</td>
			<td style="width:148px;">BioLegend</td>
			<td style="width:105px;">BLE329706</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Petri Dish</td>
			<td style="width:148px;">Dutscher</td>
			<td style="width:105px;">632180</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:148px;">Ozyme</td>
			<td style="width:105px;">BE17-512F</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Phosphate Buffered Saline Ultra Pure Grade 1X &#8211; 1L</td>
			<td style="width:148px;">1st Base Laboratory</td>
			<td style="width:105px;">BUF-2040-1X1L</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Pluronic F-68 10%</td>
			<td style="width:148px;">Gibco</td>
			<td style="width:105px;">24040-032</td>
			<td style="width:375px;">Anti-binding solution. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Polylysine slides</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">J2800AMNZ</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Polypropylene Conical Tube 50 mL</td>
			<td style="width:148px;">Falcon</td>
			<td style="width:105px;">352098</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">RBC Lysis Buffer &#8211; 100 mL</td>
			<td style="width:148px;">G Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">786-649</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">RBC Lysis Buffer &#8211; 250 mL</td>
			<td style="width:148px;">G Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">786-650</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Resuspension Buffer (RSB)</td>
			<td style="width:148px;">Biolidics</td>
			<td style="width:105px;">CBB-F016003</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: +4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Shandon Cytopsin4 centrifuge</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:105px;">A78300003</td>
			<td style="width:375px;">Dedicated centrifuge. Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Silicon Isolator</td>
			<td style="width:148px;">Grace bio-Labs</td>
			<td style="width:105px;">664270</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Sterile Deionized Water &#8211; 100 mL</td>
			<td style="width:148px;">1st Base Laboratory</td>
			<td style="width:105px;">CUS-4100-100ml</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Straight Fluorescent microscope Axio Imager D1</td>
			<td style="width:148px;">Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Surgical Sterile Bag</td>
			<td style="width:148px;">SPS Laboratoires</td>
			<td style="width:105px;">98ULT01240</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Syringe BD Discardit II 20 mL sterile</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:105px;">300296</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:376px;">Syringe Filter 0.22 &#181;m 33 mm sterile</td>
			<td style="width:148px;">ClearLine</td>
			<td style="width:105px;">51732</td>
			<td style="width:375px;">Storage conditions: Room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Zen lite 2.3 Lite Software</td>
			<td style="width:148px;">Zeiss</td>
			<td style="width:105px;"></td>
			<td style="width:375px;">Microscope associated software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

semi-automatic pd-l1 characterization and enumeration of circulating tumor cells from non-small cell lung cancer patients by immunofluorescence

Primer tümörden elde edilen dolaşımdaki tümör hücreleri (CtCs) kan dolaşımına veya lenfatik sisteme dökülür. Bu nadir hücreler (mL başına kan başına 1−10 hücre) kötü bir prognoz garanti ve çeşitli kanserlerde kısa genel sağkalım ile ilişkilidir (örneğin, meme, prostat ve kolorektal). Şu anda, anti-EpCAM kaplı manyetik boncuk tabanlı CTC yakalama sistemi kan dolaşımında CTC'ler sayısaliçin ABD Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) tarafından onaylanan altın standart testtir. Bu test, özellikle epitel kanseri hücrelerini hedef leyen anti-EpCAM belirteçleri ile kaplanmış manyetik boncukların kullanımına dayanmaktadır. Birçok çalışma EpCAM CTC tespiti için en uygun belirteç olmadığını gösterdi. Gerçekten de, CtCs kanser hücrelerinin heterojen bir alt popülasyon ve metastatik proliferasyon ve invazyon ile ilişkili bir epitelyal-mesenkimal geçiş (EMT) geçmesi edebiliyoruz. Bu CtCs hücre yüzeyi epitel marker EpCAM ifadesini azaltmak mümkün, vimentin gibi mezenkimal belirteçleri artırırken. Bu teknik engeli gidermek için, CTC'lerin fiziksel özelliklerine dayalı diğer izolasyon yöntemleri geliştirilmiştir. Mikroakışkan teknolojiler, tam kan örneklerinden CTC zenginleştirme için etiketsiz bir yaklaşım sağlar. Spiral mikroakışkan teknolojisi, spiral mikroakışkan çip içinde oluşturulan kavisli kanallarda sürekli akış ile atalet ve Dean sürükleme kuvvetleri kullanır. Hücreler normal kan hücreleri ve tümöral hücreler arasındaki boyut ve plastisite farklılıklarına göre ayrılır. Bu protokol, ctcs programlanmış ölüm-ligand 1 (PD-L1) ekspresyonu karakterize etmek için farklı adımları ayrıntıları, özelleştirilebilir immünoreskence ile spiral mikroakışkan cihaz birleştirerek (IF) marker seti.

İlk ön koşul doku kültürü için kirlenmemiş (enfeksiyöz ajaniçermeyen) CTC koleksiyonlarını elde etmek ve oluşturulan IF arka planından kaçınmaktı. Dekontaminasyon protokolü tüm boru ların ve pompaların temizlenmesine olanak sağladı ve bakteriyel kontaminasyon olmadan iyi bir geri kazanım oranı ile CTC'lerin toplanmasıyla sonuçlandı. Zenginleştirilmiş numuneler spiral mikroakışkan cihazın dekontaminasyon protokolü iş akışı olmadan ve bunlarla karşılaştırıldı. Dekontaminasyon pro...

Watch this Scientific Journal Video about Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence at JoVE.com

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Dolaşımdaki tümör hücrelerinin (CtCs) karakterizasyonu çeviri araştırmalarında popüler bir konudur. Bu protokol, küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC) hasta örneklerinde PD-L1 karakterizasyonu ve KTK'ların numaralandırılması için yarı otomatik immünoresans (IF) tahtını tanımlar.

İmmünfluoresans Ile Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Numaralandırılması

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Mikroakışkan teknolojiye dayanarak, ctc'lerin normal kan hücresinden izolasyonu ve karakterizasyonu spesifik CTC biyobelirteçlerinin kullanılmasını gerektirmez ve hücre kültürü ile uyumludur. Bu protokol yüksek oranda CTC ekstraksiyonu kolaylaştırır ve malign sitomorfolojik özellikleri değerlendirerek CtC'lerin kapsamlı bir sitolojik analizini sağlar. KTK'lar tarafından PD-L1 ekspresyonu akciğer kanseri yönetiminde prediktif bir değere sahiptir.Bu testi kullanarak saptanması iyileştirilmesi uzun vadede daha iyi bir hasta yönetimini teşvik edebilir. Bu protokolün diğer uygulaması FISH kullanarak genetik sapmaların saptanması veya KTK'larda transkripsiyon analizinin yapılmasının yanı sıra annelerde fetal kökenli hücreleri izole etmektir. Prosedürü gösteren Julie Balandier, laboratuvarımızdan bir teknisyen.Öncesi analitik dolaşan tümör hücre zenginleştirme için, ilk bir potasyum EDTA tüp içine kan 7.5 mililitre toplamak, ve hücre sedimantasyon ve pıhtılaşma önlemek için nazik ajitasyon altında örnek tutmak. Toplama altı saat içinde, mikrobiyolojik güvenlik kabini altında serolojik bir pipet kullanın, yeni bir 50 mililitre santrifüj tüp içine tam kan 7,5 mililitreye kadar aktarmak için, ve oda sıcaklığında 1600 kez G 10 dakika için örnek santrifüj. Santrifüjsonunda, buffy ceket rahatsız etmeden plazma fraksiyonu toplamak için bir transfer pipet kullanın ve PBS eşdeğer hacmi ile plazma seyreltmek, kadar 7.5 mililitre.Daha sonra, dikkatle kan örneğine kırmızı kan hücresi lisis tampon ekleyin, son hacmi ne 30 mililitre, ve yavaşça kan toplama tüpü üç kez ters, oda sıcaklığında tüp yerleştirmeden önce 10 dakika. Kuluçka sonunda, santrifüj ile hücreleri toplamak ve dikkatle supernatant son dört ila beş mililitre hariç tüm kaldırın. Kalan supernatant kaldırmak için filtrelenmiş bir mikropipet kullanın ve tüp duvarından aşağı resuspension tampon bir mililitre eklemek için filtreli ucu ile bir P1000 mikropipet kullanın.Kabarcıklar tanıtmak önlemek için, örnek homojen olana kadar, nazik pipetleme ile hücre pelet yeniden askıya. Pelet yeniden askıya alındıktan sonra, kabarcıklar tanıtmadan tüpün duvarına üç mililitre resuspension tampon ekleyin ve hücreleri yavaşça tekrar karıştırın. Tümör hücre zenginleştirme dolaşan spiral mikroakışkan cihaz için, ilk cihazüzerine yeni bir spiral mikroakışkan çip yük ve giriş ve çıkış portlarının her birine boş bir 50 mililitresantrifüj tüp yükleyin.Spiral mikroakışkan cihazı üç dakika asal için asal tıklatın. Döngü sonundaki giriş ve çıkış tüplerinin çıkarılması. Yeniden askıya alınan kan örneğini giriş portuna yükleyin ve çıkış portuna 15 mililitrelik konik bir tüp yükleyin.Sonra çalıştır'a tıklayın ve 31 dakikalık dolaşımdaki tümör hücre zenginleştirme programını başlatmak için program 3'ü seçin. Çevrimin sonunda çıkış tüpünü santrifüje aktarın ve süpernatantın son iki mililitresi hariç hepsini çıkarmak için beş mililitrelik serolojik pipet kullanın. Sonra supernatant son 100 mikrolitre hariç tüm kaldırmak için bir mikropipet kullanın.İmmünofloresan boyama için, hücreleri hemositometrede sayın ve zenginleştirilmiş numuneyi %0,2 anti-bağlayıcı çözelti konsantrasyonunun 100 mikrolitresi başına 10 ila beşinci hücrelere seyreltin. Daha sonra, numune haznesinin konturunu nemlendirmek için 50 mikrolitre anti-bağlayıcı çözelti ile ıslatılmış bir pamuklu bez kullanın ve numune odasına polilizin cam kaydırağı yerleştirin. Hazneyi kapatın ve pipet, süpernatantın son 100 mikrolitresinde numuneyi yeniden askıya almadan önce bir mikropipet ucunu bağlayıcı çözeltiyle kaplamak için üç kez yukarı ve aşağı kapatın.Hücre çözeltisini numune odasına aktarın ve numuneyi düşük bir ivmeyle dakikada 400 dönüşte 400 dönüşle özel bir santrifüjde situp çevirin. Santrifüjsonunda, birikimetri alanının etrafına silikon bir izolatör yerleştirin ve iki dakika boyunca mikrobiyolojik güvenlik kabini altında slayt kuru izin, sonra oda sıcaklığında 10 dakika için% 4 paraformaldehit 100 mikrolitre ile sitospun örnek düzeltmek, üç iki dakika yıkama başına PBS 200 mikrolitre ile yıkama, oda sıcaklığında. Son yıkamadan sonra, oda sıcaklığında reaktifi bloke ederek 30 dakikalık kuluçka ile spesifik olmayan herhangi bir bağlamayı engelleyin ve ardından 100 mikrolitre antikor çözeltisi ile etiketlendi.Etiketli kaydırağı 100'e 15 mililitrelik petri kabına, iki mililitre steril suyla nemlendirilmiş emici bir kağıda yerleştirin ve kabı bir gecede ışıktan korunan dört derece santigrat derecede kapatın. Ertesi sabah, numuneyi gösterildiği gibi PBS ile üç kez yıkayın ve numuneyi uygun bir montaj çözeltisi ve cam kapak fişi ile 10 mikrolitre monte edin. Sonra açık oje ile kapak kayma mühür.Sitospun örneklerini görüntülemek için, slaytı X Y motorlu platformlu düz floresan mikroskoba yükleyin ve antikor etiketlemede kullanılan floroforlara göre 20 x nesnel ve uygun kanalları seçin. Cıva lambasını açın ve mikroskobu ve ilişkili yazılımı yarı otomatik çekime uyarla. Lamba hazır olduğunda, edinme menüsünde dört kanalı tanımlayın, pozlama süresini ayarlayın ve tarayıp döşemeleri tanımlayın.Kutucukları ve gelişmiş denemeyi tıklatın ve tarayıp alanı tanımlayın. Ardından ekrandaki odağı ayarlayın ve denemeyi başlat'ı tıklatın. Denemenin sonunda, her kanal için TIF dosyalarını dışa aktarın ve özellikle dosyayı örnek, kaç kez, boyama ve alt kutucuk sayısını içerecek şekilde adlandırın.Görüntü analizi için, Broad Institute web sitesinden görüntü analizi yazılımını açın ve dosyayı, dosyadan boru hattını tıklatın ve dört kanal CTC'yi analiz edin. Dosyaları dosya listesine bırakın ve dosyaları kutucuklara göre gruplandırmak için meta verileri güncelleştirin. Ardından, ölçüm yoğunluğu parametrelerine karşılık gelen elektronik tablo dosyasını açmak için görüntüleri analiz et'i tıklatın.Optimize edilmiş dekontaminasyon protokolü olmadan, zenginleştirilmiş A549 hücre hatlarının doku kültürlerinde sadece 24 saat sonra yüksek bakteriyel kontaminasyon gözlenir ve ökaryotik hücrelerde ölüm ve sitomorfolojik değişikliklere neden olur. Buna karşılık, temizlik protokolünden sonra, doku kültürü ve orta kaldırma 10 saat sonra, 3D kültür koşulları altında, ve hasta örnekleri içinde 2D kültürlerde yaşayan A549 hücreleri elde edilir. Sitorspinli polilizin kaplı slaytlarda sıvı immünoresan boyama tahlilveya immünüfüloresan boyama tahlilleri kullanılarak, iki tahlil arasında numaralandırılmış çekirdek sayısında net bir ayrım görülebilir.Sitospin adım olmadan, olmayan sitospin hücre preps bulanık anahatları nedeniyle, tümör hücrelerinden beyaz kan hücreleri ayırt etmek zordur. Burada farklı hasta örneklerinden farklı temsili bulgular görülebilir, özellikle beyaz kan hücrelerinin artık sayısı güçlü değişken olduğu tespit edilir ve tam kan örneğine bağlıdır. Elde edilen dolaşımdaki tümör hücrelerinde de yüksek değişkenlik gözlendi.Situptaki her hücre görüntü analizi yazılımı tarafından tanımlanır ve hücrenin izlenmesini ve gerektiğinde sonuçları el ile onaylamasını sağlar. Nitekim, bir pilot analiz manuel numaralandırma ve görüntü analizi yazılımı numaralandırma arasında bir uyum gösterdi. Protein-antikor hibridizasyonu için kurum içi tasarlanmış nemli petri kabının kurulumu kritik öneme sahip, çünkü cihaz tüm kuluçka süresi boyunca yeterince nemli kalır.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

Capture and Release of Viable Circulating Tumor Cells from Blood

Yakalama ve Kan gelen Canlı Sirkülasyon Tümör Hücrelerinin Yayın

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Kolorektal kanserli bir Ortotopik Fare Modelinde Dolaşan Tümör Hücrelerinin İzolasyonu

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Hedef hücre ön zenginleştirme ve tüm genom amplifikasyon tek hücre aşağı akım karakterizasyonu için

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

Tümör hücre görselleştirme akciğer dokusu içinde dolaşan bir akciğer kolonizasyon tahlil kurulması

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Tümör hücrelerinin tümör hücreleri dolaşan yakalamak için tıbbi bir tel kullanarak karakterizasyonu: 3D bir yaklaşım tabanlı ayirt ve DNA balık

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Sarkom hasta türevi xenografts tümör-başlatma hücrelerinin yalıtım ve karakterizasyonu

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

22C 3 kullanarak Anti-PD-L1 antikor konsantre biyopsi ve küçük hücreli dışı akciğer kanserli hastalarda sitoloji örnekleri

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic nakli PD-L1 ifade çalışmaya Syngeneic akciğer adenokarsinom hücre

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mezenkimal kök hücre izolasyon hamuru doku ve kanser hücreleri ile ortak kültür ilişkileri incelemek için

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...