Name: disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies
Uploaded: 2019-06-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

وقد تم تمويل هذه الدراسة جزئيا من قبل الcoordenacão العليا (الرؤوس) من البرازيل ، والقانون المالي 001. قدمت الرؤوس منحه الدكتوراه لa.f. Marciano. نشكر المجلس الوطني للتنمية العلمية والتكنولوجية في البرازيل علي تقديم منحه الدكتوراه ل j. Fiorotti. وكان هذا البحث مدعوما أيضا بمنح من مؤسسه كارلوس تشاغف# يلهو للبحوث في ولاية ريو دي جانيرو (FAPERJ) و CNPq. V.R.E.P. Bittencourt هو باحث CNPq.

تم الحصول علي القراد المستخدمة في هذه الدراسة من مستعمره اصطناعية ، الستائر في الجامعة الريفية الاتحادية في ريو دي جانيرو ، والتي تمت الموافقة علي الأساليب من قبل لجنه الأخلاق لاستخدام الفقاري الحيوانية (خه/UFRRJ #037/2014).
1. القراد محتقن الإناث
<ol><li>بعد جمع القراد ، وغسل محتقن ا...

<ol>
	<li>Grisi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessment+of+the+potencial+economic+impact+of+cattle+parasites+in+Brazil.">Reassessment of the potencial economic impact of cattle parasites in Brazil.</a> Revista Brasileira de Parasitologia Veterin&#225;ria. 23 (2), 150-156 (2014).</li><li>Schrank, A., Vainstein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+enzymes+and+toxins.">Metarhizium anisopliae enzymes and toxins.</a> Toxicon. 56 (7), 1267-1274 (2010).</li><li>Camargo, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+for+controlling+Rhipicephalus+microplus+ticks+under+field+conditions.">Metarhizium anisopliae for controlling Rhipicephalus microplus ticks under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 223, 38-42 (2016).</li><li>Perinotto, W. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+pathogenicity+of+different+Metarhizium+anisopliae+s.l.+isolates+in+oil+formulations+against+Rhipicephalus+microplus.">In vitro pathogenicity of different Metarhizium anisopliae s.l. isolates in oil formulations against Rhipicephalus microplus.</a> Biocontrol Science and Technology. 27 (3), 338-347 (2017).</li><li>Pedrini, N., Crespo, R., Juarez, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+insect+epicuticle+degradation+by+entomopathogenic+fungi.">Biochemistry of insect epicuticle degradation by entomopathogenic fungi.</a> Comparative Biochemistry and Physiology. Part C: Toxicology and Pharmacolpgy. 146 (1-2), 124-137 (2007).</li><li>Ortiz-Urquiza, A., Keyhani, N. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+on+the+surface:+Entomopathogenic+fungi+versus+the+insect+cuticle.">Action on the surface: Entomopathogenic fungi versus the insect cuticle.</a> Insects. 4 (3), 357-374 (2013).</li><li>Angelo, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+serpins+involved+in+cellular+immune+response+of+Rhipicephalus+microplus+challenged+with+fungi.">Detection of serpins involved in cellular immune response of Rhipicephalus microplus challenged with fungi.</a> Biocontrol Science and Technology. 24 (3), 351-360 (2014).</li><li>De Paulo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhipicephalus+microplus+infected+by+Metarhizium:+unveiling+hemocyte+quantification,+GFP-fungi+virulence,+and+ovary+infection.">Rhipicephalus microplus infected by Metarhizium: unveiling hemocyte quantification, GFP-fungi virulence, and ovary infection.</a> Parasitology Research. 117, 1847-1856 (2018).</li><li>Marmaras, V. J., Lampropoulou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+and+signalling+in+insect+haemocyte+immunity.">Regulators and signalling in insect haemocyte immunity.</a> Cell Signal. 21, 186-195 (2009).</li><li>Hinzmann, M. F., Lopes-Lima, M., Gon&#231;alves, J., Machado, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiaggregant+and+toxic+properties+of+different+solutions+on+hemocytes+of+three+freshwater+bivalves.">Antiaggregant and toxic properties of different solutions on hemocytes of three freshwater bivalves.</a> Toxicological &amp; Environmental Chemistry. 95, 790-805 (2013).</li><li>Nation, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Physiology and Biochemistry. , (2016).</li><li>Gene, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#233;moires+de+l'Acad&#233;mie+royale+des+sciences.">M&#233;moires de l'Acad&#233;mie royale des sciences.</a> Torino. 9, 751 (1848).</li><li>Lees, A. D., Beament, J. W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+waxing+in+ticks.">An organ waxing in ticks.</a> The Quarterly Journal of the Mythic Society. 7, 291-332 (1948).</li><li>Sonenshine, D. E., Roe, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of ticks. , (2014).</li><li>Tan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+proliferation+in+larval+silkworm+Bombyx+mori.">Characterization of hemocytes proliferation in larval silkworm Bombyx mori.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (6), 595-603 (2013).</li><li>Bowden, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+humoral+immune+systems+of+the+American+lobster+(Homarus+americanus)+and+the+European+lobster+(Homarus+gammarus).">The humoral immune systems of the American lobster (Homarus americanus) and the European lobster (Homarus gammarus).</a> Fish Research. 186, 367-371 (2017).</li><li>Sonenshine, D. E., Hynes, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+related+aspects+of+the+innate+immune+response+in+ticks.">Molecular characterization and related aspects of the innate immune response in ticks.</a> Frontiers in Bioscience. 13, 7046-7063 (2008).</li><li>Tsakas, S., Marmaras, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+immunity+and+its+signaling:+an+overview.">Insect immunity and its signaling: an overview.</a> Invertebrate Survival Journal. 7, 228-238 (2010).</li><li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolymph+Test.+A+technique+for+detection+of+Rickettsiae+in+ticks.">Hemolymph Test. A technique for detection of Rickettsiae in ticks.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 19, 1010-1014 (1970).</li><li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks.">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 3652-3665 (2009).</li><li>Patton, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva,+salivary+gland,+and+hemolymph+collection+from+Ixodes+scapularis+ticks.">Saliva, salivary gland, and hemolymph collection from Ixodes scapularis ticks.</a> Journal of Visualized Experiments. 60, e3894 (2012).</li></ol>

التلقيح من مسببات الامراض مفيد عندما تهدف الدراسة إلى التحقيق في العمل المجري من الكائنات المجهرية في نماذج المفصليات التجريبية لأنه يؤكد ان الممرض هو داخل المضيف. ويمكن أيضا تطبيق هذه التقنية لتطعيم جزيئات مثل تداخل RNA (RNAi). اعتبرت تلقيح بين ال [سكوتثم] واستسلام يكون يسهل ان ينجز غير ان غا?...

القراد الماشية ، rhipicpasus ميكروبلاس، هو المري ectoparite مع تاثير سلبي هائل علي الماشية في المناطق الاستوائية. هذا القراد هو المتجه من العوامل المسببة للامراض مثل babesia بوفيس]، babesia bigemina، والهامشية انبلازما انه ، بالاضافه إلى الضرر المباشر الأرقاء ، يمكن ان تقلل من إنتاج الحليب واللحوم ، وتسبب فقر الدم والموت في نهاية المطاف. وقدرت الخسائر الناجمة عن هذا الطفيليات في 3,240,000,000 دولار سنويا في البرازيل1. ويطلب اتباع أساليب مستدامه ويعتبر استخدام عوامل الحشرات الحشرية بديلا واعدا للحد من استخدام مبيدات الجراثيم الكيميائية2،3،4.
الفطريات الحشرية ، مثل Metarhizium spp. ، هي أعداء طبيعيه من المفصليات بما في ذلك القراد ، وبعض العزلات يمكن استخدامها كمتحكمات حيوية. هذه الممرضات تصيب بنشاط المضيف من خلال اهاب واستعمار الجسم2,5,6. ومع تطور العدوى ، يتم التوسط في الاستجابات الخلوية والخلطيه من خلال نظام المناعة القراد. تم الإبلاغ عن تحليل القراد الهيموليمف كاداه مفيده لتقييم الاستجابات المناعية بعد التحدي مع مسببات الامراض7,8.
وتنقسم استجابه المفصليات المناعية إلى استجابات الخلطيه والخلوية. وتنطوي الاستجابة الحميدة علي عمليات التراص الدموي وإنتاج البروتينات/الببتيدات المضادة للميكروبات ، في حين يتم تنفيذ الاستجابة المناعية الخلوية من خلال الخلايا الدموية. هذه الخلايا موجودة في الجسم اللمفي من جميع المفصليات ويقال لتطوير دور تعبيري في الدراسات التي تنطوي علي الاستجابة المناعية الفطرية9، كما انه يرتبط مباشره إلى كثرة الكريات وعمليات التغليف. وفقا لذلك ، يمكن ان تساعد الدراسات حول الخلايا الدموية في التحقيق في مسار الموت وفهم العمليات مثل الفحص الألى ، المبرمج ، والنخر. في بعض لافقاريات كصمامات ، تواجه مجموعه الخلايا الدموية قيودا مثل انقطاع الخلايا ، وانخفاض حجم الخلايا الدموية التي تم الحصول عليها ، وتركيز منخفض للخلايا المستردة10. في كثير من الأحيان ، اعتمادا علي المنهجية المطبقة ، يتم الحصول علي انخفاض تركيز الخلايا ، مما يؤثر مباشره علي القياس الكمي للخلايا وتحليلها.
عدد الخلايا الدموية المتداولة في الهيموسيفي هو متغير بين المفصليات المختلفة ، ويمكن ان تتغير في نفس النوع بسبب مراحل فسيولوجية مختلفه مثل الجنس ، والعمر ، والمرحلة التنموية المفصلية11. يمكن أيضا العثور علي الخلايا الدموية الانضمام إلى بعض الأعضاء ويتم الإفراج عنهم في الدورة الدموية فقط بعد عمليه العدوى11. ومع ذلك ، أبلغت معظم الدراسات عن استخدام الحشرات ، في حين لا تزال القراد اقل استكشافا فيما يتعلق بفسيولوجيتها وعلم الامراض. علي الرغم من التلقيح الممرض وجمع الهيموليمف في القراد هي تقنيات اقل استخداما ، وإنشاء أساليب قياسيه تساعد علي تطوير دراسات أكثر دقه.
وكان الهدف من هذه الدراسة للمقارنة بين الطرق الأكثر استخداما لجمع البوليمرات الدموية والتلقيح من مسببات الامراض في R. ميكروبلاس القراد ، وتقييم الفعالية في اكتساب الخلايا الدموية وتركيز الكريات الدموية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:668px;" width="668">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Alkaline Hypochlorite solution</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">A1727</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">EDTA</td>
			<td style="width:116px;">Synth</td>
			<td style="width:158px;">2706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">16000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flexible rubber</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Giemsa stain</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">48900-500ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Glass capillary</td>
			<td style="width:116px;">CTechGlass</td>
			<td style="width:158px;">CT95-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Insulin syringe (needle)</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;">SKU:&#160;324910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Leibovitz&#39;s L-15 culture medium&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">11415-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Methanol</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">34860-1L-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-7105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microtubes</td>
			<td style="width:116px;">BRAND</td>
			<td style="width:158px;">Z336769-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NaCl</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Neubauer chamber&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-0111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Penicillin</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">15140163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">P2714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Tween 80</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET003662</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies

القراد هي إلزام همتوفغوس طفيليات و rhipicephalus ميكروبلاس له اهميه كبيره في الطب البيطري لأنه يسبب فقر الدم ، وفقدان الوزن ، وانخفاض قيمه الجلد الحيوانية وأيضا يمكن ان تكون بمثابه ناقل للعديد من مسببات الامراض. بسبب التكاليف الباهظة للسيطرة علي هذه الطفيليات ، والاضرار التي لحقت البيئة الناجمة عن الاستخدام غير المناسب لمبيدات آلافات الكيميائية ، وزيادة المقاومة ضد الطفيليات التقليدية ، والسيطرة البديلة من القراد ، من خلال استخدام الفطريات الحشرية ، علي سبيل المثال ، وقد اعتبر نهجا مثيرا للاهتمام. ومع ذلك ، أظهرت دراسات قليله كيف يعمل جهاز المناعة في القراد لمحاربه هذه المركبات الحشرية. ولذلك ، يوضح هذا البروتوكول طريقتين المستخدمة لتلقيح الحشرات في الإناث محتقن واثنين من التقنيات المستخدمة لجمع الهيموليمف وحصاد الخلايا الدموية. التلقيح من مسببات الامراض في الادراج الساق في الجسم الإناث القراد يسمح تقييم المعلمات البيولوجية الإناث علي عكس التلقيح بين الشجار والاستسلام ، والتي كثيرا ما تضر الجهاز Gené's. وقد أسفرت مجموعه الأورام اللمفية الظهرية عن انتعاش أكبر في الحجم من الجمع عبر الساقين. وتشمل بعض القيود من جمع الهيموليمف القراد ومعالجه ط) معدلات عاليه من اضطراب الخلايا الدموية ' ، 2) التلوث النصفي مع الأمعاء المعطلة ، والثالث) انخفاض الانتعاش حجم الهيميميمف. عندما يتم جمع الهيموليمف من خلال قطع الساق ، يستغرق الوقت المستغرق في التراكم في الساق ، ويفضل عمليه التخثر. بالاضافه إلى ذلك ، يتم الحصول علي عدد اقل من الخلايا الدموية في المجموعة من خلال الساق مقارنه بالمجموعة الظهرية ، علي الرغم من ان الطريقة الاولي تعتبر أسهل في الأداء. فهم الاستجابة المناعية في القراد بوساطة وكلاء الحشرات يساعد علي كشف النقاب عن المرض وتطوير أهداف جديده للسيطرة علي القراد. عمليات التلقيح الموصوفة هنا تتطلب موارد تكنولوجية منخفضه جدا ويمكن استخدامها ليس فقط لفضح القراد إلى الكائنات المجهرية المسببة للامراض. المثل ، فان مجموعه من القراد الهيموليمف تمثل الخطوة الاولي للعديد من الدراسات الفسيولوجية.

تقترب هذه المقالة من التلقيح وطرق جمع الهيموليمف المطبقة علي القراد. بعد التلقيح بين الفخذ الساق والجسم القراد الإناث ، وبعض السوائل (hemolymph) يمكن ان يفرز اثناء العملية. مهما, هو مهمة ان يلاحظ ان عندما التلقيح يكون أنهيت, ما من سائل أو انسجه كان حاضره في الابره راس أو في التل...

Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

تحليل القراد الهيموليمف يمثل مصدرا هاما للمعلومات حول كيفيه بعض مسببات الامراض تسبب المرض وكيف القراد الاستجابة المناعية لهذه العدوى. توضح الدراسة الحالية كيفيه تطعيم المروج الفطرية وجمع الأورام اللمفية من الإناث المجهرية الصغيرة.

الكشف عن مجموعه Hemolymph والتلقيح من المسام البدائية ميتارهيميوم في القراد Microplus Rhipicppus نحو دراسات علم الامراض لافقاريات

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

القراد هي hematophagous ectoparasites، ربيسيبيفالوس microplus، المعروف شعبيا باسم القراد الماشية له تأثير اقتصادي سلبي هائل على الماشية في المناطق الاستوائية. وبالإضافة إلى ذلك، فإن تزايد المخاوف بشأن الظروف البيئية المتدهورة والمخاوف الصحية العامة الناجمة عن الاستخدام غير المناسب لمبيدات الكاراترام الكيميائية والمقاومة المتزايدة لفئات القراد الطفيليات التقليدية، تحفز البحوث على طرق التحكم البديلة، مثل استخدام الفطريات المُنتَكة. هذه entomopathogens تصيب بنشاط مضيفي المفصليات، من خلال بشرة واستعمار أجسامهم.قد يكون المفصلي استجابات مختلفة للعدوى الفطرية. وينقسم الجهاز المناعي المفصلي إلى استجابات فكاهية وخلوية. تتضمن الاستجابة الفكاهية عملية الهماغلواتيشن وإنتاج جزيئات مضادات الميكروبات ، في حين أن خلايا الدم تتوسط الاستجابة المناعية الخلوية.يتم الإبلاغ عن معظم الدراسات على الاستجابة المناعية المفصلية باستخدام الحشرات في حين أن استجابات القراد تبقى أقل استكشافًا. أيضا ، التطعيم الممرض وجمع hemolymph القراد هي تقنيات سيئة على نطاق واسع اللازمة لفهم أفضل للاستجابة المناعية للمفصليات. وفقا لذلك ، هذا الفيديو تقنيات العنوان \ تستخدم لتصوير التلقيح ، وجمع hemolymph وتجهيزها.منذ الحويصلات القراد تواجه بعض القيود، مثل انقطاع الخلايا، وانخفاض قيمة الإنمولmph الحصول على، وانخفاض تركيز الخلايا المستردة. إصابة مباشرة على تكوين الخلايا وتحليلها. بعد جمع القراد، وغسل الإناث المتقنة.استخدام مياه الصنبور وتزج بها في 0.5٪ حل هيبوكلوريت الصوديوم لمدة ثلاث دقائق في 500 ملليلتر كوب المتلقي. بالنسبة لنظافة بشرة، تقسيم الإناث في مجموعات متجانسة مع 20 الإناث لكل من. تم إجراء ثلاثة نسخ متماثلة من كل مجموعة.Metarhizium robertsii blastospores استخدمت في عملية التلقيح. إضافة على السائل من خمسة microliters metarhizium blastospores التعليق على سطح فيلم البارافين البلاستيك. لتسريع عملية التطعيم، يمكن إضافة فقاعات متعددة إلى سطح فيلم البارافين البلاستيكي، كل فقاعة المقابلة لخمسة ميكرولترات.استخدم حقنة الأنسولين فائقة الوضوح من ملليمتر واحد وإبرة 0.3 ملليمتر لوضع تعليق وتطعيمها في القراد. تذكر أن تأخذ كل الهواء من الحقنة قبل استخدامه. تلقيح 5 microliters من تعليق الفطريات في أنثى القراد بين scutum وcapitulum.قد يكون هناك حجم صغير من الهيملmph تكون موجودة على تأطير بعد شق إبرة. كن حذراً لعدم تلقيح الهواء. تلقيح الإناث مع تعليق الفطريات بين الفخذ الساق وجسد الأنثى باستخدام حقنة الأنسولين فائقة الغرامة من ملليلتر إلى جانب إبرة 0.3 ملليمتر.عندما يتم إجراء التطعيم بين الفخذ الساق والجسم الأنثوي، يمكن أن يكون هناك حجم صغير من الهيموليم على الفخذ بعد إدخال الإبرة. كن حذراً لعدم تلقيح الهواء. استخدام جزء من المطاط ضخ مجنحة تعيين أنبوب الشعيرات الدموية 0.3 miliimeters وطرف مرشح لأداء جمع الهيمليmph.تعطيل بشرة الظهر الأنثوية باستخدام إبرة 0.3 ملليمتر. بعد انقطاع ممارسة ضغط لطيف على الجزء الterial من الجسم القراد. مراقبة تجمع السائل شفافة تقريبا للخروج من موقع تعطيل.جمع الهيمولى عن طريق مص السائل من خلال طرف مرشح إلى جانب جزء من المطاط من مجموعة ضخ مجنحة وأنبوب شعري 0.3 ملليمتر. لا تضغط على جسم القراد بالكاد أثناء شل حركتها لأن هذا قد يعطل منتصف الgut ويلوث الهيملmph. الانتظار حتى الضغط لطيف يمكن طرد السائل دون تلوث.قم بشل حركة القراد. قطع قطعة من الساق الأمامية. يمكن قطع ساق واحدة أو أكثر وكذلك يمكن قطع نفس الساق أكثر من مرة واحدة.تطبيق ضغط لطيف على الجزء الخلفي من الجسم القراد. مراقبة فقاعة سائلة شفافة تظهر على الجانب قطع وجمعه مع أنبوب الشعرية. لا تضغط على جسم القراد بالكاد ، أثناء التعبئة لأن هذا قد يعطل منتصف المنتصف ويلوث الهيملmph.الانتظار حتى الضغط لطيف يمكن طرد السائل دون تلوث. بعد جمع الهيمولmph، إيداعه في 1.5 mililiters microtube شغلها سابقا مع 30 كوكتيل بروتياز microlitres و 82 microlitres العازلة المالحة. الحفاظ على الأنابيب الدقيقة على الجليد في جميع أنحاء جمع الهيموالي ام.وسيتم تشكيل عينات من أجهزة الطرد المركزي والكريات الناعمة من الهيموسيات بعد الطرد المركزي للهيمولوم. لتحديد كمية الهيمولmph، كمي حجم الهيمولmph التي تم الحصول عليها من خلال عد الحجم الإجمالي داخل microtube وخصم حجم كوكتيل البروتياز والمخزن الاحتياطي الملحي. إزالة بعناية الهيموليتف خالية من الخلايا فائقة، وبلطف إعادة تعليق الخلايا.كمّيّة الهيموسيات بوضع 10 ميكرولترات من الهيموسيات التي تم تعليقها من قبل إعادة تعليق في غرفة نيوباور. للخلايا إعادة تعليق تم استخدام وسائط الثقافة. قطع الساق الأمامية للقراد، وتطبيق ضغط لطيف على الجزء الخلفي من الجسم القراد، ومراقبة فقاعة سائلة شفافة تظهر على موقع قطع.تطبيق قطرات الهيملmph مباشرة على شرائح المجهر نظيفة. بعد ذلك استخدام الطرق المناسبة لطخة الخلايا. التلقيح بين الفخذ الساق والجسم الأنثوي القراد يمكن أيضا أن تلحق الضرر أعضاء داخلية القراد مثل midgut وslepighian الأنابيب.عندما يتم تعطيل منتصف ة القراد من قبل الإبرة في جمع الأنف الظهر السائل الذي تم الحصول عليه هو أحمر، وليس شفافا. وهذا يشير إلى مجموعة هيموليmph غير صحيحة. في هذه الحالة، يتم التخلص من الهيملmph كما هو ملوث.ويمكن أيضا أن يلاحظ التلوث بالهيمولmph عندما يتم إصابة القراد بشكل طبيعي مع كميات عالية من مسببات الأمراض، أو في الخطوات النهائية بعد عملية الموت الناجمة عن مسببات الأمراض تلقيح. حجم الهيموليم الذي تم الحصول عليه بعد جمع الظهر أعلى من الحجم الذي تم الحصول عليه في المجموعة من خلال الساق. على الرغم من سهولة التلوث هو أعلى في طريقة جمع الأولى.وكان تركيز الهيموسيات أيضا أعلى بكثير في جمع الظهرية. عندما يتم تنفيذ الصحيح جمع خلايا الدم يمكن الحصول على مسحة جيدة وأنه من الممكن للتمييز بين أنواع مختلفة من الهيموسيات بعد تلطيخ. قدم هذا الفيديو معلومات عن طرق إجراء تلقيح مسببات الأمراض ، وعلى وجه التحديد الفطريات ذات النتوموبات ، في القراد وجمع هدم الدم.تتطلب التقنيات المقدمة هنا موارد تكنولوجية منخفضة جدًا في خطواتنا الكلاسيكية للدراسات حول علم وظائف الأعضاء القراد ، وعلم أمراض القراد ، والاستجابة المناعية للقراد. والحصاد الصحيح للخلايا المفصلية، والهيمولى الخالي من الخلايا أمر بالغ الأهمية لتوفير معلومات موثوقة للدراسات اللاحقة. لهذا السبب، من المهم أيضا أن تكون على بينة من الأخطاء الأكثر شيوعا لوحظ في تنفيذ هذه التقنيات.وبالإضافة إلى ذلك، تحدد مقترحات هذه الدراسة الموقع الأنسب لجمع الهيموّل المشطور من خلال تشويه الساقين أو قطعها، مع مراعاة الاختلاف في الحجم الذي تم الحصول عليه واحتمال حدوث تلوث.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

RNA Interference in Ticks

التدخل في الحمض النووي الريبي القراد

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

والفحص ضوء بارد الكالسيوم عن التحليل الوظيفي من البعوض ( الزاعجة المصرية) والقراد ( مروحية الرأس المتثني) G - يقترن بروتين المستقبلات

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

توجه التمييز بين الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة نحو الخلايا اللمفية تي

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

ال<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; القولون ثقافة الجهاز واستخدامه في الدراسات الدفاعية المضيف مضادات الميكروبات

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis

Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis

إعطاء التطعيم من فيشر 344 الفئران مع فرانسيسيلا تولارنسيس

Pulmonary infection with the bacterium Francisella tularensis can lead to the serious and potentially fatal disease, tularemia, in humans. Due to the ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

عزل وتوصيف المجهرية الدقيقة المستمدة من العَدلات للدراسات الفنية

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

جمع وتجهيز العقد الليمفاوية من الحيوانات الكبيرة لتحليل الحمض النووي الريبي: التحضير للدراسات ترانسكريبتوميك العقدة الليمفاوية للأنواع الحيوانية الكبيرة

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...